镉致腺垂体-肾上腺皮质凋亡机制研究

目的观察CdCl2作用后腺垂体．肾上腺皮质系统凋亡情况及半胱天冬酶-9的表达变化。方法48只雄性SD大鼠随机分为4组，即对照组、CdCl2低剂量组（1．0mg／kg）、中剂量组（2．0mg／kg）、高剂量组（4．0mg／kg）。经口灌胃染毒．每周5d，连续6周。染毒结束后分离腺垂体和肾上腺皮质进行透射电镜观察、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡、半胱天冬酶原。9mRNA（procaspase-9mRNA）表达、半胱天冬酶-9（caspase-9）表达。结果电镜检查可见凋亡细胞早期形态学变化；中、高剂量组腺垂体和肾上腺TUNEL阳性细胞的平均灰度值和procaspase-9 mRNA阳性细胞相对灰度值均为对照组的1．2倍以上（P〈0．05）；蛋白印迹（western boltting）结果显示，随着染毒剂量的增加，垂体-肾上腺系统caspase-9表达逐渐增强（P〈0．01）。结论CdCl2可诱发腺垂体一肾上腺皮质细胞凋亡，在此过程中caspase-9及其酶原mRNA表达呈现出与凋亡较为一致的趋势。     

醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶-6、-9活性的影响

目的了解醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶(caspase)-6、-9活性的影响.方法 PC12细胞分别不同时间(12、24、36、48、60、72 h)暴露于不同浓度的醋酸铅(0、62.5、125.0、20.0、500.0 μmol/L),用比色法检测其caspase-6、-9的活性.结果 PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅24h可见caspase-6活性升高,48h达高峰(为对照组的5.75倍,P＜0.01),至72 h仍高于对照组(P＜0.01).PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅12 h,caspase-9活性已升高,36 h达高峰(约为对照组的7.48倍,P＜0.01),至60h已降至与对照组无差别的水平.PC12细胞暴露于不同浓度的醋酸铅48h(caspase-6)和36 h(caspase-9),可见caspase-6、-9活性具有浓度依赖性的增加.结论醋酸铅可引起caspase-6、-9活性的升高.     

Apoptin基因诱导A 375细胞凋亡信号转导机制

目的研究肿瘤特异性凋亡基因（apoptin）在诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A 375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析检测A 375的细胞的凋亡;以比色法检测半胱天冬蛋白酶8（caspase-8）和caspase-3的相对活性。结果Apoptin基因瞬间传染的A 375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组（P〈0.01）;Cas-pase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化。结论Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡。     

脓毒症大鼠脾细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达及中药血必净的影响

目的观察血必净对脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达以及半胱天冬酶(caspase)3活性的影响。方法96只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)、模型组(40只)和血必净治疗组(40只),以盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症模型;TUNEL法检测脾细胞凋亡情况、分光光度法测定脾组织半胱天冬酶3活性、流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中CD3+细胞比例以及免疫组化法检测脾脏FasL、Bcl-2蛋白表达水平。结果假手术组大鼠脾脏FasL表达的IOD值为4.54±1.41,模型组较之明显增多,至48 h达757.96±188.10,假手术组大鼠脾脏Bcl-2表达的IOD值为594.05±183.32,模型组表达下降,于48 h仅为22.71±9.22,假手术组仅有少量细胞凋亡(0.87±0.51),半胱天冬酶3活性较低(4.34±1.34),CD3+细胞比例为63.49%;模型组于造模后4 h起脾组织细胞凋亡数增多达8.88±3.68,半胱天冬酶3活性升高至12.22±3.15,而脾细胞中CD3+细胞比例明显下降为52.09%;血必净干预后可明显降低脾脏FasL表达、促进Bcl-2表达,减轻脾组织半胱天冬酶3活化程度,减少脾细胞凋亡,并使CD3+细胞比例恢复正常。结论脓毒症时凋亡途径的活化使脾细胞过度凋亡,引起了免疫失衡的发生,血必净可以通过调节凋亡相关蛋白的表达,减轻脾细胞凋亡,恢复脓毒症的免疫平衡。     

