Aβ25-35通过钙超载导致HT22神经细胞Per2异常表达

目的探讨钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2表达变化中的作用。方法体内研究将C57BL/6小鼠双侧海马注射Aβ25-35(300μmol/kg)和无菌水后,利用跑轮行为学实验评估小鼠的昼夜节律。体外研究将HT22细胞分为对照组、Aβ25-35处理组、Nim+Aβ25-35处理组。以MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per2 mRNA表达水平,Western Blotting检测PER2蛋白相对表达量,免疫荧光染色观察PER2蛋白原位表达情况,流式细胞术检测胞内钙离子浓度。结果体内研究表明Aβ25-35导致C57BL/6小鼠在跑轮行为学实验中表现出明显的昼夜节律紊乱。离体研究发现,5、10、15、20、25、30μmol/L Aβ25-35剂量组细胞存活率较对照组显著降低(P0.05)。经20μmol/L Aβ25-35处理后,per2 mRNA及PER2蛋白水平在CT16较对照组显著降低(P0.05)。经钙离子拮抗剂尼莫地平预处理后,由Aβ25-35在CT16所致per2 mRNA及PER2蛋白水平的降低均显著升高(P0.05)。结论钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2异常表达中发挥重要作用。     

cAMP在Liraglutide改善Aβ25-35诱导的昼夜节律紊乱中的作用研究

目的研究环腺苷酸(cAMP)在利拉鲁肽(Liraglutide)改善β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)引起的昼夜节律紊乱中的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35四组,利用跑轮行为学实验评估小鼠昼夜节律,ELISA法检测海马CA1区cAMP的表达水平。HT22小鼠海马神经细胞随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536+Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536组,利用CCK8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per1 mRNA表达水平。结果海马内注射Aβ25-35后小鼠出现明显昼夜节律紊乱,且cAMP节律性表达异常,Liraglutide预处理明显改善了小鼠昼夜节律紊乱现象和cAMP节律性表达异常。HT22细胞中加入Aβ25-35后,细胞存活率下降且per1基因节律性表达异常,而Liraglutide预处理提高了细胞存活率并改善了per1表达异常,但这种效应会被cAMP抑制剂SQ22536所拮抗。结论 Liraglutide可拮抗Aβ25-35所致昼夜节律紊乱及per1基因的异常表达,其机制可能是通过改变cAMP节律性表达实现的。     

奥氮平对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用机制。方法以Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及奥氮平对PC12细胞Bax、Caspase-3表达的影响,结果10^-14～10^-5mol／L的Aβ25-35减低PC12细胞存活率,50μmol／L及100μmol／I。奥氮平预处理24h可提高PC12细胞存活率,相同浓度Aβ25-35奥氮平预处理组与非处理组比较差异显著（P〈0．05）;0．01、2、20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Bax表达增加,50μmol／L奥氮平预处理使0．01μmol／L和20μmol／L Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax的表达减低（P〈O．05）;2μmol／L及20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Caspase-3的表达增高,5μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高,与非预处理比较差异显著（P〈O．05）。结论奥氮平可对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达有关。     

高热疗法促进5-氨基乙酰丙酸介导光动力疗法诱导胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨光动力疗法(PDT)联合高热疗法(HT)的抗胶质瘤作用及可能的作用机制。方法:体外培养胶质瘤细胞株U87MG,共分为四组:对照组[HT(-)PDT(-)]、HT组[HT(+)PDT(-)]、PDT组[HT(-)PDT(+)]和PDT+HT组[HT(+)PDT(+)],分别给予相应处理;应用MTT实验评估细胞增殖能力;应用流式细胞术分析细胞凋亡率、线粒体膜电位和细胞内活性氧簇的生成情况;应用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果:MTT实验结果显示HT促进了PDT抑制U87MG细胞增殖,且与5-氨基乙酰丙酸浓度、超声辐照时间和HT温度呈正相关,并且伴随细胞活力下降的典型形态学变化。较低剂量(42℃作用10 min)的HT可明显促进PDT诱导细胞内活性氧生成增多、线粒体膜电位水平下降和细胞凋亡增加。此外,Western blot结果表明HT增进PDT上调了Caspase-3、-8、-9和Bax蛋白表达,下调了Bcl-2蛋白表达,而单独HT组却无明显变化。结论:HT可显著促进PDT抑制胶质瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。其机制与上调Caspase-3、-8、-9和Bax,下调Bcl-2蛋白表达有关。     

