骨肉瘤中IGF-2基因印迹状态与临床关系的研究

目的探讨骨肉瘤组织中,人胰岛素样生长因子-2（insulin—likegrowth factors2,IGF-2）基因的印迹状态及其与各临床病理因素间的关系。方法应用聚合酶链反应、逆转录PCR及限制性内切酶酶切等方法,检测30例骨肉瘤组织中IGF-2基因的印迹状态,分析IGF-2基因印迹丧失（loss of imprinting,LOI）及其与骨肉瘤各临床病理因素之间的关系。结果骨肉瘤组织中IGF-2基因印迹的丧失率为48．5％,瘤近旁组织中IGF-2基因印迹丧失率为21．2％,瘤远旁组织中IGF-2基因印迹丧失率为12．1％。同时,在有肺转移的骨肉瘤病例中IGF-2基因印迹丧失率（60．9％）明显高于无肺转移者（20％,P〈0．05）。结论IGF-2基因印迹丧失是贯穿于骨肉瘤发生、发展全过程的表观遗传异常,其与骨肉瘤的临床及患者预后相关。     

肥胖对小鼠精子全基因组DNA甲基化以及基因印迹的影响

目的:研究高脂饲料诱导的肥胖是否影响小鼠精子印迹基因差异甲基化区域和精子全基因组DNA甲基化水平。方法:利用高脂饲料诱导的肥胖小鼠模型,进行精子DNA的全基因组甲基化和印迹基因差异甲基化区测序。结果:高脂饲料诱导的肥胖组印迹基因差异甲基化区甲基化水平与普通饲料对照组无显著差异:MEG3-IG(93.73%vs 97.26%;P=0.252),H19(98.00%vs 97.83%,P=0.920),IGF2(97.34%vs 96.25%,P=0.166),IGF2R(1.43%vs 1.11%,P=0.695),PEG3(0.19%vs 0.38%,P=0.537),MEST(0.23%vs 0.68%,P=0.315),NNAT(0.31%vs 0.00%,P=0.134)和SNRPN(1.88%vs 3.13%,P=0.628)。精子全基因组范围内总共发现8 942个甲基化有显著差异的区域(P0.05)。对差异甲基化区域进行基因功能富集,富集基因数目最多的3项分别为代谢(n=1 482),RNA合成(n=779)和转录(n=767)。结论:高脂饲料诱导的肥胖小鼠精子印迹基因差异甲基化区甲基化水平没有发生显著改变,参与代谢、RNA合成以及转录过程基因CG序列甲基化显著改变。     

肾透明细胞癌中胰岛素样生长因子2外显子9异常甲基化与其表达的关系

目的 探讨肾透明细胞癌中原癌基因胰岛素样生长因子2(IGF-2)表达与IGF-2外显子9 CpG岛甲基化状态的关系.方法 检测43例肾透明细胞癌及相应正常组织的IGF-2外显子9甲基化状态及IGF-2基因表达.结果 癌组织中IGF-2外显子9甲基化率为15.00％,正常组织为96.77％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01),并且与肿瘤大小、病理分级及临床分期明显相关(P＜0.05).肾癌组织中外显子9去甲基化组IGF-2双等位基因表达率显著高于甲基化组(P＜0.01).结论 IGF-2外显子9去甲基化在肾透明细胞癌的发生发展中具有重要作用,可作为反映其生物学行为的指标之一.     

乙型肝炎病毒x基因上调肝癌细胞胰岛素样生长因子-Ⅱ胚胎启动子活性的研究

目的　研究乙型肝炎病毒x基因（HBx）对肝癌细胞胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)启动子活性的影响,探讨HBx基因影响肝癌恶性表型的分子机制。方法　应用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测QGY7701肝癌细胞株和转HBx基因肝癌细胞株QGY/HBx的IGF-Ⅱ成年启动子P1与胚胎启动子P3、P4的活性。结果　与QGY7701细胞相比,QGY/HBx细胞IGF-Ⅱ基因P1启动子活性无明显改变(分别为3.12±1.18与3.74±1.87,P＞0.05),而P3与P4活性显著升高(2.27±0.68、3.97±1.66与1.20±0.39、1.45±0.43比较,P＜0.05)。结论　HBx基因可上调肝癌细胞IGF-Ⅱ基因胚胎启动子P3、P4活性,这可能HBx基因增强肝癌恶性表型的一个重要机制。     

