转录因子GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节Tie2基因的表达

目的：探讨在炎症刺激因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）介导的炎症反应中转录因子GATA家族成员是否参与了Tie2基因的转录调控。方法: 采用实时定量PCR测定TNF-α作用前后人主动脉内皮细胞（HAECs）和肺动脉内皮细胞（HPAECs）中GATA家族成员GATA2、GATA3 mRNA的表达,利用荧光素酶活性检测研究GATA转录因子能否激活Tie2基因启动子,并采用电泳迁移变动分析（EMSAs）和超级迁移率变动试验（supershift）研究GATA转录因子是否通过与Tie2基因启动子结合,从而激活Tie2基因的表达。结果: TNF-α可诱导人血管内皮细胞HAECs和HPAECs中转录因子GATA2的表达,高表达的GATA2可与Tie2基因启动子上的（T/A）GATA(A/G)序列结合,激活Tie2基因启动子,从而上调Tie2基因的表达。结论: GATA转录因子家族成员GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节了Tie2基因的表达。     

不同剂量TNF-α对Nrf2转录调节活性的影响

目的:研究不同剂量肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺微血管内皮细胞NF-E2相关因子2(Nrf2)转录调节活性的影响。方法:肺组织块贴壁法培养大鼠肺微血管内皮细胞,Ⅷ因子相关抗原间接免疫荧光鉴定所培养的细胞。采用含有0μg/L、2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L和40μg/LTNF-α的无血清培养基处理肺微血管内皮细胞4h后,以免疫细胞化学技术观察细胞内Nrf2的亚定位及含量的变化;提取细胞核蛋白和总RNA,以变动迁移率分析技术检测Nrf2转录调节活性的变化以及采用RT-PCR技术检测细胞Nrf2 mRNA表达水平的变化。结果:采用2.5、5.0、10.0μg/LTNF-α处理细胞,核内Nrf2水平和Nrf2转录调节活性随浓度的增加而呈现上升趋势;而采用20.0μg/L、40.0μg/LTNF-α处理细胞,核内Nrf2水平及其转录调节活性有所下降;不同剂量TNF-α对细胞Nrf2基因转录水平没有明显影响。结论:不同剂量TNF-α对肺微血管内皮细胞Nrf2转录调节活性产生不同影响:中、低剂量TNF-α增强Nrf2转录调节活性,而大剂量TNF-α引起Nrf2转录调节活性下降。     

转录因子AP-2的研究进展

转录因子 AP- 2家族是一类 DNA结合蛋白 ,以二聚体形式结合到 DNA丰富 GC的元件上 ,调控基因表达。本文综述了近年来对 AP- 2的分子结构、活性调控以及对细胞增殖、分化、胚胎发育和肿瘤发生过程的作用的研究进展     

Nrf-2基因过表达对急性胰腺炎大鼠胰腺的保护作用

目的探讨Nrf-2基因过表达对急性胰腺炎大鼠胰腺的保护作用。方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(NC)、Nrf-2过表达组(Nrf-2^+/+)、胰腺炎组(AP)、Nrf-2过表达胰腺炎组(Nrf-2^+/++AP)。各组均采用尾静脉注射慢病毒感染后,AP组和Nrf-2^+/++AP组通过腹腔内注射蛙皮素和脂多糖造模;造模后24 h处死大鼠取材,ELISA法检测大鼠血清C-反应蛋白(CRP)含量;检测胰腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)和髓过氧化物酶(MPO)水平;RT-PCR检测胰腺Nrf-2mRNA相对表达量;Western blot检测Nrf-2蛋白相对表达量;H&E染色观察大鼠胰腺组织细胞形态。结果 AP组与NC组相比,大鼠血清C反应蛋白含量显著升高,SOD活性明显降低,MDA含量和MPO活性明显高于AP组,且AP组胰腺组织损伤较NC组明显增加;与AP组相比,Nrf-2过表达后,Nrf-2^+/++AP组大鼠血清C反应蛋白含量显著降低,SOD活性明显升高,MDA含...     