抑制素βA(INHβA)在胃癌中过表达的临床病理意义

目的 探讨抑制素βA(inhibinβA,INHβA)在胃癌中过表达的临床意义.方法 采用免疫组化检测146例胃癌组织芯片中INHβA的表达,采用免疫组化和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测HER2蛋白过表达和基因扩增,并结合患者的随访资料进行预后分析.结果 61.6％(90/146)的胃癌呈INHβA过表达,显著高于正常胃黏膜(P<0.01).胃癌中INHβA表达在不同肿瘤大小(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、临床分期(P<0.05)以及有无淋巴结转移(P<0.01)之间差异有统计学意义.19.2％(28/146)和16.4％(24/146)的病例分别呈HER2蛋白表达和基因扩增,HER2蛋白表达/基因扩增在不同肿瘤部位、组织学类型之间表达差异有统计学意义(P<0.01).INHβA过表达与HER2蛋白表达及基因扩增均显著负相关(分别r=-0.224,P<0.01;r=-0.175,P<0.05).生存分析显示,INHβA+患者5年生存率显著低于INHβA-患者(P<0.05).根据INHβA和HER2的表达可以将胃癌分为INHβA/HER2双表达组(INHβA+/HER2+)、单表达组(INHβA-/HER2+和INHβA+/HER2-)和双阴性组(HER2-/INHβA-),生存分析显示INHβA/HER2双表达的患者预后最差(P<0.01).结论 INHβA过表达可以作为判断胃癌预后不良的一项重要指标,INHβA和HER2不同表达模式为胃癌的个体化治疗提供了新的思路.     

抑制素βA(INHβA)在胃癌中过表达的临床病理意义

目的 探讨抑制素βA(inhibinβA,INHβA)在胃癌中过表达的临床意义.方法 采用免疫组化检测146例胃癌组织芯片中INHβA的表达,采用免疫组化和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测HER2蛋白过表达和基因扩增,并结合患者的随访资料进行预后分析.结果 61.6％(90/146)的胃癌呈INHβA过表达,显著高于正常胃黏膜(P<0.01).胃癌中INHβA表达在不同肿瘤大小(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、临床分期(P<0.05)以及有无淋巴结转移(P<0.01)之间差异有统计学意义.19.2％(28/146)和16.4％(24/146)的病例分别呈HER2蛋白表达和基因扩增,HER2蛋白表达/基因扩增在不同肿瘤部位、组织学类型之间表达差异有统计学意义(P<0.01).INHβA过表达与HER2蛋白表达及基因扩增均显著负相关(分别r=-0.224,P<0.01;r=-0.175,P<0.05).生存分析显示,INHβA+患者5年生存率显著低于INHβA-患者(P<0.05).根据INHβA和HER2的表达可以将胃癌分为INHβA/HER2双表达组(INHβA+/HER2+)、单表达组(INHβA-/HER2+和INHβA+/HER2-)和双阴性组(HER2-/INHβA-),生存分析显示INHβA/HER2双表达的患者预后最差(P<0.01).结论 INHβA过表达可以作为判断胃癌预后不良的一项重要指标,INHβA和HER2不同表达模式为胃癌的个体化治疗提供了新的思路.     

长非编码RNA HOXD-As2通路抑制直肠癌细胞增殖、转移作用机制研究

目的 探讨长非编码RNA(LncRNA)HOXD-As2通路抑制直肠癌细胞增殖、转移的潜在机制。方法 在直肠癌HCT116与HT29细胞中,转染阴性设为对照组,转染LncRNA HOXD-As2过表达质粒设为HOXD-As2组;转染空载体Vector设为Vector组,转染HOXD8过表达质粒设为HOXD8组。采用荧光素酶报告实验检测LncRNA HOXD-As2与靶基因HOXD8的相互作用。检测并比较4组细胞活力、增殖、侵袭、细胞迁移水平、上皮-间质转化相关蛋白表达水平及磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(p-AKT/AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶/磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K/PI3K)、磷酸化雷帕霉素机械靶蛋白/雷帕霉素机械靶蛋白(p-mTOR/mTOR)蛋白相对表达水平。结果 与对照组相比,HOXD-As2组荧光素酶活性下降,而mRNA、蛋白相对表达情况增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,HOXD-As2组直肠癌细胞HCT116、HT29中HOXD8的mRNA与蛋白表达水平均显著上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Vector组相比...     

