川芎嗪对人肾间质成纤维细胞增殖和形态的影响

目的：观察川芎嗪（TMP）对肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞（hRIFs）体外增殖和形态的影响。方法：组织块培养法体外培养hRIFs；MTT比色法分别检测对照组及不同浓度TMP（0．25、0．50、1．00和2．00mg／m1）组hRIFs在培养的d1、3、5、7、9的增殖情况；用倒置相差显微镜观察TMP作用下bRIFs形态的改变。结果：与对照组相比，0．25mg／ml或0．50mg／ml的TMP作用于hRIFs后5～9d、1．0mg／ml的TMP作用于hRIFs后3～9d、2．00mg／ml的TMP作用于b．RIFs后1～9d对hRIFs体外增殖有显著的抑制作用，用药后FBS形态也发生明显变化。结论：TMP对hRIFs体外增殖具有明显抑制作用．且有时间、浓度依赖性：同时TMP可使体外培养hRIFs出现形态异常。     

SD大鼠骨髓基质细胞的分离培养和鉴定

目的观察SD大鼠骨髓基质细胞的体外分离培养情况并加以鉴定。方法采用密度梯度离心(Percoll法)和贴壁培养结合的方法分离培养SD大鼠BMSCs;采用倒置相差显微镜观察BMSCs形态学特征;流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD45和CD90表达阳性率。结果第3代以后的细胞形态较一致,呈大而扁的梭形为主,第3～5代细胞增殖力保持旺盛;第3代细胞表面标志抗原CD45和CD90表达阳性率分别为:0.2%和94.7%。结论密度梯度离心结合贴壁培养的方法可获得较高纯度的BMSCs,对其进行研究和应用应选用第3～5代的BMSCs。     

诱导人胚胎干细胞向子宫内膜样细胞分化的初步研究

目的:探讨无饲养层培养的人胚胎干细胞诱导分化为子宫内膜样细胞的方法。方法:将无饲养层培养的人胚胎干细胞分别通过共培养诱导法和细胞因子诱导法向子宫内膜样细胞诱导,流式细胞术检测分化的细胞中子宫内膜上皮细胞标志物细胞角蛋白18和间质细胞标志物波形蛋白的表达情况。结果:共培养诱导法和细胞因子诱导法在分化第7天均出现长梭状细胞样改变。分化第8天通过流式细胞术检测发现细胞波形蛋白表达均为阴性,部分细胞角蛋白18表达阳性,共培养诱导法分化率高于细胞因子诱导法[(55.63±10.29)%vs.(13.90±0.26)%,P<0.05]。结论:共培养诱导法和细胞因子诱导法均可使人胚胎干细胞分化为子宫内膜上皮样细胞,但前者的分化效率更高。     

人骨髓间充质干细胞向肝系细胞分化的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导人骨髓间充质干细胞在体外向肝系细胞分化的可能性。方法人骨髓间充质干细胞来自成人骨髓,采用密度梯度离心法分离和反复贴壁法纯化。为有效地促进其向肝细胞分化,本实验使用了HGF和bFGF联合诱导的方法,于0、7、14、21、28d采用细胞免疫荧光法检测肝细胞表面标志甲胎蛋白(alpha_fetoprotein,AFP),细胞角蛋白(cytokeratin 18,CK_18)和细胞角蛋白(cytokeratin 19,CK_19),同时采用Periodic Acid_Schiff(PAS)染色检测诱导细胞糖原合成及贮存功能,并留取不同时段的培养上清液,用放射免疫荧光法(radioimmunoassay,RIA)法检测AFP的分泌量。结果在诱导14d后可观察到诱导细胞变成短梭形和多角形,随诱导时间延长多角形细胞增多,并可形成肝细胞样细胞集落。第14天时AFP,CK_18表达阳性,第21天诱导细胞糖原染色阳性,第28天CK_19表达阳性。培养上清液中14d时,检测到AFP的分泌,浓度为0.1ng/ml;17d时分泌量最高,为0.4ng/ml;21d时下降至0.3ng/ml。结论HGF和bFGF能够诱导人骨髓间充质干细胞在体外分化为肝细胞,这将为肝脏疾病的细胞替代治疗提供新的细胞来源。     

