3β-羟类固醇脱氢酶对邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯处理细胞后诱导型一氧化氮合酶和蛋白激酶C信号通路的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)对MCF-7细胞中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路相关基因及蛋白表达的影响以及3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)基因在此过程中的作用。方法 用浓度为0.00~0.40 mmol/L的DEHP分别染毒MCF-7细胞、3β-HSD沉默细胞和3β-HSD高表达细胞24 h,检测细胞中iNOS/PKC相关基因表达水平的变化;应用信号通路抑制剂处理后再进行DEHP染毒,荧光定量PCR和免疫印迹法检测MCF-7细胞中iNOS/PKC相关基因和凋亡基因表达水平的变化。结果 DEHP染毒MCF-7细胞,iNOS、PKCα在基因和蛋白表达水平均高于对照组;与同一染毒剂量的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞中iNOS、PKCα mRNA表达水平降低;而3β-HSD高表达细胞中iNOS、PKCα mRNA表达水平升高。应用iNOS 抑制剂(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)50 μmol/L处理后,DEHP染毒组iNOS、Bax、Caspase-3、Caspase-8表达下调;PKCα抑制剂(chelerythrine chloride,CHE) 0.20 μmol/L处理后,DEHP染毒组PKCα表达下调;而各抑制剂处理组中与对照组比较无明显降低的基因,其变化趋势与未加抑制剂处理的染毒组无显著差异。结论 DEHP引起的毒性作用可能与iNOS/PKC信号通路有关,3β-HSD对iNOS/PKC信号通路相关基因的表达有一定作用。     

正已烷对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控基因影响

目的 观察正己烷对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控基因bcl-2、bax、bcl-x1、xiap mRNA表达的影响.方法 48只成年雌性Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别给予浓度为0,3.01,9.03,27.1 g/m3正己烷静式吸入染毒;每天4 h,每周6 d,持续6周;染毒结束待大鼠进入动情期,处死并提取卵巢颗粒细胞,并采用实时荧光定量PCR法测定颗粒细胞bcl-2,ax、bcl-x1、xiap mRNA表达水平.结果 随着染毒剂量增加,各组bcl-2 mRNA表达呈下降趋势(2-△△CT值分别为1.069,0.762,0.698,0.690),bax mRNA表达呈上升趋势(2-△△CT值分别为1.039,1.242,1.317,1.895),各染毒组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).各染毒组bcl-x1 mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);27.1g/m3染毒组xiap mRNA表达(0.694)低于对照组(0.999),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 正己烷上调大鼠卵巢颗粒细胞bax,下调bcl-2、xiap mRNA表达,可能是正己烷致使卵巢颗粒细胞凋亡的机制之一.     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法体外培养25 d雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞,分别加入DBP使终浓度分别(0、5、20、80μmol/L),培养24 h。采用放射免疫方法测定雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progestone,P)的水平;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测卵巢颗粒细胞中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果 DBP染毒后颗粒细胞分泌的E2及P水平下降,各剂量DBP均可降低颗粒细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈反比,同时,DBP可以增加颗粒细胞中Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈正比。结论 DBP可导致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,且Bcl-2/Bax比例失调可能是导致其凋亡的机制。     

DEHP对CHO细胞凋亡基因和癌基因表达水平的影响

目的探讨DEHP对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞毒性和凋亡基因癌基因表达水平的影响。方法不同剂量DEHP对CHO细胞进行染毒24 h和48 h,应用CCK8试剂盒测定DEHP对CHO细胞的半数抑制浓度IC50,荧光定量PCR检测凋亡基因(Bcl-2、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)表达水平改变。结果DEHP染毒CHO细胞24 h的IC50为612μM,染毒48 h的IC50为336μM。DEHP较高剂量(150μM和300μM)染毒条件下,凋亡基因Bcl-2表达水平比对照组显著降低,300μM DEHP染毒时caspase-8和caspase-9表达水平比对照组显著增加;150μM和300μM DEHP染毒条件下c-fos表达水平增加;300μM DEHP染毒条件下k-ras基因表达水平升高;p53表达水平无明显变化。结论 DEHP可通过激活caspase通路引起CHO细胞凋亡,也引起癌基因表达水平升高。     

DEHP对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43表达和间隙连接通讯功能的影响

目的 通过对原代培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达及间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能的影响.方法 体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,应用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,应用荧光定量PCR法检测Cx43基因mRNA表达,用Weastern blot方法检测Cx43蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪方法检测GJIC功能.结果 与对照组相比,DEHP各组支持细胞Cx43基因mRNA和蛋白表达均下降(P＜0.05),呈浓度依赖关系,同时支持细胞GJIC功能降低.结论 DEHP在体外可通过抑制大鼠睾丸支持细胞Cx43基因表达而抑制GJIC功能,进而影响支持细胞功能.     

