龟板含药血清对骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察益肾龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）体外增殖过程的增殖细胞核抗原（Proliferation cell nuclear antigen,PCNA）表达的影响。方法：使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC增殖过程。用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测MSC的PCNA及其mRNA表达;免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测PCNA蛋白表达的变化。结果：龟板血清以浓度依赖方式促进MSC的PC-NA及其mRNA表达阳性细胞数和PCNA蛋白表达,与对照组比较有显著性（P〈0.05）。结论：龟板血清促MSC增殖作用可能与上调PCNA表达有关。     

补肾壮骨颗粒含药血清对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：探讨补肾壮骨颗粒含药血清对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞（ MSCs）体外增殖的影响。方法：选用10只6月龄SD大鼠去卵巢制作骨质疏松模型,对骨质疏松骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,传代后的 MSCs分为OP组、OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组和OP＋空白血清组,倒置显微镜观察各组MSCs的生长情况,进行形态学观察,并用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定生长曲线。结果：OP＋含药血清组,MSCs呈典型的集落生长,细胞呈长梭形,突起细长且多,细胞增殖较旺盛,细胞数量不断增加,随着传代次数的增多,细胞增殖速度减慢。OP组及OP＋空白血清组MSCs接种后胞体立体感下降,体积较大,细胞偏圆形,突起收缩,增殖速度较慢,细胞数量减少;随着传代次数的增多,细胞增殖速度显著减慢。OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组骨髓间充质干细胞增殖能力明显提高,生长曲线有显著性差异。结论：补肾壮骨颗粒含药血清能促进去卵巢骨质疏松大鼠MSCs的增殖。     

基于MEK/ERK信号通路探讨阳和汤含药血清对乳腺癌4T1细胞的影响

目的 通过阳和汤含药血清干预小鼠乳腺癌4T1细胞,探索阳和汤对乳腺癌4T1细胞及其内丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法 制备阳和汤SD大鼠含药血清。将其随机分组为空白组、阳和汤低、中、高剂量组（5.8、11.6、23.2 g·kg^-1）,空白组用生理盐水代替。各组按10%含药血清和90% RMPI 1640完全培养基均匀混合,干预细胞。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法分别在24、48、72 h检测阳和汤含药血清对4T1细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测4T1细胞的凋亡情况;采用划痕实验检测4T1细胞迁移情况;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MEK1/2、磷酸化（p）-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、大鼠肉瘤病毒（RAS）蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,阳和汤干预24、48、72 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组对4T1细胞增殖具有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）;阳和汤干预48 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组在24、48 h的细胞划痕愈合能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞侵袭能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞内MEK1/2、ERK1/2表达差异无统计学意义,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 阳和汤可抑制乳腺癌细胞4T1增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。其凋亡机制与MEK/ERK信号通路受抑制,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达下调有关。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖的影响。[方法]将实验大鼠随机分为四组,生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血,分离血清。将同组大鼠血清混匀,冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。对标本进行0D值测定,计算细胞增殖抑制率。[结果]鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组血清作用人肝癌HEPG2细胞48H后与灌服生理盐水组相比较细胞增殖抑制率有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组细胞增殖抑制率三者无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖有抑制作用。     

芪玄益心胶囊对大鼠心肌NF-κBp50mRNA IκBαamRNA的影响

目的:评价芪玄益心胶囊对冠脉结扎大鼠心肌梗塞的治疗作用,并探讨其机理.方法:建立大鼠冠脉结扎心肌梗塞模型,将模型大鼠随机分为麝香保心丸组、芪玄益心胶囊高、中、低剂量组、模型组,并设空白对照组.观察各组心肌梗塞率和心肌组织核转录因子-κBp50(NF-κBp50)其抑制蛋白α(IκBα)的表达.结果:模型组及各治疗组与空白组比较心肌梗塞率、NF-κBp50mRNA、IκBαmRNA表达均显著增高(P＜0.05).芪玄益心胶囊各剂量组与模型组比较心肌梗塞率、NF-κBp50mRNA、IκBαmRNA均明显降低(P＜0.05),以高剂量组变化最显著,高剂量组在降低心肌梗塞率、NF-κBp50mRNA、IκBαmRNA表达方面均优于麝香保心丸组(P＜0.05).结论:芪玄益心胶囊能够降低心肌梗塞率,并推测芪玄益心胶囊抗心肌梗塞的作用与其抑制NF-κBp50mRNA、IκBαmRNA表达相关.     

不同剂型六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的:比较六味地黄方各剂型(汤、丸、超微饮片)对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响.方法:原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖情况,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响.结果:10%以内六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用;对分化过程中的GPDH的升高有抑制作用;而对于分化过程中的脂肪积聚则有促进分解的作用.结论:六味地黄汤、丸、超微饮片能促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中的GPDH的升高和脂肪积聚;上述各作用皆以高剂量组为佳.     

