TNF-α对成骨细胞凋亡作用的探讨

目的 探讨TNF-α诱导成骨细胞凋亡的作用,为绝经后妇女骨质疏松的发生机理和治疗方法的研究提供切实可行的依据。方法 在体外培养成骨细胞的过程中,分别加人不同浓度的TNF-α,用流式细胞仪检测其对成骨细胞的凋亡率。结果 TNF-α15ng/mL组、30ng/mL组对成骨细胞的生长均有显著的抑制作用,其中又以30ng/mL组最明显。结论 TNF-α在一定浓度中对成骨细胞的生长有显著的抑制作用, 尤以30ng/mL组最明显。     

复方仙贞汤抑制成骨细胞凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的复方仙贞汤对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡的影响。方法 TNF-α培养液诱导体外培养成骨细胞凋亡后，分别加入不同浓度的复方仙贞汤，用流式细胞仪检测其对成骨细胞的凋亡率。结果 复方仙贞汤1μg／ml组和500μg/ml组细胞凋亡率明显降低，与模型组和空白对照组相比，差异非常显著，其中1μg/ml组作用更强。500μg／ml可能是通过影响成骨细胞周期中的G0-G1和S期而达到抑制凋亡作用的，而1μg／ml组还能增加G2-M期成骨细胞。结论 复方仙贞汤能抑制TNF—α诱导的成骨细胞凋亡，以低浓度(1μg／ml)抑制作用较好。     

肿瘤坏死因子-α通过骨形态发生蛋白-2信号通路抑制成骨细胞分化的实验研究

目的 通过观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导鼠肌源细胞C2C12向成骨细胞分化过程中的影响,探讨TNF-α通过骨形态发生蛋白-2(BMP-2)信号通路对成骨细胞分化的调控及其规律.方法 应用BMP-2体外诱导鼠肌源细胞C2C12 向成骨细胞分化模型,实验分4组:对照组不做任何处理,BMP-2组放入100 ng/mL BMP-2,TNF-α组放入5 ng/mLTNF-α,BMP-2+TNF-α组放入100ng/mLBMP-2和5 ng/mL TNF-α.当BMP-2浓度保持100ng/mL时,添加TNF-α浓度为0、2、5、10 ng/mL;当TNF-α保持在5 ng/mL时,添加BMP-2浓度为100、200、300 ng/mL,分别进行培养7 d后,茜素红染色观察细胞矿化,4-硝基苯基磷酸二钠盐偶氮法定量分析成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性.结果 TNF-α组、BMP-2组和BMP-2+TNF-α组的成骨活性分别为0.260±0.245、7.311±0.772、1.344±0.133,组间两两比较差异均行统计学意义(P＜0.05).当BMP-2浓度保持100 ng/mL,TNF-α浓度为0、2、5、10 ng/mL时,ALP 活性分别为10.207±0.459、6.183±0.374、1.873±0.388、0.096±0.023,组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).当TNF-α保持在5 ng/mL,B MP-2浓度为100、200、300 ng/mL时,ALP活性分别为1.859±0.220、3.779±0.216、4.716±0.304,组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TNF-α能够抑制BMP-2诱导的成骨分化,并具有剂量-效应依赖相关性;且足量的BMP-2可以抵抗TNF-α对成骨细胞的抑制作用.     

重组人胰岛素样生长因子I对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及I型胶原蛋白合成的影响

目的观察胰岛素样生长因子I(IGF-I)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-I对骨代谢影响的可能机制。方法不同浓度rhIGF-I刺激体外培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;肿瘤坏死因子α(TNF-α)单独或与rhIGF-I共同刺激成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;rhIGF-I刺激成骨细胞,免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测I型胶原蛋白的表达。结果一定浓度IGF-I能明显增加成骨细胞数量(P<0·05),在0·1~100ng/ml这种作用与IGF-I的浓度呈正相关;TNF-α在0·1~100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡(P<0·05),并使S期细胞减少(P<0·05),而IGF-I能抑制TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用(P<0·05);经IGF-I的刺激,成骨细胞I型胶原蛋白的表达明显高于对照组(P<0·05)。结论IGF-I对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用,在0·1~100ng/ml之间呈浓度依赖性,IGF-I能抑制TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡,IGF-I能促进大鼠成骨细胞I型胶原蛋白的合成。     

