降钙素基因相关肽对原代培养大鼠心肌组包缺氧／复氧损伤的影响

目的：探讨降钙素基因相关肽（CaICitoninGene-ReIatedPeptide,CGRP）预先给药对大鼠心肌细胞缺氧／复氧（Anoxia-reoxygenatiOR,A／R）损伤的影响。方法将出生1～3天的大乳鼠心脏经体外分离为心肌细胞后接种于6孔细胞培养板（3×105个／孔）,培养72h后进行实验。采用随机数字表法,取12子L心肌细胞随机分为4组（n=3）：（1）对照组,不加任何药物干预,并且不进入缺氧／复氧程序;（2）缺氧／复氧组,不加任何药物干预,只进行缺氧／复氧程序;（3）缺氧／复氧＋CGRP组,缺氧前1小时给予CGRP（10-8mol/L）,之后进入缺氧／复氧程序：（4）缺氧／复氧＋CGRP＋CGRP8—37组．缺氧前1小时给予CGRP（10—8tooI／L）＋CGRPl受体拮抗剂CGRP8—37（10-7mol／L）,之后进入缺氧／复氧程序。缺氧／复氧损伤后测定心肌细胞凋亡率、乳酸脱氢酶fLDH）释放量以及培养液中半胱氨酸天冬蛋白酶3（caspase-3）活性。结果：与对照组比较,缺氧／复氧组的细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中caspase-3活性均显著升高（p均〈0.01）：缺氧／复氧＋CGRP组的细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中caspase-3活性均显著低于单纯缺氧／复氧组（p均〈0．01）,上述指标变化可被CGRPl受体拮抗剂CGRP8-37所逆转。结论：缺氧／复氧可诱发心肌细胞损伤,cGRP预先给药可显著减轻心肌细胞在缺氧／复氧过程中的损伤,该作用可能由CGRP1受体介导。     

降钙素基因相关肽对心肌缺血/再灌注损伤保护作用信号通路研究进展

背景 降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)是一种重要的感觉神经肽,能减轻心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MI/RI). 目的 就CGRP发挥心肌保护作用的信号通路进行综述. 内容 概述CGRP的生物学特征、对MI/RI的影响以及所涉及的信号通路. 趋向 研究CGRP对MI/RI的信号转导机制有助于阐明CGRP对心肌保护的重要性,并提供新的治疗靶点.     

降钙素基因相关肽控制性降压对大鼠肝血流及氧供氧耗的影响

目的：研究α－ｈＣＧＲ控制性降压对肝血流和肝氧耗的影响。方法：２０只ＳＤ大鼠随机分为α－ｈＣＧＲｐ组和硝普钠组（Ｓ组）。Ｃ组和Ｓ组动物分别静注αｈ－ＣＧＲＰ和硝普钠使大鼠平均支动脉压降至６．７ｋＰａ并维持１小时。采用放射性同位素技术测定肝动脉、门脉和全肝血流量，并根据血气分析结果计算肝氧供和氧耗。结果：Ｃ组动物在控制性中肝动脉、全肝血流量及肝氧供显著增加；Ｓ组动物在降压中上述指标均显著下降，而肝氧     

降钙素基因相关肽通过ERK1/2信号通路对人血管内皮细胞增殖的影响

[目的]探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,并从ERK1/2信号通路角度初步探讨其可能的机制.[方法]实验分为4组,分别为空白对照组、CGRP组、CGRP+CGRP 8-37组、CGRP+PD98059组.AlarmarBlue法检测各组人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的增殖变化情况;免疫印迹技术观察CGRP诱导后ERK1/2的磷酸化,及CGRP8-37、PD98059对ERK1/2磷酸化的影响.[结果](1) CGRP可诱导HUVECs细胞增殖,该作用可被CGRP8-37和PD98059阻断;(2) CGRP可时间依赖性地诱导HUVECs细胞ERK1/2的磷酸化,CGRP8-37和PD98059可减弱其作用.[结论]CGRP可诱导HUVECs细胞增殖,ERK1/2信号通路参与其调控机制.     

