siRNA干扰STAT3基因对食管癌Eca-109细胞生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中,构建STAT3-siRNA表达载体,稳定转染人食管癌Eca-109细胞,利用RT-PCR、Western blot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况.结果:成功构建STAT3-siRNA表达载体,经测序鉴定正确.RT-PCR和Western blot结果显示,STAT3-siRNA3表达载体明显抑制了人食管癌Eca-109细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).MTT实验显示,稳定转染siRNA后,siRNA3实验组细胞的增殖能力明显下降,细胞生长抑制卒为35.68%,较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞技术显示,siRNA3实验组出现了细胞周期阻滞和细胞凋亡,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率为13.26%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);结论:RNA干扰技术沉默STAT3基因可以有效地抑制STAT3基因的表达,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖,引起细胞周期G_0/G_1期阻滞,促进其凋亡.     

Smac/DIABLO和Survivin shRNA联合转染对大肠癌Lovo细胞凋亡的影响

背景与目的:Smac/DIABLO是一种新发现的促凋亡蛋白,通过阻滞凋亡抑制蛋白(包括Survivin),激活caspase-9和caspase-3而发挥作用.本实验研究线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO和沉默凋亡抑制基因Survivin联合应用对大肠癌细胞凋亡的影响及其促凋亡机制.方法:构建Survivin的shRNA-EGFP质粒和Smac-pcDNA3.1质粒,将其用脂质体单、共转染至大肠癌Lovo细胞;Western blot检测survivin基因和Smac基因的蛋白表达;Ho-chest 33258染色观察凋亡核形态学变化,并粗略计数凋亡率;流式细胞仪PI单染测凋亡周期;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果:转染48 h后单、共转染组的Smac蛋白水平增加而Survivin蛋白水平下降;单、共转染组Hochest 33258染色可见明显的凋亡核形态学变化,凋亡率高于各对照组,且共转染组凋亡率(18.5±1.7)%高于单转染组(9.6±1.8)%、(15.0±0.3)%;Smac组G0/G1期增多为(51.0±6.2)%,而Survivin shRNA组S期细胞增多为(53.3±1.3)%(P＜0.05);caspase-3活性比Smac和Survivin shRNA共转组为(169±3)%,高于Smac组(143±5)%、Survivin shRNA组(152±6)%,且都高于各对照组(P＜0.05).结论:Smac/DIABLO和Sur-vivin shRNA协同作用激活caspase-3途径,抑制大肠癌Lovo细胞生长而促进细胞凋亡,Smac阻滞细胞周期于G0/G1期而RNA干扰Survivin后细胞周期阻滞于S期.     

骨桥蛋白下调对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响

目的观察骨桥蛋白(osteopontin, OPN)下调后对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响.方法构建针对OPN的siRNA(small interference RNA)表达质粒, 用脂质体方法转染PC3细胞.RT-PCR和Western blot检测转染后PC3细胞OPN 的表达; MTT比色法和流式细胞仪检测PC3细胞OPN下调对细胞的生长和细胞周期的影响;软琼脂生长实验检测OPN下调后对PC3细胞集落形成的影响.结果 RT-PCR和Western blot证实经RNA干扰介导的PC3细胞存在OPN表达下调,转染的细胞生长受抑制,出现细胞周期S期阻滞和细胞凋亡,在软琼脂上的细胞集落形成率下降.结论经RNA干扰的选择性OPN下调可使PC3细胞在S期阻滞并出现细胞凋亡,细胞的恶性程度下降.     

