多次大剂量贝伐单抗结膜下注射抗兔眼小梁切除术后瘢痕化研究

背景贝伐单抗是第一个完整长度的人抗血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体,已作为抑制新生血管的药物而广泛用于眼科临床。然而,作为小梁切除术后抑制伤口及滤过泡的纤维化及抗血管生成的药物,贝伐单抗多次大剂量使用的安全性和有效性尚待评估。目的评估大剂量贝伐单抗结膜下多次注射抗小梁切除滤过术后滤过泡瘢痕化的安全性及有效性。方法采用自身双眼配对的研究设计。对新西兰白兔18只36只眼行小梁切除术滤过手术,动物左眼在术后即刻及术后第3、5、7天于滤过泡结膜下注射25g／L贝伐单抗0．1ml,右眼术后不进行注射作为对照眼。术后间隔2d裂隙灯下观察滤过泡形态并根据Moorefield滤过泡分级系统进行分级。分别于术后第10、20、30天各摘除12只眼球行苏木精一伊红染色评估细胞的性质,用Masson染色评估成纤维细胞化程度,并以抗血管性血友病因子（anti-vWf）免疫组织化学染色评估每组兔眼的血管化程度。结果与对照组相比,贝伐单抗治疗眼的滤过泡大且更为弥漫,术后第7天贝伐单抗治疗组与自身对照组眼滤过泡面积分别为（2．48±0．22）cm。和（1．73±0．27）em。,差异有统计学意义（t=5．194,P〈0．05）。贝伐单抗治疗眼的滤过泡生存天数（21．O¨0±1．56）d与对照组（12．50±1．97）d相比明显延长,差异有统计学意义（P=0．005）。组织学及免疫组织化学分析证实,与对照组相比,在术后20d时,贝伐单抗治疗眼的滤过泡及邻近组织结膜的血管化程度明显减少,2组间vWf阳性染色吸光度值的平均差值为14320．7±4134．9,差异有统计学意义（t=12．275,P〈0．05）;而术后30d时贝伐单抗治疗眼的成纤维细胞沉积明显减少,2组间成纤维细胞阳性染色面积的平均差值为0．27±0．03,差异有统计学意义（t=15．980,P〈0．05）。结论兔眼小梁切除术后多次结膜下注射贝伐单抗可有效地延长滤过泡的生存时间,在术后30d贝伐单抗能减轻滤过泡和邻近结膜组织的血管化程度。此外,贝伐单抗在术后滤过泡及邻近组织血管化的末期可显著抑制成纤维细胞介导的组织增生。     

贝伐单抗在青光眼滤过手术抗瘢痕化的应用研究

青光眼滤过手术成功主要取决于滤过通道的瘢痕化反应.目前常用的抗代谢药物丝裂霉素C(MMC)和5-氟尿嘧啶(5-FU)仍存在较多的术后并发症.血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在促进血管生成、创伤愈合、瘢痕形成中具有重要作用.抗VEGF药物能与VEGF受体结合,使VEGF的生物活性失效,抑制血管内皮细胞有丝分裂,减少血管通透性,从而阻断新生血管的形成.近年来贝伐单抗(bevacizumab)针对抗青光眼滤过术瘢痕化形成的研究较多,本文就VEGF的特性及其对伤口愈合反应的影响,通过玻璃体腔注射、前房注射、结膜下给药或滴眼等途径单独应用贝伐单抗或与MMC、5-FU联合应用的动物实验和临床研究结果做一综述.     