组蛋白去乙酰化酶2基因在苯并（a）芘致神经细胞凋亡中的量效和时效表达

[目的]通过体外培养细胞途径研究组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）基因在苯并（a）芘[B（a）P]所致神经细胞凋亡中的量效和时效表达。[方法]大鼠原代培养的神经元细胞分为两批：第一批分4个组,以B（a）P同时加入s9对细胞染毒,分别为二甲基亚砜（DMSO）组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,使其终浓度为0、10、20、40gmol／L,继续培养48h;第二批分5个组,以20gmol／LB（a）P染毒,分别于染毒0、6、12、24、48h处理细胞。用流式细胞术检测神经细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR法检测caspase-3,HDAC2基因的量效和时效表达情况。[结果]①流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,中、高剂量组神经细胞的凋亡率明显增加（P〈O．05）;与低剂量组相比,高剂量组凋亡率增加（P〈0．05）。与0h组相比,染毒24、48h组神经细胞的凋亡率明显增加（P〈0．05）。②与DMSO组相比,高剂量组caspase-3、HDAC2mRNA的表达量明显增加（P〈0．01）;与低剂量组相比,高剂量组caspase-3mRNA表达量明显增加（P〈0．05）。与0h组相比,染毒48h组caspase-3、HDAC2mRNA表达量明显升高（P〈0．01,P〈0．05）。[结论]B（a）P可引起神经细胞凋亡,HDAC2基因表达上升,该基因可能在B（a）P所导致的神经细胞凋亡中起重要作用。     

Caspase-3与肝癌细胞凋亡

肿瘤细胞增殖与凋亡的失衡是肿瘤发生和发展的重要环节。Caspase-3（半胱天冬酶-3）是介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶，即Caspase中的关键效应酶，是凋亡执行的重要效应分子，广泛表达于正常人体组织及多种肿瘤组织中。大量研究表明Caspase-3蛋白酶激活与肝癌细胞凋亡有密切联系。现就Caspase-3与肝癌细胞凋亡的关系综述如下。     

锰对HUVEC-304细胞生长及p53、p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响

目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系HUVEC-304细胞生长及p53、p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响。方法取指数生长期HUVEC-304细胞,以100、200、400、800μmol/L MnCl2,分别作用24、48、72 h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验检测细胞的存活力,筛选锰对细胞的毒性剂量。流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Western blot方法检测p53、p21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果100、200、400、800μmol/L MnCl2作用24、48、72 h均对HUVEC-304细胞有显著的抑制作用(P<0.05),且呈剂量-时间效应关系。流式细胞仪检测结果表明锰能诱导HUVEC-304细胞凋亡(P<0.01),Western blot结果显示,随锰浓度的增高,p53蛋白的表达下降(P<0.05);而p21WAF1/CIP1蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论锰可抑制HUVEC-304细胞的增殖,诱导其发生凋亡,p53蛋白的表达减少及p21WAF1/CIP1蛋白的表达增加是其发生凋亡的机制之一。     

雌马酚对血管内皮细胞凋亡和增殖影响

目的探讨大豆异黄酮(SI)代谢物雌马酚对血管内皮细胞凋亡和增殖的影响。方法体外培养血管内皮细胞(ECV-304),采用不同浓度雌马酚(0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00μmol/L)处理24 h,收集细胞,采用流式细胞术分析细胞内活性氧(ROS)、细胞凋亡和细胞周期;采用免疫组织化学技术分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3表达;采用噻唑蓝(MTT)法分析雌马酚对ECV-304细胞增殖影响。结果与对照组比较,6.25μmol/L雌马酚组ECV-304细胞内ROS含量下降,100.00μmol/L雌马酚组ECV-304细胞内ROS含量升高;与对照组比较,25.00、50.00、100.00μmol/L雌马酚组ECV-304细胞早、晚期凋亡率明显升高,并可导致细胞G1期阻滞(P<0.05);MTT实验结果显示,0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmol/L雌马酚组ECV-304细胞增殖抑制率分别为-(8.23±2.21)%、-(3.29±1.07)%、(6.75±1.73)%、(25.46±4.82)%和(36.93±4.66)%,低剂量雌马酚对细胞生长具有促进作用,高剂量雌马酚对细胞生长具有抑制作用;与对照组比较,25.00μmol/L雌马酚组作用24 h后,细胞内Bax和caspase-3表达增加,而Bcl-2表达减少。结论低浓度雌马酚可降低细胞内ROS含量,促进ECV-304细胞增殖;高浓度雌马酚可导致细胞凋亡、细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。     