20例人早孕绒毛滋养细胞的体外培养

目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0．25％胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜对培养出的细胞进行形态评价;用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速,接种6～8d可以传代,原代细胞生长时间明显缩短,所得细胞纯度达95％。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。     

小鼠子宫内膜基质细胞的分离纯化与体外培养

目的分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞并进行体外培养,为进一步研究子宫内膜异位症的发病机制提供实验基础。方法通过酶消化、滤网过滤和差时贴壁等方法 ,分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞,体外培养传代,通过免疫组织化学法进行细胞表型鉴定。结果基质细胞在接种后0.5 h开始贴壁,可见梭形和多角形两种形态的细胞。免疫组化显示这两种细胞具有波形蛋白免疫反应性,反应率可达95%以上,而细胞角蛋白无免疫反应性,提示它们为来源于内膜基质的基质细胞,分离出的子宫内膜基质细胞可以在体外进行增殖。结论采用酶消化、滤网过滤和差时贴壁等方法 ,可成功地分离小鼠子宫内膜基质细胞,基质细胞可以有限的传代。     

体外培养骨膜细胞的实验研究

目的研究体外培养的骨膜细胞的形态学特征。方法采用常规细胞培养法进行骨膜细胞体外培养,并观察其形态特征及超微结构。结果人骨膜培养活细胞光镜下形态:早期新生细胞呈梭形,饱满透明,立体感强;分裂期呈立方形或短柱状;后期由长梭形逐渐变成宽梭和不规则形,分泌功能旺盛。人骨膜细胞电镜超微结构:胞体呈梭形,膜面有少量微绒毛状突起,粗面内质网丰富,有大量异噬体等次级溶酶体,线粒体体积较小、基质致密有少量嵴。具有原代细胞生物形态学特征。结论人骨膜成骨细胞可经体外培养大量增殖,且细胞传代进化后,其形态学结构与原代细胞无明显差异,可用于细胞移植。     

云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化和成纤维细胞活化过程中的相互作用

目的 探讨云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化及成纤维细胞活化过程中的相互作用.方法 常规培养永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及人胚肺成纤维细胞(WI-38),每6天传代1次;100μg/ml的云锡矿粉隔代诱导BEAS-2B及WI-38至第9代,共诱导5次,自第11代分组共培养至第40代.刀豆凝集素A及锚着独立性生长实验检测细胞恶性转化,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫细胞化学法检测成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 (1)与正常BEAS-2B细胞相比,矿粉诱导的BEAS-2B细胞单独培养至第28代细胞形态开始出现改变;与WI-38细胞共培养后,细胞形态改变提早至第20代;与矿粉诱导的WI-38细胞共培养后,细胞形态改变进一步提早至第16代.矿粉诱导的BEAS-2B细胞培养至第26代时凝集实验出现阳性;与WI-38细胞及矿粉诱导的WI-38细胞共培养后,细胞凝集时间缩短.与WI-38细胞共培养的矿粉诱导BEAS-2B及与矿粉诱导WI-38细胞共培养的矿粉诱导的BEAS-2B细胞分别在第26及第36代锚着独立性生长实验出现阳性,第36代的克隆形成率分别为6.00‰±1.00‰和15.33‰±2.52‰,且差异有统计学意义(P<0.05).矿粉诱导的各组上皮细胞S期细胞所占比例随培养代数增加逐渐升高,细胞发生恶性转化.(2)100 μg/ml矿粉诱导的成纤维细胞培养至第26代出现α-SMA表达;与上皮细胞共培养后,成纤维细胞α-SMA表达增强,且随培养代数的增加,阳性表达细胞数明显增多,着色程度增强.结论 个旧矿粉能诱导支气管上皮细胞恶性转化及成纤维细胞活化;肺上皮细胞是矿粉诱癌的主要靶细胞;肺上皮细胞的转化和成纤维细胞的活化相互影响,相互促进.     

