HBV－DNA套式一次PCR方法的建立

应用乙型肝炎病毒ＤＮＡＣ基因区的一对外引物（ＨＢＣ＿１和ＨＢＣ＿２，扩增片段长度为５６６ｂｐ）及一对内引物（ＨＢＣ＿３和ＨＢＣ＿４，扩增片段长度为３０１ｂｐ）对不同稀释度的ＨＢＶ－ＤＮＡ（ａｄｒ亚型）进行套式一次ＰＣＲ扩增，结果表明灵敏度可达到１０ａｇ水平。此方法快速、简便、灵敏、材异，与分子杂交的灵敏度相当。     

用多重及套式PCR同时检测血清中的HBV和HCV方法的建立

首次应用多重及套式ＰＣＲ技术同时检测人血清中的ＨＢＶ和ＨＣＶ。将抽提的ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ在含ＡＭＶ逆转录酶、ＴａｑＤＮＡ多聚酶以及ＨＢＶ和ＨＣＶ外套引物的ＰＣＲ缓冲引物的ＰＣＲ缓冲液中进行逆转录后连续进行ＰＣＲ扩增，以第一轮扩增产物为模板，在含ＨＢＶ和ＨＣＶ内套引物的ＰＣＲ反应体系中进行第二轮扩增，产物经电泳后，以ＤＮＡ分子量标志物或已知片段做参考，出现５２３ｂｐ和（或）２６０ｂｐ产     

HBV—DNA套式一次PCR方法的建立

应用乙型肝炎病毒ＤＮＡ Ｃ基因区的一对外引物（ＨＢＣ１和ＨＢＣ２，护增片段长度为５６６ ｂｐ）及一对内引物（ＨＢＣ３和ＨＢＣ４，护增片段长度为３０１ ｂｐ）对不同稀释度的ＨＢＶ－ＤＮＡ（ａｄｒ亚型）进行套式一次ＰＣＲ扩增，结果表明灵敏度可达到１０ａｇ水平。此方法快速、简便、灵敏、特异，与分子杂交的灵敏度相当。     

用PCR检测牙科HCV-RNA污染

丙肝病毒(HCV)是通过非肠道或隐性非肠道的途径传播的,检测出抗-HCV抗体就可以确诊人体受HCV感染。抗-HCV的平均流行率在意大利占人口的0.87％,意大利南部的Campania达2％,而且在这个地区的局部范围发现流行率已达4％。一项研究表明意大利9％的急性非甲非乙/丙型肝炎患者仅有证实的危险因素是,过去六个月进行过牙齿治疗。另一项研究显     

实时荧光定量PCR检测斑点热立克次体的方法建立

目的 建立检测斑点热立克次体的群特异性实时荧光定量PCR方法.方法 根据斑点热立克次体外膜蛋白B(ompB)基因序列设计群特异性引物和探针,以克隆的斑点热立克次体ompB基因片段作为模板,在荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量检测法.结果 该方法定量检测标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系,最小检出量小于10个拷贝.用该方法检测斑点热立克次体(立氏立克次体、西伯利亚立克次体、西伯利亚立克次体精河株、康氏立克次体、小蛛立克次体、澳大利亚立克次体、派氏立克次体、扇头蜱立克次体、非洲立克次体、阿斯特罕立克次体、斯洛伐克立克次体、日本立克次体、马赛立克次体、猫立克次体和黑龙江立克次体)DNA样本的结果均为阳性,但检测普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、查菲埃立克体、汉赛巴通体以及其他9种病原菌DNA样本的结果均为阴性.用荧光定量FCR检测立氏立克次体、黑龙江立克次体、西伯利亚立克次体精河株感染BALB/C小鼠脾脏组织DNA,均检出不同水平的阳性结果,结果与感染进程相关.结论 本研究建立的检测斑点热立克次体的实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和群特异性,适合样本中各种斑点热立克次体的快速检测,可用于斑点热的实验室快速诊断和自然疫源地的流行病学研究.     