青光眼小梁切除术后结膜下小剂量注射贝伐单抗的疗效观察

目的探讨贝伐单抗在难治性开角型青光眼小梁切除术后降眼压的疗效。方法本研究共收集患者37例37眼,其中17例患者小梁切除术后给予贝伐单抗结膜下注射0.2mg,另外20例患者作为对照组注射等量生理盐水。比较2组患者8     

大蒜素对青光眼滤过术后兔眼滤过泡瘢痕化的抑制作用

目的　探讨大蒜素对青光眼滤过术后兔眼滤过泡瘢痕化的抑制作用。方法　取健康同品系大白兔36只72眼,随机分成大蒜素组、丝裂霉素组、生理盐水组,每组24眼,均行小梁切除术。各组分别将浸有大蒜素（1.112 kg·L^-1）、丝裂霉素（0.3 g·L^-1）、生理盐水的棉片放置于结膜囊-巩膜瓣-巩膜床层间,5 min后完全取出棉片,充分冲洗。术后各组分别测眼压,观察滤过泡的形态,计算滤过泡面积并行眼前节照相。术后28 d处死各组兔,行HE染色及Masson染色对比观察各组结膜下瘢痕增生情况。结果　术后第1天3组眼压较术前降低,随后眼压逐渐回升。各组不同时间内的眼压差异均有统计学意义（均为P<0.05）。术前及术后1 d、4 d、7 d、14 d两两比较中除术后4 d丝裂霉素组眼压比生理盐水组低（P=0.025）外,其余各时间眼压两两比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。术后28 d生理盐水组眼压高于大蒜素组和丝裂霉素组（均为P<0.05）,大蒜素组和丝裂霉素组相比差异无统计学意义（P>0.05）。术后1~4 d 3组滤过泡面积分别达到最大值,之后滤过泡面积逐渐减小。统计学分析结果示3组滤过泡面积减小量在不同的时间点上是不同的（P<0.05）。不同分组之间的滤过泡面积减小量有明显差异（P<0.05）。术后大蒜素组与丝裂霉素组滤过泡面积减小幅度相同,差异无统计学意义（P>0.05）,生理盐水组比大蒜素组和丝裂霉素组的滤过泡面积减小速度更快,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。术后28 d各组结膜上皮均完整无破损及增厚。HE染色显示大蒜素组和丝裂霉素组兔眼瘢痕组织较少,滤过通道较宽;生理盐水组兔眼瘢痕组织较多,滤过通道狭窄。Masson染色显示大蒜素组和丝裂霉素组可见少量炎性细胞浸润,滤过区成纤维细胞及胶原纤维疏松,结膜及巩膜间隙较宽;生理盐水组可见大量炎性细胞浸润,滤过区成纤维细胞及胶原纤维致密,结膜及巩膜间隙较窄,形成大量的瘢痕组织。术后 28 d 根据胶原纤维占整个结膜和巩膜空间总面积的百分比分析,大蒜素组［（58.13±5.33）%］比丝裂霉素组［（62.42±2.95）%］胶原纤维少,差异有统计学意义（P<0.05）,大蒜素组和丝裂霉素组均比生理盐水组［（89.75±3.91）%］胶原纤维少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　大蒜素和丝裂霉素有着相同的功效,可通过抑制小梁切除术后滤过泡瘢痕化,对功能性滤过泡有一定的维持作用。     

抗VEGF抗体贝伐单抗在青光眼滤过性手术的应用

新生血管化发生于青光眼滤过性手术的伤口愈合阶段,是对青光眼治疗的挑战.为提高手术成功率,近年来抗VEGF抗体贝伐单抗(bevacizumab,BVZ)应用于青光眼滤过性手术,如原发性开角型青光眼、色素性青光眼、剥脱性青光眼、慢性闭角型青光眼、新生血管性青光眼以及抗青光眼手术失败的再次青光眼滤过性手术.给药方式包括局部给药、结膜下注射、前房内注射、玻璃体内注射、联合给药等.     

