睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

目的 探讨局部应用睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法 ３４只大鼠分为４组,１￣３组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入等渗盐水对照。术后１,３,４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行示踪检查。结果 ＣＮＴＦ治疗组术后１,３,４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对     

周围神经损伤的再生与修复的哲学启示

简述周围神经损伤及再生因素的多样性和再生机制的复杂性及修复方法的多样性。分析了当前影响周围神经再生与修复研究进展的原因：（1）研究缺乏系统性;（2）还原论的研究思维在研究中占主导地位,缺乏整体性思考。周围神经再生与修复应在系统方法和原则指导下,依靠科学技术,走基础和临床、学科与学科结合的研究道路。     

坐骨神经切断对大鼠脊髓背根节NGF和BDNF表达的影响

目的:探讨切断坐骨神经对成年SD大鼠背根节NGF和BDNF表达的影响。方法:用10只成年SD大鼠,切断一侧坐骨神经,术后存活3d,取手术侧和非手术侧的背根节,用NGF和BDNF的cRNA探针进行常规原位杂交染色。观察该两因子mRNA阳性反应产物在背根节的分布和变化。用计算机图像分析系统,测量坐骨神经切断后手术侧和非手术侧的100个阳性反应神经元NGF和BDNF的mRNA阳性反应神经元的平均灰度,以反映NGF和BDNF相对含量。结果:在背根节中可见NGF和BDNF的mRNA的阳性神经元,阳性反应产物星兰色位于细胞质。相比之下,呈NGF的mRNA阳性反应神经元的数量较少。手术侧NGF和BDNF的平均灰度值(82.3±3.4和80.2±5.4)较非手术侧的平均灰度(101.3±6.5和109.5±2.4)降低,表明手术侧NGF和BDNF的mRNA较非手术侧者明显增加,p<0.01。结论:提示坐骨神经切断可促进背根节NGF和BDNF的mRNA的表达增加,NGF和BDNF可能在周围神经损伤后的修复反应中具有重要作用。     

周围神经损伤后远侧段神经慢性变性对轴突再生的影响

周围神经损伤是临床上常见的神经外科疾病之一,患者常伴有不同程度的运动功能障碍,严重影响其生存质量及生活质量,即使显微外科手术取得较大的进步,而周围神经的修复治疗目前尚不理想,更多的动物与人周围神经损伤研究发现,远端神经慢性变是影响轴突再生的主要因素,而施万细胞功能变化在失神经萎缩中起到关键作用［1－2］,讨论施万细胞神经慢性变对周围神经损伤的影响,并进一步防治施万细胞慢性变,进而促进周围神经的再生。     

大鼠自体神经移植与外周神经挤压再生模型脊髓背角c-fos表达的比较研究

目的建立大鼠外周神经挤压神经再生模型和大鼠外周神经自体神经移植神经再生模型,观察对比各模型神经恢复过程中机械痛觉超敏的变化及脊髓背角c-fos表达的改变,探讨两种神经再生模型中神经再生与神经性疼痛的联系。方法雄性Wistar大鼠60只随机均分成3组,A组为坐骨神经挤压模型组;B组为自体神经移植模型组;C组为假手术组。分别制成模型后,术后18d起检测机械刺激阈值及c-fos表达计数。结果A、B组各项指标与C组比较有显著差异;A组各指标与B组有显著差异。结论两种模型再生神经生长进入去神经支配区域时,均出现支配区域的痛觉超敏和疼痛相关行为,神经性疼痛的发生时间、强度以及恢复均有不同,并和神经再生情况相关,提示神经性疼痛是评估神经功能恢复的一个重要的参数。     

