性传播疾病三种病原体检测结果分析

目的 通过对三年问北京市密云地区淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)检测的结果分析，了解三种病原体的感染情况，为临床医生诊断和治疗及流行病学研究提供依据。方法 应用聚合酶链式反应(PCR)技术对2000～2002年550例有性传播疾病(STD)相关临床症状及体征的患者的泌尿生殖道标本进行淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)的检测。结果 550份标本中，三种病原体阳性共127份，总检出阳性率23．10％。2000年感染的阳性检出率21．47％，2001年感染的阳性检出率22．34％，2002年感染的阳性检出率27．08％。单一病原体感染108例，2种病原体混合感染19例。在3年中NG的阳性检出率15．82％，CT的阳性检出率6．36％，UU的阳性检出率4．36％。在127份阳性标本中，21～40岁年龄组检出病原体103份，占全部阳性例数的81．10％。结论 性传播疾病(STD)呈逐年上升趋势，主要集中在青壮年人群；以NG单一感染为主，也伴有2种病原体的混合感染，提示泌尿生殖道感染病人应重视对这三种病原体的检出，避免漏检，及时诊断和治疗由这些病原体引起的性病，防止性传播疾病(STD)的扩散。     

盆腔炎病人病原体检测(摘要)

临床资料盆腔炎病人325例,均为我院泌尿生殖系统性传播疾病门诊确诊病人,年龄20～57岁,平均36岁.标本采集:用无菌拭子伸入宫颈1.5 cm处轻轻滚动并停留10～15 s,使拭子充分吸收水分.每个病人分别取3个拭子,分别用于淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)检测.NG培养:将宫颈分泌物1份即刻无菌接种于NG培养基(桂敏培养基,购于广西皮肤病研究所),置35～36 ℃培养24～48 h,挑取典型菌落进行革兰染色、氧化酶试验、糖发酵试验鉴定.CT检测:应用英国立明试剂盒,按试剂盒说明书操作.     

荧光定量聚合酶链反应检测女性生殖道分泌物沙眼衣原体等病原体

目的:检测女性生殖道分泌物中淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)的数量,以了解本地区上述3种病原体感染现状。方法:用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)检测了121份标本的NG—DNA和149份标本的CT—DNA与UU—DNA。结果:NG阳性率为49.6％(60/121),其阳性标本的平均拷贝数为3.61×10~5拷贝/ml;CT阳性率为23.5％(35/149),其阳性标本的平均拷贝数为9.59×10~4拷贝/ml;UU阳性率为34.3％(51/149),其阳性标本的平均拷贝数为4.11×10~5拷贝/ml。结论:FQ—PCR具有简便、快速、准确的优点,是目前快速诊断淋菌、非淋菌性阴道炎可靠准确的方法。     

荧光定量-聚合酶链反应检测性传播性疾病病原体结果分析

用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测2202份泌尿生殖道分泌物中的UU、CT、NG.了解性传播性疾病中解脲脲原体(UU)、沙眼衣原体(CT)以及淋病奈瑟菌(NG)的感染情况.三种病原体中,UU的阳性率居于首位,明显高于NG的阳性率,而CT与NG的阳性率差异无显著性.混合感染阳性率不高,由UU或CT引起的混合感染率与由NG引起的混合感染率差异无显著性.     

荧光定量—聚合酶链反应检测性传播性疾病病原体结果分析

用荧光定量—聚合酶链反应 (FQ -PCR)检测 2 2 0 2份泌尿生殖道分泌物中的UU、CT、NG。了解性传播性疾病中解脲脲原体 (UU)、沙眼衣原体 (CT)以及淋病奈瑟菌 (NG)的感染情况。三种病原体中 ,UU的阳性率居于首位 ,明显高于NG的阳性率 ,而CT与NG的阳性率差异无显著性。混合感染阳性率不高 ,由UU或CT引起的混合感染率与由NG引起的混合感染率差异无显著性。     

160例女性不孕症的四种病原体检测及意义

本文报告了对１６０例女性不孕症患者宫颈分泌物中解脲脲原体（Ｕｕ）、人型支原体（Ｍｈ）、沙眼衣原体（Ｃｔ）和淋病奈氏球菌（Ｎｇ）的测定，结果总体检出率７０％（１２０／１６０），明显高于对照组（同期早孕妇女），Ｐ＜０．０１。其中输卵管阻塞组阳性率８４．７８％（３９／４６），明显高于输卵管通畅组６３．４６％（３３／５２）及欠通畅组６４．５２％（４０／６２），Ｐ＜０．０５。且针对性治疗收到一定效果，提示妇女下生殖道Ｕｕ、Ｃｔ、Ｎｇ感染是输卵管阻塞性不孕的主要原因之一。对该类患者行三项检测，对不孕症的病因诊断及治疗有好处。     