自噬和PI3K-Akt-mTOR信号转导通路在缺氧预处理对高糖心肌细胞缺氧/复氧损伤保护中的作用

目的 探讨自噬和磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 hydroxy kinase, PI3K）-蛋白激酶B（protein kinase B, Akt）-雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin, mTOR）信号转导通路在缺氧预处理（hypoxia preconditioning, HPC）对高糖心肌细胞缺氧/复氧（anoxia/reoxygenation, AR）损伤中的作用及机制。 方法 将采用高糖培养基培养72 h的心肌细胞用随机数字表法分为5组：空白对照组（S组）、AR损伤对照组（AR组）、HPC组、渥曼青霉素＋HPC组（Wo＋HPC组）、雷帕霉素＋HPC组（Ra＋HPC组）。采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）检测试剂盒检测心肌细胞LDH漏出率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,蛋白印迹法检测心肌细胞微管相关蛋白1轻链3（microtubulesas sociated protein light, LC3）-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、PI3K表达和磷酸化（phospho, p）蛋白激酶B/蛋白激酶B（p-Akt/Akt）比值。 结果 与AR组比较,Wo＋HPC组LDH漏出率、早期和晚期凋亡率降低（P〈0.05）,LC3-Ⅱ和Beclin-1表达降低（P〈0.05）,mTOR、PI3K表达和p-Akt/Akt比值升高（P〈0.05）。HPC组各指标与AR组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。与HPC组比较,Wo＋HPC组LDH漏出率、早期和晚期凋亡率降低（P〈0.05）,Beclin-1表达降低（P〈0.05）,mTOR、PI3K表达和p-Akt/Akt比值升高（P〈0.05）。 结论 激活PI3K-Akt-mTOR信号转导通路抑制自噬可明显改善HPC对高糖心肌细胞AR损伤的保护作用。     

线粒体ATP敏感性钾通道在降钙素基因相关肽减轻新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的评价线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_(ATP)通道)在降钙素基因相关肽(CGRP)减轻新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法取原代培养的新生1～3 d SD大鼠心肌细胞,在含有10%胎牛血清培养基中培养,细胞接种于6孔细胞培养板,采用随机数字表法分为5组(n=10):正常对照组(C组)、缺氧复氧组(AR组)、CGRP+缺氧复氧组(CGRP组)、CGRP+mitoK_(ATP)通道阻滞剂(5-HD)+缺氧复氧组(5-HD组)、CGRP+CGRP受体阻滞剂CGRP_(8-37)+缺氧复氧组(CGRP_(8-37)组)。除C组,其余4组均缺氧3 h,复氧2 h;CGRP组缺氧前2 h加入终浓度为0.1 nmol/L CGRP;5-HD组于缺氧前2.5 h加入终浓度为500μmol/L 5-HD,30 min后加入终浓度为0.1 nmol/L CGRP;CGRP_(8-37)组于缺氧前2.5 h加入终浓度为1 nmol/L CGRP_(8-37),30 min后加入终浓度为0.1 nmol/L CGRP。于缺氧复氧后检测心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,JC-1荧光法测定线粒体膜电位(Δψm)的变化,即JC-1多聚体/单聚体的比值。结果 AR组AI明显高于C组(P0.01)LDH活性明显强于C组(P0.01),JC-1多聚体/单聚体的比值明显低于C组(P0.01)。CGRP组和5-HD组AI明显低于AR组(P0.05),LDH活性明显弱于AR组(P0.01),JC-1多聚体/单聚体的比值明显高于AR组(P0.01)。5-HD组和CGRP_(8-37)组AI明显高于CGRP组(P0.01),LDH活性明显强于CGRP组(P0.01),JC-1多聚体/单聚体的比值明显低于CGRP组(P0.01)。结论 CGRP可以激活新生大鼠心肌细胞膜CGRP受体,通过激活mitoK_(ATP)通道,减少心肌细胞缺氧复氧损伤。     