胚胎肝细胞提取液体外诱导骨髓干细胞向肝系细胞分化的实验研究

目的探讨胚胎肝细胞提取液体外诱导骨髓干细胞向肝系细胞分化的可行性。方法通过密度梯度分离法分离出骨髓中单个核细胞,进行体外培养和鉴定。在BMSCs传代培养7d后,把培养细胞分为诱导组和非诱导组;诱导组加入胚胎肝细胞提取液的培养体系,非诱导组加入不含胚胎肝细胞提取液的基础培养体系。在诱导培养d0,d10,d20,d30,d40对诱导分化的细胞进行形态学观察、肝系细胞特异性标志物的鉴定。结果①形态学:诱导培养2周后,长梭形细胞大多数转变成圆形、卵圆形及多角形,细胞呈肝干细胞样圆形。②免疫细胞化学检测:诱导培养d10～20细胞表达AFP、CKl9逐渐增强,d30~40逐渐减弱;诱导培养d10~40细胞表达ALB呈上升趋势;阳性染色细胞胞浆内出现棕黄色颗粒。非诱导组细胞不表达AFP、CKl9、ALB3种蛋白,为阴性染色。③糖原染色:诱导培养的细胞d10~40BMSCs均有糖原表达,非诱导细胞未见糖原表达(P﹤0.05)。结论胚胎肝细胞提取液在体外可以诱导骨髓干细胞向肝系细胞分化,并分化为具有合成、代谢、分泌及储存功能的肝系细胞。     

胚胎干细胞在心肌样环境中向心肌样细胞的分化情况

目的探讨心肌细胞促进胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)分化为心肌样细胞的诱导作用。方法收集小鼠3.5d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,4～5d后取内细胞团接种在饲养层上分离培养出ESCs。取3～5代ESCs,先将ESCs悬浮培养形成2～3d的拟胚体(embryoid bodies,EBs),再与新生大鼠心肌细胞共培养诱导向心肌细胞分化,相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)、а-肌动蛋白(а-Actin)的表达。结果诱导d3起可见自发性、有节律跳动的拟胚体出现,12d时共培养组约有93%的拟胚体出现节律性收缩,显著高于对照组,均表达心肌细胞特异性蛋白cTnT、а-actin,心肌细胞直接接触诱导组其分化比率达56.5%,分化的细胞形态较单一。结论心肌细胞与胚胎干细胞直接接触能促进胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

急进高原对武警新兵心血管功能的影响

[目的]观察急进高原对武警战士心脏和血管功能影响,为探讨新兵高原习服提供科学依据。[方法]实验于2008年在成都和拉萨完成。用XXG-E3型自动心血管功能诊断仪记录平原、急进高原d 1、d 3、d 5、d 7心脏和血管功能指标。[结果]①与平原比较,急进高原的d 1、d 3,脉搏速率加快(P﹤0.001),d 3、d 5、d 7搏出量和心搏指数减少(P﹤0.01),d 5、d 7心脏指数减少(P﹤0.05,P﹤0.001),d 7心输出量减少(P﹤0.001),d 5、d 7有效循环血量减少(P﹤0.001),d 3、d 7心肌血流灌注量减少(P﹤0.001),心肌耗氧指数、心肌耗氧量、心搏功指数、心肌血流需要量的差别均无统计学意义。②与平原比较,急进高原d 5、d 7,脉搏压减小,d 3、d 7血管顺应度、血管弹性系数、主动脉排空系数减小(P﹤0.001,P﹤0.05),d 3、d 5、d 7总外周阻力、标准周阻增大(P﹤0.001,P﹤0.05),肺动脉阻力、肺动脉压的变化差异无统计学意义。[结论]急进高原心脏功能的变化主要为心率加速和搏出量减少;对血管的影响主要是增加体循环外周阻力。     

重组人p53腺病毒药物对人喉癌细胞的抑制实验

[目的]探索p53基因在喉癌基因治疗方面的可行性。[方法]以人喉癌细胞系Hep-2为实验对象,将重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)转染Hep-2细胞,体外实验观察重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)对Hep-2细胞生长的影响。[结果]各浓度重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)(1010、109、108、107)对Hep-2生长均有抑制。尤以1010明显。转染3d后,重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)诱导Hep-2细胞明显凋亡。[结论]重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)对Hep-2细胞生长能有效抑制,能明显诱导其凋亡,为喉癌的治疗提供了临床前依据。     

