染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞和肺组织热应激蛋白HSP70…

应用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术，对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞和肺组织热应激蛋白ＨＳＰ７０进行了检测，结果两者ＨＳＰ７０的表达均明显增加。推测矽尘引起肺泡巨噬细胞ＨＳＰ７０表达增加可能与石英尘的毒作用有关。矽尘引起的肺部炎症及组织损伤都可引起肺组织ＨＳＰｓ的表达增加。     

染矽尘大鼠肺组织热应激蛋白HSP70的分布—免疫组织化学研究

采用免疫组织化学方法对染矽尘大鼠肺组织热激蛋白ＨＳＰ７０的分布进行了研究，结果染矽尘大鼠肺组织ＨＳＰ７０着色明显增多，着色细胞主要是巨噬细胞，矽尘作用下ＨＳＰ７０的增加很可能是巨噬细胞的一种自我保护机制，提高巨噬细胞热应激蛋白的表达可能为保护巨噬细胞，预防矽肺的发生发展提供一条新的途径。     

热应激蛋白保护肺泡巨噬细胞抵抗石英尘毒作用的研究

采用体外热应激的方法观察了ＨＳＰｓ对培养大鼠ＡＭ的保护作用。结果ＨＳＰｓ水平增加可保护ＡＭ抵抗石英尘毒作用，表现在ＡＭ细胞存活率明显提高，而ＭＤＡ含量及培养上清液ＬＤＨ活性明显下降。提高ＡＭＨＳＰｓ水平，可能为保护和促进肺清除功能，预防矽肺等肺部疾病的发生发展提供一条新的途径     

染石英大鼠肺泡巨噬细胞溶菌酶表达的研究

目的观察染石英大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中溶菌酶(lysozyme,LSZ)表达的改变,研究其在矽肺致病中的意义。方法48只大鼠随机分为染尘组和对照组,每组各24只。染尘组采用气管内注入法给SD大鼠一次注入石英粉尘悬液1ml(40g/L)。染尘后15、30、60d每组各处死8只大鼠。对照组注入等体积生理盐水,处死时间同染尘组。取肺组织,用免疫组织化学技术检测LSZ在AM中的表达,并结合图像分析对LSZ的表达进行定量分析。结果染尘15、30和60d肺泡AM内LSZ颗粒面积灰度乘积分别为(2063．22±1302．31)、(3117．03±2445．63)和(3417．22±2744．19),均大于对照组[(859．63±365．37)、(763．82±326．83)和(771．41±284．50)],差异有统计学意义(P＜0．01)；染尘组组内比较,随着染尘时间的增加,肺泡AM内LSZ颗粒面积灰度乘积逐渐增加,且差异有统计学意义(P＜0．01)。结论SiO_2可诱导AM高表达LSZ。LSZ在矽肺的发生、发展过程中可能起重要作用。     

染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞胰岛素样生长因子的研究

本文通过高压液相技术对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞上清中的促纤维母细胞生长活性物质进行了初步分离纯化。结果表明,SiO_2诱发的矽肺大鼠肺泡巨噬细胞上清中,出现一异常增高的蛋白洗脱峰,分子量范围在6-9KD之间,能明显促进同糸大鼠肺纤维母细胞的生长,放射免疫分析表明,这一洗脱峰具有较强的胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ)的免疫反应性。其次,对矽肺大鼠支气管肺泡灌洗液及血清的分析表明,灌洗液中IGF-Ⅰ升高明显,但血清IGF-Ⅰ水平无变化。     

SOD对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

[目的]探讨超氧化物歧化酶（SOD）对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。[方法]对雄性Wistar大鼠行支气管肺泡原位灌洗术，获取肺泡巨噬细胞。将贴壁后的肺泡巨噬细胞分为对照组、模型组和干预组，均用无血清DMEM培养基孵育。模型组加入SiO2粉尘悬液，干预组用SOD预处理1h后再加入SiO2粉尘悬液。各组肺泡巨噬细胞分别孵育1、2、4、8、16h，用免疫细胞化学和RT-PCR方法观察其MMP-2、MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。[结果]模型组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达在1、2、4、8h均较对照组明显增强（P〈0．01），分别是对照组的1．229、1．358、1．401、1．354倍和1.402、1．637、1．705、1．463倍。MMP-2蛋白及其mRNA表达无明显变化。干预组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达在1、2、4、8h较模型组显著减弱（P〈0．05），但仍高于对照组（P〈0．05）。[结论]应用SOD可降低染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA的表达。     