Nrf2靶向siRNA对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:分离新生小鼠海马组织，培养NSCs,采用电穿孔法将Nrf2 siRNA序列转染至NSCs,分别用real time RT-PCR和Western Blot检测敲减效率；运用BrdU掺入实验、Tuj1免疫荧光染色和CCK-8法检测Nrf2靶向siRNA对NSCs的增殖、分化能力和细胞活力的影响。通过脑立体定位技术，在成年小鼠海马部位注射Nrf2抑制剂Brusatol,应用Western Blot检测Nrf2的蛋白表达水平；通过Ki67、DCX免疫荧光染色检测下调Nrf2对海马神经发生的影响。利用活性氧簇(ROS)水平测定法和real time RT-PCR分别检测活性氧水平和氧化应激相关通路超氧化物歧化酶(SOD1和SOD2)的表达。结果:Nrf2的siRNA序列转染至NSCs, real time RT-PCR结果显示siRNA的敲减效率为(54.56±7.05)%(P<0.01),Western Blot结果显示siRNA的敲减效率为(39.50±7.90)%(P<0.01)...     

Nrf2激动剂萝卜硫素通过抑制肝组织铁死亡减轻小鼠脓毒症肝损伤

目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)激动剂萝卜硫素(sulfora?phane,SFN)对脓毒症小鼠肝脏铁死亡的影响及其分子机制.方法:用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and punc?ture,CLP)复制C57BL/6小鼠的...     

转录因子核因子E2相关因子2对长期中波紫外线照射诱导皮肤肿瘤的影响

背景：紫外线照射是引起皮肤肿瘤的重要环境因素,与其诱导氧化应激反应有关。核因子E2相关因子2是调节细胞内抗氧化应激反应的重要转录因子,胞浆蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1为其特异性受体,目前核因子E2相关因子2-胞浆蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1抗氧化系统与皮肤紫外线损伤的关系受到密切关注。 目的：观察中波紫外线照射所致皮肤DNA氧化损伤及光致癌作用,研究转录因子核因子E2相关因子2对长期中波紫外线照射诱导小鼠皮肤肿瘤形成的影响。 方法：取8周龄雌性核因子E2相关因子2基因敲除(Nrf2^-/-) BALB/c小鼠和野生型(Nrf2^+/+)BALB/c小鼠,以100 mJ/cm²剂量的中波紫外线照射小鼠背部4 h。另取Nrf2^-/-小鼠和Nrf2^+/+小鼠以300 mJ/cm²剂量的中波紫外线对小鼠背部进行长期照射,每周3次,连续36周。 结果与结论：Nrf2^-/-小鼠表皮内8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷阳性细胞数量显著高于Nrf2^+/+小鼠(P < 0.05),Nrf2^-/-和Nrf2^+/+小鼠中波紫外线长期照射诱导皮肤肿瘤数目和发生率接近(P > 0.05),且皮肤肿瘤组织病理学改变相似,提示核因子E2相关因子2对急性中波紫外线照射所致的DNA损伤具有抗氧化防护作用,在长期中波紫外线照射致癌过程中,转录因子核因子E2相关因子2的活性可能受到多种因素的调节,其具体机制有待于进一步研究。     

Nrf2激活剂缓解低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)激活对低氧性肺动脉高压(PAH)大鼠血管重构的影响,并初步探讨其机制。方法将大鼠分为:对照组、低氧组(低氧处理大鼠)、Nrf2激活组(低氧处理前1周每天灌胃5 mg/kg Nrf2激动剂莱菔硫烷,连续4周),每组8只。检测心肺血流动力学和右心室肥大指标平均肺动脉压(mPAP),并计算右心室肥厚指数=右心室(RV)/(左心室+室间隔)(LV+S);HE染色测定肺血管重构相关指标并计算肺小动脉血管壁面积(WA)/血管总面积(TA),血管中膜厚度(MT)/血管动脉外径(ED);硫代巴比妥酸法、氮蓝四唑法分别检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)活性;qRT-PCR检测肺动脉中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9 mRNA水平;Western blot检测肺动脉组织中Nrf2、抗氧化反应元件(ARE)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO-1)、血红素氧合酶1(HO1)蛋白水平。结果与对照组相比,低氧组mPAP、RV/(LV+S),WA/TA、MT/ED水平,肺动脉组织中MDA水平,MMP-2、MMP-9 mRNA水平,胞核Nrf2、ARE、NQO1、HO1蛋白水平升高(P0.05);肺动脉组织中SOD活性,胞质Nrf2蛋白水平降低(P0.05)。与低氧组相比,Nrf2激活组mPAP、RV/(LV+S)水平,WA/TA、MT/ED水平,肺动脉组织中MDA水平,MMP-2、MMP-9 mRNA水平,胞质Nrf2蛋白水平降低(P0.05);肺动脉组织中SOD活性,胞核Nrf2、ARE、NQO1、HO1蛋白水平升高(P0.05)。结论 Nrf2激活可延缓PAH造成的血管重构,该作用可能是通过激活Nrf2/ARE通路实现的。     

