核心蛋白聚糖对兔肌腱细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察核心蛋白聚糖(decorin,DCN)对兔肌腱细胞体外增殖和细胞周期的影响,以探讨decorin在肌腱愈合中对肌腱细胞的作用.方法 原代培养兔肌腱细胞,分别加入不同浓度(0.25、1.25、2.5、5μg/ml)的decorin;培养12、24、48 h用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法测定细胞增殖速度;镜下观察低浓度DCN作用24 h后对兔肌腱细胞增殖的影响;低浓度DCN培养24 h后用流式细胞仪检测细胞周期.结果 0.25、1.25、2.5μg/ml浓度decorin作用12 h后对兔肌腱细胞增殖有着减少的趋势,但是24 h后却明显地促进其增殖(P＜0.05),但是48 h后差异不显著.而5μg/ml浓度组作品12 h对兔肌腱细胞增殖有着增加的趋势,24 h后促进增殖作用显著(P＜0.05),48 h后却抑制兔肌腱细胞的增殖.0.25μg/ml低浓度decorin作用兔肌腱细胞24h后镜下观察和流式细胞分析,细胞增殖明显增强,S期增加,PI明显大于对照组(P＜0.05).结论 低、中浓度decorin对兔肌腱细胞的增殖起着先延迟后促进的作用,提示在肌腱愈合中如果在肌腱和腱鞘之间运用DCN,可能起到早期隔离TGF-β对腱鞘成纤维细胞的作用,而后期增强TGF-β对腱内膜细胞的作用,从而促进内源性愈合,减少外源性愈合,达到减少粘连的效果.     

白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制。方法 不同浓度的角质细胞生长因子（KGF）诱导人永生角质形成细胞（HaCaT）,显微镜观察及四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测HaCaT细胞增殖。选出最佳浓度作用HaCaT细胞复制银屑病模型,采用不同浓度白藜芦醇作用HaCaT细胞,计算半抑制浓度（IC50）,根据IC50选出后续实验白藜芦醇的浓度;将银屑病模型细胞分为阴性对照组（30 μg/L生理盐水）,2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇组,阳性对照组（5.0 μg/mL维A酸）及空白对照组（未加任何药物）,MTT法检测各组银屑病模型细胞的增殖,流式细胞术检测各组银屑病模型细胞的凋亡率,Western blotting检测各组银屑病模型细胞Caspase-3、p-ERK1/2、p-P38蛋白的表达。结果 不同KGF浓度组HaCaT细胞0 h、12 h、24 h、48 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）;②不同浓度组的OD值有差异（P <0.05）,40 ng/mL KGF组的OD值高于其他浓度组;③不同浓度组OD值的变化趋势有差异（P <0.05）,40 ng/mL KGF组的OD值从24 h开始明显高于其他浓度组。0 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.0 μmol/L、4.0 μmol/L白藜芦醇作用HaCaT细胞24 h后的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）,白藜芦醇浓度升高OD值降低,白藜芦醇可抑制HaCaT细胞增殖,IC50值约5.3 μmol/L。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）;②各组OD值有差异（P <0.05）,③各组OD值的变化趋势有差异（P <0.05）,从48 h开始,5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇对银屑病模型细胞具有一定的抑制增殖作用。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义（P <0.05）,5.0 μmol/L、7.5 μmol/L的白藜芦醇对银屑病模型细胞有促凋亡作用。5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组与阴性对照组和空白对照组比较,Caspase-3蛋白相对表达量升高（P <0.05）,p-ERK1/2、p-P38蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论 白藜芦醇可能是通过抑制ERK/MAPK和/或P38/MAPK通路发挥作用进而抑制银屑病细胞增殖并促进其凋亡,具体作用机制还有待更深入研究。     