2,5-己二酮抑制大鼠卵巢颗粒细胞干细胞因子的表达

目的研究2,5-己二酮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及干细胞因子(SCF)表达的影响。方法 21日龄清洁级雌性SD大鼠10只,提取卵巢颗粒细胞混合后,均匀接种到六孔板培养,设立1个对照组和3个实验组,培养24h后分别加入浓度为0、20、40、60mmol/L的2,5-己二酮染毒24h,Hoechst 33258荧光染色计算细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测SCF、Bax、Bcl-2基因mRNA相对表达量。结果各染毒剂量组卵巢颗粒细胞凋亡率增高,差异有统计学意义(F=221.23,P0.05)。SCF基因mRNA的相对表达量在40、60mmol/L剂量组呈下降趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。Bcl-2基因mRNA的相对表达量随染毒剂量增加呈下降趋势,各剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。Bax基因mRNA的表达量和Bax/Bcl-2比值随着染毒剂量增加呈上升趋势,各剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论2,5-己二酮染毒可致卵巢颗粒细胞凋亡率增高,抑制SCF基因表达,SCF/c-Kit信号通路可能参与此过程。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2 spd细胞FasL蛋白和mRNA表达的影响。方法将处于对数生长期的GC-2spd细胞,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养液培养24 h。分别用q RT-PCR及Western blotting检测GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达。结果 100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平均高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势。结论 DEHP可能通过增强生精细胞FasL mRNA及蛋白表达,激活Fas/FasL信号通路,最终导致生精细胞凋亡。     

MAPK抑制剂对镉诱导凋亡基因表达影响

目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD98059对氯化镉(CdCl2)诱导大鼠肾上皮细胞(NRX)凋亡基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 应用流式细胞仪测定CdCl2染毒6 h的NRK细胞凋亡作用;用MAPK抑制剂PD98059预先处理NRK细胞1 h后,用不同浓度镉染毒,运用实时荧光定量PCR技术,检测NRK肾细胞内凋亡基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平.结果 NRK细胞的凋亡率与CdCl2染毒存在剂量-效应关系;2.5,5,10 μmol/L镉染毒使Bcl-2 mR.NA的表达水平分别下降至对照组的72%,53%和37%,而Caspase-3 mRNA表达水平上升为对照组的125%,153%和175%.在细胞培养基中预先加入PD98059然后用镉染毒,PD98059可明显阻止镉引起的Bcl-2 mRNA表达水平下降以及Caspase-3 mRNA表达水平升高.结论 MAPK抑制剂PD98059对镉引起凋亡基因Bcl-2和Caspase-3的表达水平改变具有明显干预作用,提示MAPK信号调节可能参与镉诱导的细胞凋亡过程.     

PBDE-47和PCB153染毒致大鼠神经毒性作用

目的 探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(PBDE-47)和2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)单独或联合染毒对SD大鼠的神经毒性作用及其机制.方法 出生第10 d的SD大鼠经一次性PBDE-47[1,5,10 mg/(kg·bw)]和/或PCB153[5 mg/(kg·bw)]染毒,用Morris水迷宫试验观察2月龄大鼠空间学习、记忆能力;用实时荧光定量RT-PCR检测海马组织死亡相关蛋白激酶(DAPK)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)、含半胱氨酸的天冬氨酸酶-12(Caspase-12)、含半胱氨酸的天冬氨酸酶-3(Caspase-3)以及细胞色素(cytochrome C)等钙信号通路相关基因mRNA的表达水平.结果 随PBDE-47染毒剂量的增加,大鼠学习、记忆能力呈现减退的趋势,且所有染毒剂量组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).PCB153可增加PBDE-47的神经毒性作用.与对照组比较,10 mg/(kg·bw)染毒组PBDE-47可导致雌雄大鼠XIAP基因mRNA表达水平显著下调(P<0.05),同时使雌雄大鼠Caspase-12、Caspase-13、Cytochrome C以及雄性大鼠DAPK基因mRNA表达水平显著上调(P<0.05).除雌雄大鼠DAPK以及雌性大鼠Cytochrome基因外,PBDE-47和PCB153对雌雄大鼠其他各基因mRNA表达水平的影响具有交互作用(P<0.05).结论 PBDE-47可引起大鼠神经系统损伤,同时影响大鼠海马区钙信号诱导的凋亡相关基因mRNA表达水平,PCB153可增强PBDE-47的上述神经毒性作用.     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

