FQ—PCR方法检测女性尖锐湿疣（CA）患者HPV的基因分型

目的探讨女性尖锐湿疣（CA）患者感染人类乳头瘤病毒（HPV）的基因类型和分布。方法采用荧光定量聚合酶链反应（FQ．PCR）方法检测256例CA患者疣体组织或分泌物中的HPV类型。结果HPV6、11型阳性率为93％（238／256）,HPV16、18型阳性率为15．2％（39／256）,HPV6、11型和HPV16、18同时阳性为10．9％（28／256）。定量检测病毒载量最高为1．0×10^8eopies／ml,最低为2．2×10^4eopies／ml。结论本地区尖锐湿疣患者感染以HPV6、11低危型为主,少数为HPV16、18高危型;荧光PCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及检测时间短等特点,能够及时准确的为HPV患者临床治疗及预后判断提供可靠的依据。     

阴道炎患者HPV6/11-DNA定量分析

目的：了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒6／11型（HPV6／11）的感染情况。方法：荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）技术检测258例门诊患者阴道分泌物中HPV6／11的病毒拷贝数。结果：共检出HPV6／11阳性者94例,阳性率36．43％,拷贝数在10^5以上者78例,占阳性者中82．98％,40岁以上年龄组阳性率高且病毒复制量均在10^5以上。结论：（1）中老年阴道炎患者就诊晚,感染重。（2）FQ－PCR检测HPV敏感,快速,准确,特别是其定量特点对临床很有意义。     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒的快速检测与分型

RDB是将我们设计的HPV6B、11、16、18、31、33、35的7个序列特异性寡核苷酸（SSO）探针分别依次固定在尼龙膜上,再与经PCR扩增的DNA靶序列杂交,即可在同一张膜上分辨7型HPVDNA的任一型。我们检测尖锐湿疣患者62例,对其中20例进行组织活检,阳性检出率为950（19／20）。阳性检出中,HPV6B型8例（40．0％）、HPV11型9例（45．0％）、HPV6B／11型（混合型）2例（10．0％）;对其中42例进行宫颈抹片检测,阳性检出率为92．9％（39／42）。阳性检出中,HPV6B型15例（35．7％）、HPV11型19例（45．2％）、HPV6B／11型3例（7.1％）、HPV16型2例（4．8％）。结果表明尖锐湿疣患者检出HPV总阳性率为94％,感染HPV型主要为HPV6B及11型。     

HPV的快速检测与分型

以通用引物PCR初筛158例标本，凡HPV感染阳性标本再用型持异引物PCR作分型检测，结果：疣、乳头瘤等良性病变的HPV检出率为61．1％（55／90），主要检出HPV6和／或HPV11，占阳性例数的89．1％（49／55）；食管癌组织有较高的HPV感染率（66．2％，45／68），以检出HPV6，11，16为主，并明显高于HPV8（X2检验，P＜0．01），提示HPV感染可能与本地区食管癌发生密切用关。本研究建立的HPV快速检测和分型方法，用于临床检测和回顾性研究均可获得满意结果。     

女性生殖道感染的HPV6／11型和HPV16／18型核酸荧光定量PCR分析

目的 了解女性生殖道感染中HPV6／11型和HPV16／18型感染情况。方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对78例女性生殖道感染病人官颈分泌物进行HPV6／11型和HPV16／18型DNA荧光定量PCR检测。结果 FQ-PCR检测HPV6／11型和HPV16／18型阳性总检出率为88．5％(69／78)，其中尖锐湿疣病人HPV6／11型阳性为100％(36／36)，HPV16／18型阳性16．7％(6／36)；重度官颈糜烂者HPV6／11型阳性为8.3％(1／12)，HPV16／18型阳性66．7％(8／12)；低度子宫颈上皮内瘤样变(CIN Ⅰ)HPV6／11型阳性为100％(9／9)，上皮内瘤样病变Ⅱ、Ⅲ(CINⅡ、Ⅲ)级病变HPV6／11型阳性为18．2％(2／11)，HPV16／18型阳性为90．9％(10／11)。官颈癌病人HPV16／18型阳性为90％(9／10)。结论 FQ-PCR对HPV的分型特异性强，可避免假阳性的发生，对临床诊断生殖道感染有重要临床意义。     