核心蛋白聚糖在肝纤维化形成中的作用

背景：肝纤维化可进展为肝硬化,并破坏肝脏正常结构,从而导致肝功能异常和不可逆肝硬化。本研究以四氯化碳小鼠肝纤维化模型为研究对象,观察外源性核心蛋白聚糖对纤维化形成是否有缓解作用。 方法：5周龄Balb/c小鼠,腹腔注射CCl4 5周建立肝纤维化模型,注射剂量为1ml/kg (CCl4体积:橄榄油体积=1:1),每2天注射1次。检测肝标本中肝纤维化相关分子表达情况。 腹腔注射CCl4三周后,将存活纤维化小鼠随机分为2组（每组6只）,实验组（DCN组）以及纤维化对照组。同时建立5周正常对照组（6只）。每天两次予实验组注入250ug/kg核心蛋白聚糖DCN,对照组注射等量的（PBS NS）溶液。DCN注射2周后,取下三组肝脏标本。取下方叶并将其分成两部分：一部分切成多个小块用于提取组织RNA,检测相关基因表达情况;另外一部分放入福尔马林中用于HE染色、Masson染色以及免疫组化检测相关指标。 结果：外源性小鼠DCN蛋白可缓解四氯化碳诱导的肝纤维化。实验组较对照组肝纤维化程度明显减轻,胶原纤维量明显低于对照组。 结论：本部分实验以小鼠肝纤维化模型为实验对象,自3周开始向实验组注射DCN蛋白,结果表明外源性DCN可以抑制纤维化相关分子的表达,缓解肝纤维化形成。     

核心蛋白聚糖在组织器官纤维化中作用的研究进展

核心蛋白聚糖(DCN)是富含亮氨酸的蛋白聚糖基因家族中一种小分子成员之一,是天然的转化生长因子β1(TGF-β1)的抑制剂和天然调节物。DCN与组织器官的纤维化形成及发展密切相关。TGF-β1是致组织器官纤维化的重要因子之一,在多种组织器官纤维化的过程中扮演重要角色。DCN通过抑制TGF-β1的活性,可以有效地抑制组织器官的纤维化,是目前治疗组织器官纤维化有效和合理的策略,也是组织器官纤维化防治的研究热点,具有潜在的应用前景和临床价值。     

吡咯喹啉醌对鱼藤酮损伤细胞线粒体分裂融合的影响

目的:探讨吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinine,PQQ)在鱼藤酮损伤细胞中对线粒体分裂融合的影响.方法:体外采用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞构建帕金森病(Parkinson′s disease,PD)体外模型,通过定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检...     

线粒体在细胞凋亡中的介导作用

细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(Programmed cell death,PCD),是指机体在生理或病理条件下,启动自身内部机制,经过多途径的信号传递,结束其自身生命的过程.     

线粒体在细胞凋亡中的介导作用

细胞凋亡（Apoptosis）,又称细胞程序性死亡 Programmed cell death, PCD）,是指机体在生理或病理条件下,启动自身内部机制,经过多途径的信号传递,结束其自身生命的过程。它是有一系列酶参与、由基因控制的一个主动的、高度有序的死亡过程。目前已知有3条细胞凋亡信号通路：线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路,其中线粒体凋亡通路是凋亡的主要途径。     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体功能及细胞凋亡的影响

目的 :探讨活性氧在体外对肠上皮细胞线粒体功能和膜电位 (ΔΨmt)的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :肠上皮细胞株 (SW - 4 80 ) ,采用活性氧 (reactiveoxygenspecies,ROS)的代表物 -过氧化氢 (H2 O2 )损伤模型 ,用 5 0 μmmol/L ,10 0 μmmol/L ,2 0 0 μmmol/L ,4 0 0 μmmol/L和 4mmol/L作用 1,3,6 ,12及 2 4h。线粒体功能采用噻唑蓝法 (MTT法 ) ;用罗丹明 (Rhodamme- 12 3)荧光探针检查活细胞线粒体膜电位变化 ;用Annexin -V荧光探针 ,流式细胞仪检测早期凋亡细胞。结果 :H2 O2 在低浓度 (5 0 μmmol/L ,10 0 μmmol/L ,2 0 0 μmmol/L)时线粒体功能未见明显改变 ,在高浓度 (40 0 μmmol/L ,4mmol/L)时可导致线粒体功能下降 ,同时使线粒体膜电位显著降低 ,细胞凋亡率显著增加。结论 :线粒体参与了H2 O2 诱导肠上皮细胞的早期程序性死亡及随后的细胞死亡 ,这种损伤作用与线粒体功能和膜电位下降密切相关。     

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的 探究N-myc下游调节基因（NDRG1）对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组（细胞不做特殊处理）、pcDNANC组（细胞转染pcDNA-NC）、pcDNA-NDRG1组（细胞转染pcDNA-NDRG1）、通路抑制剂组[转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L磷脂肌醇3-激酶（PI3K）通路激活剂bpv的培养液];采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 m RNA的表达;CCK-8法检测细胞存活情况;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白[细胞增殖相关核抗原（PCNA）、E-钙黏附蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]及蛋白激酶B/转录激活因子3(Akt/STAT3)通路蛋白[PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3]的表达。结果 与空白对照组、pcDNA-NC组比较,pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3...     

