鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的影响

目的观察鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的影响。方法建立星形胶质细胞与常用的神经细胞株PC12细胞共培养鱼藤酮染毒模型,应用划痕染料标记示踪技术观察染毒星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的变化,采用RT-PCR法检测CX43 mRNA的表达,Western Blot技术观察CX43蛋白活性变化。结果随着染毒剂量的增加,鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的抑制作用愈发明显;与正常对照组比较,0.5、1.0μmol/L鱼藤酮染毒组CX43 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论鱼藤酮可引起星形胶质细胞CX43表达水平降低,显著抑制细胞缝隙连接耦联功能,这可能是其诱导神经细胞损伤的原因之一。     

鱼藤酮对星形胶质细胞谷氨酸摄取功能的影响

目的研究鱼藤酮对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运功能的影响。方法应用HPLC荧光法检测鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度,同位素标记法检测Glu摄取能力,采用RT-PCR与Western blot技术观察谷氨酸转运体基因及蛋白表达。结果鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度明显升高,Glu摄取能力显著降低,谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate/aspartate transporter,GLAST)基因和蛋白表达均明显降低,而谷氨酸转运体-1(glutamatetransporter-1,GLT-1)蛋白表达升高。结论鱼藤酮可显著降低星形胶质细胞谷氨酸摄取功能,引起胞外Glu浓度升高;GLAST表达下调可能是鱼藤酮诱导胞外谷氨酸含量增加的主要原因之一,而GLT-1上调可能为神经细胞自我保护机制,以限制谷氨酸的神经毒作用。 更多还原     

谷氨酸转运体在鱼藤酮神经毒性中的作用

目的观察谷氨酸转运体在鱼藤酮神经毒性中的作用。方法建立星形胶质细胞与大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞共培养鱼藤酮染毒模型,并用谷氨酸转运体-1(GLT-1)和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)特异性抑制剂二氢卡因酸盐(DHK)、L-反式吡咯烷-2,4-二羧酸(PDC)预处理。高效液相色谱(HPLC)荧光法检测星形胶质细胞胞外谷氨酸(Glu)浓度,同位素标记法检测Glu摄取能力。结果 DHK预处理组星形胶质细胞Glu摄取能力与单纯鱼藤酮中毒组比较差异无统计学意义,而PDC预处理组星形胶质细胞Glu摄取能力明显下降,胞外Glu浓度升高,与单纯鱼藤酮中毒组比较具有显著的统计学意义。结论谷氨酸转运体GLAST可能在鱼藤酮诱导的兴奋性损伤机制中起主要作用。     

鱼藤酮对大鼠星形胶质细胞CaMKⅡ基因和蛋白表达的影响

目的 研究鱼藤酮对大鼠原代培养星形胶质细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)活性的影响.方法 MTT法检测染毒星形胶质细胞活力,激光共聚焦结合Fluo-4荧光法动态测定细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i),采用RT-PCR技术检测CaMK Ⅱα和CaMK Ⅱβ mRNA的表达,Western-blot技术观察磷酸化CaMK Ⅱ蛋白活性的变化.结果 1.0和2.0 μmol/L鱼藤酮染毒时星形胶质细胞活力明显降低,染毒星形胶质细胞[Ca2 ]i呈浓度依赖性升高,CaMK Ⅱα亚基mRNA明显下调(P<0.05),CaMK Ⅱ蛋白活性显著降低(P<0.01).结论 鱼藤酮染毒星形胶质细胞内游离钙浓度的升高,CaMK Ⅱ基因表达和蛋白活性显著降低,可能是其诱导神经细胞变性损伤的重要原因之一.     

鱼藤酮对大鼠神经细胞谷氨酸代谢关键酶表达的影响

[目的]观察鱼藤酮对神经细胞谷氨酸代谢关键酶表达的影响. [方法]在体外建立星形胶质细胞与PCI2细胞共培养鱼藤酮染毒模型,采用RT-PCR法检测谷氧酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)与各氨酰胺酶(phosphate activated glutaminase,PAG)mRNA的表达,细胞免疫化学观察GS和PAG蛋白表达. [结果]随着染毒剂量的增加,星形胶质细胞GS mRNA的表达逐渐降低,GS阳性颗粒着色减弱;与对照组比较,0.5和1.0μmol/L鱼藤酮染毒组PCI2细胞PAG mRNA表达明显增强(P<0.05),PAG阳性产物强表达. [结论]鱼藤酮可干扰神经细胞谷氨酸代谢关键酶GS和PAG基因和蛋白表达,造成各氨酸代谢失衡.     

鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用

目的观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点。方法体外培养大鼠中脑星型胶质细胞,采用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光法鉴定。观察染毒星型胶质细胞形态,检测细胞活力,通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RT-PCR检测缝隙连接蛋白（connexin43,CX43）mRNA表达。结果0.5μmol/L鱼藤酮染毒24 h即可引起明显的细胞形态改变;0.75,1.0,2.0μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低,乳酸脱氢酶释放量显著增加;0.5μmol/L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖,CX43 mRNA表达降低。结论鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用,但与神经元比较,星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力。     

鱼藤酮染毒大鼠纹状体缝隙连接蛋白43的表达及意义

目的 观察鱼藤酮对大鼠中脑纹状体组织的毒性作用及对缝隙连接蛋白43(CX43)表达的影响. 方法 建立大鼠Alzet微泵恒流给药鱼藤酮染毒模型,应用光镜和免疫组织化学染色观察纹状体神经元和星形胶质细胞的形态改变,采用RT-PCR法检测CX43mRNA的表达,Western blot技术观察CX43蛋白活性变化.结果 染毒大鼠出现类帕金森病综合征特征,中脑纹状体组织神经元形态明显改变,星形胶质细胞增生.与正常对照组比较,2.0 mg/kg鱼藤酮染毒组CX43表达明显上调(P＜0.05),而4.0 mg/kg鱼藤酮染毒组CX43表达显著降低(P＜0.05). 结论 鱼藤酮可损伤中脑神经元,诱导大鼠出现类帕金森病症状,星形胶质细胞缝隙连接蛋白43的异常表达,可能参与了鱼藤酮对大鼠纹状体组织的毒性作用.     

铅对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响

目的探讨铅暴露对星形胶质细胞(AS)中GLAST和GLT-1蛋白表达及转运体功能的影响。方法取出生1~3 d Wistar大鼠的仔鼠星形胶质细胞进行原代培养,以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色鉴定细胞纯度后,进行0(对照组)、50、100、200及400μmol/L乙酸铅染毒,染毒时间为72 h。倒置显微镜下观察细胞形态并采集图像;以AlamarBlue法检测细胞活力;以Western blot法检测GLAST和GLT-1蛋白的表达;以同位素标记法测定谷氨酸转运体功能。结果 50和100μmol/L铅暴露组的细胞形态与对照组相比,未见明显改变;200μmol/L铅暴露72 h后,少量细胞开始脱壁,细胞间隙增大;400μmol/L铅暴露组细胞变大,突起变短或消失,脱壁细胞数量明显增多。与对照组相比,各浓度铅暴露组的AS活力均降低(P0.05),100、200和400μmol/L铅暴露组的GLT-1蛋白含量下降(P0.05),但各浓度铅暴露组的GLAST蛋白含量无显著改变。100、200和400μmol/L铅暴露组的3H-Glu放射性低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论铅暴露可明显抑制AS中GLT-1蛋白的表达,并导致AS的Glu转运体功能下降。     

全氟辛酸对大鼠星形胶质细胞内游离钙离子的影响

目的 探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid,PFOA)对新生大鼠星形胶质细胞(astrocytes,As)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 星形胶质细胞取材于新生24 h内清洁级Wistar大鼠.传代细胞达到80％融合时进行染毒(PFOA终浓度分别为0、50、100、200、500μmol/L).以Fura-2/AM荧光探针法测定PFOA染毒1、2、3h后星形胶质细胞内的([Ca2+]i).结果 星形胶质细胞内的[Ca2+]i随着PFOA剂量的增加和染毒时间的延长而增加,染毒1h时500μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i为353.57 nmol/L,染毒2h时达到528.37 nmol/L,均高于对照组(161.86、155.03 nmol/L),差异均有统计学意义(P＜0.01).当染毒3h时,50、100、200、500 μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i分别为320.93、396.43、601.26、476.20 nmol/L,均显著高于对照组(164.62 nmol/L)(P＜0.01),同时也显著高于相同剂量染毒1h的[Ca2+]i (P＜0.01).结论 PFOA可通过增加新生大鼠星形胶质细胞内[Ca2+]i而影响中枢神经系统钙平衡.     