近日节律基因Period2对紫外线损伤NIH3T3细胞的影响

目的 探讨Period2(Per2)基因对紫外线损伤NIH3T3细胞的影响.方法 将Per2基因插入pcDNA 3.1,构建Per2基因的真核表达质粒,采用脂质体包裹法转导入NIH3T3细胞内.以紫外灯照射Per2基因过表达(pcDNA 3.1-Per2)的NIH3T3细胞、pcDNA 3.1空白组(pcDNA 3.1-vector)细胞和空白对照组细胞;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的NIH3T3细胞的凋亡、生长情况;采用单细胞凝胶电泳技术检测Per2过表达对DNA损伤后修复的影响.结果 紫外线照射后Per2阳性表达的NIH3T3细胞较其对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少,单细胞凝胶电泳实验表明紫外线照射后,各组细胞均表现出明显的DNA损伤,但是pcDNA 3.1-Per2转染组均较pcDNA 3.1-vector及空白对照组细胞的彗星细胞出现率和拖尾细胞DNA迁移长度低.结论 节律基因Per2能抑制紫外线对细胞的损伤,其机制可能与Per2促进DNA修复作用有关.     

IDH1基因在肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其初步机制

目的 探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法 采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1^IDH1-/-);CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(HuCCT1^WT)细胞和HuCCT1^IDH1-/-细胞的增殖能力;细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。生物信息学方法分析上述两种HuCCT1细胞的转录组测序结果,Western blotting验证转录组信息通路相关蛋白的表达。结果 与HuCCT1细胞比较,HuCCT1^IDH1-/-细胞增殖和克隆形成数目明显减少(P<0.05...     

脂多糖联合三磷酸腺苷对肺上皮细胞来源A549细胞IL-1β分泌的影响及其机制研究

目的 探讨白细胞介素1β(IL-1β)在脂多糖(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)诱导的人肺上皮细胞来源A549细胞中的表达变化及其机制.方法 以肺上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,采用Western blotting法确认A549细胞中是否存在NLRP3炎症体各组件蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1)的表达.检测不同浓度LPS(0、1、5、10、50、100μg/ml)对A549细胞NLRP3炎症体通路蛋白表达(Western blotting检测)及IL-1β分泌(ELISA法)的影响,选择最佳LPS浓度.采用LPS联合ATP(LPS+ATP)刺激A549细胞,并检测其对NLRP3炎症体通路蛋白表达和IL-1β分泌的影响.采用siRNA干扰A549细胞NLRP3基因,观察LPS+ATP诱导的A549细胞中IL-1β的分泌情况.结果 Western blotting检测结果显示,A549细胞中存在NLRP3炎症体组件蛋白NLRP3、ASC、caspase-1的表达.与对照组比较,LPS单独处理细胞后,NLRP3、pro-IL-1β、caspase-lp45蛋白表达增加(P＜0.05),且呈剂量依赖关系,但未检测到活化形式caspase-lp20蛋白的表达及细胞因子IL-1β的分泌.与LPS单独刺激组相比,LPS+ATP刺激组可检测到活化形式的caspase-lp20蛋白表达及细胞因子IL-lβ分泌(P＜0.05).采用siRNA干扰NLRP3基因表达可显著抑制LPS+ATP诱导的IL-1β表达(P＜0.05).结论 A549细胞中存在NLRP3炎症体通路,LPS+ATP诱导A549细胞分泌的细胞因子IL-lβ在下调NLRP3基因后显著减少,初步提示IL-1β的释放受NLRP3炎症体途径调控.     

重楼皂苷通过p53/SLC7A11信号轴促进三阴性乳腺癌细胞铁死亡的机制研究

目的 探讨重楼皂苷对三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响及其机制。方法 用0、10、20、30、40、50μmol/L重楼皂苷处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用CCK-8法检测细胞活性。取对数生长期MDA-MB-231细胞,随机分为对照组、重楼皂苷组(30μmol/L重楼皂苷处理12 h)、抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h)与重楼皂苷+抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h后,30μmol/L重楼皂苷处理12 h),采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR和Western blotting检测二价金属离子转运体1(DMT1)、转铁蛋白受体1(TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、p53、p53/溶质运载蛋白7家族成员11(SLC7A11)的表达情况。结果 CCK-8法检测结果显示,MDA-MB-231细胞存活率随重楼皂苷浓度的升高而降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组比较,重楼皂苷组细胞存活率以及CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率以及TFR...     

