Toll样受体/核因子κB信号通路与脓毒症的研究进展

脓毒症和由此引起的多器官功能障碍综合征是当前重症监护患者死亡的主要原因[1] 。脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征。目前认为其发生的根本原因在于机体过度释放细胞因子和炎性介质导致炎症反应失控和免疫机能紊乱。而这些物质的生成大多受核因子κB(NF κB)的调控 ,NF κB是一种转录因子 ,它对许多与免疫有关的基因有调控作用 ,因此在脓毒症的发生中起到了关键的作用。而免疫细胞又是如何识别病原体最终引起NF κB的活化呢 ?Toll样受体是 1997年Medzhitov等[2 ] 在巨噬细胞上发现的 ,可作为病原体的识别受体 ,激活胞内的信…     

血液滤过对重症感染性休克患者单个核细胞Toll样受体4/核因子-κB通路活化的影响

目的 研究血液滤过对重症感染性休克患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路活化的影响。方法 选择2019年1月至2020年12月期间华北理工大学附属医院收治的重症感染性休克患者进行回顾性对照研究,根据是否接受血液滤过治疗分为常规治疗的对照组（n=59）、常规治疗联合血液滤过的实验组（n=38）。治疗前及治疗后72 h,比较2组患者心率（heart rate,HR）、平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）、中心静脉压（central venous pressure,CVP）、血清肿瘤坏死因子α(serum tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)含量、PBMCs中TLR4及NF-κB表...     

异氟醚调控Toll样受体4/核因子-κB信号通路保护大鼠肾缺血再灌注损伤

目的探讨异氟醚对肾缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury, IRI)的保护作用及相关分子机制。方法 32只大鼠按随机数字表法分为假手术组(S组)、肾缺血再灌注损伤组(IRI组)、异氟醚预处理组(Iso+IRI组)和异氟醚+脂多糖组(Iso+IRI+LPS组), 每组8只。Iso+IRI组进行异氟醚(isoflurane, Iso)预处理, Iso+IRI+LPS组进行Iso预处理后腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)0.1 mg/kg, 其他组同时注射同体积生理盐水。而后IRI组、Iso+IRI组及Iso+IRI+LPS组采用夹闭肾蒂法建立肾IRI模型, S组进行假手术。术后24 h检测大鼠静脉血Cr和BUN水平, ELISA法检测肾组织IL-1β、TNF-α、IL-6水平, 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性检测试剂盒检测肾组织SOD活性, 可见分光光度法检测肾组织丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase, GSH...     

乳脂球表皮生长因子8通过调控Toll样因子受体4/核因子-κB信号通路抑制深静脉血栓形成

目的:探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)抑制大鼠深静脉血栓形成(DVT)及对Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:健康雄性SD大鼠90只,随机数字表法分为假手术组、模型组、MFG-E8组,每组30只,Reyers法制备大鼠DVT模型,MFG-E8组大鼠每日给予rhMFG...     

髓样分化因子88的研究进展：把握TLR信号通路中的瓶颈

目的总结髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）在Toll样受体（toll like receptor,TLR）信号通路中的作用、MyD88与相关疾病的关系及其潜在的应用价值。方法收集近年来国内外有关MyD88在TLR信号通路中的作用及其与相关疾病关系的文献并作综述。结果 MyD88是一种重要的接头蛋白,在TLR信号通路中处于节点位置,起到承上启下的作用,是通路中的＂瓶颈＂。其传导的信号可导致下游多种转录因子的激活,从而启动先天性免疫反应,并且其与多种疾病的发生均有关。结论 MyD88是TLR信号通路的核心接头蛋白,在先天性免疫、获得性免疫和多种疾病的发生中均起着重要作用,是一个潜在的临床疾病的治疗靶点。     

Toll样受体4在小胶质细胞炎症反应中的作用与认知功能的关系

概述 小胶质细胞在术后早期中枢炎症反应中担当主角.而Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在小胶质细胞的活化与炎症反应中发挥着不可或缺的作用.中枢炎症细胞因子可通过多种途径影响中枢有关受体或递质功能,从而影响学习记忆和认知能力. 目的 探讨TLR4在小胶质细胞炎症反应中作用及与认知功能的关系. 内容 主要从4个方面进行综述:TLR4与小胶质细胞的关系、小胶质细胞与中枢炎症的关系、炎症和TLR4对认知的影响. 趋向 小胶质细胞在中枢神经系统(central nervous system,CNS)的炎症反应中担当主角.TLR4在小胶质细胞的激活中起关键作用,但TLR4在小胶质细胞相关的中枢炎症反应和认知中的作用尚不清楚.     