锌对热应激大鼠热休克蛋白70mRNA表达的影响

目的：锌对热应激大鼠热休克蛋白７０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达的影响。方法：分别以高、中、低锌饲料（锌含量分别为９２２０、４５６１、２１７０ ｍ ｇ／ｋｇ 饲料）喂养３ 组大鼠,热暴露（干球４１５ ° Ｃ、湿球３２ ° Ｃ）３０ ｍ ｉｎ 时断头处死,应用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交和斑点杂交检测热应激大鼠肝脏热休克蛋白７０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达情况。结果：不经受热暴露的３ 组动物仅高锌组能检测到热休克蛋白７０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ,而热暴露３０ ｍ ｉｎ 的３ 组动物均有热休克蛋白７０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 条带,且依锌水平不同,其表达强弱依次为高锌组强于中锌组,中锌组强于低锌组。结论：热应激时热休克蛋白７０ 基因的转录水平提高;锌通过活化热休克蛋白７０ 基因的转录而诱发热应激大鼠热休克蛋白７０ 的合成,从而使机体对热暴露产生更强的耐受力。     

石英尘作用下肺泡巨噬细胞HSP70及其mRNA水平的变化

为了研究石英尘对肺泡巨噬细胞热应激蛋白（ＨＳＰｓ）的影响，采用ＤｏｔＢｌｏｔ技术，从蛋白质和ｍＲＮＡ水平观察了石英尘对培养大鼠肺泡巨噬细胞热应激蛋白ＨＳＰ７０表达的影响。结果表明，石英尘作用下ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ及蛋白质水平都明显增加。提示，其机制可能与活性氧基团有关。     

染矽尘大鼠表面活性蛋白D和克拉拉细胞蛋白表达的变化

目的 探讨染矽尘大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)表面活性蛋白-D(SP-D)和克拉拉细胞蛋白(CC16)表达的动态变化.方法 将80只大鼠随机分为对照组、染矽尘组(每组40只),采用气管暴露注入矽尘悬液法建立矽肺动物模型.染尘后在7、14、21、28和60 d时每组分别处死8只大鼠,取肺组织和BALF.免疫组化法检测不同时间点的肺组织SP-D和CC16在肺组织中的表达,并作定量分析;以Western Blot法检测BALF中SP-D和CC16含量,并作定量分析.结果 对照组大鼠肺泡Ⅱ型细胞和Clara细胞胞浆内有少量sP-D表达.染矽尘组染矽尘7d后肺组织SP-D表达明显升高,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.01);14 d时达到高峰期,此后开始下降.在对照组细支气管周边的Clara细胞胞浆内CC16高表达,部分细胞核内也可见CC16表达.染矽尘大鼠7d后CC16表达明显减少,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.01).随着染矽尘时间的延长,CC16表达逐渐减少,并且呈负相关性(t=-0.967,P＜0.01) 7、28 d染矽尘组BALF中SP-D含量均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);且28 d BALF中SP-D含量明显高于7 d染矽尘组,差异有统计学意义(P＜0.01).7、28 d染矽尘组BALF中CC16蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);且28 d明显低于7 d染矽尘组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 染矽尘能够导致大鼬市组织和BALF SP-D和CC16蛋白表达改变且与染矽尘时间有一定关系.     

染矽尘大鼠早期肺组织病理变化观察

目的探讨大鼠染矽尘早期肺组织病理改变。方法 Wistar大鼠随机分为对照组和15、30、60mg/ml染矽尘实验组,每组42只。一次性气管内注入染尘建立大鼠矽肺模型,每组分6个时间点(1、3、7、14、21、28d)分别取7只大鼠处死,取肺脏称重,福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,普通光镜下观察肺组织病理变化。结果各剂量染尘大鼠各时间点肺组织脏器系数均高于对照组(P<0.05),且随时间延长和染尘剂量增加其增高幅度增大(P<0.05);肺组织肉眼观察可见,随着染尘时间的延长,肺表面逐渐出现颜色变深、体积增大、不规则斑块增多、弹性减弱等症状;HE染色显示,大鼠染尘后28d内,肺组织以炎症反应为主伴发肺间质的弥漫性纤维化。实验大鼠炎症反应程度随染尘剂量的增加加重,在染尘后7～14d肺组织的炎症反应比较明显。肺间质纤维化程度随实验时间的延长及染尘剂量的增加有逐渐加重的趋势。结论矽肺早期炎症反应明显,主要表现为细胞浸润聚集,肺泡间隔增厚,纤维组织增生,肺泡正常组织发生改变。     

葡萄糖酸锌和硫酸镁拮抗二氧化硅细胞毒性作用的研究

目的:观察葡萄糖酸锌与硫酸镁单独及联合作用对二氧化硅致肺泡巨噬细胞丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶水平变化的影响,寻找二者的最佳剂量组合。方法:采用大鼠肺灌洗法纯化获得肺泡巨噬细胞(1×109个/L),同时加入二氧化硅及不同浓度的葡萄糖酸锌溶液、硫酸镁溶液、葡萄糖酸锌与硫酸镁溶液,37℃,5%CO2培养箱培养18h后,检测丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶含量。结果:葡萄糖酸锌与硫酸镁单独作用,以及两者联合使用都具有拮抗二氧化硅细胞毒性作用。且以1·5mg/L葡萄糖酸锌的与2·0μmol/L硫酸镁联合作用效果最好。结论:葡萄糖酸锌与硫酸镁单独及二者联合应用在体外可有效拮抗二氧化硅粉尘的细胞毒性作用,降低肺泡巨噬细胞的丙二醛含量,升高巨噬细胞的超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活力,二者合用效果更佳。     