miR-138-5p通过调控Survivin表达对食管鳞癌细胞活性的影响

目的 探究miR-138-5p通过调控Survivin表达对食管鳞癌细胞活性的影响。方法 将实验分为W组（无转染组）、C组（食管鳞癌细胞转染NC组）、Z组（转染miR-138-5p组）。RT-PCR检测Survivin、miR-138-5p水平;Western blot检测Notch1、HIF-1α、MMP-9的表达;Transwell小室测迁移能力;CCK-8检测增殖能力;流式细胞仪检测凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测miR-138-5p与Survivin靶向关系。结果 miR-138-5p在食管鳞癌组织中的水平低于癌旁组织（P<0.05）;食管鳞癌组织中Survivin水平较癌旁组织高（P<0.05）。miR-138-5p、Survivin在W组与C组中的水平较为接近（P>0.05）;与C组相比,Z组miR-138-5p的水平有所上升、Survivin水平有所下降（P<0.05）,由此可看出,miR-138-5p转染成功。W组与C组中Notch1、HIF-1α、MMP-9水平较为接近（P>0.05）;与C组相比,Z组中Notch1水平有所升高、HIF-1α、MMP-9水平有所下降（P<0.05）。W组食管鳞癌细胞迁移数量（282.67±27.65）与C组细胞迁移数量（279.31±28.22）相差较小（P>0.05）;与C组相比,Z组的迁移数量（76.57±6.71）有所降低（P<0.05）。W组与C组在各时间点的OD值较为接近（P>0.05）;Z组在各时间点的OD值均较W组与C组低（P<0.05）。W组食管鳞癌细胞凋亡率（2.47±0.11）%与C组食管鳞癌细胞凋亡率（2.45±0.13）%较为接近（P>0.05）;Z组食管鳞癌细胞凋亡率（13.32±1.23）%高于W组与C组（P<0.05）。双荧光素梅报告基因检测实验结果显示Survivin′-UTR-WT在miR-NC组表达水平为（0.79±0.09）、miR-138-5p组表达水平为（0.59±0.07）,组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）;Survivin′-UTR-MUT在miR-NC组（0.91±0.11）及miR-138-5p组（1.02±0.12）表达无显著差异（P＞0.05）。与食管癌组比较,miR-138-5p组大鼠移植瘤的瘤体积、瘤质量降低,抑瘤率升高（P<0.05）。结论 miR-138-5p可通过降低Survivin的表达,抑制食管鳞癌细胞的增殖及迁移,并促进其凋亡。     

miR-218-5p抑制NRAS表达调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡

目的 探究miR-218-5p靶向调控NRAS基因表达在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 qRT-PCR和Western blot分别检测组织和细胞中miR-218-5p和NRAS的表达。取NSCLC细胞A549进行分组和转染：Blank组、NC组、miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组、si-NRAS组、oe-NRAS组、miR-218-5pmimic+oe-NC组和miR-218-5pmimic+oe-NRAS组。荧光素酶报告实验验证miR-218-5p与NRAS基因的靶向关系。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-218-5p在NSCLC组织及NSCLC细胞株中呈低表达,而NRAS呈高表达（均P<0.05）。与Blank组、NC组比较,miR-218-5p mimic组NSCLC细胞增殖活力降低,凋亡率上升（均P<0.05）;miR-218-5p inhibitor组NSCLC细胞增殖活力增高,凋亡率下降（均P<0...     

放疗对血清miR-150-5p和miR-23a-3p表达水平的影响

目的 通过采集肿瘤患者放疗前后外周血,探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响,以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法 以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法,检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化,分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果 放疗后,患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t=4.97,Z=-2.77,P<0.05)。不同的肿瘤类型中,乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t=3.47、2.47、2.87,P<0.05),消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z=-1.99,P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05),而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t=2.04、 -3.34、-2.29,P<0.05)。结论 放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达,其有作为辐射生物学标志物的潜力。     

膝痹宁通过CPT1调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎疼痛的效应机制

目的 探讨膝痹宁通过肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1)调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎(KOA)疼痛的效应机制。方法 提取大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞(FLS),采用CCK-8法筛选膝痹宁冻干粉干预FLS细胞的合适作用浓度。将FLS细胞分为对照组、KOA组、膝痹宁组,后两组采用5μg/ml脂多糖(LPS)诱导KOA炎症细胞模型,膝痹宁组加入100μg/ml膝痹宁,培养24 h。采用Real-time PCR和Western blotting检测CPT1、肉碱/有机阳离子转运体1(OCTN1) mRNA和蛋白的表达;采用试剂盒检测CPT1、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;使用2?,7?-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧(ROS)水平。提取大鼠背根神经节(DRG)神经元细胞,采用βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色进行鉴定。将收集的各组FLS上清加入DRG神经元中干预24 h,分别设为对照组、KOA组、膝痹宁组,采用Real-time PCR和Western blotting检测DRG神经元瞬时受体电位A1离子通道(TRPA1)m...     