妇女生殖道沙眼衣原体和解脲支原体感染的PCR检测及临床观察与治疗

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测阴道炎，宫颈糜烂，宫颈息肉，外阴白色病变及不孕症患者生殖沙眼衣原体（ＣＴ）和／或解脲支原体（ＵＵ）感染，结果阳性检出率分别为４６．６％，４０．４％，３６．７％，３８．１％及３７．８％，阴道炎患者的病情与ＣＴ，ＵＵ感染有一定的关系，ＣＴ和ＵＵ双重感染病情多为重度（５５．９％），而无ＣＴ和ＵＵ感染病情多为轻度（７３．９％），ＰＣＲ检测ＣＴ，ＵＵ对阴道炎的治疗具有指导意义。     

荧光定量PCR检测常见3种性病病原体结果分析

目的了解近2年来本地区人群中泌尿生殖系统感染性疾病病原体的情况,为病原学调查及临床诊治提供依据.方法统计分析两年来我室采用荧光定量PCR方法进行的有关性病病原体检测结果.结果淋病球菌(neisseria gonorrhoeae,NG),沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT),解脲支原体(ureaplasma urealyticum ,UU)的阳性检出率分别为12.87%,5.84%,2.41%.结论本地区常见的3种性病病原体中,NG发病率最高,其次为CT,UU感染率最低;20～45岁是好发NG、CT、UU 3种性病的年龄,女性多于男性,提示应加强对此类疾病宣传预防和诊治工作.     

PCR法检测淋球菌,沙眼衣原体及解脲支原体感染

目的：评价聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对性病性尿道炎及宫颈炎诊断的临床实用价值。方法：采用ＰＣＲ法、淋球菌（Ｎｇ）涂片／培养、沙眼衣原体直接免疫荧光检查（ＣｔＤＩＦＡ）和解脲支原体（Ｕｕ）培养平行检测了１１９例患者的１８９份尿道／宫颈拭子标本。结果：以Ｎｇ涂片／培养、ＣｔＤＩＦＡ和Ｕｕ培养为对比标准，ＮｇＰＣＲ、ＣｔＰＣＲ和ＵｕＰＣＲ的敏感性分别为１００％（２８／２８）、９６９％（３１／３２）和９３３％（４２／４５），特异性分别为９４５％（８６／９１）、９１９％（８０／８７）和９４６％（７０／７４）。治疗结束后１周～２周内复查仍有２５９％（２１／７０）患者ＰＣＲ未阴转。结论：ＰＣＲ技术可以敏感、特异地检测泌尿生殖道标本中的ＮｇＤＮＡ、ＣｔＤＮＡ和ＵｕＤＮＡ，具有简便、快速的优点，然而对治疗后短期内复诊患者，似不宜仅以ＰＣＲ阳性结果作为重复治疗的依据。     

聚合酶链反应检测性传播疾病4种病原体

应用聚合酶链反应（PCR），对100例（男60，女40）性乱者进行人乳头状瘤病毒（HPV）、沙眼衣原体（CT）、淋球菌（NG）及解脲支原体（Uu)4种病原体基因检测。结果：58%至少有1种病原体感染。4种病原体总检出率为19.5%。各病原体检出率依次HPV-DNA30%；Uu-DNA22%;CT-DNA17%;NG-DNA9%。29.31%有混合感染，各病原体混合感染率NG77.77%;CT64.7%;Uu45.45%;HPV40%。结果提示：淋病在性病中的构成比明显下降，非淋菌性尿道炎的病原体似不一定均以CT感染最多见，对性高危人群做多项STD病原体检查，对STD防治是必要的。     

多重荧光定量PCR快速检测6种常见下呼吸道感染病原菌

目的:探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测6种常见呼吸道病原菌的检测方法。方法:采用BeaconDesigner7.9设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限。对176例临床标本中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行回顾性检测,并用一代基因测序验证。结果:MRT-PCR法检测病原菌的最低检出限达103 copies/mL,大肠埃希菌19例,金黄色葡萄球菌30例,铜绿假单胞菌37例,肺炎克雷伯菌53例,阴沟肠杆菌15例,鲍曼不动杆菌22例,与传统鉴定方法报告病原菌一致,特异性达100%。通过一代基因测序结果完全符合。结论:使用多荧光通道PCR仪,采用多重PCR技术检测痰液标本中6种常见病原菌的基因检测方法,敏感性和特异性高,提高了检测效率。     