HPV、HSV2感染及C—cerbB—2表达与宫颈癌关系

目的：探讨汕头地区宫颈癌的发生与HPV，HSV2感染以及C-cerbB-2表达的相关性。方法：采用PCR技术检测宫颈癌（84例）组织与正常宫颈（13例）组织的HPV－DNA，HSV2－DNA，并用免疫组化SP法检测同一宫颈癌组织标本与正常宫颈组织标本的C-cerbB-2表达情况。结果：（1）宫颈癌组织HPV－DNA，HSV2－DNA阳性率为47．6％，46．4％，正常宫颈组织则为7．7％，15．4％，宫颈癌组织的HPV，HSV2感染率均显著高于正常宫颈组织（P＜0．01，P＜0．05）。（2）宫颈癌组织中，HPV，HSV2双阳性24例，经统计学处理，HPV和HSV2间的感染有显著相关性（P＜0．05）。（3）宫颈癌组织的C-cerbB-2表达率为34．5％，显著高于正常宫颈组织（0／13，P＜0．05）。（4）75．9％的C-cerbB-2阳性患者（22／29）与HPV与HPV和（或HSV2）同时呈现阳性。结论：汕头地区宫颈癌的发生与较高的HPV，HSV2感染率和C-cerbB-2表达率密切相关，三者的共同作用可能是宫颈癌发生发展的重要因素。     

胃癌组织HPV16、EB病毒及HBV感染的检测与分析

目的：探讨肿瘤相关病毒HPV16、EB病毒及HBV感染与胃癌的相关性。方法：选择临床病理确诊的胃癌组织及其癌旁正常胃黏膜组织标本各40份，用PCR方法检测标本中HPV16、EB病毒及HBV DNA。结果：胃癌及癌旁正常胃黏膜组织标本中，HPV16DNA阳性检出率分别为25％（10／40）和0（0／40），EB病毒DNA阳性检出率分别为17．5％（7／40）和0（0／40），差异均有显性（P＜0．05）；HPV16、EB病毒DNA同时呈阳性的检出率为5％（2／40）；HBV DNA在胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的检出率均为0。结论：HPV16、EB病毒感染可能与胃癌的发生相关。     

非甲—非戊型病毒性肝炎中TT病毒感染的初步报告

用套式PCR方法检测了32例非甲－非戊型肝炎的血清TTV DNA。结果：11例TTV DNA阳性,急性,慢性,重症肝炎的TTV DNA检出率分别为31．8％（7／22）,28．6％（2／7）,66．7％（2／3）,结合目前国内外的研究认为：TTV感染可能是非甲－非戊型肝炎的重要因素之一。其传播途径除输血感染外尚存在其它途径,TTV感染其临床特点类似乙肝病毒感染可引起急性肝炎,慢性肝炎及重症肝炎,并存在无症状携带。     

多重PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16、18和11／6E6基因的研究

目的：研究宫颈癌发病与HPV16、18E6基因的关系。方法：采用多重PCR技术检测83例宫颈癌组织中HPV16、18及11／6E6基因。结果：（1）新疆地区36例宫颈癌中HPVE6基因检出率为86.11％（31／36）,其中HPV16E6占构成比80.56％（25／31）。（2）山西地区宫颈癌中HPV DNA阳性检出率51.06％（24／47）,其中HPV16E6占构成比50.00％（12／24）。（3）两组HPVE6阳性检出率比较P＜0.01,差异有显著性。两组HPV16E6构成比比较,P＞0.05,差异无显著性。结论：宫颈癌发生与HPV感染的关系密切,且新疆地区比山西地区更为密切。两组HPV感染以HPV16为主。     