Assessing the suitability of miRNA-142-5p and miRNA-541 for bloodstain deposition timing

A recent proof-of-concept pilot study proposed using microRNA (miRNA) markers for time of death determination. The markers – miRNA-142-5p and miRNA-541, were reported to show considerable expression differences in vitreous humor between individuals who died during the day or night. Here, we investigated whether these miRNA markers show the same diurnal expression pattern in blood, which would make them useful for estimating bloodstain deposition time to allow molecular alibi testing for forensic casework. We analyzed venous blood samples collected from 12 healthy individuals every 4 h during the 24 h day/night period under controlled sleep-laboratory conditions. MiRNA-142-5p normalized against miRNA-222 showed no statistically significant expression differences between blood samples collected during daytime and nighttime (one-way ANOVA p = 0.81), and also no statistically significant rhythmicity during the 24 h day/night period (cosine fit for all individuals p > 0.05, averaged data p = 0.932). MicroRNA-541 amplification in blood was above the 34-cycle threshold applied in the study, indicating too low quantities for obtaining reliable data. Overall, we conclude that the two miRNA markers previously suggested for time of death determination in vitreous humor are not suitable for estimating the deposition time of forensic bloodstains. Future studies may find out if miRNA markers with significant diurnal expression patterns can be identified and how useful they would be for forensic trace deposition timing.     

MiR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1表达增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制。方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达。结果 与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高（t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05）;细胞活力增加（t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05）;与MZ-CRC-1细胞（1.00±0.06）相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达（0.26±0.03）显著降低（t=19.107,P<0.05）;与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加（t=5.156、6.005、9.649,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=8.659,P<0.05）。与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低（t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05）,细胞凋亡率升高（t=6.362,P<0.05）;过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达（t=9.325、10.614,P<0.05）;与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高（t=6.700,P<0.05）;与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低（t=7.073,P<0.05）。结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1的放射敏感性。     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球促周围神经再生作用的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是一种具有广泛生物学活性的肽类生长因子，对神经外胚层和中胚层的多种细胞具有促增殖和分化作用，在神经创伤修复这一研究领域中具有广阔的应用前景。但bFGF对热和酸均不稳定，在体内的半衰期为3～5min，全身应用则会被快速灭活而难以发挥其有效作用，局部穿刺给药对深部神经损伤难以保证每次释药部位的准确性，且不适宜长期用药。     

In vivo assessment of peripheral nerve regeneration by diffusion tensor imaging

Purpose

To evaluate the sensitivity of diffusion tensor imaging (DTI) in assessing peripheral nerve regeneration in vivo. We assessed the changes in the DTI parameters and histological analyses after nerve injury to examine degeneration and regeneration in the rat sciatic nerves.

Materials and Methods

For magnetic resonance imaging (MRI), 16 rats were randomly divided into two groups: group P (permanently crushed; n = 7) and group T (temporally crushed; n = 9). Serial MRI of the right leg was performed before the operation, and then performed at the timepoints of 1, 2, 3, and 4 weeks after the crush injury. The changes in fractional anisotropy (FA), axial diffusivity (λ_∥), and radial diffusivity (λ_?) were quantified. For histological analyses, the number of axons and the myelinated axon areas were quantified.

Results

Decreased FA and increased λ_? were observed in the degenerative phase, and increased FA and decreased λ_? were observed in the regenerative phase. The changes in FA and λ_? were strongly correlated with histological changes, including axonal and myelin regeneration.

Conclusion

DTI parameters, especially λ_?, can be good indicators for peripheral nerve regeneration and can be applied as noninvasive diagnostic tools for a variety of neurological diseases. J. Magn. Reson. Imaging 2011;. © 2011 Wiley‐Liss, Inc.

     

他克莫司和雷帕霉素在异体神经移植中的研究近况

周围神经的长段缺损需经神经移植修复,而异体神经修复缺损易被排异。近年来,新型免疫抑制剂他克莫司(Tacmlimus)FK506和雷帕霉素(rapamycin)在异体神经移植中的应用取得了较好的效果。笔者就国内外相关文献进行了综述。     

成肌细胞自体移植对大鼠神经植入术后终板再生及神经肌肉功能恢复的影响

目的 观察成肌细胞自体移植对大鼠神经植入术后终板再生及神经肌肉功能恢复的影响,为成肌细胞在神经再生领域的应用提供实验依据,并为进一步将其作为转基因载体研究打下基础. 方法 SD雄性大鼠20只按随机数字表法分为实验组和对照组,每组10只.建立大鼠腓肠肌神经植入术模型,实验组将原代培养的成肌细胞注射到神经植入术局部,对照组只注射同体积不含成肌细胞的培养基,通过胫神经功能指数(tibial functional index,TFI)测定、神经电生理检测、病理组织学检测,观察成肌细胞对神经植入术后神经肌肉功能恢复的影响. 结果 实验组胫神经功能恢复明显快于对照组(P＜0.01);实验组大鼠腓肠肌神经电生理峰峰值(peak to peak value,PPV)、曲线下面积(area under the curve,AUC)、再生终板数量较对照组差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 成肌细胞自体移植能使大鼠神经植入术后的神经肌肉功能恢复明显加快,再生终板数量增加.     