Cyclin D1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响

[目的]利用RNA干扰（RNAi）技术观测其对白血病K562细胞cyelin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒．通过壳聚糖介导转染K562细胞，Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclinD1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyelin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；细胞阻滞于G0／G1期，细胞凋亡明显。而m—pshRNA-790质粒并无上述生物学效应：[结论]cyclinD1基因表达下调可抑制K562细胞生长影响细胞周期分布并诱导细胞凋亡提示，因可能是白血病治疗的一个有效靶点。     

联合干扰人端粒酶逆转录酶和端粒重复序列结合因子2基因的表达对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的 探讨联合干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因在乳腺癌基因治疗中的协同效应.方法 构建表达小分子干扰RNA(siRNA)-hTERT和siRNA-TRF2的重组腺病毒载体rAd-hTERT和rAd-TRF2,单独或联合转染人乳腺癌MCF-7细胞.采用Western blot法检测MCF-7细胞中hTERT和TRF2蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,采用流式细胞仪榆测MCF-7细胞的细胞周期变化,采用细胞平板克隆形成实验检测MCF-7细胞的克隆形成能力.结果 转染48 h后,PBS对照组、空载体对照组、阴性对照组、rAd-hTERT转染组、rAd-TRF2转染组以及rAd-hTERT和rAd-TRF2联合转染组乳腺癌MCF-7细胞中hTERT蛋白的相对表达量分别为1.00、0.94±0.02、0.95±0.04、0.18±0.04、0.95±0.01和0.18±0.04;TRF2蛋白的相对表达量分别为1.00、1.01±0.08、0.96±0.02、0.95±O.08、0.22±0.01 和0.26±0.02.单独转染rAd-hTERT或rAd-TRF2后,乳腺癌 MCF-7 细胞的增殖抑制率仅为54.6%和48.4%,有8.9%±1.2%和9.2%±2.3%的细胞进入分裂期,66.4%±1.5%和64.6%±1.9%的细胞阻滞于G_0+G_1期,细胞的克隆形成能力显著下降;联合转染rAd-hTERT和rAd-TRF2后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率高达82.1%,进入分裂期的MCF-7细胞明显减少(为4.4%±1.2%),大量细胞阻滞于G_0+G_1期(为81.4%±1.3%),细胞的克隆形成能力下降更加明显.结论 联合干扰hTERT和TRF2 基因较单基因干扰可获得更有效的乳腺癌基因治疗效果.     

沉默EZH2基因表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的 研究RNA干扰靶向沉默EZH2基因表达对ACHN肾癌细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 应用Western blot法检测EZH2蛋白在人正常近端肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株786-0和ACHN中的表达。脂质体法介导化学合成EZH2 siRNA转染ACHN细胞株,Western blot法检测转染后ACHN细胞EZH2蛋白的表达情况,CCK-8法检测转染后ACHN细胞增殖率,流式细胞术检测转染后ACHN细胞周期分布和凋亡情况。结果 肾癌细胞株786-0和ACHN中EZH2蛋白的表达水平明显高于人正常近端肾小管上皮细胞HK-2。RNA干扰EZH2基因可成功地敲减ACHN细胞EZH2蛋白的表达。EZH2-siRNA干扰后,实验组ACHN细胞生长明显受抑制,在转染后48和72 h细胞增殖受抑制效应著（P＜0.05）。细胞周期分析显示：siEZH2转染组G1期ACHN细胞比例呈增加趋势,而S期和G2期细胞比例呈减少趋势,其中在转染后48h G1期ACHN细胞比例显著增加,而S期和G2期细胞比例明显下降（P＜0.05）;凋亡分析显示：siEZH2转染组ACHN细胞凋亡率随转染后时间的延长而呈增加趋势,在转染后48和72 h细胞凋亡率增加最显著（P＜0.05）。结论 沉默EZH2基因表达可靶向肾癌ACHN细胞周期中G1/S限制点而阻滞细胞周期进展,同时可有效抑制肾癌细胞增殖和促进细胞凋亡。     