复方七芍降压片含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察复方七芍降压片含药血清对炎症因子及其诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:采用自发高血压大鼠模型灌喂蒸馏水、复方七芍降压片和厄贝沙坦,分别制备对照血清和含药血清。使用炎症因子TNF-α、嘌呤受体P2Y6抑制剂MRS2578和含药血清对大鼠VSMC进行干预,检测不同处理下大鼠VSMC的细胞活力和细胞周期以及炎症因子IL-6、IL-1β的表达差异。结果:TNF-α可促进细胞增殖,促进IL-6和IL-1β表达;MRS2578可抑制细胞增殖,抑制IL-6和IL-1β表达;复方七芍降压片含药血清和厄贝沙坦含药血清可抑制细胞增殖,抑制IL-6和IL-1β表达。结论:复方七芍降压片含药血清能抑制炎症因子诱导的VSMC增殖,抑制细胞炎症因子的表达。复方七芍降压片降低血压的功效可能与抑制VSMC炎症反应有关。     

益智仁含药血清对脂多糖诱导小鼠小胶质细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨益智仁含药血清对脂多糖(LPS)诱导小鼠小胶质细胞(BV2)炎症损伤的影响及作用机制.方法 取健康雌性SD大鼠20只,随机分为对照组和益智仁低、中、高剂量组,每组5只.益智仁低、中、高剂量组分别灌胃5 g/(kg·d)、10 g/(kg·d)、20 g/(kg·d)益智仁药粉,对照组灌胃等体积生理盐水,连续7...     

川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。方法体外建立神经干细胞培养体系,川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)处理神经干细胞72 h。CCK-8和BrdU法检测NSCs增殖;细胞免疫荧光检测NSCs分化;DAPI染色检测NSCs的凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)对NSCs增殖无影响(P>0.05)。川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中浓度)促进神经干细胞分化(P<0.05),促进Notch1、Tublin、caspase-3 mRNA表达(P<0.05),抑制Jagged1、Hes1、Sox2,Pax6 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);高浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进神经干细胞凋亡(P<0.05),促进GFAP mRNA表达(P<0.05),抑制Ngn1 mRNA表达(P<0.01)。中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进Tublin蛋白及Ngn1 mRNA表达,抑制GFAP、Jagged1蛋白及GFAP mRNA表达(P<0.05,P<...     

加味阳和汤含药血清联合转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

目的 探究加味阳和汤含药血清联合转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响。方法 全骨髓贴壁培养法分离培养SD大鼠BMSCs,并进行流式细胞术鉴定;CCK-8实验筛选出加味阳和汤含药血清促进BMSCs增殖的最佳有效浓度;将第3代BMSCs分为空白对照组、加味阳和汤含药血清组(含药血清组)、TGF-β1组(阳性对照组)、加味阳和汤含药血清联合TGF-β1组(联合组),诱导分化21 d后,阿利新蓝染色检测软骨特异性基质蛋白糖胺聚糖生成;RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨分化标记基因SOX-9、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的基因蛋白表达。结果 (1)阿利新蓝染色显示,空白对照组未见明显软骨特异性基质蛋白糖胺聚糖(呈蓝色)产生,其余3组可见明显糖胺聚糖生成,其中联合组效果最佳;(2)与空白对照组比较,Aggrecan、ColⅡ及SOX-9的基因蛋白表达均明显升高(P<0.05),其中联合组效果最佳(P<0.01),且明显优于含药血清组和阳性对照组。结论 加味阳和汤含药血清在一定浓度范围...     

龟板含药血清对骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察益肾龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)体外增殖过程的增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC增殖过程。用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测MSC的PCNA及其mRNA表达;免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测PCNA蛋白表达的变化。结果:龟板血清以浓度依赖方式促进MSC的PC-NA及其mRNA表达阳性细胞数和PCNA蛋白表达,与对照组比较有显著性(P<0.05)。结论:龟板血清促MSC增殖作用可能与上调PCNA表达有关。     

芪玄益心胶囊对糖尿病大鼠胰腺IL-1β及其mRNA NF-κBp50 IκBa的影响

目的:评价芪玄益心胶囊对糖尿病(DM)大鼠的降糖作用,并探讨其作用机制.方法:以四氧嘧啶腹腔注射致胰腺损伤复制大鼠DM模型,将其随机分关吡达组、关吡达 芪玄益心胶囊高、中、低剂量组、模型组,并设空白对照组.观察各组模型血糖、糖化血清蛋白、胰腺白介素-1β(IL-1β)及其mRNA、核转录因子-kBp50(NF-κBp50)及其抑制蛋白(IκBa)水平,并与空白组对照.结果:模型组及各治疗组与空白组比较,血糖、糖化血清蛋白、IL-1β及其mRNA、NF-κBp50(细胞核)、IκBa(细胞浆)表达均显著增高(P<0.05).美吡达 芪玄益心胶囊各剂量组与模型组比较,血糖、糖化血清蛋白、IL-1β及其mRNA、NF-κBp50、IkBa表达明显降低(P<0.05).芪玄益心胶囊与美吡达比较,美吡达 芪玄益心胶囊高剂量组对胰腺IL-1β及其mRNA、NF-κBp50、IκBa改善优于美吡达(P<0.05).结论:糖尿病大鼠胰腺中存在IL-1β、NF-κBp50的激活,芪玄益心胶囊对其有一定的抑制作用,推测抑制IL-1β-NF-κBp50(IkBa)这一途径的激活,是芪玄益心胶囊降低血糖,胰腺保护作用的重要机制之一.     

