GM-CSF增强DNA疫苗免疫效果的研究进展

DNA疫苗因既能诱导体液免疫应答 ,又能诱导细胞免疫应答而受到广泛关注 ,但作为治疗性疫苗其免疫效果尚需进一步提高。细胞因子作为DNA疫苗免疫佐剂受到了广泛重视 ,特别是GM -CSF ,由于在细胞因子网络中占有重要地位 ,在免疫反应中具有重要作用 ,而成为研究的热点之一。本文就GM -CSF增强DNA的免疫效果及其作用机理作一简要综述     

103 GM-CSF增强DNA疫苗免疫效果的研究进展

DNA疫苗因既能诱导体液免疫应答,又能诱导细胞免疫应答而受到广泛关注,但作为治疗性疫苗其免疫效果尚需进一步提高.细胞因子作为DNA疫苗免疫佐剂受到了广泛重视,特别是GM-CSF,由于在细胞因子网络中占有重要地位,在免疫反应中具有重要作用,而成为研究的热点之一.本文就GM-CSF增强DNA的免疫效果及其作用机理作一简要综述.     

GM-CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗治疗晚期肿瘤的Ⅰ期临床试验

目的探讨GM-CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗的安全性和临床有效性。方法收录我院2007年1月至2008年5月病理明确的IV期癌症患者50例,其中恶黑11例,卵巢癌10例,肾癌15例,胃癌/结直肠癌14例。每周皮下注射肿瘤细胞和GM-CSF分泌细胞混合物1ml;共受6次。在第1、5次注射同时,进行DTH接种试验。治疗前后取外周血样进行淋巴细胞亚型及细胞因子检测。治疗完成1个月后进行影像学检查。结果所有患者对治疗耐受良好,无脱组患者。主要不良反应为,注射局部的红肿疼痛,硬结,瘙痒和发热。4例治疗后影像学好转但未达到部分缓解,32例稳定,14例进展。DTH阳性率68%(34/50)。流式细胞仪检测治疗后CD8 T细胞(CTL)明显增加(P<0.05),CD4 CD25 CD127–T细胞(Treg)降低(P<0.05)。ELISA检测IFN-γ治疗前后的变化无统计学意义,但有升高趋势。结论异体GM-CSF肿瘤疫苗免疫治疗安全,耐受良好,能改善患者的机体免疫状态。     

GM-CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗治疗晚期肿瘤的Ⅰ期临床试验

目的探讨GM—CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗的安全性和临床有效性。方法收录我院2007年1月至2008年5月病理明确的IV期癌症患者50例，其中恶黑11例，卵巢癌10例，肾癌15例，胃癌／结直肠癌14例。每周皮下注射肿瘤细胞和GM-CSF分泌细胞混合物1ml；共受6次。在第1、5次注射同时，进行DTH接种试验。治疗前后取外周血样进行淋巴细胞亚型及细胞因子检测。治疗完成1个月后进行影像学检查。结果所有患者对治疗耐受良好，无脱组患者。主要不良反应为，注射局部的红肿疼痛，硬结，瘙痒和发热。4例治疗后影像学好转但未达到部分缓解，32例稳定，14例进展。DTH阳性率68％（34／50）。流式细胞仪检测治疗后CD8＋T细胞（CTL）明显增加（P〈0．05），CD4＋CD25＋CD127-T细胞（Treg）降低（P〈0．05）。ELISA检测IFN—V治疗前后的变化无统计学意义，但有升高趋势。结论异体GM—CSF肿瘤疫苗免疫治疗安全，耐受良好，能改善患者的机体免疫状态。     

核酸疫苗与蛋白疫苗的免疫特点及其联合免疫的研究进展

核酸疫苗和蛋白疫苗具有各自的免疫特点,分别诱导以细胞免疫和体液免疫为主的免疫应答,并能通过联合免疫提高机体预防病原体的免疫保护力,而核酸疫苗和蛋白疫苗的免疫特点以及联合使用核酸疫苗与蛋白疫苗协同免疫可以提高疫苗免疫效果。     