结膜下注射贝伐单抗对兔角膜新生血管的抑制作用

目的 观察碱烧伤后不同时间结膜下注射贝伐单抗（Bevacizumab）角膜新生血管（CNV）的形成与转归.方法 新西兰白兔54只,制成单眼碱烧伤模型,随机分为3组,每组18只眼,A组碱烧伤后结膜下立即注射贝伐单抗2.5 mg（0.1 ml）,B组碱烧伤后3d结膜下注射贝伐单抗2.5 mg（0.1 ml）,C组结膜下注射生理盐水0.1ml,为对照组.共观察28 d.裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管生长情况,行眼前段照相并计算其面积,伤后7、14、28 d各组随机取6例角膜行共焦显微镜检查,观察角膜组织炎性细胞浸润情况及角膜新生血管形态学变化.结果 A、B及C组角膜新生血管开始出现的时间分别为（5.9＋0.8）d、（3.5＋0.6）d及（3.4＋1.1）d,其中A组明显较C组延长（P＜0.05）,B组与C组差异无统计学意义（P =0.068）.伤后各时间点A、B组角膜新生血管的生长面积均明显较C组减少（P＜0.05）,A组与B组角膜新生血管面积比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.共焦显微镜检查可见C组烧伤区大量炎性细胞浸润及新生血管形成,而A组角膜炎性细胞较少,烧伤区无新生血管形成,B组见少量新生血管侵入烧伤区.3组基质层均可见纤维及瘢痕组织增生,其中治疗组纤维增生程度与瘢痕组织均较对照组轻.结论 结膜下注射贝伐单抗可抑制角膜炎性细胞形成,改善损伤角膜基质,促进角膜愈合,从而减少碱烧伤引起的角膜新生血管的生长,在早期注射能取得更好的疗效.     

聚肌胞兔滤过术后结膜下注射对成纤维细胞的影响

目的研究聚肌胞注射液对兔滤过术后滤过道的组织病理学变化及毒性。方法对10只新西兰兔双眼小梁切除术,于术中、术后一组（每兔1眼）球结膜下注射聚肌胞,对照组（每兔另1眼）球结膜下注射生理盐水。术后3、5、10、15d行术眼眼压和裂隙灯显微镜检查。术后5、7、10、15d行术眼病理切片光镜观察。结果对照组的滤过泡于术后7d失败,聚肌胞组的滤过泡于术后14d失败,术后7～10d聚肌胞组巩膜瘘道阻塞率是40％,对照组巩膜瘘道全部阻塞。结论对兔眼滤过术中、术后应用聚肌胞可以抑制成纤维细胞增生,暂时提高兔眼滤过术的成功率,无副作用。     

贝伐单抗对小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎角膜新生血管和瘢痕形成的抑制作用

背景 单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)可诱导发生角膜新生血管和炎症反应,传统的治疗药物为阿昔洛韦(ACV),研究已证实贝伐单抗具有抑制新生血管的作用,但其是否对HSK发挥治疗作用值得研究. 目的 研究贝伐单抗对小鼠HSK角膜瘢痕和新生血管的抑制作用.方法 利用体外培养并感染的Vero细胞生产单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1),以无血清DMEM培养基于冰上对HSV-1进行10倍梯度稀释后制备成HSV-1液.选用SPF级雄性6～8周龄C57 BL/6小鼠200只,用0.6μl滴度为l×l0 7空斑形成单位(PUF)/ml的HSV-1行小鼠角膜基质注射以制备HSK模型,将模型眼分为单纯ACV注射组、ACV+贝伐单抗注射组和生理盐水注射组,按照分组分别于感染后5、8、11和14d选择角膜混浊评分为1分的模型眼结膜下注射50μg ACV、50 μg ACV+5 μl贝伐单抗和5μl生理盐水.此外采用紫外线照射均有轻度新生血管和瘢痕的6只模型小鼠双眼诱导HSK复发,于复发后0、2、4和6d行5μl贝伐单抗(25 mg/ml)右眼结膜下注射,左眼结膜下注射5 μl生理盐水.于造模后5、7、11、14和17d以及复发的0、2、4和6d行小鼠角膜裂隙灯显微镜检查并用角膜知觉测量仪行中央角膜敏感度检测;制备角膜铺片,采用免疫荧光检测法检测角膜中CD31和βⅢTubulin荧光表达以评估角膜新生血管和角膜神经纤维分布;采用Image J软件测定角膜新生血管面积和瘢痕面积. 结果 HSK成模率达80％以上,造模后7d和复发后2d角膜混浊最重,造模后15 d和复发后2d角膜新生血管面积最大.造模后模型眼中央角膜敏感度逐渐降低,于造模后9d下降到最低.ACV+贝伐单抗注射组角膜病变面积小于单纯ACV注射组,ACV+贝伐单抗注射组小鼠中央角膜敏感度为5.50±0.71,明显高于生理盐水注射组的0.50±1.41,差异有统计学意义(Z=-2.397,P=0.029).ACV+贝伐单抗注射组小鼠角膜病变面积增长率为(167.10±52.53)％,低于生理盐水注射组的(312.30±74.18)％,差异有统计学意义(Z=-1.992,P=0.046).实时荧光定量PCR显示造模后7d,模型眼角膜及同侧三叉神经节(TG)中胸苷激酶(TK)和感染细胞蛋白-27(ICP-27) mRNA相对表达量均较高,造模后45 d明显下降,诱导复发后2d TKmRNA和ICP-27 mRNA均再次升高,复发后7d表达量降至最低.造模后45 d同侧TG中均可见LAT mRNA表达量达峰值,诱导复发后2d相对表达量下降,复发后7d相对表达量再次升高,差异均有统计学意义(均P＜0.01).角膜铺片结果显示,造模后生理盐水注射组小鼠较正常对照小鼠角膜新生血管明显增加,角膜神经纤维明显减少,单纯ACV注射组和ACV+贝伐单抗注射组小鼠角膜新生血管少于生理盐水注射组,ACV+贝伐单抗注射组小鼠角膜神经纤维较生理盐水组注射组和单纯ACV注射组均增加.结论 贝伐单抗结膜下注射可抑制HSK模型小鼠角膜新生血管生成和瘢痕形成,与ACV联合应用时二者有协同作用.     