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞药物敏感性的影响

目的　研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A5 4 9细胞药物敏感性的影响。方法　利用阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3 p16 INK4a和pcDNA3 p14 ARF同时导入该基因位点缺失的人肺腺癌A5 4 9细胞系中 ,确定其编码的蛋白p16 INK4a和p14 ARF稳定表达 ;在设立空白组和空质粒转染组的情况下 ,用 5种不同作用机制的常用肺癌化疗药物 (阿霉素、顺铂、拓朴替康、诺维本和紫杉醇 )作用于转染前后的细胞 ,利用MTT法测定各种不同药物的 5 0 %抑制浓度(IC50 ) ,并测定在该浓度作用下转染细胞的凋亡指数。结果　转染INK4a/ARF基因后 ,A5 4 9细胞对阿霉素和顺铂的IC50 值显著降低 (P <0 0 5 ) ,而拓朴替康、诺维本和紫杉醇的IC50 值无明显变化 (P >0 0 5 ) ;阿霉素和顺铂诱导的凋亡指数也明显高于其他 3种药物。结论　恢复p16 INK4a和p14 ARF蛋白的表达可改变A5 4 9细胞对部分化疗药物的敏感性。     

二苯乙烯苷抑制氧化应激介导骨质疏松的作用及机制研究

目的 研究二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene-2-o-β-d-glycoside,TSG)对氧化应激导致的骨质疏松的保护作用,并初步探讨相关机制。方法 不同浓度TSG预处理MC3T3-E1 24 h,200μM H₂O₂处理24 h,实验分组：(1)空白对照组;(2)H₂O₂处理组;(3)H₂O₂+TSG1μM处理组;(4)H₂O₂+TSG10μM处理组;(5)H₂O₂+NAC1mM处理组,通过CCK-8检测细胞活性;RT-PCR检测细胞中TCF及其下游基因(AXIN2、ALP、OPG)、FoxO3a及其下游基因(GADD45、CAT)的mRNA表达;Western blot检测细胞中β-catenin、FoxO3a蛋白表达情况。30只9周龄BALB/c雌性小鼠,随机分为5组：(1)基础组：标记为C;(2)假手术组+溶剂组：标记为J;(3)去卵巢模型...     

阻断CXC趋化因子10在神经母细胞瘤细胞氧糖剥夺模型中对toll样受体4/核因子κB通路调节炎症影响

目的探讨阻断CXC趋化因子10(CXCL10)在神经母细胞瘤细胞(N2a)氧糖剥夺(OGD)模型中对toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路调节炎症的影响。方法应用脂质体转染法将CXCL10基因转染至小鼠神经瘤母细胞,采用实时定量荧光PCR(RT-PCR)与Western blot法检测转染后CXCL10的基因和蛋白表达水平;实验分为未传染组、OGD/R组、OGD/R+NC组、OGD/R+CXCL10 siRNA组、OGD/R+CXCL10 siRNA+LPS组、OGD/R+TAK242组,细胞转染24 h后建立OGD模型,3 h后予以复氧;复氧24 h后,RT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-2基因表达水平,应用Western-blot法检测细胞CXCL10、TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果 RT-PCR与Western blot结果显示,OGD损伤细胞后,TLR4被激活,进而激活NF-κB信号通路,导致炎症因子表达。CXCL10基因沉默降低了相关炎症因子的表达,并抑制了N2a细胞的TLR4、P-NF-κB p65和caspase3的蛋白表达。沉默CXCL10基因加入TLR4激动剂可以促进炎症因子表达及相关信号通路的蛋白表达。结论 CXCL10对OGD损伤有保护作用,可能通过TLR4/NF-κB信号通路实现。     

TGF-β3对辐射致肺上皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 探索转化生长因子-β3(TGF-β3)在辐射致肺上皮细胞损伤中的作用及其可能机制,为放射性肺损伤的防治提供实验依据。方法 设计合成并筛选Ⅱ型转化生长因子-β受体(TGFBR2)的小干扰RNA(siRNA),用于细胞TGFBR2干涉;将体外培养的人支气管上皮细胞(Beas-2B细胞)及其TGFBR2干涉细胞随机分为对照组、5 ng/ml TGF-β3处理组(TGF-β3组)、6 Gy⁶⁰Co-γ射线单次照射组(6 Gy组)、6 Gy⁶⁰Co-γ射线单次照射+5 ng/ml TGF-β3处理组(6 Gy+TGF-β3组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组胶原蛋白和TGFBR2的表达,RT-qPCR和Western印迹检测上皮间质转化(EMT)相关标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期。结果 (1)TGF-β3对辐射诱发的细胞胶原蛋白表达增高有明显抑制作用,并可降低辐射所致细胞EMT相关标志物α-SMA基因和蛋白水平的异常高表达,有效保护辐射所致肺组织细胞纤维化改变;(2)TGF-β3可抑制...     