补体C5aR受体在UUO大鼠模型肾组织中的表达

目的动态检测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中补体C5a受体（C5aR）的表达变化,从而探讨其在肾小管间质纤维化发展中的可能作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为UUO组及假手术（SOR）组,每组18只,UUO组行左侧输尿管梗阻术,SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第5、10、15天分别处死每组中6只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化检测肾组织C5aR的表达,RT-PCR检测C5aR的基因表达情况。结果UUO组第5天肾小管扩张,小管间质细胞部分变性,梗阻后第10天小管间质细胞可见坏死,间质纤维增多,第15天可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点显著高于SOR组（P〈0．01）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中仅有少量C5aR表达,UUO组术后第5、10及15天C5aR表达[（7．94±2．67）IOD,（12．39±2．64）IOD,（13．37±0．98）IOD]显著高于对应时间点的SOR组[（4．50±2．32）IOD,（5．69±1．73）IOD,（4．30±1．45）IOD]（P〈0．05,P〈0．01）,术后第10天明显高于第5天（P〈0．01）,而从第10天到第15天仅稍有增高。C5aRmRNA在UUO组从术后第5天到第10天梗阻侧肾脏C5aRmRNA表达明显增多（0．10±0．02到0．34±0．10）,而从第10天到第15天表达未见明显增多,甚至有降低的趋势（第15天为0．32±0．06）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中C5aR的表达在早期随着梗阻时间延长而上调,晚期则增多缓慢,其基因水平表达情况同蛋白基本一致,提示C5aR可能在肾脏局部通过与循环系统中的C5a结合在肾间质纤维化早期起作用。     

来曲唑与克罗米芬用于多囊卵巢综合征促排卵疗效研究

目的比较来曲唑(LE)与克罗米芬(CC)促排卵作用及妊娠结局。方法选择60例多囊卵巢综合征患者随机分成两组,LE组28例,CC组32例。于月经周期第3～5 d分别服用LE与CC,观察LE与CC对卵泡发育及子宫内膜的影响。结果出现优势卵泡LE组24例,CC组12例,差异有统计学意义(P0.01)。单卵泡发育LE组23例,CC组4例,差异有统计学意义(P0.01)。绒毛膜促性腺激素(HCG)注射日子宫内膜平均厚度LE组(8.33±1.94)mm,CC组(5.82±1.53)mm,差异有统计学意义(P0.01)。结论 LE促排卵效果明显优于CC,且LE组单卵泡发生率明显高于CC组,有效降低了多卵泡发育、卵巢过度刺激综合征和多胎妊娠的发生率。     

动态APACHEⅢ联合MODS评分在ICU临床研究中的应用

目的应用动态急性生理学及慢性健康状况评估Ⅲ（APACHEⅢ）评估重症监护病房（ICU）患者的病情及预后;同时对比动态APACHEⅢ评分,多器官功能障碍综合征（MODS）评分预测患者预后与实际预后的关系。方法收集整理286例危重症患者资料,分为存活组252例,死亡组34例,比较两组第1、3、5、7天应用APACHEⅢ系统评分,同时进行MODS评分及预后预测。结果第1、3、5、7天APACHEⅢ分值和预测病死率死亡组均高于存活组（P〈0.05或P〈0.01）,动态评分更有助预后判断;APACHEⅢ评分与MODS评分高低有一致性;MODS评分与死亡率有关。结论动态APACHEⅢ评分系统联合MODS评分系统可用于ICU病房患者病情及预后评估,是医疗质量及合理利用ICU资源的依据。     

In vitro effect of copper on the stromal cells of bone marrow in rats

The effect of copper in form of copper sulphate (CuSO4 x 5 H2O) was studied in the bone marrow cells of rats of Wistar strain in an in vitro culture. Evident differences between tissue cultures of the bone marrow cells were observed between the control and experimental groups. In the experimental group, the CFU-F colonies appeared as early as in 3rd day while in the control group in 5th day. Loosely arranged fibroblasts, macrophages and adipocytes also showed quantitative differences between groups. An increase in mean corpuscular hemoglobin (MCH) was also found in peripheral blood of experimental animals.     