外阴白斑组织中人乳头瘤病毒的快速检测与基因分型

目的：为探讨人乳头瘤病毒（HPV）与外阴白斑发生的关系,应用通用引物聚合酶链式反应和反向点探针杂交方法对58例外阴白斑进行HPV6,11,16,18,31,33等型别进行快速检测及基因分型。方法：将上述6个病毒型别的特异性寡核苷酸探针依次固定在尼龙膜上,再与经通用引物PCR扩增的DNA靶序列杂交,即可在同一张膜上分辨出6型HPVDNA的任一型或几型。结果： 在我们检测的58例外阴白斑患中,总阳性检出率为37．9％（22／58）,其中,HPV6型7例（31．8％）、HPV11型5例（22．7％）、HPV6／11型（混合型）2例（9．1％）、HPV16型10例（45．5％）、HPV18型1例（4．5％）、HPV31型0例、HPV33型1例（4．5％）。经统计学分析,外阴白斑的发生与患感染HPV有显相关性（P＜0．01）。结论：良性型HPV（HPV6,11,6／11）与恶性型HPV（HPV16,18,33）可能均与外阴白斑的发生有关。     

非小细胞肺癌中高危型人乳头瘤病毒感染的检测

目的通过检测人乳头瘤病毒（HPV）16／18型在非小细胞肺癌中的感染状况，初步探讨高危型HPV感染与肺癌发生的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）检测44例非小细胞肺癌及18例肺良性病变组织中HPV16／18两型DNA相关序列，同时采用免疫组织化学SP法检测HPV16／18E6癌蛋白表达情况。结果非小细胞肺癌组及肺良性病变组中高危型HPVDNA阳性率分别为43．18％（19／44）和5．56％（1／18），差异有显著性意义（P〈0．05）。肺癌组E6癌蛋白的检出率为36．36％（16／44），对照组未发现阳性病例（0／18），差异有显著性意义（P〈0．05）。统计分析显示：高危型HPV感染与肿瘤临床分期（Ⅰ～Ⅱ期）、吸烟史有关，与其他因素（年龄、性别、病理分型、肿瘤发生部位、淋巴结转移）无关。结论非小细胞肺癌的发生可能与HPV16／18型感染有关；免疫组化检测E6癌蛋白简便可信，可作为检测高危型HPV感染的常规方法。     

食管癌活检组织P53基因 5、6、7、8外显子突变检测

目的：研究P53基因突变与食管癌的关系。方法：应用银染单链构象多态性技术（SSCP）检测食管癌活检组织P53基因5、6、7、8外显子PCR扩增产物。结果：56例食管癌标本经PCR－SSCP检测和病理确诊。检出P53基因突变阳性病人22例,检出率为39．3％（22／56）,其中5－8外显子阳性检出率别为1．79％（1／56）,7．14％（4／56）,17．85％（11／56）和10．71％（6／56）,结论：食管癌P53基因突变并非偶然事件。     

应用原位PCR技术检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中人乳头瘤病毒DNA

目的：探讨原位PCR（isPCR)技术的敏感性及人乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）的关系。方法：采用isPR技术对66例宫颈癌和25例CIN组织中的人乳头瘤病毒（HPV）DNA进行检测。结果：52例宫颈癌检测到了HPV DNA（78．8％）,其中HPV16 DNA阳性45例（78．8％）,HPV18 DNA阳性10例（15．2％）,HPV16,18的DNA均阳性3例,HPV18 DNA阳性而HPV16 DNA阴性7例,CIN中HPV DNA阳性13例。结论：isPCR是一种敏感性高,特异性强的方法;宫颈癌和CIN的发生与HPV16和HPV18感染有密切关系。     