Toll样受体4及NF-κB与动脉粥样硬化关系的实验研究

目的 观察球囊损伤后动脉粥样硬化兔颈动脉干Toll样受体4(TLR4)、NF-κB及其表达变化.方法 本实验首先通过球囊损伤颈总动脉的方法在高脂饲养的兔子体内引起一个持续性的低水平的局部炎性介质反应,建立双因素干预的动物粥样硬化模型,以促进兔颈总动脉的血管病变,同时将全部动物分为对照组、高脂饲养组和模型(双因素)组,8...     

异氟醚麻醉诱导大鼠脑海马神经炎症并激活Toll样受体2通路

目的 观察异氟醚麻醉与神经炎症的关系并探究其中的反应机制. 方法 将15只雌性SD大鼠用完全随机分组法分为3组(每组5只):对照组行热板实验,麻醉组行异氟醚麻醉、热板实验,空白组不做上述处理.热板实验后取大鼠大脑进行切片制作,免疫荧光双标检测观察Toll样受体2(toll like receptor 2,TLR2)在大脑海马区的表达,Westemblot检测海马区TNF-α、IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)以及TLR2表达水平. 结果 与对照组比较,麻醉组大鼠热缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)在异氟醚麻醉2h[(3 1±4)s比(19±3)s]和24 h[(25±4)s比(19±4)s]后显著增高(P＜0.05),而48 h时与对照组PWL比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,麻醉组大鼠海马区TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1以及TLR2表达水平均升高(P＜0.01). 结论 异氟醚麻醉促进海马区炎症因子表达,并激活TLR2信号通路.     

严重脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4和髓样分化因子88在胸腺肽α1治疗过程中的基因表达变化

目的 观察严重脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体（TLR）2、4基因及其信号传导通路上的髓样分化因子88（MyD88）基因表达水平在胸腺肽α1治疗过程中的变化。方法 54例严重脓毒症患者被随机分为对照组（常规治疗,28例）和治疗组（胸腺肽α1治疗,26例）,采用实时荧光定量PCR监测两组患者入院时及治疗后第3、7天外周血单个核细胞TLR2、TLR4和MyD88基因表达水平变化,并观察两组的28 d病死率。结果 治疗组的28 d病死率虽低于对照组,但差异无统计学意义（23.1%vs 35.7%,P=0.310）。治疗组的患者单核细胞TLR2、TLR4和MyD88基因表达水平逐渐上升,而对照组未见该规律,与对照组相比,治疗后第3天时治疗组的TLR2（2.31±0.79 vs 1.83±0.51）、TLR4基因表达增高（7.31±0.79 vs 6.55±0.92）;第7天时治疗组TLR2（2.75±1.17 vs 1.63±0.36）、TLR4（7.75±1.03 vs 6.39±0.72）和MyD88（4.26±0.77 vs 3.77±0.68）水平明显增高,均P〈0.05。结论 胸腺肽α1在治疗严重脓毒症患者过程中可以上调患者单核细胞的TLR2、4和MyD88基因的表达水平。     

研究银杏二萜内酯调控Toll样受体4/核因子-κB通路对糖尿病大鼠肾脏病变的影响及机制

目的 研究银杏二萜内酯对糖尿病（diabetic mellitus,DM）大鼠肾脏病变的影响,并基于Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路探讨其可能的作用机制。方法 采用高糖高脂饮食4周后腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DM大鼠模型,设模型组、银杏二萜内酯组、瑞沙托维（TLR4抑制剂）组、银杏二萜内酯+瑞沙托维组,另设正常对照组。各组分别1次/d腹腔注射给药治疗14 d后,测定空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、血肌酐（serum creatinine,Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）和24 h尿蛋白定量（24 h urine protein,24 h-UTP）水平,通过苏木精-伊红染色和马松染色观察肾脏病变,透射电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构病变,末端标记法观察细胞凋亡状况,酶联免疫吸附法检测肾组织炎症因子[白细胞介素（interleukin,IL）1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(tumor nec...     

