结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变与耐药水平的相关性研究

目的：了解结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)katG、inhA和AhpC基因突变与异烟肼(isoniazid,INH)耐药的相关性。方法：回顾性分析南京市第二医院结核科2019年1月—2021年12月住院肺结核患者MTB培养及耐药基因检测结果。结果：痰或灌洗液MTB培养及菌种鉴定为人型结核分枝杆菌1 712例,INH表型药敏测定,敏感1 308例,耐药404例;其中663例标本同时送检INH耐药基因检测(分子药敏),99例未检出,564例分子药敏阳性,其中敏感390例,突变174例,突变位点为katG315、inhA启动子和AhpC启动子。以表型药敏作为金标准,分子药敏检出INH耐药的灵敏度为92.4%(95%CI:88.5%～96.4%),特异度为96.2%(95%CI:94.3%～98.1%),阳性预测值为91.4%(95%CI:87.2%～95.5%),阴性预测值为96.7%(95%CI:94.9%～98.4%),约登指数88.6%,准确率95.0%。172例表型药敏为耐药的患者检出耐药基因突变159例,分别为katG315突变126次,...     

结核分枝杆菌异烟肼耐药与kat G基因突变的相关性研究

目的 INH异烟肼耐药性的方法.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测50株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因.运用DNA测序和生物信息分析比对进行验证结果.以H37Rv标准株为对照,5株药物敏感株的RFLP分析结果 均与标准株一致,不存在突变;45株耐INH分离株中,31株(68.88%)RFLP分析存在基因异常.结论 西安地区结核杆菌临床分离株对INH耐药与katG基因(尤其是315位密码子)突变有关,PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对INH的耐药性.     

云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征

目的 分析云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征。方法 采用PCR方法对云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌进行katG和inhA基因扩增,并将扩增产物进行基因测序后比对分析。结果 88株异烟肼耐药菌株中,耐药基因与表型药敏结果的符合率为82.95%(73/88),katG和inhA基因突变率分别为75.00%(66/88)和9.09%(8/88)。最为常见的基因突变位点为katG315(67.05%)和inhA-15(7.95%),katG315位点基因突变主要表现为Ser315Thr(59.09%,52/88)。耐多药与单耐异烟肼菌株中katG基因突变比例,差异有统计学意义(χ²=4.190,P=0.041),而inhA基因及katG315、inhA-15位点基因突变比例,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 云南省异烟肼耐药以katG315和inhA-15基因突变为主,MDR菌株中katG基因突变率高于异烟肼单耐,目前基于基因突变的分子检测技术是检测异烟肼耐药的有效手段。     

结核分枝杆菌耐异烟肼基因突变的快速检测

目的：探讨编码过氧化氢-过氧化物酶的katG基因突变与结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药性的相关关系。方法：根据结核分枝杆菌genebank中katG序列，自行设计特异性寡聚核苷酸引物，采用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism，PCR-SSCP)分析和直接测序法(direct sequencing，DS)分析结核分枝杆菌中katG基因突变情况．以H37，Rv标准株为对照。结果：所有23株敏感菌均未有SSCP结果异常；35株耐药菌中，有2株(5．7％)katG基因扩增阴性，且发生在高度耐药菌中．进一步分析发现，SSCP法突变检出23株(65．7％)，测序法突变检出24株(68．6％)，符合率为95．8％(23／24)．结论：参照测序法对耐药菌突变序列的分析结果，PCR-SSCP敏感、特异，可快速检测结核分枝杆菌katG耐药基因突变，有利于耐药结核分枝杆菌耐药性的快速检测。     