胎盘HBV-DNA定量检测与宫内感染关系的研究

目的 探讨胎盘HBV—DNA含量与官内感染的关系及作为胎盘传染性和病毒复制的直接指标的可靠性。方法 采用FQ～PCR（荧光探针定量聚合酶链反应）检测344例HBV标志物阳性孕妇足月分娩后的胎盘的HBV—DNA含量，并分别检测同一孕妇分娩前的外周血及脐血的HBV—DNA含量，比较其测定值范围及相互关系。结果 344例孕妇按乙肝标志物组合，分为三组，分别检测分娩前外周血HBV—DNA、胎盘HBV—DNA及脐血HBV—DNA，检出率分别为：（1）HbsAg携带组90例，22．2％（20／90）、33．3％（30／90）和5．6％（5／90）；（2）大三阳组134例，70．9％（95／134）、85．8％（115／134）和11．9％（16／134）；（3）小三阳组120例，20.8％（25／120）、20．8％（25／120）和3．3％（4／120）。孕妇乙肝标志物阳性以大三阳组HBV—DNA阳性率最高，胎盘组织HBV—DNA含量与母血HBV—DNA含量有一致性和相关性。结论 外周血HBV—DNA阳性孕妇更易发生胎盘感染。官内感染的程度可随胎盘组织HBV—DNA含量增加而程度加重。胎盘HBV—DNA含量可作为一个宫内感染的判断指标。     

三种方法诊断尖锐湿疣的对比研究

目的探讨原位分子杂交法诊断尖锐湿疣的敏感性与特异性，并与组织病理及醋白试验相比较。方法应用原位分子杂交法[所用探针为地高辛标记的DNA探针（HPV6／11，HPVl6／18，HPV31／33）]、组织病理及醋白试验分别检测实验组和对照组标本。结果37例标本中，醋白试验34例阳性；组织病理检查37例均阳性；原位分子杂交法的总阳性率为94．6％，HPV6／11阳性31例（阳性率83．7％），HPV16／18阳性2例（阳性率5．4％），1例标本HPV6／11及HPVl6／18均阳性（2．7％），HPV31／33阳性1例（阳性率2．7％），阳性标本可见细胞核着蓝色，阳性反应物主要分布在棘层空泡化细胞的细胞核内。结论原位分子杂交法检测HPV敏感性高，特异性强，能对感染有明确的组织学定位，而且还能进一步鉴定感染的型别，因此是诊断和研究尖锐湿疣的较好和先进方法。     

宫颈癌患者HPV16感染及其血清抗体检测分析

目的：探讨宫颈癌与人乳头瘤病毒16（HPV16）感染及其血清抗体的关系，为HPV感染及宫颈癌的临床诊断提供理论依据。方法：选择28例宫颈癌患，用PCR方法检测宫颈癌组织的HPV型别；并采用重组杆状病毒－昆虫细胞系统制备HPV16病毒样颗粒（VLPs），用ELISA方法检测其血清HPV16VPLs抗体，同时以36份尖锐湿疣患血清及72份健康体检查血清作为对照。结果：宫颈癌HPV通用型DNA阳性率为50％（14／28），HPV16DNA阳性率为42．9％（12／28），HPV18DNA阳性率为3．5％（1／28），较健康对照组阳性率为1．4％（1／72）、中位数－0．0220）－0．0265）和尖锐湿疣组阳性率为8．3％（3／36）、中位数为0．0165（0．0145）差异具显性意义（P＜0．01）。HPV16DNA检测法与HPV16VLPsELISA血清抗体检测法两间呈中度相关（K＝0．471，P＜0．05）。结论：本组宫颈癌以HPV16感染为多见，HPV16VLPs血清ELISA抗体检测可用作HPV16感染的血清学诊断和宫颈癌的免疫学研究。     

孕母乙肝标志物及HBV—DNA含量与新生儿宫内感染关系的探讨

目的探讨HBsAg阳性孕妇血清乙肝标志物及HBV—DNA含量与其新生儿宫内感染的关系。方法选择HBsAg阳性的孕妇1237例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测其分娩前血清乙肝标志物含量,荧光定量聚合酶链反应法（PCR）定量检测HBV—DNA,并同时检测其新生儿血清乙肝标志物及HBV—DNA水平。结果（1）在1237名孕妇中,其新生儿发生宫内感染者39例,感染率为3．15％（39／1237）,其中PIBeAg阳性孕妇其新生儿宫内感染率为11．4％（37／324）,较HbeAg阴性孕妇的新生儿宫内感染率[0．2％（2／913）]明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。血清HBV高复制状态（HBV—DNA≥10^6copy·ml^-1）的孕妇其新生儿宫内感染率为23．4％（33／141）,较血清HBV低复制状态（HBV—DNA〈10^6copy·ml^-1）孕妇的新生儿宫内感染率[1．9％（6／316）]明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）发生宫内感染的39例新生儿血清HBV—DNA水平显著低于其母血HBV—DNA水平,但两组数值之间无相关（r=-0．03,tr=0．18,P=0．86）。结论孕妇分娩前HBeAg阳性和HBV—DNA高滴度是发生新生儿HBV宫内感染的危险因素,但孕妇分娩前血清HBV—DNA滴度与新生儿血清HBV—DNA滴度之间无相关性。     