钢厂接触矽尘工人及矽肺病人外周血淋巴细胞HSP70水平检测

本研究用ＨＳＰ７０单克隆抗体及ＤｏｔＢｌｏｔ方法对某钢厂接触矽尘工人矽肺患者外周血淋巴细胞ＨＳＰ７０水平进行了检测，结果发现接触矽尘工人及矽肺患者在淋巴细胞ＨＳＰ７０水平有不同程度的增高，但与矽尘引起的肺部纤维化病变尚水见明显联系。其意义有待进一步探讨。     

大鼠矽肺支气管肺泡灌洗液和肺组织磷脂谱的研究

本文报告了大鼠矽肺支气管肺泡灌洗液和肺组织磷脂谱间变化的关系。实验分为正常对照组和石英组，在染尘后１５、４５、９０、１８０和２７０天分批剖检，测定其灌洗液和肺组织中总磷脂、ＤＰＰＣ、ＰＧ、ＰＥ含量。结果表明在实验期间石英组灌洗液和肺组织中总磷脂、ＤＰＰＣ、ＰＧ和ＰＥ含量呈升高趋势，且早期变化明显，但二者并不是呈简单的对应关系。推测影响灌洗液和肺组织磷脂谱含量和比值变化的因素有所不同。     

经SiO2粉尘刺激的矽肺患者肺泡巨噬细胞中CTGF的表达及意义

[目的]通过矽肺病人肺灌洗液中巨噬细胞经SiO2粉尘刺激后,巨噬细胞及培养上清中CTGF的表达,探讨CTGF在矽肺纤维化过程中的作用。[方法]应用免疫细胞化学方法和酶联免疫吸附法检测巨噬细胞及培养上清的CTGF的表达。[结果]处理组不同时间点SiO2刺激的矽肺患者AM和培养上清中CTGF表达不断增高,并在18h表达最高,与同期对照组相比差异显著。[结论]SiO2可促进矽肺病人AM高表达CTGF,提示CTGF在肺纤维化的形成与发展中其重要作用,推测CTGF的表达与肺纤维化形成有关。     

CTGF和TGF-β1在实验性矽肺肺组织中的表达及其意义

[目的]研究结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)在二氧化硅所致矽肺大鼠肺组织中的表达.[方法]矽肺组大鼠20只气管灌注石英粉尘制作模型,对照组大鼠20只以灭菌生理盐水代替,45d后观察大鼠肺组织的病理改变,免疫组化方法观察肺组织中CTGF和TGF-β1的蛋白表达情况.[结果]CTGF和TGF-β1在矽肺组肺组织中的表达量均高于对照组大鼠,且差异有统计学意义(P<0.05);CTGF和TGF-β1表达量间无直线相关关系(P>0.05).[结论]CTGF和TGF-β1可能参与了矽肺的发生发展.     

SiO2对人肺泡巨噬细胞及肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

[目的]探讨SiO2是否通过影响矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)和肺成纤维细胞(FB)基质金属蛋白酶(MMPs)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)系统参与矽肺纤维化的发生发展.[方法]收集矽肺患者的AM,在体外以SiO2(50 μg/ml)和不加血清的DMEM培养基培养2、6、12、18、24、36 h,用免疫细胞化学的方法检测AM中MMP-9和TIMP-1的表达.收集矽肺患者AM培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48 h,用免疫细胞化学的方法检测FB中MMP-1和TIMP-1的表达.[结果]经SiO2刺激的AM MMP-9表达明显上调,且随刺激时问不同表达量也不同,于18 h达高峰(平均光密度值为0.440±0.021),与同期对照纽AM(0.390±0.011)相比,差异有统计学意义(P<0.05);而TIMP-1的表达与对照组(平均光密度值分别为0.175±0.019、0.162±0.044)的差异无统计学意义(P>0.05).未经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清作用于FB 24 h,FB中MMP-1的表达较空白对照组减少(平均光密度值分别为0.103±0.014、0.133±0.023,P<0.01),TIMP-1的表达增多(平均光密度值分别为0.108±0.012、0.065±0.006,P<0.01);经SiO2刺激24 h的矽肺患者AM培养上清作用于FB后,FB中MMP-1的表达量进一步减少(平均光密度值分别为0.062±0.008、0.133±0.023,P<0.01),而TIMP-1的表达量进一步增加(平均光密度值分别为0.143±0.015、0.065±0.006,P<0.01).[结论]SiO2上调AM中MMP-9的表达,可能与肺脏损伤早期,降解基底膜,导致包括成纤维细胞在内的多种细胞迁移有关.通过肺泡巨噬细胞的介导,SiO2影响了FB中MMP/11MP系统的平衡,参与了矽肺纤维化的发生发展.     