雷公藤内酯醇诱导PC3细胞凋亡的机制研究

目的观察雷公藤内酯醇（triptolide,TPL）对去势后抵抗性前列腺癌（Castration—Resistant Prostate Cancer,CRPC）PC3细胞的生长增殖抑制作用,对其诱导凋亡相关基因进行分析。方法MTY比色法观察TPL对PC3细胞的生长增殖抑制作用;Annexin—V／PI标记分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12、24h BCL-2、BAX、PIG3、P21、FAS、CASPASE3等与凋亡相关基因表达变化。结果什L抑制PC3细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为18．3ng／ml和13．5ng／ml,与24h组相比,48h组低浓度（5ng／ml,t=1．47,P〉0．05）和高浓度（160ng／ml,t=0．91,P〉0．05）差异无统计学意义。而10ng／ml（t=3．26,P〈0．05）、20ng／ml（t=4．21,P〈0．05）、40．g／ml（t=4．09,P〈0．05）、80ng／ml（t=2．91,P〈0．05）差异有统计学意义。Annexin-v／PI检测经18．3ng／ml,I’PL处理后的PC3细胞凋亡随着作用时间的延长而增多,相对于对照组,6、12、24h组Anexin—V阳性／PI阴性表达率分别为（5．42±2．21）％（t=3．52,P〈0．05）、（13．51±3．37）％（t=6．53,P〈0．01）、（29．3±4．53）％（t=8．74,P〈0．01）差异有统计学意义,并且各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR显示经18．3ng／ml TPL处理后,BAX、HG3表达递增,P21、BCL-2表达递降,FAS、CASPASE3表达无明显改变。结论TPL可以抑制PC3生长增殖并诱导细胞凋亡,而在凋亡的过程中,BAX、BCL-2、PIG3、P21等基因的改变可能扮演着重要的角色。     

靶向抑制存活素表达对卵巢癌细胞株生物学行为的影响和意义

目的：通过存活素（ Survivin）反义寡核苷酸（ ASODN）转染人卵巢癌SKOV3细胞株抑制存活素Survivin蛋白表达,分析靶向抑制 Survivin 表达对卵巢癌细胞生长、细胞周期改变、凋亡、侵袭迁移能力的影响和意义。方法用脂质体（LipofectamineTM2000）介导Survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,通过四唑盐比色法（MTT法）分析细胞生长活性改变,通过流式细胞仪检测Survivin蛋白表达改变、细胞周期分布和细胞凋亡率,通过Transwell小室检测细胞侵袭迁移能力的改变。结果转染Survivin ASODN后卵巢癌细胞株中Survivin蛋白表达明显下降（t＝7．82,P＜0．01）。细胞生长明显减慢（F＝3．75,P＜0．01）,600nm/L ASODN转染48小时细胞存活率为49．50±20．76％,接近IC50值。细胞凋亡明显增加（t＝6．37,P＜0．05）,细胞增殖明显下降（t＝-10．35,P＜0．01）,更多的细胞停留在G0/G1期（t＝10．38,P＜0．01）。细胞迁移和侵袭能力下降（t值分别为19．26、27．42,均P＜0．01）。结论 Survivin ASODN通过靶向抑制卵巢癌细胞存活素表达,可抑制细胞生长,促进细胞凋亡,减少进入有丝分裂的细胞数,降低细胞的侵袭迁移能力,从而达到治疗卵巢癌的作用。靶向抑制存活素的治疗将成为卵巢癌治疗的重要手段。     