In vitro effect of copper on the stromal cells of bone marrow in rats

The effect of copper in form of copper sulphate (CuSO4 x 5 H2O) was studied in the bone marrow cells of rats of Wistar strain in an in vitro culture. Evident differences between tissue cultures of the bone marrow cells were observed between the control and experimental groups. In the experimental group, the CFU-F colonies appeared as early as in 3rd day while in the control group in 5th day. Loosely arranged fibroblasts, macrophages and adipocytes also showed quantitative differences between groups. An increase in mean corpuscular hemoglobin (MCH) was also found in peripheral blood of experimental animals.     

巨细胞病毒感染对人早孕绒毛及蜕膜组织的内分泌影响

目的:探讨人巨细胞病毒(humancytomegalovirusHCMV) 感染对人早孕绒毛及蜕膜组织的内分泌影响。方法: 采用体外培养早孕绒毛及蜕膜组织技术, 给予HCMV感染建立体外HCMV感染早孕绒毛及蜕膜模型, 采用放射免疫法检测HCMV感染后早孕绒毛及蜕膜组织培养上清液中hCG和PRL的水平。结果: ①正常早孕绒毛培养液中hCG分泌峰值在培养后第7天。给予高浓度HCMV干预后, hCG水平显著下降(P<0 .01 ), 给予中浓度HCMV干预后, hCG水平明显下降(P<0. 05 ),给予低度HCMV干预后, hCG水平于培养的第1~3天有所下降, 与正常对照组无显著差别(P>0 .05)。②正常蜕膜培养液中PRL分泌峰值在培养后第5天达峰值, 给予高浓度HCMV干预后, PRL水平显著下降(P<0 .001), 给予中浓度HCMV干预后,PRL水平明显下降(P<0 .01), 给予低度HCMV干预后, PRL水平于培养的第1~5天明显下降(P<0. 05) 后渐恢复至正常水平。结论: HCMV感染可影响早孕绒毛及蜕膜组织的hCG和PRL的分泌, 导致不良妊娠结局。     

湖南省3例人感染高致病性禽流感病例流行病学分析

[目的]比较、分析湖南省3例人感染高致病性禽流感（H5N1）确诊病例就诊、诊断与报告以及实验室标本采集、检测情况。[方法]采用描述流行病学方法。[结果]3病例发病后4～7次到不同级别的医疗单位就诊,8～13d才被诊断为“不明原因肺炎病例”并网络报告;11～32d确诊;病后14～37d正式公布。患者发病前均有病死禽接触史或污染环境的暴露史,但只有一起有明确的动物禽流感疫情。标本检测阳性率直接受标本采集的时间和种类的影响。[结论]基层专业人员对人禽流感的敏感性和标本采集意识较差,群众对人禽流感预防知识不足,提示应加强对专业人员的培训,普及防治知识。     

人脐血CD34^＋细胞体外诱导分化为树突状细胞及其扩增

目的采用脐血CD34^＋细胞在rhGM—CSF、rhTNF—α诱导下体外分化扩增为成熟树突状细胞。方法应用CD34^＋干细胞分选试剂盒以及免疫磁珠法从脐血中分离CD34^＋细胞,用rhGM—CSF、rhTNF—α联合诱导分化发育14d,成为成熟DC,观察细胞形态及检测CD83分子表达。结果50ml脐带血可分离出CD34^＋细胞约1．1×10^6,在rhGM—CSF、rhTNF-α诱导下CD34^＋干细胞培养2周,约扩增10～20倍。CD34^＋干细胞培养第3d开始出现集落,第8～9天集落最大,CD34^＋千细胞分化发育为有树突状突起的成熟DC,表面分子CD83阳性率为81．7％。结论体外联合运用rhGM—CSF、rhTNF—α,能够成功诱导脐血CD34^＋细胞分化为大量成熟的DCs。