鱼藤酮对PC12细胞谷氨酸含量及其转运体表达的影响

目的观察鱼藤酮对PC12细胞的毒性与谷氨酸递质水平及谷氨酸转运体表达的关系。方法MTT法检测鱼藤酮染毒PC12细胞活力，高效液相色谱法测定染毒细胞胞外Glu含量，RT-PCR及Western blot技术检测谷氨酸转运体EAAC1 mRNA和蛋白表达。结果0．25μmol／L鱼藤酮染毒24h即可引起PC12细胞活力明显降低，LDH渗出量显著增加；0．5μmol／L以上鱼藤酮诱导PC12细胞释放Glu增加，谷氨酸转运体EAAC1基因及蛋白表达均显著降低。结论鱼藤酮引起神经细胞损伤可能与其增加Glu释放和降低谷氨酸转运体的表达有关。     

二(噁)英对星形胶质细胞和神经母细胞瘤细胞线粒体的影响

目的 探讨2,3,7,8-四氯二苯并二(噁)英(TCDD)的神经毒性.方法 选择人星形胶质细胞和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),4个染毒组和对照组分别暴露于1、10、50、100 nmol/L TCDD和二甲基亚砜(DMSO)24 h.用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,用RT-PCR检测细胞的线粒体相关基因mRNA表达水平.结果 透射电镜观察到TCDD染毒组细胞线粒体嵴数目减少,出现空泡化.RT-PCR结果显示,与对照组相比,染毒组两种细胞HSPD1、MFN1、MFN2、SLC25A10mRNA的表达水平下降,TSPO和SLC25A 27 mRNA的表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TCDD对星形胶质细胞和SH-SY5Y细胞具有损伤作用,可以影响神经细胞线粒体的正常形态、正常转运功能和动力学过程.     

兴奋性氨基酸递质系统在乐果诱导星形胶质细胞活化中的作用

目的 探讨兴奋性氨基酸递质系统在乐果染毒后皮层星形胶质细胞活化中的作用.方法 新生大鼠皮层神经细胞传代3次后获得纯化的星形胶质细胞,分别加入终浓度为10-6、10-5、10-4mol/[的乐果,并用50和100 μmol/LN-甲基-N-天门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK801对10-4mol/L乐果染毒组进行干预.染毒后48 h收获细胞,高效液相色谱-荧光检测系统(HPLC-FLD)方法测定细胞内兴奋性氨基酸递质含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测NMDA受体NR2B亚基、谷氨酸(Glu)、谷氨酸转运体(GLT-1)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及S100β mRNA表达的变化,免疫荧光染色半定量检测GFAP以及S100β的蛋白表达.结果 各剂量染毒组GLASTmRNA表达下降为对照组的67.8%、68.6%和76.2%,差异有统计学意义(P＜0.05);10-4 mol/L染毒组Glu、Asp含量与对照组相比明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,10-4mol/L染毒组GFAP和10-5mol/L染毒组S100βmRNA表达,10-5、10-4mol/L染毒组GFAP蛋白表达,10-4mol/L染毒组S100β蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01),有剂量依赖趋势.对10-4mol/L染毒组给予50和100 μmol/L MK801干预后,GLT-1、GLAST mRNA表达水平较10-4 mol/L染毒组明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01),NR2B mRNA表达进一步升高,与未干预前相比,差异无统计学意义(P＞0.05),但均明显高于对照组水平,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);100 μmol/L MK801干预后,Glu的含量升高为10-4mol/L染毒组的1.81倍,差异有统计学意义(P＜0.01);50和100μmol/LMK801干预后,GFAP转录及蛋白水平较未干预前明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01),50 μmol/L干预组S100β蛋白表达水平仍然高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 乐果对兴奋性氨基酸递质系统的影响参与了星形胶质细胞的活化;NMDA受体阻断剂MK801有助于控制星形胶质细胞胶质化.