RNA干扰沉默IQGAP1表达可提高食管鳞癌细胞KYSE150对顺铂的化疗敏感度北大核心CSCD

目的研究具有IQ结构域的GTP激酶活化蛋白1基因(IQGAP1)对食管癌细胞KYSE150化疗敏感度的影响及其相关作用机制。方法构建针对IQGAP1基因的小干扰RNA(si RNA)并转染至食管鳞癌细胞株KYSE150,采用MTT法观察KYSE150细胞对化疗药物顺铂敏感度的改变;流式细胞技术检测IQGAP1基因沉默前后顺铂对KYSE150细胞周期分布及凋亡的影响;Western blot检测细胞转染前后转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平变化。结果转染si RNA可显著下调KYSE150细胞中的IQGAP1 m RNA和蛋白表达水平;经(1、5、10、20)μmol/L顺铂处理细胞24 h后,干扰组(IQGAP1-si RNA)的细胞生存率均较对照组发生明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示干扰组在顺铂处理后G_0/G_1期细胞比例和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05);Western blot结果显示IQGAP1基因沉默后,Nrf2和MRP1蛋白表达下调。结论沉默IQGAP1基因可有效提高人食管鳞癌细胞株KYSE150对顺铂的化疗敏感度,该作用可能是通过下调Nrf2和MRP-1蛋白表达来实现的。     

慢病毒介导RNAi抑制胃癌细胞CDH17基因的表达对化疗药物敏感性的影响

[目的]探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)沉默肝肠一钙黏连蛋白(CDH17)基因的胃癌细胞SGC-7901对化疗药物敏感性的影响.[方法]将制备好的siRNA-CDH 17慢病毒表达载体稳定转染SGC-7901细胞72h后,采用实时定量PCR法检测转染后SGC-7901细胞中CDH17基因的表达水平;Western blot检测CDH17蛋白的表达水平;利用流式细胞仪检测细胞周期,MTT法和平板克隆形成实验检测CDH17基因沉默后胃癌细胞SGC-7901对氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性.[结果] Real-time PCR及Western blot检测结果表明CDH17 mRNA及蛋白在SGC-7901细胞中表达下调;实验组SGC-7901细胞周期明显阻滞在Go/G1期,S期相对减少;5-FU处理SGC-7901细胞48h后,MTT法和平板克隆形成实验显示实验组增殖抑制显著高于另两组,差异有统计学意义(P＜0.001).CDH17基因沉默的SGC-7901细胞对5-FU的敏感性显著增强.[结论]以CDH17基因为靶标的RNA干扰能下调SGC-7901细胞中CDH17的表达,从而增强其对5-FU的化疗敏感性.     

siRNA干扰XIAP基因对卵巢癌SKOV-3细胞生物学功能影响的研究

目的:采用小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV-3细胞X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的表达,观察其对卵巢癌细胞增殖能力和凋亡的影响.方法:将XIAP siRNA转染SKOV-3细胞,MTT检测细胞增殖抑制情况,Annexin-V检测细胞凋亡率的变化,FCM法检测细胞周期变化.结果:XIAP siRNA转染后能明显抑制XIAP蛋白的表达,与其他组相比差异有统计学意义,F=63.782,P<0.05;特异性干涉组细胞的增殖能力明显低于空白对照组及非特异性干涉组,F=53.412,P<0.05;XIAP-siRNA转染组的细胞凋亡率为((31.54±0.62)%],与非特异性干涉组[(5.34±0.38)%]和空白对照组[(6.73±0.46)%]相比,差异有统计学意义,F=102.32,P<0.01.SKOV-3细胞明显阻滞在G0/G1期,与其他组相比,差异有统计学意义,P<0.01.结论:干扰XIAP基因可抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,诱导其凋亡.     