15种呼吸道病原体的实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立15种呼吸道常见病原体的实时荧光定量PCR检测方法,用于新兵发热病因的快速检测.方法 根据生物信息学分析结果选定15种常见呼吸道病原体的检测靶基因,建立实时荧光定量PCR方法.采用15种病原体的培养物和正常人的基因组对检测方法的敏感性和特异性进行测试,并对健康和发热新兵各50例的咽拭子进行检测.结果 所建立的荧光定量PCR方法的有效检测线性范围为1×102～1×109拷贝/ml,最低检测限为5～50拷贝/ml,敏感性和特异性均较高.在50例发热新兵咽拭子中,24.0%嗜肺军团菌阳性,30.0%乙型流感病毒阳性,24.0%肺炎支原体阳性,8.0%甲型流感病毒阳性,对照组上述病原的阳性率依次为20.0%、6.0%(P<0.05)、22.0%和0.0%,而腺病毒、麻疹病毒、SARS相关冠状病毒、人冠状病毒、流行性腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒H5N1、风疹病毒、猪链球菌、肺炎衣原体和肺炎链球菌均阴性.18例(36%)流感病毒感染者急性期血清IgM和IgG阳性率分别为88.9%(16/18)和72.2%(13/18),在恢复期则分别为16.8%(3/18)和100%(18/18).健康新兵的两次血清抗体检测无临床意义.在咽拭子嗜肺军团菌及肺炎支原体阳性个体,发热期和恢复期血清抗体阳性率分别为8.3%和8.3%、&3%和16.7%.结论 成功建立可同时进行15种呼吸道病原体早期诊断的实时荧光定量PCR方法,该方法检测结果表明此次新兵营集训新兵发热病因以流感病毒感染为主.     

检测人巨细胞病毒的套式PCR法及在妇产科的临床应用

报告了检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，及其在妇产科临床应用的结果。改进了从临床样品中提取ＤＮＡ的方法，优化了套式ＰＣＲ的条件。测得套式ＰＣＲ的扩增倍数为２．９×１０￣９，套式ＰＣＫ／电泳法的灵敏度为４０个ＨＣＭＶ基因组拷贝。临床应用结果表明，孕妇的ＨＣＭＶ感染率很高，母婴间存在ＨＣＭＶ感染的垂直传播关系。胎盘是传播的主要途径，胎盘的屏障功能随妊娠时间的延长而减弱。宫颈分泌物的感染也是母婴间ＨＣＭＶ感染传播的感染源。ＨＣＭＶ感染对胎儿发育的影响，应引起优生优育工作者们的重视。     

副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的 建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法.方法 根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法.结果 以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒.利用阳性质粒建立了定量PCR方法,得到标准曲线y=-4.9197x+58.72,决定系数(R2)为0.9864.此方法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性.对粪便和食物模拟标本进行检测,敏感性均为102cfu/μl.此方法重复性较好,对4种浓度(105、104、103、102cfu/μl)的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct值的变异系数＜2%.结论 建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检测食品和粪便中的沙门菌.     

输血传播病毒-DNA聚合酶链方法的建立及应用

目的：建立输血传播病毒（ＴＴＶ）－ＤＮＡ聚合酶链反应方法并应用于新疆地区不同人群ＴＴＶ感染的检测。方法：根据已报道的ＴＴＶ基因痛列（ＤＤＢＪ序列号：ＡＢ００８３９４）,通过引物设计软件ＳＱＮＣＥ和ＯＬＩＧＯ在其ＯＲＦ１区设计一对ＰＣＲ引物,扩增产生一个３１５ｂｐ的扩增片段,产物经ＢｇⅠⅡ酶切分别产生一个２１９ｂｐ和９６ｂｐ的酶切片段。结果：用建立的ＰＣＲ方法在１５例维存尔族转氨酶升高的非甲－非庚型     

用PCR及Southern杂交方法对HBsAg阴性献血员HBV感染的检测

用ＰＣＲ与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交（ＳＢＨ）方法对７８例ＨＢｓＡｇ阴性献血员进行ＨＢＶ感染检测，结果２份标本经ＰＣＲ后直接在２５４ｎｍ紫外灯下观察就可见到特异扩增带，另有１２份标本经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交后可观察到特异扩增带，总阳性率较原来ＨＢｓＡｇ检测提高１７．９％，说明ＰＣＲ－ＳＢＨ可以区分ＨＢｓＡｇ阴性但仍然存在ＨＢＶ潜伏感染的献血员，使用ＰＣＲ－ＳＢＨ方法检测的ＨＢＶ可以提高输血的安全性。     