Abstract：

Objective To study the involvement of excitatory amino acid system in astrocytes activation caused by dimethoate. Methods Pure-cultured astrocytes were gained by three passages from primary cultured rat nerve cells, then treated with 10-6,10-5,10-4 mol/L dimethoate for 48 h, 50 μmol/L and 100μmol/L MK801, a NMDA receptor blocker, was used to intervene the effects induced by 10-4 mol/L dimethoate.HPLC-FLD was utilized to measure the concentrations of excitatory amino acid (EAA), RT-PCR was used to detect the expression levels of NR2B, GLT-1, GLAST, GFAP and S100β mRNA, and immunofluresence staining method was applied to measure the expression levels of GFAP and S100β proteins. Results The expression levels of GLAST mRNA in all exposure groups were 67.8% ,68.6% and 76.2% of control level,respectively, which were significantly lower than that of control group (P＜0.05); The concentrations of EAA significantly decreased in 10-4 mol/L dimethoate group, as compared with control group (P＜0.01); the expression levels of GFAP mRNA in 10-4 mol/L dimethoate group, of S100β mRNA in 10-5 mol/L dimethoate group, of GFAP protein in 10-4 mol/L and 10-5 mol/L dimethoate groups and S100β protein in 10-4 mol/L dimethoate group were significantly higher than those in control group (P＜0.01). The expression levels of GLT-1 and GLAST mRNA in 10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μ mol/L MK801 groups increased significantly, as compared with 10-4 mol/L dimethoate group (P＜0.01), the expression levels of NR2B mRNA in 10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μmol/L MK801 groups increased significantly, as compared with control group (P＜0.05 or P＜0.01); the concentration of Glu in 10-4 mol/L dimethoate plus 100 μ mol/L MK801 group increased significantly, as compared with 10-4 mol/L dimethoate group (P＜0.01); the expression levels of GFAP mRNA and protein in10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μ mol/L MK801 groups decreased significantly (P＜0.01); S100β protein expression level in 50 μ mol/L MK801 intervention group was significantly higher than thatl in control group (P＜0.01). Conclusion Excitatory amino acid system involved in astrocytes activation caused by dimethoate. MK801 was useful to control astrocytes gliosis.     

鱼藤酮对大鼠中脑原代培养细胞的毒性

目的 研究植物杀虫剂鱼藤酮(Rotenone)对大鼠中脑原代培养细胞的毒性作用.方法 采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法,用0.01、0.10、1.00μmol/L鱼藤酮对体外培养中脑原代培养细胞染毒24h,通过免疫细胞化学的方法观察神经细胞的存活数及形态学改变.结果 与对照(0μmol/L)组比较,0.10和1.00μmol/L鱼藤酮染毒组多巴胺神经元数目明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);1.00μmol/L鱼藤酮染毒组星型胶质细胞数目明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).随着鱼藤酮染毒浓度的升高,存活的多巴胺(DA)能神经元体积变小,突起减少、变短或断裂.结论 多巴胺神经元对鱼藤酮的毒性作用更敏感.     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。     

氯化镉对大鼠原代星形胶质细胞凋亡的影响

目的研究氯化镉对星形胶质细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的细胞,以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20、40μmol/L氯化镉溶液染毒12、24 h,采用MTT实验测定细胞的存活率;以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉溶液染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞的凋亡率。结果与对照组相比,5~40μmol/L氯化镉染毒12、24 h时大鼠星形胶质细胞的存活率均较低,5~20μmol/L氯化镉染毒12 h时大鼠星形胶质细胞的凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着氯化镉染毒浓度的升高,大鼠星形胶质细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率呈上升趋势。结论氯化镉对星形胶质细胞具有明显的毒性作用,可诱导星形胶质细胞凋亡。     

镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究氯化镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响。方法原代培养的小鼠大脑皮质星形胶质细胞分别于终浓度为0(对照)、0.25、0.5、1.0 mmol/L氯化镧无血清培养基处理24 h后,采用RT-PCR法检测星形胶质细胞B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X基因(Bcl-2-associated Xgene,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9 mRNA的表达水平。结果与对照组比较,0.25、0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均显著升高,0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bcl-2 mRNA的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氯化镧染毒剂量的升高,小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2 mRNA的表达水平呈下降趋势。而各组小鼠星形胶质细胞caspase-8 mRNA的表达水平间比较,差异无统计学意义。结论氯化镧对星形胶质细胞产生毒作用的机制可能与氯化镧致促凋亡基因Bax和caspase-3、caspase-9表达升高以及抑凋亡基因Bcl-2表达下降有关。     

芳烃类有机溶剂对原代培养神经胶质细胞的谷氨酸重摄取的影响

[目的 ]研究芳烃类有机溶剂对原代培养大鼠神经胶质细胞的谷氨酸重摄取的影响。 [方法 ]取新生SD大鼠的海马神经胶质细胞进行原代培养 ,培养 2周后 ,用芳烃类有机溶剂 (甲苯、二甲苯和乙苯 )染毒 ,染毒浓度为 3mmol/L、6mmol/L和 9mmol/L ,染毒时间为 4h、12h和 2 4h ,并设空白对照组和赋形剂蓖麻油组 ,染毒后 ,观察神经胶质细胞的存活率、乳酸脱氢酶 (LDH)活性以及氨基酸重摄取的变化。 [结果 ]染毒后 ,神经胶质细胞摄取谷氨酸的能力显著下降(P <0 0 5 ) ,有明显的剂量 反应关系 (r =0 87,P <0 0 1) ,当染毒浓度为 9mmol/L浓度时 ,抑制率达 70 %以上 ;但染毒后神经胶质细胞的存活率与对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,LDH的活性差异亦无显著性 (P >0 0 5 )。 [结论 ]芳烃类有机溶剂对神经胶质细胞本身的致死性毒作用较小 ,但对神经胶质细胞的谷氨酸重摄取功能有较强的抑制作用     

c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用

目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0~20μmol/L镉染毒0~24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0~20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0~20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0~20μmol/L镉染毒0~12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5~20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5~20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10~20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与0 h比较,0~20μmol/L镉染毒3~12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。     