快速康复外科理念对胰腺癌术后患者营养状况和免疫功能的影响

目的探讨快速康复外科(FTS)对胰腺癌手术后患者营养状况及免疫功能的影响。方法选取胰腺癌手术患者120例,随机分为快速康复外科组(观察组)印例和传统治疗组(对照组)60例,对照组采用传统方法康复,观察组采用快速康复外科理念,分别检测各个时段血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(Alb)、前白蛋白(PAB)、转铁白蛋白(TRF)等营养指标及IgA、IgG、IgM、CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+等免疫指标浓度,并进行对比分析。结果 2组患者术前Hb、Alb、PAB、TRF浓度无明显差异(P>0.05);术后第1天均显著下降(P<0.05),术后第5天又略有上升,且观察组术后第5天血清PAB、TRF浓度明显高于对照组(P<0.05)。2组患者IgA、IgG、IgM浓度于术后第1天较术前均明显降低(P<0.05),但对照组降低更明显,术后第5天观察组恢复至术前浓度水平,但对照组仍明显低于术前(P<0.05)。2组患者CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+浓度于术后第1天明显降低(P<0.05),但对照组降低更明显,术后第5天观察组恢复至术前浓度水平,但对照组仍明显低于术前浓度水平(P<0.05)。结论快速康复外科理念能明显改善胰腺癌术后患者的营养状况,保护免疫功能,加速患者术后康复,值得大力推广。     

大鼠肾系膜细胞饰胶蛋白聚糖乙酰化可增强其蛋白质稳定性和功能

 目的 通过细胞学研究检测大鼠肾系膜细胞饰胶蛋白聚糖(decorin, DCN)的乙酰化及其对系膜细胞泛素化的影响作用。方法 体外培养大鼠肾系膜细胞,应用免疫共沉淀、蛋白质电泳分析及RT-PCR等检测DCN的表达改变。结果 大鼠肾系膜细胞存在DCN乙酰化修饰,且DCN的乙酰化修饰抑制了DCN泛素化降解,促进了DCN蛋白质的稳定。此外增强DCN乙酰化修饰可促进转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)以及Ⅳ型胶原的下调,同时抑制肾系膜细胞的生长。结论 DCN乙酰化修饰可抑制DCN降解,增强DCN抗肾炎的作用,在防治系膜细胞增生性肾炎中可作为潜在的干扰靶点。     

氯喹通过影响胰腺癌细胞自噬和线粒体功能对吉西他滨耐药细胞的作用及其机制

探讨氯喹（CQ）对吉西他滨（GEM）耐药胰腺癌（PC）细胞的影响,阐明其相关作用机制。     

Abnormal mitochondrial function impairs calcium influx in diabetic mouse pancreatic beta cells

Background  Abnormal insulin secretion of pancreatic beta cells is now regarded as the more primary defect than the insulin function in the etiology of type 2 diabetes. Previous studies found impaired mitochondrial function and impaired Ca²⁺ influx in beta cells in diabetic patients and animal models, suggesting a role for these processes in proper insulin secretion. The aim of this study was to investigate the detailed relationship of mitochondrial function, Ca²⁺ influx, and defective insulin secretion.

Methods  We investigated mitochondrial function and morphology in pancreatic beta cell of diabetic KK-Ay mice and C57BL/6J mice. Two types of Ca²⁺ channel activities, L-type and store-operated Ca²⁺ (SOC), were evaluated using whole-cell patch-clamp recording. The glucose induced Ca²⁺ influx was measured by a non-invasive micro-test technique (NMT).

Results  Mitochondria in KK-Ay mice pancreatic beta cells were swollen with disordered cristae, and mitochondrial function decreased compared with C57BL/6J mice. Ca²⁺ channel activity was increased and glucose induced Ca²⁺ influx was impaired, but could be recovered by genipin.