异氟醚预处理对大脑中动脉闭塞大鼠胶质细胞中Toll样受体4表达的影响

目的观察异氟醚预处理对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠胶质细胞中Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法雄性SD大鼠48只,体重250～300g,随机均分为三组:假手术组(S组)、MCAO模型组(M组)、异氟醚预处理组(I组)。2h后进行再灌注,再灌注24h后进行神经功能评分,检测脑梗死容积,分别测定每个视野内TLR4与星形胶质细胞标记物(GFAP)共存阳性细胞数和TLR4与小胶质细胞标记物(OX42)共存阳性细胞数。结果与M组相比,I组神经功能评分降低,脑梗死容积减少,GFAP和OX42阳性细胞数均减少(P<0.05)。结论异氟醚预处理具有脑保护作用,抑制TLR4的表达及胶质细胞的活化可能是其作用机制之一。     

七氟醚预处理中核因子-κB的激活对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 研究七氟醚预处理中NF-κB的激活对大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 48只雄性SD大鼠,阻断左冠状动脉前降支缺血30 min,开放再灌注120 min,随机分为6组.①对照组进行单纯心肌缺血/再灌注;②DMSO组于心肌缺血前15 min腹腔内注射二甲亚砜(DMSO);③PTN组于缺血前15 min腹腔内注射核转录因子-κB(NF-κB)特异性阻断剂小白菊内酯(PTN)500 μg/kg;④七氟醚组于吸入2.5%七氟醚30 min,继之15 min药物排出;⑤PTN+七氟醚组于七氟醚预处理前15 min腹腔内注射PTN;⑥七氟醚+FTN组于七氟醚预处理后即刻腹腔内注射PTN.实验中监测血液动力学变化,实验结束用氯化三苯四氮唑染色法(TPT)测定心肌梗死范嗣.结果 平衡期,各组间心率(HR),平均动脉压(MAP)和心率-收缩压乘积(RPP)无统计学意义(P>0.05).七氟醚组、PTN+七氟醚组和七氟醚+PTN组在吸入七氟醚期间HR、MAP和RPP明显降低,再灌注1 h和2 h引起各组MAP和RPP明显降低(P<0.05).与对照组(52.48±6.04)%相比,七氟醚组的心肌梗死范围显著减少(33.73±5.72)%,而PTN+七氟醚组(52.60±5.01)%和七氟醚+PTN组(52.39±7.00)%的心肌梗死范围明显高于七氟醚组(33.73±5.72)%(P<0.05).结论 七氟醚预处理缩小了大鼠心肌梗死范围,而PTN阻断了七氟醚的心肌保护作用,NF-κB可能参与了七氟醚预处理的心肌保护机制.     

七氟醚预处理对大鼠心肌缺血再灌注时Toll 样受体4表达的影响

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠心肌缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠30只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):假手术组(S组)开胸暴露30 min,左冠状动脉前降支仅穿线不结扎;心肌缺血再灌注组(IR组)采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h的方法 制备大鼠心肌缺血再灌注模型;七氟醚预处理组(SP组)吸入2.5%七氟醚30 min,洗脱15 min后制备模型.于再灌注2 h时处死大鼠取心脏,观察心肌组织病理学结果,采用Western blot法检测TLR4、NF-κB和TNF-α的蛋白表达水平.结果 与S组比较,IR组和SP组TLR4、NF-κB和TNF-α的蛋白表达上调(P＜0.05);与IR组比较,SP组TLR4、NF-κB和TNF-α的蛋白表达下调(P＜0.05).病理学结果 显示:SP组心肌细胞损伤较IR组减轻.结论 七氟醚预处理可通过抑制TLR4表达上调降低炎性反应,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sevoflurane preconditioning on the expression of Toll-like receptor 4(TLR4) during myocardial ischemia reperfusion(IR) in rats.Methods Thirty male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 3 groups (n=10 each):sham operation group (S group) , IR group and sevoflurane preconditioning group(SP group).Myocardial ischemia was produced by temporary ligation of anterior descending branch of left coronary artery for 30 min followed by 2 h reperfusion. In SP group, the animals inhaled 2.5% sevoflurane for 30 min followed by 15 min washout before ischemia. The rats were sacrificed at 2 h of reperfusion, hearts removed and myocardial tissues obtained for microscopic examination.The expression of TLR4, NF-κB and TNF-α was detected using Western blot. Results The expression of TLR4, NF-κB and TNF-α was significantly up-regulated in IR and SP groups compared with group S (P＜0.05).The expression of TLR4, NF-κB and TNF-α was significantly down-regulated in group SP compared with group IR (P＜0.05).The myocardial injury was attenuated in group SP.Conclusion Sevoflurane preconditioning can attenuate myocardial IR injury by inhibiting the up-regulation of TLR4 expression and reducing the inflammatory response.     