二英对星形胶质细胞和神经母细胞瘤细胞线粒体的影响

目的探讨2,3,7,8-四氯二苯并二英(TCDD)的神经毒性。方法选择人星形胶质细胞和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),4个染毒组和对照组分别暴露于1、10、50、100 nmol/L TCDD和二甲基亚砜(DMSO)24 h。用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,用RT-PCR检测细胞的线粒体相关基因m RNA表达水平。结果透射电镜观察到TCDD染毒组细胞线粒体嵴数目减少,出现空泡化。RT-PCR结果显示,与对照组相比,染毒组两种细胞HSPD1、MFN1、MFN2、SLC25A10m RNA的表达水平下降,TSPO和SLC25A27 m RNA的表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TCDD对星形胶质细胞和SH-SY5Y细胞具有损伤作用,可以影响神经细胞线粒体的正常形态、正常转运功能和动力学过程。     

乙酸铅和氯化镉暴露对小鼠睾丸支持细胞乳酸水平的影响

目的探究乙酸铅、氯化镉单独或联合染毒对小鼠睾丸支持细胞(15P-1细胞)乳酸(LD)水平的影响。方法将15P-1细胞分设对照(空白培养基)组和乙酸铅(0.05~160μmol/L)单独染毒组、氯化镉(0.05~160μmol/L)单独染毒组,染毒24 h后,测定细胞存活率。后续实验分别设对照(空白培养基)组和乙酸铅(1~60μmol/L)单独染毒组、氯化镉(0.5~30μmol/L)单独染毒组及乙酸铅(1、10、20μmol/L)+氯化镉(0.5、5、10μmol/L)联合染毒组,染毒24 h后,测定细胞内葡萄糖摄取量、乳酸脱氢酶(LDH)活力以及细胞内、外LD浓度和p H值。结果与对照组比较,2.5~160μmol/L乙酸铅和2.5~160μmol/L氯化镉分别单独染毒组15P-1细胞存活率均降低(P0.05)。与对照组比较,0.5~10μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞内的葡萄糖摄取量较高(P0.05)。与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,仅0.5μmol/L氯化镉单独染毒组细胞内葡萄糖摄取增加(P0.05)。与对照组比较,1、10μmol/L乙酸铅染毒、各浓度氯化镉染毒及10μmol/L乙酸铅+5μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞内的LD浓度较高,而20~60μmol/L乙酸铅染毒及20μmol/L乙酸铅+10μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞内的LD浓度较低(P0.05);与对照组比较,1~30μmol/L乙酸铅染毒及15、30μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞外的LD浓度均较低,而0.5、5μmol/L氯化镉染毒及1μmol/L乙酸铅+0.5μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞外的LD浓度较高(P0.05)。与对照组比较,10~60μmol/L乙酸铅染毒及5~15μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞内的p H值较低(P0.05)。与对照组比较,20~60μmol/L乙酸铅染毒及各浓度氯化镉染毒15P-1细胞外的p H值较高(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅+氯化镉染毒组15P-1细胞内、外的p H值均较高(P0.05)。与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,1、10、20μmol/L乙酸铅单独染毒组及0.5、5、10μmol/L氯化镉染毒组细胞内p H值较高,而1、10、20μmol/L乙酸铅单独染毒组及0.5、10μmol/L氯化镉单独染毒组细胞外p H值较高(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒15P-1细胞内的LDH活力较低,而各浓度氯化镉染毒15P-1细胞内的LDH活力较高(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅+氯化镉染毒组15P-1细胞内LDH活力均较高(P0.05)。与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,1、10、20μmol/L乙酸铅单独染毒组及5、10μmol/L氯化镉单独染毒组细胞内的LDH活力较高(P0.05)。结论乙酸铅对生精系统的损伤可能通过降低细胞内LDH活力进而抑制细胞内乳酸生成来实现,而氯化镉则可能通过抑制细胞内LD转运到细胞外供给精子发生需要的能量来实现。