肾癌组织中IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR表达及其临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)及其受体(IGF-ⅠR)在肾癌发病机制中的作用及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测51例肾癌组织和12例正常肾组织中IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR的表达。结果IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR在肾癌组织中阳性表达率分别为68.6%、72.5%,均显著高于正常肾组织的33.3%、41.7%(P<0.05)。IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR表达与肾癌分期、淋巴结转移和病理分型均无显著性相关(P>0.05),与肿瘤大小密切相关(P<0.05)。结论IGF-Ⅰ分泌异常与肾癌的发生有密切关系,但不是有价值的肿瘤生物学行为标记物。     

SPINT2基因启动子甲基化与肾癌预后关系的研究

目的 检测肾癌中SPINT2基因启动子甲基化状态,探讨其与肿瘤特征及患者预后的关系.方法 选取2002～2004年本我院就诊的肾透明细胞癌石蜡组织,用甲基化特异性PCR检测其中SPINT2基因启动子甲基化状态,分析其与肿瘤特征及患者预后的关系.结果 共42例肾透明细胞癌患者密切随访,平均随访39个月(3 ～78个月).其中完全甲基化19例,不完全甲基化13例,无甲基化10例.不同甲基化状态的患者预后存在显著性差异(P=0.042),甲基化与肿瘤分期显著相关(P=0.007).结论 SPINT2基因启动子甲基化在肾透明细胞癌组织中广泛存在,其甲基化状态与肾癌的肿瘤分期和预后密切相关.     

降钙素基因相关肽对鼠成骨细胞IGF—I及IGF—IFmRNA表达的影响

目的：探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对成骨细胞胰岛素样生长固子I（IGF－I）和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（IGF－IR）基因表达的影响。方法：将体外培养的鼠成骨细胞用不同浓度的CGRP分别处理8h和24h,通过半定量逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）来观察成骨细胞二种目的基因（IGF－I,IGF－IR）的mRNA表达强度变化,结果：CGRP可以刺激成骨细胞IGF－IFmRNA表达,以10^-8M作用8h最为明显。CGRP亦能够上调成骨细胞IGF－IFmRNA表达,而且维持时间达24h。结论：CGRP通过增强IGF－I的自分泌作用来间接地调节成骨细胞活性,从而发挥成骨效应。     

生长激素对胰腺癌IGF-Ⅰ,Ⅱ-IGFBP3通路动态影响的实验研究

目的 观察生长激素(GH)对胰腺癌细胞增殖及对肿瘤宿主胰岛素样生长因子Ⅰ,Ⅱ(IGF-Ⅰ,Ⅱ)-胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)通路的影响,初步探讨体内外实验差异的原因.方法 体外应用GH(50 ng/ml)24 h,48 h,72 h后计数胰腺癌细胞SW-1990,PANC-1及P3;选用BALB/C雌性裸小鼠35只,以SW-1990成瘤,测量瘤体积,成瘤裸鼠随机分为注射GH的实验组(GH组)及对照组(NS组),荷瘤裸鼠在最后依次注射GH后第1小时、2小时、6小时及24小时处死动物,心室穿刺抽血,切除肝脏,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IGF-Ⅰ,-Ⅱ水平(P＜0.05),蛋白印记(Western Blot)方法观察肝脏IGFBP3的相对光密度(ROD)变化.结果 GH在体外可加速胰腺癌细胞增殖但在体内不促进肿瘤生长;GH上调荷瘤宿主血清IGF-Ⅰ、Ⅱ水平;与GH刺激前(NS)相比,肝脏IGFBP3表达在GH刺激后1 h、2 h、6 h有显著提高(P＜0.05),24 h有所减弱.结论 GH对胰腺癌细胞的作用存在一定的体内外差异;GH在体内通过提高IGF-Ⅰ、Ⅱ水平发挥效应,GH不刺激在体肿瘤生长可能与IGFBP3上调有关.     