番茄红素对缺氧/复氧诱导小鼠心肌细胞内质网应激和凋亡的影响

目的 评价番茄红素对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)引起的小鼠心肌细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和凋亡的影响. 方法 建立C57BU6乳鼠心肌细胞H/R模型,采用随机数字表法将C57BL/6小鼠心肌细胞分为正常对照组(C组)、番茄红素组(Lyc组,含5μmol/L番茄红素的培养基预处理4h)、H/R组(H/R组,缺氧4h复氧6h)和番茄红素+H/R组(Lyc+H/R组,给予5μmol/L番茄红素预处理4h后行H/R处理).采用水溶性四氮唑-8(cell counting Kit-8,CCK-8)法检测心肌细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞搏动频率,TUNEL法检测细胞凋亡率,二氯荧光素法(dichlomnuorescein diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,实时荧光定量PCR (real-time PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及半胱天冬氨酸蛋白酶-12 (cysteme aspartate specific protease-12,caspase-12)mRNA的表达,Western blot法分析剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-12(cleaved cysteme aspartate specific protease-12,Cleaved-caspase-12)和剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteme aspartate specific protease-3,Cleaved-caspase-3)的表达. 结果 与C组比较,H/R组心肌细胞存活率显著降低[(100±5)％,(69±6)％](P＜0.01),搏动频率显著降低[(94±6),(28±5)次/min](P＜0.01),心肌细胞凋亡率[(4.9±1.5)％,(25.6±2.6)％]和ROS含量[(100±11)％,(226±10)％]显著升高(P＜0.01);CHOP mRNA[(1.00±0.10)、(2.60±0.19)]和GRP78 mRNA[(1.00±).18)、(4.12±0.23)]表达水平显著升高(P＜0.05);caspase-12 mRNA[(1.00±0.09)、(1.79±0.14)]、Cleaved-caspase-12[(1.00±0.08)、(1.85±0.10)]和Cleaved-caspase-3[(1.00±0.07)、(1.89±0.14)]表达水平显著升高(P＜0.05).与H/R组比较,Lyc+H/R组心肌细胞存活率明显升高[(69±6)％、(84±7)％](P＜0.05),搏动频率增加[(28±5)、(73±6)次/min] (P＜0.05),凋亡率显著降低[(25.6±2.6)％,(18.2±2.2)％](P＜0.05),细胞内ROS含量[(226±10)％、(140±16)％]明显降低,CHOP mRNA [(2.60±0.19)、(1.71±0.14)]和GRP78 mRNA[(4.12±0.23),(1.98±0.19)]表达水平显著降低(P＜O.05);caspase-12 mRNA[(1.79±0.14)、(1.38±0.11)]、Cleaved-caspase-12[(1.85±0.10)、(1.26±0.12)]和Cleaved-caspase-3[(1.89±0.14)、(1.36±0.12)]表达水平显著降低(P＜0.05). 结论 番茄红素可抑制H/R过程中的ERS及其凋亡信号途径而减轻心肌细胞损伤.     

辛伐他汀通过PI3K/Akt通路缓解肺泡Ⅱ型细胞缺氧复氧损伤

目的 观察辛伐他汀( SIM)对缺氧复氧损伤肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的保护作用并探讨其机制.方法 体外培养人ATⅡ来源的A549细胞株,建立二氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧复氧损伤模型;不同浓度辛伐他汀(5～100 μmol/L)处理A549细胞,CCK-8比色法检测细胞增殖率;Hoechst33342染色检测细胞凋亡;Western blot检测ATⅡ特征标志表面蛋白C(SP-C)及PI3K/Akt通路蛋白Akt、P70、mTOR、Caspase-3水平.结果 与对照组比较,缺氧前予低剂量SIM(5～20 μmol/L)预处理30 min,可显著促进A549细胞增殖、抑制其凋亡,并上调SP-C、p-Akt及下游增殖相关蛋白p-P70、mTOR水平,同时下调凋亡蛋白Caspase-3水平,两者差异有统计学意义(P＜0.01).与SIM组比较,给予PI3K抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)可拮抗SIM的保护作用,表现为SP-C、p-Akt、mTOR及p-P70蛋白水平下调,Caspase-3蛋白水平上调,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 辛伐他汀可缓解ATⅡ细胞缺氧复氧损伤,其机制与辛伐他汀活化PI3K/Akt通路有关.     