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞周期及Cdc25C蛋白表达的影响

背景与目的:前列腺雄激素调节基因(prostate androgen regulated gene,PAR)在雄激素非依赖性前列腺癌中特异性高表达,可能与细胞恶性转化相关。本研究用RNA干扰技术下调PAR基因表达,并探讨其对前列腺癌PC3细胞细胞周期及调节因子Cdc25C表达的影响。方法:针对PAR基因的siRNA转染PC3细胞,以RT-PCR验证其对PAR基因表达抑制的有效性,用流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测Cdc25C表达水平。结果:siRNA转染可抑制PC3细胞PAR基因表达,同时G2/M期细胞及凋亡细胞比例分别由(23.79±3.16)%及(1.49±0.13)%增加至(29.95±3.25)%和(20.61±2.73)%,Cdc25C蛋白表达水平明显下降。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2/M期阻滞和凋亡,抑制细胞周期调节因子Cdc25C的表达。     

RNA干扰沉默AKT基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡影响研究

目的：通过小分子干扰RNA（siRNA）技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中P13K／AKT信号通路关键基因蛋白激酶B（protein kinase B,PKB／AKT）基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKTsiRNA转染SKOV3细胞。荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKTmRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测P13K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪AnnexinV／pI法检测细胞凋亡率的变化。结果：siRNA干扰组AKTmRNA的表达量为（O．325±0．04）明显抑制,并显著低于对照组,q=58．96,P〈O．001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而P13K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0．637;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达（79．52±2．31）％,较对照组（27．35±2。01）％与空白载体组（28．64±1．96）％明显升高,约是空白载体组（q=60．880,P〈0．001）与对照组（q=58．553,P〈0．001）的3倍,差异有统计学意义。结论：AKTsiRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法。     

血管内皮生长因子反义RNA对裸鼠食管癌细胞增殖和凋亡的影响意义

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）反义RNA对裸鼠食管癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将转染VEGF反义eDNA和空载体peDNA3．1的食管癌细胞株TE-1分别接种在裸鼠体内；应用免疫组化法、RT-PCR法检测移植瘤组织中VEGF蛋白和mRNA表达情况；流式细胞仪和透射电镜检测肿瘤细胞增殖及凋亡情况。结果：反义组肿瘤组织中VEGF蛋白和mRNA的表达降低，肿瘤细胞的细胞器发生扩张和肿胀、核染色质边集、凝集成块等凋亡形态学改变；Go／G，期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖指数降低；对照组和空载体组细胞凋亡较少。结论：VEGF反义RNA能抑制裸鼠食管癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，为食管癌基因治疗基础研究提供依据。     

RNA干扰 Rac1基因表达对结直肠癌LoVo细胞骨架和细胞周期的影响

目的:观察Rac1蛋白在结直肠癌细胞中的表达,并分析其与结直肠癌LoVo细胞骨架、细胞周期和细胞凋亡的相关性.方法:Western blotting测定5种结直肠癌细胞株(LoVo,SW480,SW620,SW1116,HT29)中Rac1蛋白的表达;Rac1-shRNA质粒转染LoVo细胞后,激光共聚焦显微镜观察LoVo细胞骨架的变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:5种结直肠癌细胞株中均有Rac1蛋白的高表达.Rac1基因沉默后,LoVo细胞中交联状态的F-actin网明显减少且紊乱,G0/G1期细胞比例较对照组显著增加[(74.63 ±4.40)％ vs(56.46 ±3.09)％,P＜0.05],而S期细胞比例较对照组显著减少[(12.87±1.77)％vs(29.66±1.92)％,P＜0.05];Rac1-shRNA转染组LoVo细胞凋亡率较对照组显著增加[(25.31±2.05)％vs(9.38±1.16)％,P＜0.05].结论:RNA沉默Rac1基因的表达影响了LoVo细胞骨架的形成和细胞周期,为以Rac1为靶点治疗结直肠癌提供了实验依据.     