环孢素A抑制大鼠轴索损伤后血清IL-1β的表达

目的 观察大鼠轴索损伤后血清IL-1β的表达规律,以及环孢素A(CsA)对其表达的影响,探讨CsA的神经保护机制.方法 75只健康雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(A组)5只、单纯视神经牵拉伤组(B组)35只、CsA处理组(C组)35只,B、C组又分为牵拉伤后或CsA治疗后1,3,6,12 h、1,3,7 d共7个观察时相点,不同时相点各5只大鼠.光镜下观察视网膜神经节细胞(RGCs)和轴索形态学变化,并采用放射免疫方法(平衡法)检测大鼠血清中IL-1β的含量.结果 (1)B组大鼠右侧视神经牵拉伤后3 d,RGCs明显稀疏;伤后7 d,神经纤维排列紊乱,分布稀疏.C组相应的病理变化明显减轻.(2)B组大鼠伤后3,6,12 h、1 d血清中IL-1β浓度明显高于A组,6 h达到高峰,随后逐渐下降,3 d后降至A组水平.C组大鼠血清IL-1β浓度变化规律与B组相似,3,6,12 h、l d血清中IL-1β浓度明显低于B组,但6,12 h、1 d仍高于A组.结论 IL-1β长时间过度表达可能参与了轴索损伤后的继发性病理变化;CsA可能通过减轻轴索损伤后的炎症反应对轴索损伤起保护作用.     

分化抑制因子1促进血管内皮细胞增殖的机制研究

目的探讨分化抑制因子1(Id1)促进血管内皮细胞增殖的机制。方法构建p21启动子介导的报告基因p21-Luc,分别转染Eahy926细胞、Id1抑制(siId1细胞)或诱导表达(pcDNAId1)细胞、E2A抑制或诱导表达细胞,检测荧光素酶报告基因活性。提取Eahy926细胞总蛋白,分别加入Id1抗体、E12抗体和E47抗体,免疫共沉淀,以Eahy926细胞作为对照,Western blotting检测Id1、E12和E47的表达情况。分别转染siId1、pcDNAId1载体于Eahy926细胞,与正常Eahy926细胞同步化培养48h后,行细胞染色,用流式细胞仪检测细胞G1期的DNA含量。结果与Eahy926细胞比较,siId1细胞、pcDNAE2A细胞p21基因启动子介导的荧光素酶活性增强,p21蛋白表达增高(P<0.05,P<0.01);pcDNAId1细胞、siE2A细胞p21基因启动子荧光素酶活性降低,p21蛋白表达减弱(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,Id1免疫共沉淀细胞裂解物中同时检测到E47/E12蛋白,E47/E12沉淀物中也能检测到Id1。与正常Eahy926细胞比较,转染siId1的...     

扩散张量成像在周围神经变性及再生中的研究进展

周围神经损伤后,其远端轴突和髓鞘发生沃勒变性,如何评估轴索再生、残端修复和神经支配区功能重建是临床研究的难题。目前,临床上主要通过神经电生理检查判断神经损伤程度,但对评估神经完全损伤及近端病变缺乏敏感性及特异性。MR扩散张量成像(DTI)能够无创性定量评估周围神经变性及再生过程,联合扩散张量纤维示踪技术(DTT)可追踪神经纤维束的方向、排列、髓鞘脱失等信息。就DTI技术评估周围神经损伤变性及再生的研究进展予以综述。     

尿液miR-17-5p检测对膀胱癌的诊断价值

目的探讨膀胱癌患者尿液中微小核糖核酸17—5p（miR-17-5p）表达及其诊断价值。方法运用荧光定量PCR检测miR-17-5p在膀胱癌患者尿液中的表达水平,采用△△CT方法计算膀胱癌患者与正常人尿液中miR-17．5p表达量的比值,结合术后病理参数,统计分析miR-17-5p与临床病理资料的相关性。结果膀胱癌患者尿液中miR-17-5p表达较正常人明显升高。26例膀胱癌患者中18例（69．2％）的miR-17-5p表达较正常人显著升高,且与肿瘤大小和恶性程度相关,肿瘤越大、恶性程度越高,尿液中miR-17-5p的表达量越高。结论尿液中高表达miR-17—5p可能成为诊断膀胱癌的重要标志物,并与膀胱癌的临床病理密切相关,可能对膀胱癌的诊断提供新的思路。