新疆北疆猪伪狂犬病毒野毒的PCR检测

根据猪伪狂犬病毒(PrV)非必需糖蛋白gE基因特异引物,建立了针对PrV野毒的PCR检测方法。利用该方法对采自北疆地区部分规模化猪场的92份疑似病料进行了检测,PrV检出率为40.2%(37/92),表明该检测方法敏感性、特异性较高,最低病毒检出量约为0.25pg,可用于PrV野毒感染的快速诊断和流行病学调查。对阳性病料PrV gE基因的特异性序列进行对比分析发现有15个病料发生变异,经DNAMAN分析其同源性高达98.3%,初步判断这些野毒株仍属于同一个基因型。实验结果为了解新疆北疆地区猪伪狂犬病病毒的流行情况提供了理论依据。     

应用不对称PCR法进行表面等离子共振微生物核酸检测

目的通过比较不同方法获取的微生物核酸样本用于表面等离子共振(SPR)传感器检测效果的差异,对不对称PCR法制备核酸单链用于SPR检测效果进行研究。方法分别将经淬火处理和未经处理的不对称PCR、常规PCR产物用于SPR传感器检测,以检测曲线和检测响应为指标对各样本在SPR传感器上的检测效果进行比较。结果实验结果表明不对称PCR可以直接获得核酸单链,较常规PCR方法在SPR核酸检测上具有更好的检测效果:经过淬火处理后不对称PCR产物样本平均折射率(R I)改变为39.33(RU),而相同浓度的普通PCR产物只有10.63(RU);同时在SPR实时检测曲线也可以观察到不对称PCR产物能够产生明显的结合信号,而普通PCR则没有类似信号出现。结论利用不对称PCR方法可以制备直接用于SPR检测的核酸单链,并且在杂交检测效果上明显优于普通PCR方法。     

电阻抗法细菌药物敏感性快速检测装置的研制

目的利用细菌在生长繁殖过程中的代谢产物可使培养基电阻率降低的特性,研制一种电阻抗法细菌药物敏感快速检测装置。方法测量培养基电阻抗,并将细菌在培养期间内取得的阻抗值描记成阻抗曲线图,因正常细菌培养基所产生的阻抗曲线图与在细菌培养基中滴加了抗菌药物所形成的阻抗曲线图形态有明显形态差别,利用这种阻抗曲线的形态差别判断细菌的药物敏感性。结果检测装置大大缩短了细菌药物敏感检测的时间。结论该检测装置对实现医学临床快速药物敏感试验,药敏检测自动化、智能化有一定的实际意义。     

Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立

目的：建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法，为Hendra病的早期诊断提供依据。方法：采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增，并比较两种方法的敏感性。结果与结论：应用常规PCR方法可检测到100fg/μl的含Hendra病毒特异序列的重组质粒DNA，而实时PCR法则可检测到0．1fg/μl的DNA，后者的敏感性比常规PCR法的提高了1000倍，该方法不但操作上更加简便、快速，还可避免交叉污染，适于对Hendra病毒特异序列的检测。     

实时荧光定量PCR检测莫氏立克次体

目的 采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR.方法 依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法.结果 建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.995);该方法能检出＜10拷贝的莫氏立克次体DNA,敏感性为普通PCR的1 000倍.用该方法检测莫氏立克次体DNA,结果为阳性,但是检测其他相关细菌DNA的结果均为阴性.用该方法检测莫氏立克次体感染豚鼠血标本,50%样本检测为阳性,而普通PCR检测结果均为阴性.结论 该实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量莫氏立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊地方性斑疹伤寒.     