肺腺癌组织中RGC32基因的表达及其对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

 目的　检测RGC32基因在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法　实时荧光定量PCR检测36例肺腺癌及相应癌旁组织中RGC32基因的表达;应用RNA干扰技术抑制A549细胞中RGC32基因的表达,实时荧光定量PCR检测抑制效果,MTT法测定A549细胞生长抑制率,流式细胞术检测A549细胞凋亡。结果　RGC32基因在肺腺癌组织中表达明显上调,为癌旁组织表达量的2.2736倍（t＝-29.185,P＝0.001）。RNA干扰能够显著抑制A549细胞中RGC32基因的表达。RGC32基因表达降低后,A549细胞的凋亡率由（2.47±0.17）%提高至（4.65±0.26）%（t＝-202.868,P＝0.000）,生长抑制率由2.9 %提高至45.4 %（t＝-37.915,P＝0.001）,细胞增殖活力明显降低。结论　RGC32基因在肺腺癌组织中的表达明显上调,RGC32基因表达降低能够促进A549细胞的凋亡并抑制细胞增殖。     

Effect of plasmid-mediated RNA interference targeting telomerase reverse transcriptase on lung cancer cells

In the present study, a plasmid-mediated siRNA interference vector targeting the hTERT gene was constructed and stably transfected into H1299 lung cancer cells. Using real-time quantitative fluorescent PCR technology, western blotting and flow cytometry-based cell cycle profiling, the silencing effect of this vector and its inhibitory effect on proliferation in lung cancer cells were explored. Based upon the results of our previous study, a pair of siRNA sequences was selected, and a DNA template primer was designed and synthesized. After cloning of the template primer into the promoter of the pGenesil-1.1 expression vector, the constructed interference vector was validated using enzyme digestion and gene sequencing. The recombinant interference vector and empty vector were separately transfected into H1299 lung cancer cells with cationic liposomes, and stable monoclonally transfected cells were obtained after selection with G418. After stable transfection, hTERT mRNA and protein expression levels were detected using real-time RT-PCR technology and western blotting. Using the MTT method and a colony formation assay, the growth and proliferation of the stably transfected lung cancer cells were determined. Changes in the cell cycle profile of the stably transfected lung cancer cells were detected using flow cytometry. An interference vector targeting the hTERT gene (pGenesil.1-hTERT) was successfully constructed. Enzyme digestion and gene sequencing confirmed that the sequence insertion met the criteria of the design. After transfection of H1299 cells with pGenesil.1-hTERT or an empty vector, the stably transfected monoclonal cell lines H1299-pGenesil.1-hTERT and H1299-pGenesil.1 were obtained. Compared to the control cells transfected with the empty vector, the H1299-pGenesil.1-hTERT cells had significantly lower mRNA expression of hTERT (93.97±0.83% inhibition, with P<0.001). The protein expression of hTERT in H1299-pGenesil.1-hTERT cells was significantly lower compared to that in H1299-pGenesil.1 cells. The rate of proliferation of H1299-pGenesil.1-hTERT cells was lower compared to that of H1299-pGenesil.1 lung cancer cells. In H1299-pGenesil.1-hTERT cells, the number of cells in the G1 phase increased by 18.3% (P<0.05) compared to the control group; the number of cells in the S and G2 phases decreased by 10.4 and 7.9%, respectively (P<0.05). A recombinant plasmid that interfered with the expression of the hTERT target gene was successfully constructed. Upon transfection of the recombinant interference plasmid into H1299 lung cancer cells, hTERT mRNA and protein expression were down-regulated effectively, telomerase activity and cell proliferation were inhibited, and the cell cycle profile was altered.     

lncRNA CASC2对结直肠癌细胞功能及血管生成的影响

目的 研究lncRNA CASC2过表达对结直肠癌细胞增殖、迁移、血管生成及Wnt/FZD/β-catenin信号通路的影响.方法 qRT-PCR检测lncRNA CASC2在正常结肠上皮细胞(NCM460)及结直肠癌细胞株(DLD-1、HT29、SW620、HCT116、RKO、LOVO、SW480)中的表达情况;H...     