肾癌组织中Tim-3基因的甲基化分析

目的分析肾癌组织中Tim-3基因启动子的甲基化情况,探讨Tim-3甲基化在肾癌发生中的可能作用。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测20例肾癌组织和3例癌旁组织中Tim-3基因启动子甲基化状态,分析检测结果。结果肾癌组织中有11例(55%)检测到了Tim-3基因甲基化表达,相应癌旁组织中没有检测到Tim-3基因甲基化表达。结论肾癌组织中Tim-3基因启动子发生甲基化,Tim-3基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关。     

IGF1对兔关节软骨细胞增殖的影响及其形态学观察

目的了解胰岛素样生长因子1(IGF1)对体外生长的兔关节软骨细胞增殖以及细胞超微结构的影响.方法应用兔关节软骨细胞体外单层培养,对照组培养液为含10%小牛血清DMEM,实验组在培养液DMEM中加入IGFl使其终浓度为100μg*L-1,作用细胞1周, 得出细胞生长曲线,并分别测得两组DNA含量.同时观察IGFl作用后,软骨细胞超微结构的变化.结果结果显示IGFl能明显促进培养软骨细胞增殖.实验组DNA含量,与对照组相比,有统计学意义 (P<0.01).在电镜下,细胞主要表现为增殖性改变,说明细胞代谢活跃.结论IGFl可刺激软骨细胞增殖,细胞超微结构表现代谢活跃状态.     

基因组DNA和结缔组织生长因子基因启动子甲基化状态与2型糖尿病肾病的关系

目的 探讨糖尿病肾病(DN)患者基因组DNA及结缔组织生长因子(CTGF)启动子甲基化在DN发病中的作用.方法 根据1999年WHO糖尿病诊断标准,选取我院2型糖尿病患者90例及同期健康体检者30例,分为糖尿病组48例、DN组42例和健康对照组30例.提取各组受检者外周血白细胞DNA,应用高效液相色谱法检测基因组DNA整体甲基化水平;甲基化特异性PCR及测序方法检测CTGF启动子甲基化状态;用酶联免疫吸附法检测各组血清CTGF蛋白水平.结果 DN组基因组DNA甲基化水平为5.23％±0.09％,与糖尿病组(4.71％±0.03％)和健康对照组(4.37％±0.01％)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).DN组CTGF基因启动子甲基化水平为22.02％±12.90％,明显低于糖尿病组(49.18％±8.01％,P=0.019)及健康对照组(72.18％±19.30％,P=0.000),差异均有统计学意义.DN组血清CTGF蛋白水平为(193.44±11.9) mg/L,显著高于糖尿病组[(127.65±10.30) mg/L,P=0.031]及健康对照组[(95.84±5.1) mg/L,P=0.001].结论 DN患者CTGF启动子的甲基化程度明显低于糖尿病非肾病患者,而CTGF表达则高于非肾病患者,提示CTGF基因启动子的低甲基化可能参与DN的发生发展.     

低氧诱导因子2α和血管内皮生长因子在肾癌中的研究近况

肾癌的形成是多基因、多途径相互作用的过程.低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIFs)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)肿瘤机制的研究不断取得新的进展,这对于阐明肿瘤的发生、发展及靶向治疗策略提供了新的依据.     

膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变

目的研究RASSF1A基因启动子的甲基化状态及在膀胱癌和肾癌发生中的作用。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测45例手术切除的膀胱癌组织和相应癌旁正常组织标本、9例电切膀胱癌组织、3例非肿瘤患者正常膀胱组织、12例肾癌组织和相应癌旁正常组织标本中RASSF1A基因的甲基化情况。结果膀胱癌组织中RASSF1A基因异常甲基化55.6%(30/54),其中手术切除组57.8%(26/45),电切癌组织异常甲基化4例,癌旁正常组织基因异常甲基化1例;肾癌组织中基因异常甲基化66.7%(8/12),相应癌旁正常组织中未发现基因甲基化。3例正常膀胱组织标本中未发现基因异常甲基化。膀胱癌组织中RASSF1A基因甲基化率有随组织分期升高的趋势,但与临床病理参数间无明显相关性。结论膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因启动子高度甲基化,表明该基因甲基化可能与2种肿瘤的发生相关。     

肾细胞癌中WNK2基因甲基化状态与mRNA表达的研究

目的 探讨WNK2基因在肾细胞癌(RCC)发生及发展中的作用.方法 选取2016年5月至2017年6月本院的肾肿瘤患者58例,分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其RCC及相应癌旁组织、正常组织标本中WNK2基因甲基化状态和mRNA表达情况.结果 在58例RCC组织、癌旁组织...     