重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠成骨细胞增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响，探讨IGF-Ⅰ对骨代谢影响的可能机制。方法 不同浓度rhIGF-Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力；肿瘤坏死因子α（TNF-α单独或与rhIGF-Ⅰ共同刺激成骨细胞，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；rhIGF-Ⅰ刺激成骨细胞，免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果 一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加成骨细胞数量（P〈0．05），在0．1～100ng／ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关；TNF-α在0．1～100ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡（P〈0．05），并使S期细胞减少（P〈0．05），而IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α对成骨细胞的促凋亡作用（P〈0．05）；经IGF-Ⅰ的刺激，成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论 IGF-Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用，在0．1～100ng/ml之间呈浓度依赖性，IGF-Ⅰ能抑制，TNF-α诱导的大鼠成骨细胞凋亡，IGF-Ⅰ能促进大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成。     

Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响及相关机制。方法将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染原代培养的大鼠成骨细胞并且进行阳性克隆筛选。用30 ng/ml TNF-α刺激转染组和对照组细胞24 h,流式细胞术、透射电镜检测细胞凋亡,应用免疫组化结合计算机图像分析技术检测转染组和对照组细胞Bcl-2蛋白及TNF-α刺激前后Caspase-3蛋白表达。结果 Bcl-2蛋白表达在转染加压筛选组显著高于对照组(P<0.05)。TNF-α刺激后转染组细胞亚二倍体凋亡峰比例为6.6％,对照组为16.1％。TNF-α刺激后转染组细胞.超微结构大多正常,对照组细胞出现明显凋亡征象。TNF-α刺激后两组细胞 Ciaspase-3蛋白表达均升高;TNF-α刺激前Caspase-3蛋白表达转染组与对照组比较差异无显著性(P>0.05),TNF-α刺激后Cas-pase-3表达对照组较转染组显著高(P<0.05)。结论 Bcl-2过表达对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡有抵抗作用,Bcl-2过表达的抗凋亡作用可能部分通过抑制TNF-α刺激引起的Caspase-3蛋白表达升高实现,有望作为抑制成骨细胞凋亡的侯选基因。     

黄精多糖对TNF-α作用的大鼠成骨细胞增殖、凋亡影响及其机制研究

目的探讨黄精多糖(polygonatum sibiricum polysaccharide,PSP)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用的大鼠成骨细胞增殖、凋亡影响及其可能作用的机制。方法采用MTT法检测不同浓度的PSP对TNF-α诱导的成骨细胞增殖能力的影响,筛选出PSP的适宜浓度;通过流式细胞术检测PSP对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡能力的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PSP对TNF-α作用的成骨细胞中miR-212表达的影响;运用蛋白印迹法(Western blot)检测成骨细胞中Cyclin D1、Bc L-2、Bax、P21的蛋白表达水平。结果 TNF-α可抑制成骨细胞增殖,促进P21蛋白表达,而抑制Cyclin D1蛋白表达。PSP不同剂量组可明显促进成骨细胞增殖,令Cyclin D1蛋白表达上调,而P21蛋白表达下调; TNF-α可促进成骨细胞凋亡,上调Bax表达,而降低Bc L-2、miR-212表达,PSP可提高miR-212的表达水平,上调miR-212表达可显著逆转TNF-α对成骨细胞的作用;抑制miR-212表达可明显逆转PSP对TNF-α诱导的成骨细胞增殖及凋亡的作用。结论黄精多糖可通过上调miR-212表达,进而促进成骨细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