“通膈汤”含药血清对食管癌细胞增殖和凋亡的影响研究

目的：观察中药复方通膈汤含药血清对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响。方法：将大鼠分为空白血清组和通膈汤低、中、高剂量组,分别灌胃给予蒸馏水和通膈汤不同剂量水溶液。连续灌胃10d后,腹主动脉取血,离心并收集血清。食管癌Eca-109细胞培养,经消化、计数,制成细胞悬液,接种,置于培养箱中,每孔加入含相应浓度含药血清的培养基。CCK-8法（CCK试剂盒）检测通膈汤含药血清对Eca-109细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测含药血清对Eca-109细胞周期和凋亡的影响,细胞黏附试验和transwell（转移）侵袭试验检测含药血清对细胞黏附能力及侵袭能力的影响。结果：10%和20%通膈汤各剂量含药血清对Eca-109细胞的增殖有明显抑制作用,该作用随时间延长而增强。20%通膈汤低、中剂量含药血清组细胞G1期（DNA合成前期）比例明显高于空白血清组（P<0.05）,G2+S期（DNA合成期+DNA合成后期）比例明显低于空白血清组（P<0.05）。与空白血清组比较,20%通膈汤各剂量含药血清组细胞凋亡率显著增大。20%、10%、5%含药血清能显著降低Eca-109细胞的黏附能力及侵袭能力。结论：通膈汤含药血清可以抑制食管癌Eca-109细胞增殖,诱导其凋亡并降低细胞黏附及侵袭能力。     

六味地黄丸含药血清对树突状细胞增殖的影响

目的：研究六味地黄丸含药血清对SD大鼠骨髓源性树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDC）增殖的影响。方法：制备六味地黄丸含药血清,观察含药血清作用下的细胞生长情况,进行细胞计数及细胞活力测定;用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测不同浓度、不同时间六味地黄丸含药血清作用下的细胞增殖变化,寻找最佳六味地黄丸浓度和作用时间;ELISA法检测细胞上清中树突状细胞分泌细胞因子IL-12的浓度;混合淋巴细胞反应（MLR）检测其刺激T淋巴细胞活化和增殖能力。结果：与空白对照组比较,成熟型DC含药血清组显著促进DC细胞增殖,且这种增殖在含药浓度15%,作用时间48 h时最为显著。其IL-12分泌量显著提高（P<0.05）。六味地黄丸含药血清培养的成熟型DC对异基因T淋巴细胞具有增殖刺激作用,且随着细胞数量的增加作用增强（P<0.05）,呈量效关系。结论：六味地黄丸含药血清具有诱导大鼠骨髓源性树突状细胞增殖的作用。     

二仙汤加味对去卵巢大鼠心肌NF-κBp50、IκBα的影响

目的探寻二仙汤加味对去卵巢大鼠心肌保护作用的机制。方法采用5月龄雌性大鼠建立去卵巢模型,随机分为空白对照组、模型组、加味二仙汤高、中、低剂量组、替勃龙组,每组8只。二仙汤组分别用二仙汤30、15、7.5g/kg生药剂量给药,替勃龙组用0.25mg/kg给药,其余两组给予3mL生理盐水灌胃,各组持续灌胃60d。采用免疫组化法分析心肌NF-κBp50、IκBα的表达。结果模型组与各治疗组、空白组比较,NF-κBp50、IκBα的表达均显著增高。二仙汤各剂量组与模型组比较,NF-κBp50、IκBα表达明显降低。二仙汤组对心肌NF-κBp50、IκBα改善优于替勃龙组。结论去卵巢大鼠心肌中存在NF-κBp50、IκBα的激活,加味二仙汤对其有一定抑制作用,可能是二仙汤心肌保护作用机制之一。     

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

目的探讨阳和汤含药血清对成骨细胞、破骨细胞的影响作用。方法 SD大鼠连续7 d灌胃阳和汤,腹主动脉采血,制备含药血清。分离并培养原代成骨细胞、成骨细胞株UMR106、原代破骨细胞、破骨前体细胞RAW264.7。随机分为阳和汤含药血清低剂量组、中剂量、高剂量,空白血清组,各组加入相应含药血清进行培养,分别于24、48、72h收获细胞,采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响;比色法测定破骨细胞TRAP酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24、48、72h均能提高成骨细胞的增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组在48、72h也能明显提高细胞增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组对破骨前体细胞RAW264.7增殖率24、48、72h均没有影响,与空白血清组比较差异均无统计学意义;阳和汤含药血清中、高剂量组破骨前体细胞RAW264.7增殖率均低于空白血清组,24、48、72h比较差异有统计学意义;阳和汤含药血清低剂量组对破骨细胞的TRAP活性24、48 h影响不大,但72h TRAP活性低于空白血清组;阳和汤含药血清中、高剂量组48、72h破骨细胞TRAP活性均显著低于空白血清组。结论阳和汤能抑制体外培养的破骨前体细胞增殖,降低破骨前体细胞TRAP活性,对成骨细胞的增殖有促进作用。