金黄色葡萄球菌苯唑西林及红霉素耐药基因多重PCR快速检测

目的 建立金黄色葡萄球菌苯唑西林和红霉素耐药基因的多重PCR快速检测体系,并进行临床应用评价.以了解耐药基因mecA、ermA、ermC在广州地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素.方法 全自动仪器鉴定菌株及药敏试验,克林霉素耐药试验检测克林霉素诱导耐药,通过优化PCR反应体系建立多重PCR反应并应用于检测金黄色葡萄球菌耐药基因:mecA、ermA和ermC.结果 成功构建四重PCR快速检测体系,临床评价所分离的124株金黄色葡萄球菌中,mecA、ermA、ermC检出率分别为59.7%、50%、33.9%;克林霉素诱导耐药菌株主要是ermC基因;苯唑西林耐药菌株中均能检测出mecA,红霉素耐药菌株中97.7%携带耐药基因ermA或/及ermC.结论 所构建的多重PCR检测体系为临床实验室提供快速而有效的菌株耐药基因检测手段.mecA、ermA、ermC是本地区分离的金黄色葡萄球菌对苯唑西林和红霉素耐药的主要机制之一.     

几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果评价

目的：建立一种应用多重PCR技术,能够同时快速准确检测大肠杆菌O157、副溶血性弧菌、普通变形杆菌和单核细胞增生李斯特菌4种常见肠道致病菌的方法。方法：根据大肠杆菌O157、副溶血性弧菌、普通变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌的特异基因作为目的基因,设计相应的引物,并进行实验优化以确立对4种肠道致病菌的检测体系。并对市售经果汁样品人工随机染菌后进行模拟样品验证。结果：该多重PCR方法能够有效地扩增出相应致病菌的目的基因片段,其中单核细胞增生李斯特菌扩增片段为155 bp,大肠杆菌O157扩增片段为366 bp,变形杆菌扩增片段为522 bp,副溶血弧菌扩增片段为199 bp,且特异性较强。对4种目标菌的检测灵敏度可达到103CFU/mＬ。能够检测出模拟样品中随机接种的任意3种细菌。结论：利用建立的多重PCR可以快速、准确地筛查大肠杆菌O157、副溶血弧菌、普通变形杆菌和单核细胞增生李斯特菌。     

利用多重PCR检测3种食源性致病菌

目的旨在建立一种可以同时检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌的多重PCR方法。方法以金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌invA、志贺氏菌ipaH基因作为靶序列设计3对特异性引物,进行PCR反应得到223bp、302 bp、369 bp扩增片段,经测序证实扩增产物为目的片段。结果采用建立的FTA滤膜结合多重PCR的检测方法同时对这3种食源性致病菌进行检测,灵敏度均达到102 cfu/ml。结论该方法灵敏度高、耗时短,可用于同时检测3种致病菌,为预防控制细菌性食物中毒的暴发流行提供了新的检测方法。     

4种感染性腹泻病原菌免疫磁珠-多重PCR快速检测体系的建立

目的基于免疫磁珠分离及多重PCR技术建立出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的快速检测体系。方法根据出血性大肠埃希菌uidA、福氏志贺菌ipaH、空肠弯曲菌hipo及副溶血弧菌tlh的基因序列设计特异性引物,优化免疫磁珠分离过程及多重PCR扩增中的各个环节,建立上述4种病原菌同步快速扩增体系,并鉴定该体系特异性、敏感性。结果发现Mg2+浓度对该体系影响最大,在Mg2+浓度为4 mmol/L时扩增效率最高;该体系对4种病原菌的敏感性分别为:出血性大肠埃希菌2.7×10 cfu/ml、福氏志贺菌6.4×10 cfu/ml、空肠弯曲菌7.6×10 cfu/ml、副溶血弧菌3.6×10 cfu/ml。结论建立了出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的免疫磁珠-多重PCR快速检测体系,该体系特异性及敏感性高,检测过程简单,结果稳定,可应用于临床诊断及食品卫生监管中致病菌的快速检测。     