地塞米松通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡的研究

目的观察地塞米松对离体成骨细胞凋亡的影响,探讨地塞米松对成骨细胞凋亡的分子作用机制。方法采用不同浓度地塞米松(10~(-8)、10~(-6)、10~(-4)mol/L)干预SD大鼠离体成骨细胞,DAPI染色观察细胞核形态,透射电镜观察细胞核及线粒体形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光探针检测线粒体跨膜电位。结果 10~(-8)、10~(-6)、10~(-4)mol/L地塞米松干预24 h后,DAPI染色发现,10~(-8)mol/L地塞米松组的成骨细胞很少发生凋亡,10~(-6)mol/L和10~(-4)mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡明显,地塞米松的浓度越高,核固缩、核裂解等凋亡现象越明显;透射电镜观察发现,随着地塞米松浓度增加,细胞核固缩明显,线粒体肿胀、空泡样变化现象增多;成骨细胞的凋亡率随着地塞米松浓度的增加而逐渐增高,与空白对照组相比,10~(-8)mol/L地塞米松组细胞凋亡率无明显升高(P0.05),10~(-6) mol/L和10~(-4)mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率分别较空白对照组增加7.240%和31.173%(P0.05);随着地塞米松浓度的增加,线粒体膜电位逐渐减低,与空白对照组相比较,10~(-8)mol/L地塞米松组细胞膜电位下降不明显(P0.05),10~(-6) mol/L和10~(-4)mol/L地塞米松组膜电位下降分别较空白对照组降低6.814%和17.846%(P0.05)。结论地塞米松通过激活线粒体途径诱导成骨细胞凋亡,存在浓度依赖性。     

血管内皮生长因子C对大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对肾小管上皮细胞生成血管内皮生长因子C（ VEGF-C）的影响,及VEGF-C对TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）,加入不同浓度的TNF-α作用不同时间,用实时定量PCR和Western blot方法检测VEGF-C mRNA和蛋白的表达.用不同浓度TNF-α与放线菌素D（ActD）刺激细胞24 h,流式细胞学方法检测细胞凋亡.再加入不同浓度的VEGF-C,观察其对凋亡的抑制情况.结果 TNF-α促进NRK52E细胞VEGF-C的表达,呈剂量和时间依赖性.TNF-α（加入ActD 30ng/ml）促进细胞凋亡,凋亡率随TNF-α浓度增高而增加.VEGF-C能够抑制凋亡,50 ng/ml时对细胞凋亡有抑制作用,100 ng/ml时抑制作用最强.结论 VEGF-C对大鼠近端肾小管上皮细胞的凋亡具有保护作用.     

流体剪切力抑制TNF-α诱导的成骨细胞凋亡机制

流体剪切力(FSS)在骨生理和骨组织重建中起着十分重要的作用。现阶段FSS抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成骨细胞凋亡机制研究主要集中在FSS诱导成骨细胞PI3K激活、诱导成骨细胞caspase-3抑制和刺激成骨细胞产生一氧化氮方面,三条抑制凋亡途径既相互独立又相互联系,构成了复杂的网络机制。回顾分析FSS抑制TNF-α诱导的成骨细胞凋亡机制,有利于了解FSS对成骨细胞生物活性的影响,揭示骨愈合的相关分子机制。     

异丙酚对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法3～4代人脐静脉内皮细胞于融合状态,随机分为5组:①TNF-α组(P0+TNF-α);②12.5μmol/L异丙酚和TNF-α组(P12.5+TNF-α);③25μmol/L异丙酚和TNF-α组(P25+TNF-α);④50μmol/L异内酚和TNF-α组(P50+TNF-α);⑤100μmol/L异丙酚和TNF-α组(P100+TNF-α);TNF-α终末浓度为2000U/ml,各组先加入不同浓度的异丙酚孵育30min后再加入TNF-α共同培养24h。用DNA原位缺口末端标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡指数(AI),并用透射电镜观察细胞形态学改变。结果 肿瘤坏死因子组(P0+TNF-α)可见较多凋亡细胞,不同浓度的异丙酚预处理后再加入肿瘤坏死因子的各组(P12。5+TNF-α、P25+TNF-α、P50+TNF-α、P100+TNF-α细胞凋亡指数与肿瘤坏死因子组(P0+TNF-α)比较,均有明显下降(P<0.05或P<0.01),且随异丙酚浓度的升高,AI逐渐减小,内皮细胞损伤明显减轻。结论 临床相关浓度的异丙酚可抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡。     