硫酸锌预处理对成年大鼠缺氧／复氧心肌细胞超微结构的影响

目的：研究硫酸锌预处理对成年大鼠缺氧／复氧心肌细胞超微结构的影响。方法：分离培养SD成年大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧／复氧损伤模型,将细胞随机分为正常组（N）,缺氧复氧组（H／R）,缺氧预处理组（HP）,硫酸锌（ZnSO4）预处理组（ZnP）,分别进行相应处理,然后用透射电镜对各组心肌细胞超微结构进行观察,并进行线粒体评分。结果：N组、HP组、ZnP组超微结构优于H／R组,线粒体评分较H／R组低（P〈0．05）,HP组、ZnP组超微结构变化相似且线粒体评分无统计学差异,但均高于N组（P〈0．05）。结论：缺氧／复氧可造成成年大鼠心肌细胞超微结构的损伤,ZnSO4预处理、缺氧预处理均能减轻这种损伤,且两者效果相当。     

降钙素基因相关肽防治心肌缺血再灌注损伤的机制

降钙素基因相关肽(CGRP)是一个内源性心肌保护物质,在心脏缺血再灌注损伤中起重要的保护作用,其机制包括多个方面,可能成为临床上一个新的心肌保护剂.     

吡那地尔预处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞钙敏感性受体的影响

目的 探讨吡那地尔预处理对缺氧/复氧后心肌细胞钙敏感性受体(calcium-sensing receptor,CaSR)的影响.方法 通过离体大鼠心脏灌注装置,分离成年大鼠心肌细胞随机分为四组,其中正常组(N组)常规培养,另三组缺氧45 min、复氧60 min制作缺氧/复氧模型;C组不做预处理;吡那地尔组(P组)和格列苯脲组(G组)在缺氧前用吡那地尔30 μmol/L预处理15 min;G组在吡那地尔处理前用格列苯脲50μmol/L处理5 min.采用RT-PCR及Western blot方法检测心肌细胞CaSR基因及蛋白表达情况.结果 C、P、G组CaSR基因表达水平及蛋白表达量明显高于N组(P＜0.01);P组CaSR基因表达水平及蛋白表达量明显低于C组(P＜0.05);而G组明显高于P组(P＜0.01).结论 吡那地尔预处理能抑制心肌细胞缺氧/复氧导致的CaSR基因表达上调,其作用可能与ATP敏感性钾通道的开放有关.     

异氟烷对原代培养的缺氧/复氧损伤心肌细胞活力及线粒体通透性转换的影响

目的 在原代培养SD乳鼠心肌细胞上观察异氟烷(isoflurane,Iso)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞活力及线粒体通透性转换(mitochondrial permeability transition,MPT)的影响. 方法 1 d～3 d龄SD乳鼠心肌细胞原代培养48 h后,建立H/R模型.将培养细胞按孔随机分为5组(n=6),在缺氧期予Iso和苍术苷(atractyloside,Atra)处理:①Normal组:在37℃的CO2培养箱中孵育细胞5 h(95%空气+5%CO2);②H/R组:缺氧(95% N2+5% CO2)3 h,复氧(95%空气+5% CO2)2 h;③Atra组:缺氧3 h,缺氧期给予20μ的Atra,复氧2h;④Iso0.4组:缺氧3 h,缺氧期给予0.4mmol/L Iso,复氧2h;⑤Atra+Iso0.4组:缺氧3 h,缺氧期给予0.4mmol/L Iso和20 μmol/L Atra,复氧2 h.复氧50min后,以Calcein-AM染色心肌细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的开放;复氧2 h后,MTT法测定心肌细胞活力.结果 复氧2 h后,Normal组、H/R组、Atra组、Iso0.4组、Atra+Iso0.4组吸光度分别为0.442±0.010、0.417±0.006、0.413±0.007、0.462±0.011、0.452±0.008,Normsl组、Iso0.4组、Atra+Iso0.4组明显高于H/R组、Atra组(P<0.01);H/R组吸光度与Atra组差异无统计学意义(P>0.05).复氧50 min后,Normal组、Iso0.4组、Atra+Iso0.4组Calcein保留在线粒体内,胞浆荧光强度较弱;H/R组、Atra组Calcein从线粒体释放到胞浆,胞浆荧光强度较强. 结论 ①缺氧期Iso处理可以明显抑制心肌细胞MPTP开放,减轻缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)引起的心肌细胞损伤,保存细胞活力;②缺氧期给予Atra不能逆转Iso的心肌保护作用.     

