转染Megsin基因对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响及机制

目的 了解Megsin基因高表达对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响，并探讨其机制。 方法 构建大鼠Megsin基因真核表达载体，体外转染系膜细胞。3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测系膜细胞增殖情况。RT-PCR方法检测系膜细胞血小板源生长因子(PDGF)-BB、IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1和TNF-α mRNA表达变化。ELISA法检测细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原浓度。观察PDGF-BB中和抗体对大鼠系膜细胞转染Megsin基因后细胞增殖和TGF-β1 mRNA表达的影响。 结果 大鼠系膜细胞转染Megsin基因后，细胞内3H-TdR掺入量显著增加，PDGF-BB和TGF-β1 mRNA表达显著上调，细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原的浓度显著升高，3者与转染Megsin基因呈明显时间依赖性关系。PDGF-BB中和抗体显著抑制系膜细胞转染Megsin基因后细胞内3H-TdR的掺入，并下调稳定表达Megsin基因的大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA表达。结论 Megsin基因高表达在体外可促进系膜细胞PDGF-BB和TGF-β1的表达和分泌，进而促进系膜细胞增生和Ⅳ型胶原分泌。     

黄芪通过c-met调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

AB 目的：探讨黄芪对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的作用及机制。方法：体外培养正常大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）,应用倒置相差显微镜观察NRK52E细胞形态学变化;免疫组织化学染色法及实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,肝细胞生长因子HGF受体（c-met）的表达;ELISA法定量检测细胞上清液中胶原Ⅰ（Col-Ⅰ）,胶原Ⅲ（Col-Ⅲ）和纤维黏连蛋白（FN）的水平。结果：TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化（TEMT）,TGF-β1诱导组细胞肥大、拉长,呈长梭形,α-SMA表达明显增强,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌增加（P〈0.05）。加入不同浓度黄芪后,细胞形态接近正常肾小管上皮细胞形态,α-SMA表达、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌均较TGF-β1诱导组明显抑制（P〈0.05）,c-met表达较TGF-β1诱导组增加（P〈0.05）且呈剂量依赖性。结论：TGF-β1可以诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化,增加细胞外基质成分Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的分泌;黄芪能够抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化以及细胞外基质的分泌;黄芪抑制细胞转分化的机制可能与其增强c-met的表达有关。     

肾疏宁对体外培养肾小球系膜细胞系膜基质的实验研究

目的：探讨肾疏宁防治系膜基质硬化的细胞分子机制。方法：应用细胞培养技术，进行肾小球系膜细胞培养，采取血清药理学方法，制备肾疏宁药物血清，并分为低，中，高三个剂量梯度，利用血管紧张素Ⅱ为刺激因子，在4h,8h,16h,32h四个时间段观察肾疏宁药物血清对正常和病理状态下系膜细胞增殖和分泌系膜基质ColⅣ及FN的含量，RT－PCR检测ColⅣ及FN的mRNA水平。结果：血管紧张素Ⅱ能明显促进MC增殖和系膜基质中ColⅣ及FN的分泌，16h达到高峰，32h时呈下降趋势，肾疏宁血清中，高剂量组对ColⅣ及FN的分泌均有明显抑制作用，并呈现剂量依赖关系。RT－PCR结果也说明肾疏宁血清对正常和血管紧张素Ⅱ刺激下的MC分泌ColⅣ及FN的mRNA表达有下调作用。结论：肾疏宁能明显抑制肾小球系膜基质中ColⅣ及FN的合成与分泌，并在基因水平上对其有影响作用。这可能也是肾疏宁临床治疗MsPGN疗效较佳并且防治肾小球硬化的作用机理之一。     

血小板源生长因子对肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原合成的影响

目的 观察PDGF-BB对HSC细胞增殖以及合成Ⅰ型胶原的作用。方法 大鼠的HSC细胞用不同浓度的PDGF-BB培养处理，收集细胞和培养液上清。细胞增殖用噻唑蓝（MTT）法检测，流式细胞仪检测细胞周期，Ⅰ型胶原蛋白用ELISA法检测，RT—PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果 PDGF-BB在浓度1～10μg/L时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖，当浓度大于10μg/L其促增殖作用达到饱和。PDGF-BB明显促进细胞的DNA的合成，使细胞大部分处于S期。PDGF-BB能在蛋白和mRNA水平上促进Ⅰ型胶原的合成，并且随着PDGF-BB处理时间地延长其合成量也增加。结论 PDGF-BB除了能促进肝星状细胞的增殖外，也促进Ⅰ型胶原的合成。     

肾纤康汤对系膜增生性肾小球肾炎患者血清层粘连蛋白及Ⅳ型胶原的影响

目的：探讨经验方肾纤康汤对系膜增生性肾小球肾炎（Mesangial Proliferative Glomerulonephritis MsPGN）患者血清细胞外基质（Extacelluar Matrix ECM）成分的抑制作用。方法：60例MsPGN患者随机分成肾炎对照组、苯那普利组和肾纤康组，治疗前后采用放射免疫法检测血肖层粘连蛋白（Laminin LN）和Ⅳ型胶原（Collagen Ⅳ Col-Ⅳ）并观察各组差异。结果：MsPGN患者血清LN、Col-Ⅳ水平显著高于健康对照组（P＜0.01）。肾纤康汤能明显下调MsPGN患者血清LN和Col-Ⅳ水平（P＜0.01），其作用强度珉本那普利相近（P＞0.05）。结论：肾纤康汤能减少MsPGN患者血清LN、Col-Ⅳ的水平，其效果和作用机制有待于进一步的研究。     