PDGF与IGF对骨形成的协同作用及机制

骨的形成、发生、发展是一个极其复杂的过程,在众多的影响因素中,生长因子的局部调节发挥着重要的作用[1].同时,在任何时候,骨细胞的微环境中都存在不止一种生长因子,骨的形成是在多种生长因子相互作用的网络调节下实现的.因此研究骨生长因子之间的相互作用,对进一步阐明骨形成、发生机理,筛选有协同作用的生长因子联合应用修复骨缺损,治疗骨组织疾病,具有重要的理论和实践意义.现就PDGF与IGF的协同作用作以下综述.……     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞细胞周期的影响

目的了解胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF—IR)在人结肠癌细胞株HT-29上的表达情况，观察两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对HT-29细胞周期的影响。方法免疫组织化学法检测HT-29的IGF-ⅠR表达，流式细胞术检测两种IGF—ⅠR单克隆抗体对HT-29的细胞周期的影响。结果人结肠癌细胞株HT-29细胞膜高表达IGF—ⅠR，IGF-ⅠR单克隆抗体能使HT-29的细胞周期阻滞于任何一期，诱导凋亡，对结肠癌细胞起抑制作用。结论IGF-ⅠR单克隆抗体阻断IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ与IGF-ⅠR结合，阻滞HT-29的细胞周期，诱导凋亡。     

人肠癌RKO细胞周期依赖性激抑制因子基因启动子区甲基化状态的研究

目的 探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子(CKIs)家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征.方法 应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂5-Aza-2]-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理肠癌细胞,甲基特异性聚合酶链反应(Methylation-Specific PCR,MSP)、T-A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip、p27/kip启动子CpG岛甲基化状态.结果 未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2基因组DNA胞嘧啶(C)保持不变,这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态;而经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip和p27/kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态.结论 肠癌RKO细胞周期INK4家族(p15ink4b和p16ink4a/CDKN2)基因的启动子区处于异常的高甲基化状态,而KIP/CIP家族(p21/cip和p27/kip)基因未处于高甲基化状态;5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态.     

EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响

目的　了解表皮生长因子 (EGF)和胰岛素样生长因子 (IGF)对体外培养兔关节软骨细胞存活数目和分裂增殖百分数的影响。方法　体外培养兔关节软骨细胞传至第 2代 ,分别以EGF、IGF ,以及二者不同的浓度组合作用于软骨细胞。通过酶联免疫检测仪 (MTT)测定软骨细胞存活数 ,流式细胞仪测定软骨细胞分裂增殖百分数。结果　不同浓度EGF对兔关节软骨细胞存活和分裂增殖均有促进作用 ,作用浓度强度次序为 :10ng/ml>0 1ng/ml>10 0ng/ml。不同浓度IGF对兔关节软骨细胞的存活和分裂增殖均有较强促进作用 ,浓度为 5 0ng/ml时 ,刺激效果最显著。EGF与IGF联合使用时 ,刺激效果优于任何一种因子单独使用 ,而以EGF 10ng/ml和IGF 5 0ng/ml为最佳浓度组合。 结论　EGF和IGF都可促进兔关节软骨细胞存活和分裂增殖 ,但以协同作用效果最佳。     

组织因子途径抑制物-2在肾癌组织中的表达及甲基化

目的 探讨组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)对肾癌侵袭性及细胞凋亡的影响,TFPI-2在肾癌组织中的表达与基因启动子甲基化关系.方法 免疫组织化学、蛋白质印迹、荧光定量RT-PCR检测37例肾癌及11例正常肾脏组织TFPI-2基因表达;TUNEL法检测细胞凋亡;荧光定量甲基化特异性PCR检测TFPI-2基因启动子甲基化.结果肾癌与正常肾脏组TFPI-2蛋白质印迹条带吸光度(A)值分别为0.92±0.36、1.61±0.13;2组TFPI-2 mRNA相对表达量为0.0019±0.0011、0.0065±0.0008.随肾癌分期增加,TFPI-2表达下降.肾癌TFPI-2表达1～4级细胞凋亡指数分别为2.41%、3.90%、6.78%、9.57%.随TFPI-2表达增加,肾癌细胞凋亡指数上升.肾癌TFPI-2基因启动子甲基化阳性组与阴性组TFPI-2 mRNA相对表达量分别为0.0015±0.0011、0.0024±0.0009,2组蛋白质印迹条带A值为0.82±0.35、1.04±0.34.基因启动子甲基化阳性组TFPI-2表达低于阴性组.结论 肾癌TFPI-2基因表达与侵袭性呈负相关,促进细胞凋亡;启动子高甲基化是肾癌TFPI-2基因低表达机制之一.