水痘并发肺炎的临床分析

目的探讨水痘患者并发肺炎的临床发病情况。方法采用回顾性调查研究方法,对60例水痘患者的临床资料进行分析。结果 60例水痘病人中发生肺炎8例,占13.33%,均为儿童,无成人发生肺炎。结论水痘是儿童常见传染病,多见于年长儿。     

Development of a 13-locus PCR multiplex system for paternity testing

In this study the development of a 13-locus multiplex-PCR system fitting the updated demands for paternity testing in Germany is described. For this purpose an existing multiplex PCR system that allows the simultaneous amplification of eight different STR loci together with the sex-specific locus amelogenin (genRES MPX-2, Serac, Germany) was extended. Whereas some of the primers were taken from the underlying multiplex system, suitable primer sequences were chosen for the STR loci D19S433, TPOX, TH01, D16S539, D5S818, D2S1338 and FGA. Primers of loci resulting in potentially overlapping fragment sizes were labelled with the fluorescent dyes 6-FAM, JOE and NED. Reaction conditions, such as annealing temperature, concentrations of primers and polymerase or buffer conditions were optimised to obtain a robust amplification and reproducible genotype analysis for various sample sources. Full DNA profiles from single source samples were reliably typed from template DNA amounts of as low as 120 pg, suggesting a potential use of this system also in forensic casework analysis. With a mean exclusion chance (MEC) of 99.9989% and a power of discrimination (P_D) of about 1×10¹⁴ (Caucasians), the new multiplex PCR system provides a significant and sensitive system for forensic DNA analysis. On the basis of these studies, a commercial kit system is now provided by Serac (Bad Homburg, Germany, genRES MPX-3).     

南疆绒山羊生长发育规律的研究

本试验运用Log-Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy三种非线性生长发育曲线模型对南疆绒山羊的早期生长发育进行拟合研究。结果表明：三种模型中Log-Logistic模型对南疆绒山羊早期生长发育的拟合效果和预测体重方面效果最佳。分析计算Logistic模型拟合参数,发现拐点体重为8.43 kg,拐点月龄为1.878月。结论：根据Log-Logistic模型建立了南江黄羊的早期体重生长曲线,在拐点月龄（1.878月）以前,必须加强对妊娠母羊的饲养管理、提高营养水平,促进南疆绒山羊羔羊体重最大化提高。     

人尿中6种利尿剂的液相色谱-串联质谱联用检测方法研究

目的:使用液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)技术,为氯拉扎尼(chlorazanil,I)、氯索隆(cicletanine,II)、西氯他宁(chlorxolone,III)、苄氢氯噻嗪(benzylhydrochlorothiazide,IV)、芬喹唑(fenquizone,V)和美替克仑(meticrane,VI)等6种利尿剂建立在人尿中的检测方法并进行方法验证。方法:将尿样用同等体积的5%乙酸铅水溶液沉淀蛋白质并离心后,使用电喷雾电离源的正、负离子切换模式,以多反应监测(MRM)模式进行定性和定量分析。结果:上述利尿剂I-VI的最低检测限(LOD)分别为1、0.1、0.01、1、2和10 ng/m L;线性范围(R2>0.99)分别为3~300 ng/m L、0.3~500 ng/m L、0.03~4000 ng/m L、3~1500 ng/m L、6~600 ng/m L和30~1600 ng/m L;6种药物在低、中和高三个浓度水平的日内变异系数均小于8%,日间变异系数均小于12%,检测的准确度在80%至120%之间;基质效应均在83%~115%范围内。结论:新建方法具有前处理简单、分析速度快、灵敏度高和重现性好等特点,已应用于我们实验室的兴奋剂常规检测中。     

一种检测冠心病的新方法：心电积分图的研究

心电积分图是一种无创性冠心病诊断方法。它通过非线性数学变换,将心电信号转化为一种新的曲线形式,用以检测常规心电图所不能发现的心电异常变化。本文通过软件和硬件研究,利用IBM PC-XT微型计算机和心电图仪实现了心电积分图检测方法,并进行了与核素心脏造影诊断的对比研究。结果表明,心电积分图对冠心病诊断灵敏度为76.9%,特异性为75.0%,心电积分图与核素心脏造影的阳性符合率为95.2%。