近日节律基因Per2对人肺癌细胞生长的抑制作用

目的 研究近日节律基因Per2对肺癌细胞(A549)生长的抑制作用及其机制.方法 将pcDNA3.1(+)-Per2转导入A549细胞内,过表达Per2,以空质粒pcDNA3.1(+)为对照.采用MTT和细胞平板集落形成实验检测肺癌细胞的生长情况;通过流式细胞技术观察细胞的凋亡.结果 近日节律基因Per2能够抑制A549细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡.结论 近日节律基因Per2能够抑制肺癌细胞的生长,其机制可能涉及诱导肿瘤细胞的凋亡.     

重组人胰高糖素样多肽-1(rhGLP-1)对人肝细胞系HL-7702胰岛素信号通路的影响

 目的 通过研究重组人胰高糖素样多肽-1(rhGLP-1)对人肝细胞系 HL-7702胰岛素信号通路关键位点 Akt 表达的影响,揭示GLP-1对肝细胞胰岛素信号通路PI3K-AKT-mTORC的作用。方法 选用处于对数生长期的人肝细胞系HL-7702,分别在含有不同浓度rhGLP-1(7-36)( 10 nM、100 nM、1000 nM)的培养液中培养24 h,以空白培养液作为对照。用蛋白质免疫印迹法(western blot)检测 Akt 蛋白及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达量。结果 Akt 蛋白的表达水平在对照组与GLP-1低浓度组、GLP-1中浓度组、GLP-1高浓度组均无明显差异。与对照组相比,p-Akt(Thr308)的表达量在GLP-1低浓度组(0.60±0.27 vs 1±0,P<0.05)、GLP-1中浓度组(0.61±0.18 vs 1±0,P<0.05)、GLP-1高浓度组(0.54±0.15 vs 1±0,P<0.01)明显下降;p-Akt(Ser473)的表达量在对照组与GLP-1不同浓度组之间均没有差异。结论 GLP-1导致人肝细胞p-Akt的表达水平下降,提示GLP-1对肝细胞PI3K-AKT-mTORC通路可能具有抑制作用,这可能是GLP-1类降糖药物降低血脂的机制之一。     

空军总医院学报2001年主题词索引

A埃希菌属　产超广谱 β-内酰胺酶细菌的耐药性 (焦力群 ) 17(4 ) :2 41癌　　　　肺癌相关基因及蛋白 c- jun、c- fos/Ap- p与 KGF的关系 (刘　领 ) 17(1) :34癌基因产物肺癌相关基因及蛋白 c- jun、c- fos/Ap- p与 KGF的关系 (刘　领 ) 17(1) :34癌 ,鳞状细胞原发性甲状腺鳞状细胞癌 1例 (周晓武 ) 17(2 ) :10 0癌 ,胰岛细胞恶性胰岛 α、β、D细胞混合瘤一例报告 (朱西娥 ) 17(4 ) :199B白内障　　先天性白内障一家系调查报告 (田　青 ) 17(4 ) :2 39白细胞介素 - 18白细胞介素 - 18(IL- 18)的免疫生物学特征及其抗肿瘤作用 (张国…     

β-连接素和生存素在子宫内膜异位症患者异位内膜和在位内膜的表达及意义

目的探讨β-连接素(β-catenin)、生存素(survivin)两种蛋白在子宫内膜异位症(EMs)患者异位内膜和在位内膜的表达、分布及其在EMs发病中的作用与关系。方法应用免疫组织化学法检测31例子宫内膜异位症患者(EMs组)异位内膜和在位内膜及10例非子宫内膜异位症患者(正常对照组)在位内膜中β-连接素、生存素的表达,并检测两者的相关性。结果β-连接素在EMs组囊壁组织、在位内膜中表达的阳性率分别为87.1%(27/31)、83.9%(26/31);生存素在EMs组异位内膜、在位内膜中表达的阳性率分别为90.3%(28/31)、87.1%(27/31);β-连接素、生存素在正常对照组在位内膜表达的阳性率分别为40%(4/10)、30%(3/10)。EMs组异位内膜、在位内膜的β-连接素、生存素表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。EMs组异位内膜、在位内膜中β-连接素与生存素的表达有相关性(r分别为0.850,0.616,P<0.01)。结论子宫内膜β-连接素、生存素的高表达可能在子宫内膜异位症的发病过程中起重要作用。     

ShRNA介导的Smad4基因沉默对C2C12成肌细胞纤维化的影响

目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组。通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen I和α-SMA表达水平。结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P<0.05);(2)TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P<0.05);(3)TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen I mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P<0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P>0.05)。结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点。