急性肺损伤新生大鼠AQP5及CC16变化的临床意义

目的探讨肺组织水通道蛋白5（AQP5）、血及肺灌洗液Clara细胞蛋白（CC16）在急性肺损伤早期的动态改变及临床意义。方法将140只sD新生大鼠随机分两批（每批70只）,再随机分为正常对照组（NS组）及内毒素（LPS）组（LPS组,7个亚组）。LPS组予腹腔注射5mg／kgLPS制作新生大鼠急性肺损伤（ALI）模型。各亚组分别在注射后0．5、1、2、4、8、16h和24h处死后取材,第一批收集肺行组织病理和肺湿／干重比值检测,采集血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）,用双抗体夹心ELISA法检测CC16含量。第二批取肺组织,用免疫印迹法测肺组织AQP5的表达,观察其动态改变。结果 ①LPS注射0．5h后在病理上动物出现点状肺出血,随时间推延渐发展为片状肺出血;LPS2h、4h组肺湿／干重比（W／D）明显增高,P〈0．01有统计学意义;②LPS0．5h组大鼠肺组织AQP5表达开始下调,1-2h组达到最低,继而AQP5表达渐上升,8h组与正常水平接近,之后再次下调至24h。③LPS致伤后大鼠BALF中CC16水平迅速下降,LPS组各组均较对照组有显著性差异（P〈0．01）;LPS组血清CC16水平较对照组上升,从注射LPS2h后开始有差异,4h达高峰,以后呈下降趋势,但8h、16h组仍明显高于对照组（P〈0．01）。结论①新生大鼠AQP5、CC16的改变反映了I型肺泡上皮细胞受损及Clara细胞损伤,三者可作为早期反映AU的敏感实验室指标。②LPS组AQP5、BALF及血清CC16与对照组有差异的时间点有差别,早期发现干预ALI对前两者监测更好。③AQP5表达变化提示可能存在治疗窗口期。     

肺癌MMP-9和VEGF表达与微血管密度的关系及其意义

[目的]探讨肺癌组织中MMP-9和VEGF的表达与肺癌血管生成的关系及其意义。[方法]采用免疫组织化学S-P法检测84例肺癌组织中MMP-9、VEGF和CD34的表达。[结果]肺癌组织MMP-9和VEGF表达显著高于癌旁正常肺组织(P﹤0.01)。小细胞肺癌和腺癌MMP-9表达高于鳞癌(P﹤0.01)。肺癌MMP-9表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P﹤0.01),Ⅲ和Ⅳ期高于Ⅰ和Ⅱ期(P﹤0.05)。肺癌MMP-9表达阳性者微血管密度高于MMP-9表达阴性者(P﹤0.01)。肺癌VEGF表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P﹤0.05),Ⅲ和Ⅳ期高于Ⅰ和Ⅱ期(P﹤0.05)。肺癌VEGF表达阳性者微血管密度高于肺癌VEGF表达阴性者(P﹤0.01)。肺癌MMP-9和VEGF的表达呈正相关(P﹤0.05)。[结论]MMP-9和VEGF促进肺癌血管生成,与肺癌侵袭转移密切相关。     

SiO2对肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和肺成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响

[目的]探讨SiO2能否通过肺泡巨噬细胞(AM)表达基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶机制因子(TIMPs)系统参与胶原的病理性累积。[方法]收集矽肺患者AM,分别用加入SiO2粉尘的培养液和无血清培养液培养2、6、12、18、24h,取出细胞爬片并吸出培养上清。将HELF分为处理组、对照组和空白对照组,于6h、12h、18h、24h、36h、48h取出细胞爬片、吸出上清。检测AM中MMP-9、TIMP-1及HELF条件培养上清中CⅢ的表达。[结果]经SiO2刺激的AM表达MMP-9增高,各点与同期对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01);12、18、24hTIMP-1的表达与同期对照组相比也明显增高,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01),但表达较MMP-9晚且少,将处理组的MMP-9与同期的TIMP-1相比,MMP-9表达显著多于TIMP-1,差异有统计学意义(P﹤0.001);AM条件培养上清作用于HELF后,可使HELF上清中CⅢ明显升高,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01)。[结论]SiO2可促使AM高表达MMP-9和TIMP-1,并通过AM的介导诱导HELF高表达CⅢ,AM通过表达MMPs/TIMPs系统在胶原的病理性累积中起到了重要作用。