钴纳米粒子和钴离子对成骨样细胞MG-63体外生长的影响

[目的]研究钴纳米粒子(Co-NPs)和钴离子(Co2+)对成骨细胞体外生长的影响,探讨金属磨损粒子与假体周围骨溶解的关系。[方法]分为三组:空白对照组、Co-NPs组、Co2+组。体外培养成骨样细胞MG-63,不同时间点观察细胞形态变化并计数,Real-time PCR检测Caspase3、ATM、BAX、Bcl-2、P21等凋亡基因的变化,ELISA方法检测培养上清中TNF-α和IL-6的表达情况,Real-time PCR检测细胞TNF-α和IL-6 mRNA水平的表达。ELISA检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)的表达。[结果](1)与对照组相比,不同浓度Co2+组和高浓度Co-NPs组的细胞计数明显减少,高浓度Co2+组细胞形态发生变化;(2)Real-time PCR结果显示:相比于对照组,不同浓度Co2+组和高浓度Co-NPs组的MG-63细胞中凋亡相关基因Caspase3、ATM、BAX、P21表达上调,而BCl-2均未发生明显上下调变化;(3)ELISA结果显示:不同浓度Co2+组和高浓度Co-NPs组的MG-63细胞培养上清中TNF-α表达上调,而IL-6表达未发生明显变化;Real-time PCR的结果也显示TNF-α的mRNA水平上调,IL-6的mRNA水平未发生明显变化;(4)ALP检测结果显示:不同浓度Co2+和高浓度Co-NPs抑制ALP的表达。[结论]不同浓度Co2+和高浓度Co-NPs能抑制成骨细胞增殖和活性,促进其凋亡,同时促进其释放TNF-α。     

骨组织工程中促细胞粘附因子bFGF的研究

目的：针对骨组织工程中成骨细胞与基质材料间促粘附这一重要问题,研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对成骨细胞粘附特性的影响。方法：取兔骨髓基质干细胞来源的成骨细胞体外培养,分别用0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml浓度的bFGF诱导培养,观察接种后各时间点成骨细胞粘附情况,体视学计量粘附细胞数量。结果：10ng/mlbFGF诱导成骨细胞24小时后,细胞粘附数量增加最明显,显高于对照组及100ng/ml组（P＜0．01）。实验还发现,成骨细胞粘附最快发生在接种后4小时内。结论：一定浓度碱性成纤维细胞生长因子具有促进成骨细胞粘附特性的作用。     

酒精诱导体外培养成骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax mRNA表达的实验研究

目的 观察酒精对体外培养成骨细胞凋亡的影响及凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达变化.方法 体外分离培养成骨细胞,随机分组进行不同浓度酒精干预,利用AO/EB染色观察细胞凋亡形态学改变、DNA Ladder检测凋亡细胞DNA片段形成等定性方法证实凋亡发生.流式细胞技术定量测定细胞凋亡率.RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达.结果 不同浓度酒精干预后,成骨细胞发生皱缩,AO/EB染色出现凋亡细胞,随酒精浓度增加形成规则的DNA Ladder梯状条带,100mM浓度时最明显.流式细胞仪分析,与对照组(3.42%±1.07%)相比,100 mM酒精干预48h后细胞凋亡率增加,为11.94%±1.14%,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,成骨细胞经100 mM酒精干预培养24 h后,Bcl-2 mRNA表达强度降低66%,Bax mRNA表达强度增高11%,Bcl-2/Bax比值下降69%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 酒精引起体外培养成骨细胞凋亡,是酒精性骨损害的发生机制之一.凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达下调和Bax mRNA表达上调与酒精引起成骨细胞凋亡有关.     