高剂量糖皮质激素对成年雄性小鼠PDGF-BB分泌及H型血管生长的作用研究

目的 探讨长期高剂量糖皮质激素对雄性成年小鼠血小板衍化生长因子-BB（PDGF-BB）分泌的影响以及对骨成长特异H型血管的作用。方法 选取雄性3月龄C57小鼠，通过腹腔注射强的松龙10 mg/m2，持续四周，建立糖皮质激素性骨质疏松症组（GIOP组），同时设定对照组。测定血清骨形成标志物骨钙素(OC)、骨特异性碱性磷酸酶(BSAP)、胶原氨基酸延长肽I(PINP)及骨吸收标志物血清C端交联肽(CTX)；测定骨髓上清和血清的PDGF-BB；对股骨行Micro-CT扫描；将股骨冰冻切片，行CD31hiEmcnhiH型血管免疫荧光染色。结果 GIOP组血清中CTX-1表达上升，BSAP、OC和PINP表达下降,股骨Micro CT显示GIOP组相对于对照组骨量减少,GIOP组血清和骨髓中的PDGF-BB表达明显下降,CD31hi和Endomucinhi 表达均有所下调。结论 长期高剂量糖皮质激素对成年雄性小鼠破骨前体细胞PDGF-BB分泌有抑制作用，对骨成长特异的H型血管生长有抑制作用。骨特异的H型血管生长被抑制是糖皮质激素性骨质疏松症的发病机制之一。     

"慢性肾衰基本方"含药血清对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:观察经验方"慢性肾衰基本方"对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的肾小管上皮细胞(TECs)转分化及细胞外基质分泌的影响,以进一步证实并初步探讨其延缓慢性肾衰竭肾小管-间质纤维化的作用机制.方法:给予家兔中药灌胃3 d后制备"慢性肾衰基本方"含药兔血清,应用不同浓度含药血清处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,然后应用免疫细胞化学方法、流式细胞技术测定HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达率;应用酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定培养上清纤维连结蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)水平,并进而计算单个细胞FN及Col-Ⅳ分泌水平.结果:含药兔血清呈剂量依赖方式逆转TGF-β1诱导的HK-2细胞α-SMA的表达,并呈剂量依赖方式抑制单个细胞FN及Col-Ⅳ的分泌.结论:"慢性肾衰基本方"至少部分是通过抑制肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质的过度分泌而对防治肾小管-间质纤维化发挥作用.     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞外基质的影响

目的：通过检测霉酚酸酯（MMF）的代谢产物霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）增殖、转化生长因子-β1（transformation growth factor-β1,TGF-β1）和细胞外基质的主要成分：纤维连接蛋白（fibrin,FN）、层黏连蛋白（laminin,LN）和胶原Ⅳ（typeⅣ collagen,ColⅣ）分泌的影响,探讨MPA对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的保护机制。方法：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定高糖及高糖加入不同浓度MPA（1～10μmol/L）后对大鼠MCs增殖的影响,ELASE的方法测定各组24h、48h、72hFN、LN、ColⅣ的表达,荧光定量多聚酶链反应的方法检测各组标本中TGF-β1 mRNA的表达,并进行统计学分析。结果：高糖可以诱导MCs增殖及TGF-β1、FN、LN、ColⅣ的表达,MPA抑制高糖环境下MCs增殖和FN、LN和ColⅣ分泌并呈剂量时间依赖性,MPA可以呈剂量依赖性抑制高糖环境下MCs分泌TGF-β1,各组之间有统计学差异（P〈0.05）。结论：MPA可以通过抑制高糖环境下MCs的增殖和TGF-β1的分泌,从而抑制系膜外基质增多、系膜区扩张,有效阻止细胞外基质积聚,从而防止肾小球硬化,延缓DN的发展。     

肾病Ⅰ号方对大鼠系膜细胞增殖及IL-6和FN表达的影响

目的：观察肾病Ⅰ号方（SBYHF）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖及表达纤维连接蛋白（FN）及白细胞介素-6（IL-6）的影响,探讨其抗肾纤维化的机制。方法：通过体外培养大鼠肾小球系膜细胞技术及体外药物血清实验方法,采用CCK-8法检测GMC的增殖,ELISA法检测FN的分泌水平,RT-PCR法检测IL-6 mRNA的表达。结果：肾病Ⅰ号方可显著抑制GMC和增殖（P〈0.01）,减少FN的分泌和IL-6 mRNA的表达（P〈0.01）。结论：肾病Ⅰ号方可能通过减少GMC和FN的分泌,下调IL-6 mRNA表达,而抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖,从而发挥抗肾脏纤维化的作用。     

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ⅣC）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。方法：培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）测定TGF-β1mRNA的表达。结果：百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显（P〈0.01）;高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多（P〈0.01）,百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖（P〈0.01）、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达（P〈0.05）。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。