核因子E2相关因子2在神经细胞衰老及其相关疾病中的作用

衰老是正常身体功能逐渐出现生物学损伤的过程,中枢神经系统最容易受到影响。目前关于衰老的机制探讨有很多,其中氧化应激被广泛关注。核因子E2相关因子2(Nrf2)作为一种维持人体内氧化还原平衡和信号转导的重要转录因子,可以激活抗氧化反应元件(ARE)以保护大脑免受氧化应激的损伤,从而在抗衰老及相关疾病中起到积极作用。Nrf2的缺失与神经元变性、星型胶质细胞以及小胶质细胞的过度活化有关,其后果是引起衰老及相关疾病。本文对Nrf2与各类神经细胞衰老的关系以及Nrf2在衰老相关神经系统疾病中的作用进行了综述。     

人类组织因子途径抑制因子的研究进展

人类组织因子途径抑制因子属于库尼(Kunitz)型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白,分为组织因子途径抑制因子-1(tissuefactorpathwayinhibitor-1,TFPI-1)和组织因子途径抑制因子-2(tissuefactorpathwayinhibitor-2,TFPI-2)。TFPI-1以抗凝血作用为主,而TFPI-2是广谱丝氨酸蛋白酶抑制剂。二者在结构上有部分同源性,均由3个重复的Kunitz结构域组成。但二者在基因序列、组织来源、分布和作用机理上的很大差异,导致二者在多种生理和病理过程中发挥的作用也大不相同。就有关研究进展做一综述。     

HL—60细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对T细胞的作用及其生物学特性

白血病细胞培养上清液和白血病人血清能抑制PHA—P诱导的人外周血T淋巴细胞的增殖;抑制白细胞介素2(IL—2)的产生和反应性。以正常2BS人胚肺细胞培养上清液和正常人血清作对照则无抑制作用。白血病细胞培养上清液无细胞毒作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结果表明,来源HL—60人早幼粒白血病细胞的肿瘤免疫抑制因子(tumor-derived immunosuppressive factor,TDSF)的分子量约为87KD,其化学本质为蛋白质。抗急非淋白血病药物对这种TDSF的分泌有部分抑制作用。     

齐墩果酸通过Nrf2抑制铁死亡并减轻重症急性胰腺炎大鼠肝损伤

目的：基于核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗铁死亡轴探讨齐墩果酸（OLA）对重症急性胰腺炎（SAP大鼠肝损伤的作用机制。方法：经逆行注射牛磺胆酸钠法构建SAP大鼠模型,大鼠被随机分为SAP组、OLA+SAP组、铁死亡抑制剂ferrostatin-1(FER1)+SAP组、OLA+Nrf2抑制剂brusatol(BRU)+SAP组和假手术（sham）组,每组8只。注射牛磺胆酸钠后0.5、3和6 h,依次给予相应药物或生理盐水灌胃及腹腔注射。HE和TUNEL染色分别观察胰腺和肝脏形态变化及肝细胞死亡情况;试剂盒检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、白蛋白（ALB）和淀粉酶（AMY）水平,肝组织丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）和总谷胱甘肽（t-GSH）水平,以及肝组织中铁含量;Western blot检测肝组织中cleaved caspase-3及Nrf2-抗铁死亡轴相关蛋白水平。结果：造模后12 h,相较于sham组,SAP组胰腺和肝细胞肿胀变形,有较多炎性细胞,血清ALT、AST、TBA和AMY水平,肝组织clea...     