破骨细胞对IGF-1诱导成骨细胞骨同化的促进作用

目的 探讨破骨细胞(osteoclast, OC)存在时IGF-1对成骨细胞(osteoblast, OB)活性的影响。方法 体外培养MC3T3小鼠成骨细胞及RANKL诱导分化成熟的破骨细胞。以10ng/ mL的rhIGF-1直接干预单独或与破骨细胞共育的成骨细胞, 并设空白对照组,培养12h,检测成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性;培养8d后Von kossa钙化染色法观察矿化结节的形成。结果 成骨细胞、破骨细胞共培养时,rhIGF-1作用12h能够明显促进成骨细胞增殖(P<0.05),抑制成骨细胞的凋亡(P<0.05),使细胞内ALP活性升高(P<0.05),8d时钙化结节的个数及面积百分比升高(P<0.05);与单独培养的成骨细胞组有显著性差异。结论 破骨细胞可明显促进IGF-1所诱导的成骨细胞骨同化作用。     

骨组织工程中促细胞粘附因子bFGF的研究

目的 针对骨组织工程中成骨细胞与基质材料间促粘附这一重要问题,研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成骨细胞粘附特性的影响。方法 取兔骨髓基质干细胞来源的成骨细胞体外培养,分别用Ong/ml、10ng/ml、100ng/ml浓度的bFGF诱导培养,观察接种后各时间点成骨细胞粘附情况,体视学计量粘附细胞数量。结果 10ng/ml bFGF诱导成骨细胞24小时后,细胞粘附数量增加最明显,显著高于对照组及100ng/ml组(P<0.01)。实验还发现,成骨细胞粘附最快发生在接种后4小时内。结论 一定浓度碱性成纤维细胞生长因子具有促进成骨细胞粘附特性的作用。     

血红素氧合酶1对TNF-α诱导的人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用研究

目的探讨血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)对TNF-α诱导的人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用及其可能的分子机制。方法取腰椎间盘突出症患者自愿捐赠的椎间盘组织,体外培养人退变髓核细胞并传代,取第3代细胞进行实验。采用细胞计数试剂盒8测定不同浓度(10、20、50、100和200 ng/mL)TNF-α对髓核细胞活性的影响,筛选最佳刺激浓度进行下一步实验。将髓核细胞分成4组,分别采用单纯基础培养液(对照组)、TNF-α刺激(TNF-α组)、TNF-α和CoPP 10μmol/L刺激(CoPP组)、TNF-α和ZnPP 15μmol/L刺激(ZnPP组)培养,24 h后采用Hoechst染色以及流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP-1)以及HO-1、p-P65的表达。为进一步探讨HO-1对髓核细胞凋亡的潜在分子机制,取髓核细胞分别采用TNF-α刺激(TNF-α刺激组)以及TNF-α和吡咯烷二硫基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)5μmol/L刺激(TNF-α+PDTC刺激组)培养24 h,采用流式细胞仪检测髓核细胞凋亡率。结果经检测确定TNF-α最佳抑制浓度为100 ng/mL。Hoechst染色示,对照组和CoPP组凋亡细胞较少;TNF-α组和ZnPP组可见凋亡样改变细胞核,其中ZnPP组最显著。流式细胞仪检测示,与对照组相比,TNF-α组、CoPP组及ZnPP组细胞凋亡率均显著提高(P0.05);与TNF-α组相比,CoPP组细胞凋亡率显著降低(P0.05),而ZnPP组显著提高(P0.05)。Western blot检测示,与对照组相比,TNF-α组HO-1蛋白表达降低,cleaved Caspase-3、EMP-1及p-P65蛋白表达升高(P0.05)。与TNF-α组相比,CoPP组HO-1蛋白表达明显升高,cleaved Caspase-3、EMP-1、p-P65蛋白表达明显降低(P0.05);而ZnPP组HO-1蛋白表达明显降低(P0.05),cleaved Caspase-3、EMP-1蛋白表达增高(P0.05),p-P65蛋白表达无明显变化(P0.05)。与TNF-α刺激组相比,TNF-α+PDTC刺激组细胞凋亡率明显降低(t=3.076,P=0.031)。结论 HO-1能够抑制TNF-α诱导的人椎间盘髓核细胞凋亡,其机制可能是通过调控NF-кB通路得以实现。     