Conclusion  Defective mitochondrial function in diabetic mice pancreatic beta cells is a key cause of abnormal insulin secretion by altering Ca²⁺ influx, but not via Ca²⁺ channel activity.

     

MAP4K4在胰腺癌中的表达及增殖功能的研究

目的：检测丝裂原激活蛋白激酶4（MAP4K4）在胰腺癌中的表达及意义,并研究其对胰腺癌细胞增殖功能的影响。方法：检索GEPIA和Oncomine数据库,分析MAP4K4在胰腺癌以及正常胰腺组织中的表达;检索GEPIA和OncoLnc数据库,分析MAP4K4的表达量与胰腺癌患者生存期之间的关系。免疫组化检测MAP4K4在人胰腺癌及癌旁组织中的表达并分析其与胰腺癌患者临床病理参数的相关性以及生存分析。qRT?PCR和Western blot检测MAP4K4在人胰腺癌细胞株中的表达。慢病毒感染人胰腺癌细胞株CFPAC?1和MIA PaCa?2构建MAP4K4过表达及干扰细胞株,CCK?8和克隆形成实验研究其增殖能力变化。结果：GEPIA和Oncomine数据库显示MAP4K4在人胰腺癌中的表达显著高于正常胰腺组织（P＜0.01）。GEPIA和OncoLnc数据库表明胰腺癌中高表达MAP4K4组患者的总体和无病生存期显著低于低表达组患者（P＜0.01）。免疫组化表明MAP4K4在人胰腺癌组织中的表达高于癌旁组织并与肿瘤大小、肿瘤分化相关（P＜0.05）,生存分析提示MAP4K4高表达的胰腺癌患者生存时间显著低于MAP4K4低表达的患者（P＜0.05）。MAP4K4过表达及干扰胰腺癌细胞株构建成功,过表达后胰腺癌细胞株增殖能力明显增加而干扰后显著降低（P＜0.05）。结论：MAP4K4在胰腺癌中表达增高并与预后负相关,且促进胰腺癌细胞增殖。     

Resistin对人肾小球系膜细胞表型和功能的作用及机制研究

目的研究巨噬细胞因子抵抗素（Resistin）过度表达对高糖刺激作用下人肾小球系膜细胞p38MAPK信号通路的影响,探讨Resistin调控肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的作用机制。方法通过转染携带野生型Resistin基因的腺病毒载体（Ad—Resistin）构建过度表达Resistin的人巨噬细胞模型,并与高糖刺激后的人肾小球系膜细胞共培养,^3H-氚标胸腺嘧啶掺入实验检测肾小球系膜细胞增殖,免疫细胞化学检测系膜细胞增殖相关基因（AP-1）的表达,免疫荧光检测细胞外基质蛋白（Laminin）的蛋白表达,Western blot检测系膜细胞内p38MAPK、TGF-β的表达并测定Smad2的磷酸化水平。结果Ad—Resistin感染后,人巨噬细胞Resistin mRNA水平及蛋白表达明显升高（P〈0．01）。同过度表达Resistin的人巨噬细胞共培养后,与对照组比较,人肾小球系膜细胞p38MAPK、TGF-β的蛋白表达明显增强,细胞内Smad2的磷酸化水平显著升高（p〈0．05）,肾小球系膜细胞出现明显的增殖,细胞外基质的合成增多（P〈0．05）。结论巨噬细胞因子Resistin的过度表达可能通过p38MAPK信号通路,调控高糖刺激作用下肾小球系膜细胞的增殖及细胞外基质的异常积聚。     

自噬对维持胰岛B细胞正常功能的作用

胰岛B细胞数量减少及分泌胰岛素能力下降是2型糖尿病发病的主要机制之一。新近的研究显示,自噬在保护胰岛B细胞以及维持胰岛B细胞结构、数量、分泌能力、内环境的稳定等方面有重要的作用。自噬已是近年来的研究热点,在肿瘤、神经、衰老等领域研究广泛,但在胰岛B细胞方面的研究起步较晚,相关报道也较少。本文就自噬的概念及自噬在维持胰岛B细胞正常功能方面的作用等作一综述。