结核分枝杆菌耐药基因突变位点对异烟肼体外最小抑菌浓度的影响

目的 探讨结核分枝杆菌(Mtb)耐药基因突变位点对异烟肼(INH)体外最小抑菌浓度(MIC)的影响.方法 利用基因芯片法筛选耐INH人型Mtb菌株,得到inhA-15(C-T)突变株20株、KatG315(G-C)突变株46株,另筛出非突变株32株.采用罗氏培养法对菌株进行复苏,并进行梯度浓度INH敏感性试验,了解INH对不同菌株的MIC.结果 INH对inhA-15(C-T)突变菌株的MIC为(0.375±0.079)μg/ml,对KatG315(G-C)突变菌株的MIC为(5.757±4.060)μg/ml,对无突变菌株的MIC为(0.061±0.050)μg/ml,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).3株无突变菌株表现为低度耐药,inhA-15(C-T)突变组中有1株表现为敏感,其余表现为耐药,KatG315(G-C)突变菌株均表现为耐药.结论 基因芯片筛选的MtbinhA-15(C-T)和KatG315(G-C)突变株均对INH存在不同程度的耐药,临床可根据不同突变位点菌株的耐药结果初步判断Mtb对INH的耐药性.     

广西百色地区结核分枝杆菌异烟肼耐药基因特征分析

目的：分析百色市地区结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因 KatG 、inhA 的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测异烟肼耐药性,提取耐药菌株 DNA ,PCR 扩增耐药结核分枝杆菌 katG 、inhA 基因序列并分析异烟肼耐药相关基因突变特征。结果分离培养出98例结核分枝杆菌,34株对异烟肼耐药,耐药率为36．7％,耐药菌株 KatG 基因突变率为44．1％（15／34）,其中315位点突变率为66．7％（10／15）,出现两个新的突变位点为279（4／15）和427（1／15）。 inhA 5位点突变率为13．3％（2／15）,inhA 16位点突变率为6．7％（1／15）,3株均为 katG 和inhA 联合突变。结论百色地区耐异烟肼结核分枝杆菌耐药性产生与 katG 和 inhA 基因突变相关,检测本地区结核分枝杆菌katG 和 inhA 基因突变可预测结核分枝杆菌对异烟肼的耐药性。     

结核分枝杆菌对于异烟肼耐药的分子机制研究进展

<正>我国耐药结核病疫情严重,一线抗痨药物异胭肼(INH)作为DOTS(直接督导下短程化疗)战略中重要组成药物已被广泛应用于临床,而长期应用异胭肼可诱导结核分枝杆菌的基因变异,使异胭肼耐药性大幅提高。研究表明结核分枝杆菌中的过氧化氢酶-过氧化物酶(katG)、烯酰脂酰载体蛋白还原酶(inhA)、β-酮酰基酰基运载蛋白合成酶(kasA)、烷基     

温州市耐多药/利福平耐药结核分枝杆菌耐药基因突变及特征分析

目的：通过全基因组测序（WGS）分析温州市耐多药/利福平耐药结核分枝杆菌（MDR/RR-MTB）的耐药情况,为耐药结核病的防治提供参考依据。方法：收集2021年1月至2022年9月温州市中心医院收治的54例MDR/RR-TB患者的菌株与临床资料,对菌株进行WGS。分析菌株对15种抗结核药物的耐药情况,同时绘制耐药情况弦图,以及准广泛耐药结核（Pre-XDR-TB）与广泛耐药结核（XDR-TB）菌株耐药情况热图。结果：54例患者中,男性占75.93%,>45岁占50.00%,温州本地户籍占83.33%,无固定职业占92.59%,治疗类型中复治占40.74%。患者性别（男、女）间,年龄（<30、30～45、>45岁）间,户籍（本地、外地）间,职业（无固定职业及体力劳动者、非体力劳动者）间比较差异有统计学意义（P<0.05）,初治与复治比例比较差异无统计学意义（P>0.05）。54株菌株对药物的耐药率从高到低依次为利福平（100.00%,54/54）、异烟肼（83.33%,45/54）、链霉素（50.00%,27/54）、乙胺丁醇（38.89%,21/54）、吡...     

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展

本文就报道的结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因katG、inhA、ahpC、kasA、ndh、OxyR-ahpC、mabA-inhA、furA-katG、fabG-inhA、efpA、ini (A,B,C)及其突变位点进行综述.     