1，25-二羟基维生素D3对K562细胞周期及凋亡的影响

目的观察1，25-二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的作用。方法Western印迹检测维生素D受体（VDR）在K562细胞的表达；四噻唑蓝法（MTT）、AO／EB、流式细胞仪分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期。结果（1）K562细胞核阳性表达VDR；（2）0-10^-6mol／L浓度的1，25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖，10^-8mol／L 1，25（OH）2D3明显抑制K562细胞增殖，促进凋亡，细胞周期阻滞主要发生在G2期或M早期，凋亡率从4．1％（对照组）增至26．5％（P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3可明显抑制K562细胞增殖，促进细胞凋亡。     

姜黄素对人喉癌细胞株Hep-2增殖和端粒酶活性的影响

目的研究姜黄素（curcumin）对人喉癌细胞Hep-2增殖和端粒酶活性表达水平的影响。方法CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后24h、48h、72h的细胞增殖活性：集落形成试验检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后的细胞增殖抑制率;StretchPCR-银染法检测细胞端粒酶活性变化。RT—PCR分析端粒酶主要组分hTERT的mRNA表达情况。结果①姜黄素对Hep-2细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。五种浓度（20μmol／L、40μmol／L、60μol／L、80μmol／L、100μol／L）姜黄素作用12、24、48、72小时后,IC50分别为81．17μmol／L、40．90μmol／L、33．26μmol／L、31．63μmol／L;②四种浓度（20μmol／L、40μmol／L、60μmol／L、80μmol／L）姜黄素作用于Hep-2细胞48h,-周后各组Hep-2细胞集落形成数和细胞增殖抑制率均呈浓度依赖性．其细胞增殖抑制率与对照组相比,分别为36．25％、57．4％、98．48％、100％;③60μmol／L姜黄素作用于Hep-2细胞24、48、72小时后。与对照组相比,端粒酶活性总光密度值（IOD）分别下降23．19％、60．28％和70．15％,各时间组间有显著性差异（P〈0．01）;端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达水平IOD值分别下降2．90％、58．69％和88．35％,各时间组间有显著性差异（P〈o．01）。结论姜黄素可抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖活性,下调hTERTmR．NA的转录水平并抑制细胞的端粒酶活性,有较好的临床应用前景。     

caspase-3和caspase-9在甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导肝癌细胞SMMC7721细胞凋亡中的影响

[目的]观察甘氨鹅脱氧胆酸钠(glycochenodeoxycholate,GCDCA)诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡过程中caspase3,9活性变化,探讨GCDCA诱导肝癌细胞凋亡的机制。[方法]体外培养SMMC7721细胞,GCDCA为处理因素,Annexin V—FITC/PI双染色法结合流式细胞技术仪检测细胞凋亡率,比色法测定caspase3,9活性。[结果]200μmol/L的GCDCA处理SMMC7721细胞24h,48h,72h后,其细胞凋亡率明显增加;caspase3,9活性表达水平明显升高,并与GCDCA呈浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]GCDCA可明显诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡,caspase3,9参与GCDCA诱导SMMC7721细胞凋亡调控。     

Nd:YAG激光对大鼠视网膜组织caspase-9的影响

目的观察Nd:YAG激光致Long Evans大鼠视网膜损伤对其caspase-9 mRNA水平、蛋白表达水平和酶活性的影响。方法建造大鼠视网膜Nd:YAG激光照射损伤模型,眼底照相观察大鼠视网膜损伤,于照后即刻、3h、6h、12h、24h、3天和7天不同时相点,检测受损视网膜的caspase-9的mRNA和蛋白表达以及酶活性的变化,并与假照射组进行比较。结果 Nd:YAG激光照后LE大鼠视网膜组织中caspase-9 mRNA表达无明显变化,但在照后6h和12h,活化的caspase-9蛋白表达和caspase-9酶活性均明显升高(P0.01)。结论 Nd:YAG激光照射导致LE大鼠视网膜caspase-9活化。     