Rapid detection of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae in nasopharyngeal swabs by multiplex PCR

Objective To establish multiplex PCR-based assays for detecting H.influenzae and H.parainfluenzae.And the PCR-based assays were applied to detect the carriage rates of H.influenzae and H.parainfluenzae in nasopharyngeal swab specimens which were collected from healthy children.Methods Multiplex primers for species-specific PCR were designed by using DNAstar soft based on the sequences of 16S rRNA genes from genus Haemophilus to detect H.influenzae and H.parain fluenzae.Results The sensitivity of the 16S rRNA PCR assay for detecting H.influenzae and H.parainfluenzae was 97.53％ and 100％ respectively,and the specificity was 95.89％ and 96.63％ respectively.Youden's Index on the ability to detect H.influenzae and H.parainfluenzae was 0.9342 and 0.9663 respectively.666 nasopharyngeal swab specimens were collected from healthy children.The detection rates of H.influenzae and H.parainfluenzae were 14.11％ and 16.07％ respectively by using isolation and culture methods.The detection rates of H.influenzae and H.parainfluenzae were 43.54％ and 57.96％ respectively by 16S rRNA PCR assays.The carriage rates of serotypes a,b,c,d,e,f and non-typeable isolates were 0％ (0/666),0.15％ (1/666),1.20％ (8/666),0.15％ (1/666),1.20％ (8/666),1.80％ (12/666),95.50％ (636/666) respectively.Conclusion The multiplex PCR assays were very rapid,reliable and feasible methods for detection of H.influenzae and H.parainfluenzae in pharyngeal swab specimens which were compared to conventional isolation and culture methods.95.5％ of H.influenzae strains in healthy children were nontypeable.The encapsulated or typable strains were mainly three serotypes which was c,e,and f serotype.     

应用单管巢式多重PCR技术检测登革病毒及分型

目的建立一种单管巢式多重RT-PCR方法,以用于临床对于不同型别登革病毒混合感染的检测并分型。方法将1~4型登革病毒RNA混合,首先用1~4型病毒通用外引物进行一步法RT-PCR,然后以混合病毒RT-PCR产物为模板,在同一反应管内同时加入4对(5条)型特异性引物进行巢式多重PCR,结果用EB染色的3%琼脂糖凝胶电泳观察;并将其检测敏感性和特异性与该方法的单一病毒模板RNA扩增进行比较。结果经反应条件的优化,混合病毒模板单管巢式多重PCR可以在同一反应管内同时扩增出4条病毒特异性目的条带,分别为482、119、290、389 bp。其敏感性和特异性与单一病毒RNA的扩增相当,对模板RNA检测的敏感性可以达到66.068 copies/μl。结论该方法简便、快速、敏感、特异,可以根据扩增目的片段的大小进行诊断和分型,对于临床登革病毒混合感染病例的诊断和快速分型有应用价值。     

多重PCR检测支气管肺泡灌洗液中细菌性病原体的研究

目的评价呼吸道感染患者肺泡灌洗标本进行多重PCR检测的准确性。方法选取2006～2009年本院住院的158例儿童为研究对象,同时选用需要接受纤维支气管镜检查的30例同龄非感染患儿作为对照。所有儿童24h内接受标准的纤维支气管镜介导的支气管肺泡灌洗。用多重PCR检测灌洗液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体和肺炎嗜衣原体。并用细菌培养等常规方法对这些患者的肺泡灌洗液进行分析。结果常规细菌学诊断方法显示,肺炎链球菌,流感嗜血杆菌,肺炎支原体,肺炎嗜衣原体在下呼吸道感染病人中分别占14％,21％,3．2％,和0％。而应用肺泡灌洗液多重PCR这种诊断方法,这些病原体在这些病人中分别占了28％,47％,4％和1％,其敏感性分别为87％。90％,100％和0％,特异性分别为81％,64％,100％和99％。在104位检查前服用了抗生素的支气管镜检患者中,肺炎链球菌通过细菌培养来确诊占2．9％,而通过多重PCR则为31％。在对照组中多重PCR鉴别肺炎链球菌的比例为17％．流感嗜血杆菌为40％。结论在下呼吸道感染病人中,支气管肺泡灌洗液结合多重PCR能够有效的用来鉴别肺炎链球菌,流感嗜血杆菌,肺炎支原体,肺炎嗜衣原体,这在已经用抗生素治疗的病人中尤为有效。