叉头盒蛋白A1过表达对SW480细胞增殖和凋亡及EMT形成影响

目的探讨叉头盒蛋白A1(fork-head box protein A1,FOXA1)过表达对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)形成的影响,为结肠癌发生发展机制研究提供一定参考。方法收集南京医科大学第一附属医院2014-03-01-2016-10-31结肠癌手术切除癌组织及其配对正常组织标本各50例。体外培养结肠癌细胞SW480、T84、DIFI及人正常结肠上皮细胞NCM460,以随机数字表法分成空白对照组(CK组)、转染含慢病毒载体对照液的阴性对照组(NC组)和转染含FOXA1过表达慢病毒载体的FOXA1过表达(FOXA1过表达组)3组。采用qRT-PCR法检测细胞中FOXA1mRNA表达水平,采用MTT法检测细胞增殖,采用AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,采用流式细胞术法检测细胞周期,采用蛋白质印迹法检测细胞中FOXA1蛋白及EMT过程相关蛋白的表达。结果结肠癌组织FOXA1mRNA及蛋白表达水平分别为0.42±0.12、0.28±0.07,低于正常组织的1.11±0.24、0.98±0.21,t值分别为18.183、22.361,均P<0.05。结肠癌SW480、T84、DIFI细胞中FOXA1mRNA分别为0.11±0.02、0.14±0.03和0.15±0.03,蛋白表达水平分别为0.34±0.07、0.38±0.09和0.37±0.08,均低于正常上皮细胞的0.27±0.06、0.67±0.09,F值分别为10.259、10.385,P值分别为0.004、0.004;与CK、NC组比较,FOXA1过表达组结肠癌SW480细胞凋亡率(F=32.511)、G0/G1期细胞比例(F=8.860)、FOXA1mRNA(F=325.500)及其蛋白(F=39.670)、E-cadherin(F=37.507)、Cytokeratin蛋白水平(F=14.957)均升高,均P<0.05;24(F=22.407)、48(F=65.290)和72h(F=46.778)的A值、S期细胞(F=11.042)、G2/M期细胞比(F=6.139)、N-cadherin(F=20.746)、Vimentin(F=26.493)、Twist(F=11.024)、β-catenin蛋白(F=29.359)表达水平均降低,均P<0.05。结论过表达FOXA1能够抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其凋亡,可能抑制结肠癌细胞EMT过程。     

沉默CDC6基因对结肠癌细胞增殖的影响及机制的初步研究

目的:探讨沉默CDC6表达对结肠癌细胞增殖的影响及可能作用的机制。方法:筛选高表达CDC6结肠癌细胞株,构建CDC6-shRNA慢病毒载体,感染结肠癌细胞,RT-qPCR、Western blotting验证。CCK8法、细胞克隆形成、流式细胞周期实验分别检测转染前后结肠癌细胞增殖及细胞周期变化。Western blotting检测各组ERK、pERK、AKT、pAKT蛋白水平。结果:CDC6在结肠癌SW620细胞中高表达,shRNA-CDC6慢病毒感染后,CDC6 mRNA及蛋白表达明显降低,敲减率达到82.2%（P＜0.01）。CDC6表达沉默后,CCK8实验结果显示,结肠癌细胞增殖速率明显下降,72小时抑制率达21.0%（P＜0.05）;细胞克隆实验也显示,干扰组结肠癌细胞克隆形成能力显著下降,相对对照组,干扰组细胞克隆数减少52.1%（P＜0.01）。流式细胞周期实验显示,相对对照组,干扰组细胞G0/G1期的细胞比例升高,从44.12%增加到55.03%（P＜0.05）。Western blotting实验结果显示,CDC6表达下调后,干扰组结肠癌细胞pERK、AKT及 pAKT蛋白表达显著减少（P＜0.05）。结论:沉默CDC6基因表达能抑制结肠癌细胞的增殖能力,可能与抑制ERK及AKT信号通路活性有关。