缺氧复氧对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡的影响

目的:探讨缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡3种细胞死亡方式的影响。方法:将培养的H9C2心肌细胞按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组)和HR组,其中HR组H9C2心肌细胞在缺氧培养箱中进行氧糖剥夺8h,然后复氧12 h。通过检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量及四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测细胞活力来评估细胞损伤情况(每组6孔),Western blot检测(每组9孔)细胞凋亡相关蛋白[天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific proteinase,caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)、Bcl相关蛋白(bcl-associate x protein,Bax)]、自噬相关蛋白[(轻链蛋白3(light chain 3,LC3)Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of ra-pamycin,p-mTOR)]、焦亡相关蛋白[Nod样受体蛋白-3(nod-like receptor pyrin domain3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apopto-sis associated speck-like protein,ASC)、caspase-1p20、IL-1β、IL-18]。通过免疫荧光染色进一步评估细胞凋亡、自噬及焦亡情况(每组6孔)。结果:与Ctrl组比较,HR组H9C2心肌细胞HR后细胞活力降低(P<0.05),LDH释放增加(P<0.05),活化的cas-pase-3及Bax的表达上调(P<0.05),Bcl-2表达下降(P<0.05),TUNEL染色显示HR后细胞凋亡显著增加(P<0.05),提示HR后细胞凋亡及损伤增加;而p-mTOR、p62均表达增加(P<0.05),但LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1蛋白降低(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色显示HR后细胞内的自噬小体增加(P<0.05),表明HR后H9C2心肌细胞自噬受到明显抑制;同时炎性小体NLRP3、ASC、cas-pase-1p20蛋白均显著上调(P<0.05),活化的炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达增加(P<0.05),提示HR后NLRP3炎性小体活化,细胞焦亡增加。结论:H9C2心肌细胞在HR损伤过程中自噬被抑制,细胞焦亡及凋亡增加。     

银杏内酯B对缺氧/复氧心肌细胞Caspase-3/PTEN/Akt通路及细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对缺氧/复氧心肌细胞半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)/10号染色体缺失张力蛋白同源的磷酸酶基因（chromosome 10 deletion phosphatase-tension protein homologue,PTEN）/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路及细胞增殖凋亡的影响。方法 体外培养H9C2细胞,对照组用无血清DMEM高糖培养基在37℃、5%CO2条件下培养28 h,其余各组制备缺氧/复氧模型,GB低剂量组和GB高剂量组在缺氧/复氧前1 h分别用终浓度为50μmol/L和200μmol/L的GB预处理,卡维地洛组在缺氧/复氧前1 h用终浓度为10μmol/L的卡维地洛预处理。检测H9C2细胞增殖和细胞凋亡,同时检测H9C2细胞中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、PTEN、Akt、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt...     

线粒体通透性转换孔与心肌细胞缺氧/复氧过程中炎症反应关系的实验研究

目的 探讨线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)功能状态与心肌细胞缺氧/复氧损伤过程中炎症反应的关系.方法 心肌细胞培养72 h后,采用随机数字表法将其随机分为4组:空白对照组(Sham 组)、缺氧/复氧损伤对照组(AR组)、mPTP开放抑制剂环孢素A(ciclosporin A,CSA)后处理组(CSA组)、mPTP开放剂苍术苷(atractyloside,ATR)后处理组(ATR组).实验结束后检测各组心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率、心肌细胞凋亡、线粒体膜电位的变化和心肌细胞核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)与磷酸化核转录因子-κBp65 Ser536(p-NF-κB p65 Ser536)蛋白的表达量,并检测心肌细胞培养上清液白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的浓度.结果 与AR组比较,CSA组LDH漏出率显著降低[(27.2±2.6)％,(19.0±2.3)％](P＜0.01),早期凋亡细胞百分比显著降低[(33.4±2.8)％,(15.4±2.3)％](P＜0.01),p-NF-κB p65 Ser536蛋白表达量显著降低(5.1±0.7,4.4±0.4)(P＜0.01),IL-6和TNF-α浓度均显著降低[IL-6 (190±10),(170±11) ng/L;TNF-α(129±9),(118±12) ng/L](P＜0.01).与AR组比较,ATR组LDH漏出率显著升高[(27.2±2.6)％,(32.1±3.6)％](P＜0.01),早期凋亡细胞百分比显著升高[(33.4±2.8)％,(43.0±3.3)％](P＜0.0l),p-NF-κB p65 Ser536蛋白表达量显著升高(5.1±0.7,5.8±0.6)(P＜0.01),IL-6和TNF-α浓度均显著升高[IL-6 (189±10),(205±9) ng/L;TNF-α(129±9),(144±10) ng/L] (P＜0.01).结论 mPTP开放状态能够通过调控心肌细胞缺氧/复氧过程中的炎症反应而显著影响缺氧/复氧心肌细胞损伤的程度.     