miR-515-5p靶向Toll样受体4调控髓样分化因子88/NF-κB通路抑制骨关节炎软骨细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的 探究miR-515-5p抑制骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨细胞凋亡、缓解炎症反应的分子机制。方法 体外培养人软骨细胞系C28/I2,使用10 ng/mL IL-1β处理细胞24 h构建体外OA模型;另外,分别采用miR mimics、mimics阴性对照（negative control,NC）、过表达（over expression,oe）-NC和oe-Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)转染C28/I2细胞后,使用10 ng/mL IL-1β处理各组细胞24 h构建OA模型。采用细胞计数试剂盒8和EdU检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测B淋巴细胞瘤2蛋白（B-cell lymphoma 2 protion,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-Caspase-3)、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene...     

热休克蛋白70通过激活TLR4/MyD88/NF-κB通路参与肠道炎症

目的：研究热休克蛋70(HSP70)参与肠道炎症的相关作用机制。方法：将不同慢病毒处理的Caco-2细胞分为HSP70过表达组、HSP70过表达阴性对照组、HSP70低表达组、HSP70低表达阴性对照组和空白对照组。脂多糖（LPS）刺激模拟炎症环境,用Western blotting、逆转录定量聚合酶链反应及ELISA法测定TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中各关键蛋白和细胞因子的表达量及含量,并利用EdU比色法测定细胞增殖率。结果：LPS刺激24 h,各组Caco-2细胞中白细胞介素（IL）-1β和肿瘤坏死因子（TNF）-α的mRNA表达量和蛋白含量较相应未加LPS组均有明显上升（P <0.05）;与低表达组相比,HSP70过表达组的IL-1β和TNF-α的mRNA表达量分别为其1.87和1.94倍,蛋白含量分别为其1.77和1.57倍,HSP70、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量为其1.86、1.96、2.12、1.69倍,mRNA相对表达量为6.05、2.98、3.02、2.46倍,差异均有统计学意义（...     

TLR4／NF—κB信号通路与肾脏缺血后处理的肾脏保护作用的关系

目的探讨小鼠。肾脏缺血后处理（ischemic postconditioning,IPC）对缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）的保护作用及与Toll样受体（toll—like receptor,TLR）4／核因子（nuclear factor,NF）-κB信号通路的关系。方法BALB／c小鼠42只随机分组：假手术组6只、IRI组18只与IPC组18只,IRI组与IPC组均设术后1d、3d、5d亚组,每个亚组各6只小鼠。建立肾脏IRI及IPC模型;于术后1d、3d、5d取血检测血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）,取肾组织行病理学检查,计算术后1d急性肾小管损伤的Jablonski评分,采用蛋白质印迹（Western blot）法检测术后1d、3d、5d的TLR4、NF—κB表达水平。结果术后各时点,IRI组的Scr、BUN水平均明显高于假手术组（均为P〈0．05）;术后1d,IPC组的Scr、BUN水平均明显低于IRI组（均为P〈0．05）,且于术后5d两指标明显下降并恢复至正常范围。与假手术组比较,IRI组和IPC组肾小管损伤程度较为严重（均为P〈0．05）;与IRI组比较,IPC组的肾小管损伤程度显著减轻（P〈0．05）。术后1d、3d,IPC组的TLR4表达水平较IRI组明显降低（均为P〈0．05）。术后1d、3d、5d,IPC组的NF—κB表达水平较IRI组明显降低（均为P〈0．05）。结论IPC可减轻缺血再灌注对肾脏的损伤,其保护作用可能通过抑制TLR4／NF—κB信号通路实现。     