痰中耐药结核分枝杆菌katG基因的快速检测及异烟肼耐药机制研究

目的快速检测痰中耐药结核分枝杆菌katG基因及了解耐异烟肼的分子机制。方法用PCR方法直接从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增katG基因片段，对扩增获得的katG基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、多耐药但对异烟肼敏感、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到katG基因。从临床分离菌株中随机扩增药敏试验证实的耐多药3株，全耐、包括对异烟肼耐药的多耐、对异烟肼敏感的多耐药、全敏感及H37Rv标准结核分枝杆菌株各1株，均扩增获得273bp片段，序列测定比较发现，2株耐多药菌、1株全耐菌及包括异烟肼耐药的多耐药菌株均检测有katG基因点突变，突变位点均为第2066位碱基C突变为G，1例MDR-TB、全敏感株、对异烟肼敏感的多耐药菌株和标准株均无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌katG基因及其突变，结核分枝杆菌对异烟肼的耐药性与katG基因点突变有关，但可能还存在其它值得探讨的机制。     

某地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变特征分析

目的了解深圳地区结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼的耐药相关基因的突变特点。方法 60株结核分枝杆菌临床分离株通过全自动快速分枝杆菌培养鉴定系统(BACTEC-MGIT960)进行鉴定和药敏分析。在这60株菌株中,针对包括利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因和异烟肼耐药相关位点katG315、inhA-15、kasA269、kasA312进行PCR扩增,并将扩增产物T-A克隆后进行测序。结果在60株结核分枝杆菌临床分离株中,检出利福平耐药株45株,敏感株15株;异烟肼耐药株41株,敏感株19株;利福平和异烟肼同时耐药的有14株。在45株利福平耐药株中,rpoB基因RRDR突变发生率为91.1%(41/45),共检测到12种突变形式,主要突变位点在531、526、516、533,以Ser531Leu突变最常见,占rpoB发生基因突变株的51.2%(21/45)。在41株异烟肼耐药株中,katG315位点有29株发生突变,包括28株katG315(AGC-ACC)和1株katG315(AGC-AAC)突变,突变发生率为70.7%(29/41);inhA-15位点有9株发生突变,均为(C-T)突变,突变发生率为21.95%(9/41)。kasA基因未发现常见突变形式。结论深圳地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变位点与国内外研究基本一致,但各位点频率有所不同。     

肺结核患者结核分枝杆菌利福平基因突变特征及耐药情况

目的 探讨肺结核患者当中的结核分枝杆菌利福平基因发生突变的特征,同时分析其耐药情况,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。 方法 选取2016年6月—2018年12月杭州师范大学附属医院收治的肺结核患者532例,依据其痰液中的结核分枝杆菌耐药性分为耐药株(218株)及敏感株(314株)。测定2组菌株的rpoB基因序列及最低抑菌浓度(MIC)值水平。 结果 218株耐药菌株中180株为单重突变耐药菌株,rpoB基因结构分析发现,发生比率最高的突变密码子分别为526位(13.2%)、531位(74.4%)。206株(94.5%)耐药菌株出现至少1个突变位点,且均位于耐利福平决定区(RRDR),12株(5.5%)耐药菌株突变位点在RRDR之外。有4株耐药菌株在RRDR之内发生同义突变,4株耐药菌株在RRDR之外发生同义突变。H37Rv密码子未发生任何突变。有8株敏感菌株发生同义突变在RRDR之外。单重突变菌株的RIF平均MIC值水平为(47.34±2.04)μg/mL,显著低于多种突变菌株平均MIC值水平[(118.24±3.95)μg/mL,t=107.636,P<0.001]。526单密码子平均MIC值水平与531单密码子突变菌株的MIC值水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。多重密码子突变菌株的MIC值水平为(116.03±5.06)μg/mL高于单重密码子平均MIC值水平[(47.08±1.31)μg/mL,t=85.530,P<0.001]。 结论 利福平耐药性机制可能与rpoB基因的起始端531位、526位等突变相关,rpoB基因序列可用于预测结核分枝杆菌中的利福平耐药情况及表型。      