五桑饮增强SIRT1和Nrf2表达并减轻糖尿病小鼠肾损伤和纤维化

目的：探讨五桑饮减轻糖尿病诱导的小鼠肾损伤及相关机制。方法：小鼠经含高脂高糖饲料喂养后,腹腔注射链脲佐菌素,从而建立糖尿病模型,并随机分为糖尿病模型组和五桑饮治疗组,另设正常对照组。采用生化分析、HE、PAS和Masson染色观察五桑饮对糖尿病肾病小鼠肾功能、肾组织形态学和纤维化等相关参数的作用。采用TUNEL染色分析小鼠肾组织凋亡,DHE染色分析肾组织细胞内活性氧水平。比色法分析肾组织氧化应激指标,包括脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde, MDA）,抗氧化酶超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase, CAT）。RT-qPCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平。采用Western blot法分析肾组织沉默信息调节因子1(silent information regulator 1, SIRT1)和核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)蛋白表达。...     

CDDO-Im对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤修复的影响

目的:探讨合成三萜类化合物衍生物CDDO-Im激活核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)信号通路对缺血性脑卒中后大鼠神经功能损伤修复的影响并分析其作用机制.方法:成年雄性SD大鼠行大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusi...     

转录因子AP-2与肿瘤的研究进展

激活蛋白AP-2是一种序列特异性的转录因子,由AP-2α,AP-2β,AP-2γ,AP-2δ和AP-2ε等几个关系密切、结构保守的成员组成,参与细胞增殖分化、凋亡和癌变的调控.在多种不同类型肿瘤的发生、发展过程中,AP-2都存在异常表达,且与肿瘤预后有着密切的关系.同时,AP-2对肿瘤的调节具有抑癌或促癌的双向效应,这...     

Nrf2在支气管哮喘豚鼠炎症细胞中调控谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的:探讨核因子相关因子-2(Nri2)调控.谷氨酰半胱氨酸合成酶(在支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞中的表达.方法:38只健康雄性豚鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)和地塞米松治疗组(C组),卵蛋白致敏法复制哮喘模型,检测3组豚鼠肺组织匀浆中丙二醛(MDA)浓度,收集BALF,行细胞计数和分类.离心,细胞涂片行免疫细胞化学和原位杂交,检测Nrl2、Bachl、蛋白和mRNA.结果:(1)B组嗜酸性粒细胞数(EOS)比例高于A组和C组;(2)肺组织中MDA浓度B组高于A组和C组;(3)原位杂交A组A值高于B组和c组;Nrt2、Bachl原位杂交A值3组差异无显著;(4)免疫细胞化学B组A值低于A组;Nrf2细胞核内阳性率B组低于A组和c组;Bachl细胞核内阳性率B组高于A组和c组;(5)CSmRNA表达(A值)与Nri2核内阳性率呈正相关,与Bachl核内阳性率呈负相关;B组BALF中表达(A值)与EOS比例呈负相关.结论:支气管哮喘豚鼠体内存在氧化/抗氧化失衡,炎症反应使在豚鼠支气管哮喘炎症细胞中的表达降低,地塞米松可以通过调节NrF2／Bachl核转位而增加表达.     

TFPI-2在妊娠期子痫前期患者血浆及胎盘中的表达

目的：妊娠期高血压疾病患者血液呈异常高凝状态,母体脏器和胎盘组织中可见大量血栓形成,本实验的目的是探讨外源性凝血途径抑制物——组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor 2, TFPI-2)在妊娠期高血压疾病患者血浆及胎盘组织中的变化及临床意义。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测妊娠期高血压患者、子痫前期患者及正常妊娠孕妇血浆中TFPI-2的水平并同时采用免疫组织化学法测定胎盘组织中TFPI-2的表达情况。结果：与正常妊娠组相比,妊娠期高血压组血浆及胎盘组织中TFPI-2表达无显著性差异(P>0.05);子痫前期组血浆及胎盘组织中TFPI-2表达明显降低,与正常妊娠组和妊娠期高血压组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论：TFPI-2可能在子痫前期的发生、发展中起着重要的作用。