异丙酚对肿瘤坏死因子-α诱导小鼠脊髓神经元凋亡的影响

目的研究异丙酚对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导小鼠脊髓神经元凋亡的影响。方法脊髓神经元取自孕14d胎龄小鼠的胎鼠，于含B27的神经细胞培养基中培养7d后，随机分为6组：对照组（Con组）；50μmol／L异丙酚组（P50组）；TNF-α组（TNF-α组）；25μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P25＋TNF-α组）；50μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P50＋TNF-α组）；100μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P100＋TNF-α组），各组中加入相应终浓度的异丙酚孵育30min，再加入TNF-α至终末浓度为2000U／ml，培养24h后，采用碘化丙锭／Hoechst 33342双染法检测细胞凋亡，计算细胞凋亡率，采用免疫细胞化学方法测定Bcl-2表达。结果与Con组比较，TNF-α组神经元凋亡率升高，Bcl-2表达降低（P〈0．01），不同浓度异丙酚预先给药可减弱TNF-α诱导的上述改变（P〈0．05）。结论异丙酚可抑制TNF-α诱导小鼠脊髓神经元的凋亡，其机制与上调Bcl-2表达有关。     

流体剪切力抑制肿瘤坏死因子α诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的实验研究

目的研究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的影响。方法将MC3T3-E1分为TNF-α干预组(实验组)和无TNF-α干预组(对照组),TNF-α(10ng/ml)×4h诱导MC3T3-E1凋亡后,四个实验组分别加载12dyn/cm2FSS作用0,15,30,60min。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜和流式细胞技术(FΑCS)检测细胞的增殖能力和凋亡,免疫印迹法检测半胱氨酸蛋白激酶9(caspase9)和凋亡蛋白酶活化因子1(Αpaf-1)蛋白的表达。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果TNF-α(10ng/ml)×4h能诱导明显的凋亡信号,FSS(12dyn/cm2)能明显抑制这种凋亡,而且随着刺激时间的增加,从0min逐渐延长至60min,细胞活性逐渐增加,凋亡细胞数逐渐减少,实验组与对照组单因素方差分析及各组间LSD两两比较有显著性差异(P0.05),同时caspase9和Αpaf-1蛋白的表达也逐渐增加。结论生理范围的FSS能够抑制TNF-α诱导的MC3T3-E1细胞的凋亡,作为线粒体通路的关键蛋白,caspase9和Αpaf-1在凋亡时增加而FSS后表达减少,说明FSS抑制这种凋亡至少部分是减弱了凋亡的线粒体通路。     

TNF-α在构建大鼠骨性关节炎模型中对内质网应激的影响探讨

目的观察不同剂量肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)在构建大鼠骨性关节炎(osteoarthritis,OA)模型中对内质网应激的影响,初步探讨大鼠骨性关节炎病理过程中内质网应激的作用。方法将20只SPF级SD雄性大鼠随机分为健康对照组、TNF-α1ng/m L干预组、TNF-α5ng/m L干预组和TNF-α10ng/m L干预组,分别给予不同剂量TNF-α处理,4周后取材,培养提取的各组原代软骨细胞,采用MTT法检测不同剂量TNF-α对软骨细胞活力的影响;ELISA法检测内皮细胞粘附分子-1(endothelial cell adhesion molecule-1,s ICAM-1)含量变化,TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)检测炎症因子MMP9、ICAM1的表达以及内质网应激指标IRE1、p-IRE1、GRP78的水平变化。结果 MTT法检测提示加入不同剂量的TNF-α后软骨细胞活力未见明显改变;TUNEL法检测结果提示,与对照组相比,TNF-α干预组软骨细胞凋亡率较高(P0.01),并呈浓度依赖性促进细胞凋亡;Western blot结果表明,与对照组相比,软骨细胞的p-IRE1、IRE1、GRP78、MMP9及ICAM1的表达水平呈TNF-α浓度依赖性升高(P0.01)。结论在TNF-α构建大鼠骨性关节炎模型中,炎症因子与内质网应激指标均发生显著改变,内质网应激可能在大鼠骨性关节炎的发生发展过程中发挥重要影响,且当TNF-α浓度为10 ng/m L时,其对炎性因子及内质网指标的作用效果最为显著。