结核分枝杆菌链霉素耐药基因突变特征分析

目的 了解广东地区链霉素耐药结核分枝杆菌rpsL、rrs基因突变特征。方法 对137株链霉素耐药、166株链霉素敏感的结核分枝杆菌临床分离株应用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增rpsL、rrs基因片段,并进行测序、分析比对。结果 137株链霉素耐药菌株中, 118株存在rrs或者rpsL基因突变,突变率86.13%;其中92株存在rpsL基因突变（突变率为67.15%）,主要分布在43位氨基酸（70株）与88位氨基酸（20株）,其中43位氨基酸突变类型为K→R（AAG→AGG,49.64%）和K→T（AAG→ACG,1.46%）,88位氨基酸突变类型为K→R（AAG→AGG,13.14%）、K→T（AAG→ACG,0.73%）和K→Q（AAG→CAG,0.73%）,并有2株存在39、43位氨基酸的联合突变,即T→T（ACC→ACT）联合K→T（AAG→ACG）突变（1.46%）; 47株存在rrs基因突变（突变率为34.31%）,包括8种核苷酸突变,主要分布在1401位A→G（13.14%）、514位A→C（8.76%）、517位C→T（6.57%）,2株存在514、1401位核苷酸A→C;A→G的联合突变;15株存在rpsL与rrs基因的同时突变;166株链霉素敏感菌株中,7株存在rpsL基因突变,13株存在rrs基因突变。结论 广东地区链霉素耐药结核分枝杆菌株的rpsL、rrs基因突变具有其自身特点,存在地域差异。     

无锡地区2010-2012年结核分枝杆菌对异烟肼耐药状况分析

［摘要］ 目的：了解无锡市2010~2012年MTB对INH耐药状况,为防治提供参考。方法：2010年1月~2012年12月于本院就诊的肺结核患者,临床分离株培养鉴定为MTB菌株采用绝对浓度法进行INH耐药性检测,分析MTB对INH的耐药情况。结果：2010~2012年无锡地区MTB对INH耐药性保持在一个相对稳定的较低水平;MTB对INH耐药率与INH的浓度有关,MTB对高浓度INH耐药率明显较低浓度INH为低。结论：INH仍可作为抗结核的一线药物,临床选择INH治疗时,尽可能选择高浓度给药,这样可提高疗效,减少耐药性产生。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药机理及其耐药突变检测方法

近年来，结核病死灰复燃，已成为世界三大传染病之一。除了爱滋病的流行、卡介苗的预防效果不佳等因素外，结核耐多药菌株的产生是该病流行加剧的主要原因^[1]。作为标准化疗的一线药物，利福平和异烟肼在结核病的治疗中发挥了重要的作用。然而，由于对这两种药物耐药株的产生使其联合治疗的有效率降低到77％^[2]。快速、准确的检测菌株的耐药情况不仅有助于选择最适合的治疗方案，继而提高治疗效果，而且有助于阻止耐药菌株的传播，因而具有非常重要的意义。     

耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG、inhA基因的突变

目的 探讨耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG与inhA基因突变的特征,为临床选择抗结核药物治疗提供实验室参考。方法 回顾性分析2015年1月1日-2017年1月1日在上海交通大学附属同仁医院海南分院的260例患者标本,对213例进行结核分枝杆菌分离培养,对47例进行博奥芯片法检测,再对213例培养所得菌株进行博奥芯片检测,对博奥芯片检测的47例痰标本进行结核分枝杆菌分离培养;对101株结核分杆菌进行katG与inhA基因检测。结果 培养法和博奥芯片结核分枝杆菌检出率分别为36.6%（78/213）和48.9%（23/47）;培养法和博奥芯片耐多药结核分枝杆菌检出率分别为41.0%（32/78）和47.8%（11/23）;博奥芯片法和比例法耐异烟肼符合率98.7%(77/78);男性结核分枝杆菌阳性率45.9%高于女性阳性率29.2%;检测katG基因和inhA基因,3个基因区域都发生突变,突变发生率大小依次为katG315（AGC→ACC）密码子(32株,54.2%)、katG315（AGC→AAC）密码子(16株,27.1%)、inhA-15（C→T）(10株,16.9%)。24株(23.8%,24/101)对异烟肼无突变但对利福平发生突变;43株也同时耐利福平(42.6%,43/101)。突变频率较高的突变位点是315,突变频率为81.4%(48/59),1株(1.7%,1/59)为双位点联合突变且突变频率最低。结论 结核分枝杆菌katG和inhA基因突变与耐INH相关,这为临床及时准确诊断、及早使用抗结核药物联合治疗提供了帮助。     