AKT基因被RNA干扰抑制后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的通过RNA干扰技术阻断卵巢癌SKOV3细胞中AKT基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,分为对照组、空白载体组与RNA干扰组三组,采用MTT法与流式细胞仪AnnexinV／PI法检测并评价AKT基因干扰后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。结果MTF结果显示RNA干扰组细胞增殖能力较对照组与空白载体组明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）,空白载体组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果显示,RNA干扰组细胞凋亡率高达到（79．52±2．31）％,较对照组与空白载体组明显升高,约是空白载体组与对照组的3倍,差别具有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向AKT基因的小干扰RNA（siRNA）可有效地抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是卵巢癌的治疗新方法。     

热休克蛋白70抑制大鼠脓毒症血清诱导的心肌细胞凋亡及其信号转导通路的研究

目的初步探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）抑制脓毒症血清所致心肌细胞凋亡及其机制。方法将原代培养心肌细胞分组：正常对照组、正常大鼠血清组、脓毒症血清组、转空载体对照组和转HSP70基因组,转HSP70基因组以重组质粒pcDNA3．1-HSP70转染后36h后验证基因和蛋白表达;各组以相应血清混合培养2h;分别行Hoechst33258染色后计数以及DNA“梯状”条带检测心肌细胞凋亡,再应用Western—blot分析HSP70过表达对Caspase-3,8,9活化和Bid裂解的影响情况。结果处理后12、24、36h凋亡率,转HSP70基因组心肌细胞为（12．48±2．39）％、（23．96±3．12）％、（25．40±3．96）％,明显低于脓毒症血清组[（28．66±2．24）％、（55．76±5．69）％、（46．89±8．74）％,t=5．851、5．932、6．027,P〈0．01],亦明显低于转空载体组[（34．25±3．42）％、（50．71±6．38）％、（47．62±5．74）％,t=5．876、5．903、6．122,P〈0．01],但明显高于正常对照组和正常血清组（3．13％-6．75％,t=6．324、6．578、6．137、5．987、6．032、6．871,P〈0．01）;在Caspase-3、8、9活化表达中,P11、P20和P10条带比值,转HSP70基因组分别为（12．5276±2．1247、9．3481±4．5423、16．1349±6．0641）,低于脓毒症血清组（27．13244-2．1564、25．5643±4．3018、36．5647±6．7135,t=5．856、5．902、5．891,P〈0．01）,低于转空载体组（28．0314±2．0367、25．6413±4．1356、34．5648±5．9473,t=3．861、3．933、4．281,P〈0．05）,高于正常对照组（8．0324±1．5234、5．1246±1．3274、2．0314±0．6423,￡=3．286、3．867、4．031,P〈0．05）和正常血清组（8．5649±1．2136、6．0324±1．0214、3．2146±0．1325,t=5．898、5．969、6．879,P〈0．01）;tBid条带比值,转HSPT0基因组（12．0316±2．3641）低于脓毒症血清组（27．0536±5．3214,t=3．274,P〈0．05）和转空载体组（27．1034±3．6741,t=3．301,P〈0．05）,但高于正常对照组（6．0347±2．1304,t=5．924,P〈0．01）和正常血清组（7．3121±1．3021,t=5．871,P〈0．01）。结论HSPT0通过干预死亡受体通路和线粒体通路而抑制脓毒症血清所致的细胞凋亡。     

JNK信号通路在二甲基肿酸所致人胚肺成纤维细胞DNA损伤与凋亡中的作用

[目的]探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在二甲基胂酸（DMA）所致人胚肺成纤维（HELF）细胞DNA损伤与凋亡中的作用。[方法]以0、2．5、5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，检测HELF细胞生长、DNA损伤、细胞凋亡、JNK磷酸化水平；并用20μmol／LJNK抑制剂SP600125预处理30min后，再用DMA处理HELF细胞48h，观察上述指标变化情况。[结果]10和20μmol／LDMA对HELF细胞生长产生明显抑制作用（P〈0．05）；2．5、5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞γ-H2AX表达水平明显增强（P〈0．05），并具有一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=-0．982，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞断裂，caspase3表达水平明显增强（P〈0．05），呈一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．945，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，JNK磷酸化的表达水平明显增加（P〈0．05），呈现一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．988，P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125能明显降低10、20μmol／LDMA的生长抑制作用（P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125可明显阻滞DMA所致HELF细胞对DNA损伤和诱导的凋亡作用（P〈0．05）。[结论]DMA可引起HELF细胞DNA损伤和凋亡；在此过程中JNK信号通路激活起到正调控作用。     