降钙素基因相关肽/细胞外调节激酶信号通路对人MG-63细胞增殖的实验研究

目的 研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对人MG-63细胞增殖的影响及其可能涉及的信号通路.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞计数法观察对比不同浓度外源性CGRP及其受体拮抗剂CGRP8-37与细胞外调解激酶(ERK)抑制剂PD98059对体外培养的人MG-63细胞增殖的影响.根据不同分组将体外培养的人MG-63细胞用CGRP、CGRP8-37及PD98059作用24 h后,通过免疫细胞化学方法观察细胞骨保护蛋白(OPG)、护骨素配体(RANKL)、ERK表达强度的变化.结果 不同浓度CGRP均可促进MG-63细胞的增殖,促进作用随浓度增高而增强,CGRP8-37、PD98059可减弱此作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).CGRP呈剂量依赖性的上调成骨细胞OPG和ERK的表达,同时下调RANKL的表达,CGRP-37和PD98059可减弱此作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 CGRP可通过ERK信号通路改变OPG/RANKL的比值来调控成骨细胞增殖.

Abstract：

Objective To explore the effect of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on proliferation and differentiation of MG-63 cells through extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway in vitro. Methods To study the effects of ERK inhibitor PD98059 and CGRP inhibitor CGRP8-37, 2 groups of MG-63 cells were treated with PD98059 and CGRP8-37 for one hour prior to serum treatment. The other 4 groups were cultured with serum of different doses (high, middle, low and blank). Proliferation and apoptosis of MG-63 cells were observed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method and cell-counting.Expressions of osteoprotegerin (OPG), receptor activator of nuclear factor kappaβ ligand (RANKL) and ERK were observed through immunocytochemical and image analysis. Results MTT showed that CGRP promoted proliferation of MG-63 cells and expressions of OPG and ERK but not expression of RANKL The effect was dose-dependent, and significantly inhibited by either CGRP 8-37 or PD98059 (P <0.05) . Conclusion CGRP can stimulate proliferation of MG-63 cells via CGRP receptor and ERK pathway to regulate the ratio of OPG/RANKL.     

异氟烷对原代培养的缺氧/复氧损伤心肌细胞活力及线粒体通透性转换的影响

Objective To explore whether isoflurane (Iso) conditioning protect cardiocytes against hypoxia/reoxygenation injury by attenuating mitochondrial permeability transition pore (MPTP) open. Methods Cardiocytes were randomly divided into 5 groups (n=6): ① Normal group, cardiocytes were incubated at 37℃ in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 95% air for 5 hours; ② H/R group, cardiocytes were exposed to 3 h of hypoxia (95% N2 and 5% CO2) followed by 2 h of reoxygenation (95% air and 5% CO2); ③Atra group, 3 h of hypoxia followed by 2 h of reoxygenation, atractyloside (20 μmol/L) was added in medium during hypoxia; ④ Iso0.4 group, 3 h of hypoxia followed by 2 h of reoxygenation, 0.4 mmol/L Iso solution was added in mediumuring hypoxia; ⑤ Atra+Iso0.4 group, 3 h of hypoxia followed by 2 h of reoxygenation, 0.4 mmol/L Iso solution and Atractyloside (20 μmol/L) were added in medium during hypoxia. MTT Cell Viability Assay at 2 hours after reoxygenation were detected by ELISA reader. The onset of MPT was monitored by laser scanning confocal microscope (ISCM) through calcein at 50 minutes after reoxygenation. Results The respective absorbance of Normal group, H/R group, Atra group, Iso0.4 group, Atra+Iso0.4 group were 0.442±0.010、0.417 ±0.006、0.413±0.007、0.42±0.011、0.452±0.008, absorbance of Normal group, Iso0.4 group and Atra+Iso0.4 group were significantly increased compared with H/R and Atra group (P<0.01). There was no significant difference between H/R and Atra group (P>0.05). After 50 minutes reoxygenation,Calcein of the Normal group, Iso0.4 group, Atra+Iso0.4 group was remain in the mitochondria, and cytoplasm fluorescence intensity was weak.Calcein of the H/R group and Atra group was released from mitochondria to cytoplasm, and cytoplasm fluorescence intensity was great.Conclusion Iso has protective effect on primary cultured cardiocytes subjected to hypoxia/reoxygenation by attenuating the MPTP open.Atractyloside can not significantly reverse the protective effect of Iso.     