结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒诊断结核分枝杆菌耐药效果研究

目的 评价结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒（GenoType MTBDRplus VER2.0,简称MTBDRplus 2.0）检测利福平和异烟肼耐药的灵敏度和特异度等效能指标,为提高结核分枝杆菌耐药性检测水平提供依据。方法 收集2022年1—12月云南省32个县（市、区）级结核病定点治疗医院分离培养的阳性菌株,经MTBDRplus 2.0检出结核分枝杆菌880株,进行最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）法药敏试验检测。结果 以MIC法为金标准,MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药的灵敏度为67.69%,特异度为98.40%,阳性预测值为77.19%,阴性预测值为97.45%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测异烟肼耐药结果一致性中等,Kappa为0.701(P<0.001);检测利福平耐药的灵敏度为87.80%,特异度为99.40%,阳性预测值为87.80%,阴性预测值为99.40%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测利福平耐药结果一致性较好,Kappa为0.872(P<0.001)。MTBDR...     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因型

目的研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因突变。方法根据结核分枝杆菌katG基因序列设计探针并制作DNA芯片,用四甲基罗丹明标记的引物扩增结核分枝杆菌katG基因突变热点的片断,与DNA芯片杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(pdymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序法为对照。结果153株结核分枝杆菌临床分离株中30株异烟肼敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同,123株异烟肼耐药株中有85株检测到katG基因突变,占69.1%(85/123)。其中83株为315位密码子AGC→ACC突变,2株为315位密码子AGC→AAC突变,该突变与PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果一致;余38株未检测到突变,经测序证实其中1株PCR-SSCP有不同突变的为279位密码子GGC→GAC突变,因芯片上未点该位点的探针,所以杂交结果为阴性。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐异烟肼分离株的katG基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

异烟肼诱导致单耐异烟肼结核分枝杆菌假定药物外排泵基因表达量变化的初步研究

目的观察异烟肼诱导致单耐异烟肼结核分枝杆菌假定药物外排泵基因表达情况,并探讨导致该基因高表达的原因。方法选取30株单耐异烟肼结核分枝杆菌分离株、20株全敏结核分支杆菌分离株和H37Rv(标准对照),对不同菌株进行无异烟肼与亚抑菌异烟肼的诱导培养,采用Real-time PCR技术检测27个假定外排泵基因表达量的变化,并且依据2-ΔΔCT进行计算假定药物外排泵基因的表达差异倍数。结果 30株单耐异烟肼结核分枝杆菌分离株中18株最小抑菌浓度(MIC)为2.0μg/m L(14株kat G 315 AGC-ACC突变,4株无突变),8株MIC为1.0μg/m L[4株kat G 315 AGC-ACC突变,4株inh A(-15)C-T突变],4株MIC为4.0μg/m L[3株kat G 315AGC-ACC,1株ahp C(-88)G-A突变],20株全敏结核分枝杆菌分离株无突变。27个假定药物外排泵基因中有11个基因呈现高表达,主要体现为Rv1258c、Rv2265、Rv0849、Rv0191、Rv1819c、Rv3239c、Rv2209、Rv2936、Rv2937、Rv1146、Rv2938c,株数分别为5、4、4、3、3、3、2、2、2、1、1株。结论临床中Rv1258c、Rv0849以及Rv2265等相关基因均可能导致结核分枝杆菌对异烟肼的假定药物外排泵基因表达,且异烟肼会导致其外排泵基因的高表达。