锰诱导的大鼠生精细胞凋亡通路的探索研究

[目的]研究锰对大鼠生精细胞caspase-3表达的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达作用的机理.[方法]雄性SD大鼠(体重120±10 g)24只随机分为3组:空白对照组,15 mg/kg和30 mg/kgMnCl2组.8只/组.MnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4 w,空白对照组给予等容NS,给药途径均为腹腔注射,5 d/w,1次/d,于第4w末处死,免疫组化(SABC法)法检测睾丸caspase-3和cyto--c表达. [结果]与空白对照组比较,各染锰组cas-pase-3阳性细胞率均显著升高,cyto-c阳性细胞率均显著降低(P＜0.01).染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15 mg/kg MnCl2组比较,caspase-3阳性细胞率显著升高,cyto-c阳性细胞率显著降低(P＜0.01).各组caspase-3和cyto-c阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.876,P＜0.01). [结论]锰可通过线粒体途径诱发大鼠生精细胞凋亡,且caspase-3的表达随染锰剂量的增加而增加,二者存在一定的剂量-效应关系.     

SP600125对NO诱导的软骨细胞凋亡及caspase-3活性影响的研究

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和JNK抑制剂SP600125,研究NO对兔关节软骨细胞凋亡及caspase-3活性的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺兰染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检...     

caspase-3基因在染铝小鼠神经细胞凋亡中的作用

[目的]通过观察染铝小鼠海马的线粒体膜电位、组织形态以及脑组织内活化的caspase-3蛋白含量表达的变化,研究caspase-3 siRNA在铝致神经细胞凋亡中的作用。[方法]取3月龄雄性昆明小鼠,按体重随机分为4组,即空白对照组（生理盐水4μL）、染铝组（0.5%AlCl3.6H2O 4μL）、Al＋RNAi组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋目的siRNA表达载体1μL）、空载体组（0.5%AlCl3.6H2O 3μL＋对照siRNA表达载体1μL）,通过侧脑室注射进行染毒,连续染毒5 d,各组小鼠海马的凋亡率用流式细胞术检测;线粒体膜电位用罗丹明123（Rhl23）染色流式方法检测;观察小鼠组织学变化;脑组织中活化的caspase-3蛋白的含量用蛋白印迹（Western blot）技术检测。[结果]凋亡率结果显示：与空白对照组相比,染铝组、空载体组的细胞凋亡率升高有统计学意义（P〈0.05）,Al＋RNAi组凋亡率尚无差别（P〉0.05）;线粒体经Rhl23染色呈现明亮绿色的荧光,染铝组和空载体组荧光强度较对照组明显减弱（P〈0.05）,Al＋RNAi组与空白对照组差异无统计学意义;常规HE染色镜下可见空白对照组小鼠海马神经元排列整齐,染铝组细胞排列零乱,细胞连接松解,空载体组细胞数量减少,siRNA处理后细胞状态与空白对照组相似;活化的caspase-3蛋白表达量结果显示染铝组高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;空白对照组、空载体组、Al＋RNAi组之间尚无差别（P〉0.05）。[结论]RNA能通过下调caspase-3基因的表达,从而对铝致小鼠神经细胞凋亡产生抑制作用。     

子痫前期患者胎盘组织p-p38与caspase-3、8的表达及临床意义

目的 研究p-p38、caspase-3、caspase-8在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义.方法 选择2016年 6月至2017年 2月在西京医院妇产科住院分娩的孕妇80例,分为子痫前期组40例,正常妊娠组40例,采用免疫组化法及蛋白印迹法检测子痫前期患者和正常妊娠妇女胎盘滋养细胞中p-p38、caspase-3、caspase-8的表达.结果 p-p38、caspase3、caspase8在子痫前期胎盘和正常妊娠胎盘中均有表达;在子痫前期患者胎盘中p-p38、caspase-3、caspase-8表达与正常胎盘相比显著升高(2.08±0.04vs 1.44±0.04、1.72±0.03 vs 1.12±0.06、1.59±0.04 vs 1.18±0.01,t值分别为71、60、61,均P<0.01).结论 胎盘组织中p-p38、caspase-3、caspase-8的异常表达可能促进滋养细胞凋亡增加,推进子痫前期的发生发展.     