体外循环与内皮素和降钙素基因相关肽的临床与实验研究

为探讨心脏灌流及体外循环（ＣＰＢ）心内直视手术期间的内皮素（ＥＴ）和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的变化及其临床意义。用含有ＥＴ和ＥＴ＋ＣＧＲＰ的ＫＨ液分别对离体大鼠心脏进行灌流并观察冠脉流量、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量。对ＣＰＢ心脏手术病人围术期测定ＥＴ和ＣＧＲＰ含量。结果：（１）大鼠心脏在ＥＴ灌流期间冠脉血流明显减少，ＭＤＡ生成和ＬＤＨ漏出显著升高；同时灌流ＣＧＲＰ则为相反结果。（２）ＣＰＢ心脏手术病人术前ＥＴ含量明显高于术中及术后（Ｐ＜０．０１）；心脏复苏后ＥＴ达到最低水平，进入ＩＣＵ后ＥＴ开始回升。（３）ＣＰＢ期间ＣＧＲＰ含量与术前比无差异，术后２４小时ＣＧＲＰ明显高于术前及术中（Ｐ＜０．０５）。结论为心脏停搏液中似无必要添加ＣＧＲＰ去拮抗ＥＴ，术后早期适量应用ＣＧＥＰ会有所裨益。     

降钙素基因相关肽对急性肝损伤小鼠肝脏微循环的干预

目的：研究降钙素基因相关肽（CGRP）对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠肝损伤模型肝脏微循环的影响。方法：昆明种小鼠60只,随机分为ConA损伤组、CGRP干预组和空白对照组（n=20）,空白对照组注射生理盐水,ConA损伤组用ConA诱导建立小鼠急性肝损伤模型,CGRP干预组在用ConA诱导建模前体外注射CGRP,各组中10只于处理后用激光多普勒血流仪测肝脏的平均血流灌注量,另10只活体观察肝脏微循环流速,最后处死,全部HE染色观察肝脏病理变化。结果：CGRP干预组肝脏的平均血流灌注量和血液流速较ConA损伤组明显增加（P〈0.01）,病理学改变明显减轻。2组的血细胞浓度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：CGRP能够通过改变肝脏组织的灌注影响急性肝损伤时肝脏微循环障碍的程度和病理改变。     

利多卡因对缺氧/复氧后肝细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨利多卡因预处理对肝细胞缺氧/复氧后Bcl-2、Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将体外培养的肝细胞分为三组:缺氧/复氧组(Ⅰ组)、利多卡因预处理组(Ⅱ组)和正常对照组(Ⅲ组),每组10份。检测肝细胞缺氧/复氧培养后细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)浓度,肝细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白表达、肝细胞凋亡率及超微结构变化。结果Ⅰ、Ⅱ组细胞培养液中ALT、AST浓度、肝细胞Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡率较Ⅲ组均升高(P<0.05),透射电镜示肝细胞损伤,可见凋亡细胞;Ⅱ组细胞复氧后培养液中ALT、AST浓度、肝细胞Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率均低于Ⅰ组(P<0.05),而肝细胞Bcl-2蛋白表达较Ⅰ组升高(P<0.05),透射电镜观察也显示Ⅱ组肝细胞比Ⅰ组损伤轻微。结论利多卡因预处理可以在一定程度上减轻缺氧/复氧后肝细胞损伤,降低细胞凋亡率,保护机制可能与Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。