IFN-γ诱导小鼠颗粒细胞DNA损伤及凋亡的体外研究

目的初步探讨IFN-γ诱导小鼠卵泡颗粒细胞DNA损伤及凋亡的机制。方法体外分离培养小鼠原代颗粒细胞,分为正常对照组、IFN-γ(1 000 U/ml)处理组及NAC(20 mM)+IFN-γ(1 000 U/ml)联合处理组,处理5d后,采用免疫荧光染色、Western blot和流式细胞术检测颗粒细胞的ATM/ATR信号通路中DNA损伤相关蛋白,ROS水平及凋亡相关蛋白的变化。结果 IFN-γ组颗粒细胞表达γ-H2AX,而NAC组未见明显γ-H2AX表达;Western blot发现IFN-γ组颗粒细胞γ-H2AX、Chk2和p-Chk2蛋白以及p53和p-p53、Caspase-3等凋亡相关蛋白水平均明显上调,NAC组中以上蛋白均被抑制;流式细胞术检测发现IFN-γ可诱导颗粒细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平上调,而NAC组颗粒细胞的ROS下降至对照组水平。结论 IFN-γ可通过DNA氧化损伤信号引起颗粒细胞凋亡。     

4-邻氨基酚-4＇去甲表鬼臼酯（ODE）在K562肿瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究不同浓度4-邻氨基酚-4＇去甲表鬼臼酯（ODE）对肿瘤细胞生长的影响,探讨ODE诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法 采用MTT法测定ODE对K562细胞生长的抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学方法检测K562细胞中 Bcl-2/Bax 比率变化.结果 （1）不同浓度ODE对K562细胞生长有抑制作用,随ODE浓度的增加及作用时间的延长细胞生长抑制率增高（P〈0.05）;（2）透射电镜观察可见凋亡细胞发生;（3）凋亡细胞中Bcl-2灰度较正常细胞染色的灰度低,Bax在凋亡细胞中的灰度较正常细胞高.结论 ODE能够显著抑制K562细胞的生长,其抑制作用随浓度的增加及时间的延长而增强,通过形态学可观察到凋亡细胞的产生,其诱导凋亡可能是通过改变凋亡基因而发挥作用的.     

VEGF-C诱导宫颈癌Hela细胞Bcl-2、cyclinD1的表达

目的研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的分子机制。方法应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、Western Blotting检测增殖凋亡相关基因Bcl-2、cyclin D1蛋白水平的变化。结果 10、20、50 ng/μl VEGF-C处理后,细胞增殖指数分别为(1.00±0.03)、(1.25±0.05)、(1.55±0.08)、(2.13±0.08),呈剂量依赖性升高(P0.05)。细胞周期S期比率呈剂量依赖性升高(P0.05),分别为(30.91±0.09)%、(37.95±0.27)%、(45.05±0.40)%、(64.26±0.20)%;细胞凋亡率呈剂量依赖性降低(P0.05),分别为(12.4±0.3)、(11.4±0.2)、(9.6±0.15)、(5.5±0.25)。Bcl-2、cyclin D1蛋白表达呈剂量依赖性升高。结论外源性VEGF-C通过细胞内信号的传递,诱导cyclin D1的表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,来促进Hela细胞增殖;诱导Bcl-2的表达,抑制凋亡。     

二硫化碳对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响

[目的]研究二硫化碳（carbondisulfide,CS：）染毒对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响。[方法]选用22～24d龄清洁级雄性SD大鼠,建立睾丸生精-支持细胞体外共培养体系,将细胞分为4组：1个对照组和3个不同浓度csz染毒组（1、2、4μmol／mL）,提取RNA,应用荧光实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测Cyto C、 Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9、Aif、EndoG、Smac、IAPS、 Bax、 Bcl-2 mRNA表达水平。[结果]大鼠睾丸支持一生精共培养细胞中,CS2染毒可导致CytoC、Smac、IAPS、Caspase-3、BaxmRNA的表达水平和Bax／Bcl-2mRNA表达水平值均明显升高（P〈0．05）,同时使Apaf-1、Aif、Bcl-2和EndoGmRNA的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]CS2染毒可影响大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因的表达,并且这一机制与CS2导致生殖损伤相关。