登革1～4型病毒prM-E基因的双价和四价重组质粒DNA在小鼠中的免疫原性观察

目的 在鼠模型中观察登革（DEN）病毒双价和四价重组质粒DNA的免疫原性，为登革多价DNA疫苗的研究奠定基础。方法采用可去除内毒素的试剂盒大量提取质粒DNA。将双价质粒DNA及将它们配伍后再与鼠源GM-CSF进行联合免疫，免疫途径采用肌肉注射，并加以电刺激，以提高质粒DNA的摄入效率。于初次免疫后第2和4周各加强免疫1次。然后在小鼠中分别测定针对登革1-4型病毒的体液和细胞免疫应答水平。采用间接免疫荧光法和中和试验测定血清抗体效价，细胞免疫应答水平通过测定脾淋巴细胞的增殖指数和其分泌的IFN-T浓度进行评价。细胞浸润实验通过对免疫部位的肌肉进行HE染色确定。结果小鼠在初次免疫后第4周即开始产生针对DEN1～4型病毒的抗体，随着时间的延长，抗体效价逐渐上升。第14周中和抗体效价最高达1：32。淋巴细胞的刺激指数及其分泌IFN-T的浓度均显著高于对照组。GM-CSF对体液免疫应答有促进作用，但对细胞免疫应答无显著的促进作用。结论本研究所构建的双价和四价重组质粒DNA在鼠模型中具有较好的免疫原性，这为登革多价DNA疫苗的研究奠定了基础。     

哮喘患者血清TNF-α、GM-CSF及HA水平测定

目的 :研究TNF -α、GM -CSF及HA三项标记物与哮喘病情变化的关系。方法 :三项标记物均采用放射免疫分析法。研究对象包括 6 6名患者及 3 0名对照组。结果 :哮喘发作组 (n =3 6 )血清TNF -α、GM -CSF及HA水平均显著高于正常对照组 (p <0 0 1 ,p <0 0 1 ,p <0 0 5 )。而哮喘缓解组 (n =3 0 )则三项标记物均显著下降 ,但与正常对照组比较差异仍有显著性 (p <0 0 5 )。结论 :三项标记物的变化与哮喘的发作关系密切 ,提示临床在抗炎治疗时应适时采用免疫调节剂     

GM-CSF对TNF-α诱导白血病细胞凋亡的抑制作用

通过TNFα以及TNFα+GM-CSF对18例白血病患者髓性白血病细胞凋亡的影响研究,发现加TNFα组凋亡细胞数明显高于TNFα+GM-CSF组,两者比较有显著性差异（P<0.01）。本结果提示TNFα有捉进肿瘤细胞凋亡作用,而 GM-CSF则可抑制这种作用。     

DNA介导免疫的研究进展

ＤＮＡ介导免疫是指将质粒ＤＮＡ导入动物组织后，质粒ＤＮＡ原位表达并产生特异的体液和细胞免疫应答，目前主要应用的基因导入方法是质粒ＤＮＡ直接注射骨骼肌，并可在质粒ＤＮＡ注射前应用再生诱导剂提高导入基因的蛋白表达水平以增强免疫效果，ＤＮＡ介导免疫多被应用于抗感染免疫研制成核酸疫苗。     

人参总皂甙诱导淋巴细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达GM-CSF的影响，及其与人粒细胞．巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法：采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒细胞，巨噬细胞系造血祖细胞(CFU-GM)增殖；经TSPG诱导制备的胸腺细胞和脾细胞条件培养液富含GM-CSF样活性；TSPG能显著促进胸腺细胞和脾细胞的GM-CSF蛋白和，mRNA表达。结论TSPG可能通过直接和／或间接途径促进淋巴细胞合成和分泌GM-CSF，进而促进CFU-GM的增殖分化。     

DNA介导免疫的研究进展

DNA介导免疫是指将质粒DNA导入动物组织后，质粒DNA原位表达并产生特异的体液和细胞免疫应答。目前主要应用的基因导入方法是质粒DNA直接注射骨骼肌，并可在质粒DNA注射前应用再生诱导剂提高导入基因的蛋白表达水平以增强免疫效果。DNA介导免疫多被应用于抗感染免疫研制成核酸疫苗。     

DNA疫苗及其免疫途径的研究进展

<正>DNA疫苗(DNA vaccine)又称为核酸疫苗、基因疫苗,是指将含有编码某种抗原蛋白基因序列的质粒载体作为疫苗,采用某种方法直接导入动物细胞内,然后通过宿主细胞的转录翻译系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而使被接种动物获得相应的免疫保护,以达     

GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体的构建及Xba Ⅰ甲基化位点的应用

目的构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体并探讨XbaI甲基化位点在构建中的应用,为构建GM-CSF基因重组腺病毒及更方便地利用XbaⅠ多克隆位点打下基础。方法体外分离小鼠脾细胞,经ConA刺激,用含两种不同的XbaⅠ位点毗邻碱基的引物RT-PCR获取小鼠GM-CSF基因,经XbaⅠ及XbaⅠ双酶切后分别定向克隆入pAdTrack-CMV重组腺病毒穿梭载体中,比较两种重组载体酶切鉴定的效率并通过测序验证。结果成功逆转录得到小鼠GM-CSF基因并克隆入pAdTrack-CMV中,测序结果与预期一致。酶切鉴定显示由于XbaI位点毗邻碱基的不同导致甲基化的XbaⅠ位点在克隆菌株中不能被有效切开。结论成功构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体,XbaⅠ位点对甲基化敏感。     

中国乙型肝炎疫苗免疫效果和免疫机理的研究进展

我国是以农村为重点的乙型肝炎 (乙肝 )高发区 ,表面抗原携带者达 1 2亿。 2 0 0 0万人为慢性肝炎患者 ,受感染者达我国总人口的 5 0 %～ 6 0 % ,因此 ,研制、开发和大量推广高质量乙肝疫苗是我国乙肝预防工作的重点。为了控制乙肝流行 ,国家从“六五”开始 ,就把病毒性肝炎列为重大国家科研规划之中。 1985年我国研制成功血源乙肝疫苗 ;1992年研制出基因工程ＣＨＯ疫苗 ;1994年引进美国Ｍｅｒｃｋ公司的酵母基因工程疫苗开始试生产。在我国乙肝基因疫苗开发、引进和大量生产、应用上均有一系列问题需要解决 ,如国产ＣＨＯ疫苗和引进酵母疫…     

肺结核患者治疗前后血清GM-CSF和hs-CRP水平检测的临床意义

探讨了肺结核患者治疗前后血清粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和hs-CRP水平的变化及其意义.应用放免法和免疫比浊法对40例肺结核患者进行了血清GM-CSF和hs-CRP水平测定,并与35名正常人作对照.在治疗前肺结核患者血清GM-CSF和hs-CRP水平均显著高于正常人组(P<0.01),经3个月治疗后血清GM-CSF和hs-CRP水平与正常人比较无显著性差异(P>0.05).患者治疗前后的血清GM-CSF和hs-CRP水平具有显著性差异(P<0.01).检测肺结核患者血清中GM-CSF和hs-CRP水平的变化与患者的病情和预后密切相关,有重要的临床价值.     

CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理

目的研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒Ａｄ－ＣＤ,然后连续１０天腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）、单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组、单用ＡｄＧＭ－ＣＳＦ组、注射对照病毒ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ组或ＰＢＳ组。结果与接受ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭ－ＣＳＦ、ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长（Ｐ＜０．０１）。经ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润,黑色素瘤细胞表达ＭＨＣ－Ⅰ和Ｂ７－１分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论联合应用自杀基因和ＧＭ－ＣＳＦ基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用     

EB病毒潜伏膜蛋白2 DNA疫苗的构建及其初步免疫效果观察

目的：以EB病毒潜伏膜蛋白2（latent membrane protein 2,LMP2)为靶基因,构建EBV－LMP2的侯选DNA疫苗,并初步探讨其在小鼠体内诱导特异性细胞毒方面的作用,为研制鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC)等EB病毒相关肿瘤的治疗性疫苗提供有益资料。方法：将EB病毒LMP2全cDNA片段克隆至含CMV早期启动子的真核表达载体pCDNAⅢ,构建CMV启动子EB病毒LMP2DNA疫苗,在体外将重组质粒转染COS细胞,以RT－PCR和间接免疫荧光法检测重组质粒在转染的COS细胞中的转录和表达,采用50μg,100μg,200μg3种质粒剂量进行初步的小鼠后可诱发机体产生会对LMP2蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫,50μg,100μg,200μg 3种免疫剂量产生的抗体水平差异不大。在免疫接种6周后,重组质粒免疫的小鼠产生针对LMP2的特异性CTL均明显高于空载体免疫小鼠,3种剂量的CTL结果显示：在100μg,200μg免疫组,小鼠诱导产生的CTL水平要略高于50μg免疫组。结论：EB病毒重组质粒LMP2免疫小鼠可以诱发小鼠产生特异的体液和细胞免疫应答,这些结果为研制鼻咽癌DNA疫苗提供有益的资料。     

增强DNA疫苗免疫原性的研究进展

DNA疫苗是疫苗领域的研究热点,与传统疫苗相比,具有能够同时诱导体液免疫和细胞免疫、安全、廉价等多种优势,但也存在免疫后抗体滴度不高、免疫效果差的问题。本文就目前DNA疫苗的免疫机制研究现状及其优化研究的进展进行了综述。