七氟醚预处理对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的  探讨七氟醚预处理对肺缺血-再灌注损伤（IRI）的保护作用及对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核因子（NF）-κB信号通路的影响。 方法  将40只健康成年SD大鼠随机分为对照组（Sham组）、模型组（LIRI组）、七氟醚预处理组（Sev组）和TLR4抑制剂TAK-242联合七氟醚预处理组（TAK+Sev组）,每组各10只。采用苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理学变化并进行病理损伤评分;采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算细胞凋亡率;测定肺组织湿重/干重（W/D）比值以确定肺组织含水量;检测肺组织中氧化应激相关指标水平以及肺组织和血清中炎症因子水平;采用蛋白质印迹法检测肺组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平。 结果  与Sham组比较,LIRI组和Sev组大鼠肺组织病理损伤评分、W/D比值、细胞凋亡率、丙二醛（MDA）水平、炎症因子水平以及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量均升高,超氧化物歧化酶（SOD）水平和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）相对表达量均降低（均为P < 0.05）;与LIRI组比较,Sev组和TAK+Sev组大鼠肺组织病理损伤评分、W/D比值、细胞凋亡率、MDA水平、炎症因子水平以及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量均降低,SOD水平和IκBα相对表达量均升高（均为P < 0.05）;与Sev组比较,TAK+Sev组大鼠肺组织病理损伤评分、W/D比值、细胞凋亡率、MDA水平、炎症因子水平以及TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量均降低,IκBα相对表达量升高（均为P < 0.05）。 结论  七氟醚预处理能够抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活,抑制炎症反应和氧化应激,从而有效减轻肺IRI。     

胸腔热灌注对兔急性肺损伤中Toll样受体4/核转录因子/P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的:观察胸腔热灌注(IHP)对兔急性肺损伤(ALI)中Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF-κB)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)炎症信号通路的影响。方法:新西兰大白兔31只,按随机数字表法分为4组,假撞击组(A组,7只)、胸部撞击组(B组,8只)、撞击+35 ℃常温灌注组(C组,8只)和撞击+...     

乙肝病毒X蛋白通过激活核因子-κB信号通路上调MDR1的表达

目的 探讨核因子(NF)-κB信号通路是否是乙肝病毒X蛋白(HBx)上调多药耐药基因(MDR1)的途径之一.方法 建立稳定转染HBx基因的L02(L02/HBx)细胞系,用NF-kB信号通路阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阻断NF-κB信号通路.采用荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF-κB信号通路的激活失活,同时用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测转染前后及PDTC加入前后MDRl的表达.结果 转染HBx基因后NF-κB信号通路被激活,MDRI表达明显上调(P<0.05);PDTC加入后NF-κB信号通路被阻断,MDRi表达明显下调(P<0.05).结论 NF-κB信号通路可能是HBx介导肝癌多药耐药,上调多药耐药基因MDR1的途径之一.     

异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TLR4和MyD88表达的影响

目的 评价异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)表达的影响.方法 雄性成年SD大鼠54只,体重250～300 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)仅分离血管,不留置线栓;脑缺血再灌注组(IR组)采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h;异氟醚预处理(IP组)吸入2%异氟醚,1h/d,连续5 d,处理结束后24 h时制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24 h时进行神经功能缺陷评分,然后每组处死3只大鼠,测定脑梗死体积.分别于再灌注24、48和72 h时,处死5只大鼠,取右侧大脑缺血部位额叶皮质,采用Western blot法测定TLR4、MyD88和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,IR组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,IR组TLR4、MyD88和NF-κB的表达均上调,IP组MyD88和NF-κB的表达上调(P＜0.05);与IR组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,TLR4、MyD88和NF-κB的表达均下调(P＜0.05).结论 异氟烷预处理可通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达,减轻炎性反应,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.