前列地尔对局灶性脑缺血大鼠脑组织Fas、caspase-3的影响

目的从脑组织膜蛋白酶(Fas)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)的表达变化的角度来探讨前列地尔对大鼠局灶性脑缺血的防治机制及其量效关系.方法采用大脑中动脉闭塞方法建立局灶性脑缺血动物模型,观察低、中、高剂量前列地尔对局灶性脑缺血大鼠大脑皮质Fas、caspase-3表达的影响.结果前列地尔低、中、高剂量组大鼠脑组织Fas表达平均灰度分别为(110.39±8.44),(135.53±6.66)和(157.34±7.94),均弱于缺血对照组(88.46±11.08);前列地尔低、中、高剂量组大鼠脑组织caspase-3表达平均灰度分别为(137.86±6.99),(156.71±5.19)和(169.55±4.44),均弱于缺血对照组(106.76±12.51).结论前列地尔防治大鼠局灶性脑缺血损伤的机制可能与抑制脑组织Fas、caspase-3表达有关,且以高剂量效果较好.     

三氯乙烯引起裸鼠刺激性接触性皮炎细胞凋亡的信号传导途径

目的研究有机溶剂三氯乙烯（TCE）引起BALB／c裸鼠皮肤组织发生细胞凋亡的程度以及凋亡相关蛋白caspase-9与凋亡的关系。方法应用原位末端标记（TUNEL）法检测三氯乙烯染毒的50只BALB／c裸鼠皮肤组织的细胞凋亡,应用免疫组化S-P法检测皮肤组织中caspase-9的表达,并利用抗氧化剂维生素E研究三氯乙烯的损害作用。结果各染毒剂量组皮肤组织的凋亡指数和caspase-9活性的差异有统计学意义,TCE浓度越高,细胞凋亡和caspase-9的表达水平越高,维生素E保护组低剂量下无保护作用,高剂量组有保护作用。结论TCE引起的早期皮肤组织损伤与细胞凋亡有关,caspase-9在凋亡过程中发挥了重要的作用,以线粒体损伤为主要途径的细胞凋亡在三氯乙烯致皮肤组织损伤的过程中具有重要的意义。     

芹菜素对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的:了解芹菜素对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测芹菜素在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞的周期分布;DAPI荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;Western blotting方法检测了凋亡相关信号分子caspase-3和Bcl-2的蛋白表达情况。结果:芹菜素在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。Western blotting实验结果表明,芹菜素可以诱导SGC-7901细胞中凋亡相关信号分子caspase-3活化片段的产生并抑制Bcl-2蛋白的表达。结论:芹菜素在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于caspase-3的活化及Bcl-2蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

牛磺酸对视网膜感光细胞光损伤及NFκB/caspase-1表达的影响

目的观察牛磺酸对光化学损伤后感光细胞凋亡的影响,并探讨其防护机制.方法 70只SD大鼠随机分为对照组(control),牛磺酸组(taurine, Tau),分别喂饲标准饲料或添加4%Tau饲料15d后接受3 000±200 lx持续0、1、3 、6 、9 、12 、24 h光照,用TUNEL法检测感光细胞凋亡并计算凋亡指数(apoptotic index, AI),免疫印迹法测定caspase-1和核内p65蛋白表达水平,RT-PCR法检测IκBa mRNA.结果 光照9 h后Tau组出现凋亡细胞,且多个时相点该组AI值显著低于对照(P＜0.05);短期光照(3h/6h)诱导p65核转位,Tau组核内p65量显著高于对照组(P ＜0.05),长时程光照后(12 h/24 h)对照组核内p65显著降低,Tau组仍有较高表达;光照1 h后对照组IκBa mRNA迅速升高,而Tau组在光照3、6 h后升高较显著.视网膜caspase-1蛋白随光照时间延长表达增高,Tau组显著低于对照组对应时相点(P ＜0.05).结论 牛磺酸抑制视网膜光化学损伤中感光细胞凋亡,可能与其维持NFκB激活状态进而下调caspase-1表达有关.