宫颈尖锐湿疣组织中HPV分型与端粒酶活性的研究

目的由于宫颈尖锐湿疣(CA)皮损中HPV高危型感染常与其癌变有关，而端粒酶活性增高多见于恶性疾病。该研究探讨宫颈CA皮损中HPV分型与端粒酶活性的关系。方法采用荧光定量PCR检测HPV病毒分型，端粒重复序列扩增文件-酶标法(TRAP—ELISA)检测端粒酶活性。结果尖锐湿疣患者皮损中端粒酶活性明显高于正常皮肤组织；24例(40．0％)HPV16／18型阳性，34例(56．7％)HPV6／11型阳性，2例未检测到HPV；HPV16／18型感染的皮损中端粒酶活性明显高于HPV6／11型感染者。结论认为端粒酶活性与HPV型别有关，可能与HPV病毒协同参与CA发病，HPV16／18型阳性者在临床可能有癌变倾向，抑制端粒酶活性可能可以阻碍疣体生长，为临床治疗提供一个新的方向。     

外阴恶性肿瘤中P21、ILK及HPV6／11、HPV16／18的检测及意义

目的：探讨P21、ILK及HPV6／11、HPV16／18与外阴恶性肿瘤的关系。方法：P21、ILK用免疫组化SP法检测,HPV6／11、HPV16／18用原位杂交法（ISH）检测。结果：外阴恶性肿瘤组、外阴上皮内瘤变（VIN）组、正常组中,P21、ILK的阳性表达率分别为40．00％（12／30）、52．38％（11／21）、0（0／10）和63．33％（19／30）、47．62％（10／21）、0（0／10）;外阴病变各组P21、ILK的阳性表达率均显著高于正常组（P〈0．05）。外阴恶性肿瘤组、VIN组中HPV6／11、HPV16／18的阳性表达率分别为60．00％（18／301、42．86％（9／21）和33．33％（10／30）、28．57％（6／21）,正常对照组未检测出;HPV6／11在外阴恶性肿瘤组、VIN组中的阳性表达率均显著高于正常组（P〈0．05）;HPV16／18在外阴恶性肿瘤组中的阳性表达率显著高于正常组（P〈0．05）。结论：P21、ILK及HPV感染在外阴恶性肿瘤的发生及发展中可能起一定的作用。     

基因芯片对外阴尖锐湿疣HPV亚型的检测

目的探讨基因芯片技术对人乳头瘤病毒（HPV）检测的实用价值和外阴尖锐湿疣（CA）患者宫颈HPV亚型感染状况。方法采用基因芯片方法检测77例CA患者宫颈脱落细胞中HPV感染亚型（包括5种低危型和18种高危型），并与免疫组织化学检测结果进行阳性检出率的比较。结果基因芯片检出HPV阳性64例（阳性率84．4％）显著高于免疫组化检出的43例（阳性率55.8％）。基因芯片共检测出12种HPV基因型，其中低危型（HPV6、11、43、44）感染21例（占32．8％）；高危型（HPV16、18、31、33、45、56、58、73）感染30例（占46．9％）；高低危同时感染13例（占20．3％）。结论基因芯片是一种敏感性高，特异性好，适合临床HPV分型检测的方法。对外阴CA患者在治疗疣体同时进行HPV亚型检测，利于进行相应治疗，以降低宫颈癌的发病风险。