丝裂霉素C结膜下注射治疗青光眼小梁切除术后功能不良滤过泡的临床观察

目的观察丝裂霉素C(MMC)结膜下注射对青光眼小梁切除术后早期功能不良的滤过泡的临床效果。方法对114例(122只眼)青光眼患者术后1～8周内滤过功能不良的滤过泡行丝裂霉素C(MMC)结膜下注射,每天结膜下注射一次,共3～7次,MMC浓度为0.004%,配合每天眼部按摩2～3次,观察滤过泡弥散隆起的情况,前房深浅的变化,随访3～6个月。结果122只眼丝裂霉素C(MMC)结膜下注射前:低平限局肥厚充血型92只眼、包囊型囊样30只眼。MMC结膜下注射后滤过泡外观形态:轻度膨隆弥散型84只眼,多腔或薄壁型24只眼,限局肥厚型或无滤过泡14只眼。结膜下注射前患眼的眼压为(28.6±2.1)mmHg,结膜下注射后患眼的眼压为(15.1±2.3)mmHg。结论对于青光眼小梁切除术后早期功能不良的滤过泡采用结膜下注射丝裂霉素C(MMC)联合眼部按摩是安全、有效及简便的处理方法。     

转化生长因子-β与青光眼术后滤过泡瘢痕化的关系

青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化是手术失败的最主要原因.转化生长因子-β( TGF-β)能诱导人Tenon囊成纤维细胞表型转化,进一步迁移、增殖,合成细胞外基质,与滤过泡瘢痕化有重要关系.近年来在细胞因子及基因水平抗纤维化方面的研究取得一定进展,通过TGF-β抗体(如重组抗人TGF-β2单克隆抗体、CAT-152)、TGF-β抑制剂(如Decorin、糜酶抑制剂、SB-431542等)以及基因水平(如TGF-β的反义寡核苷酸等)来抑制TGF-β信号通路(如ALK5/Smad2/Smad3通路、MAPK通路、Rho-ROCK通路、PI3 K-AKT通路等)的重要靶点或蛋白表达,从而达到调控滤过泡瘢痕形成的作用.但目前很多药物的应用均缺乏临床试验支持,同时也缺少不同药物比较的研究.探索TGF-β细胞信号转导不同通路之间的关系,并寻找调控滤过道瘢痕化的最佳靶点是今后的研究方向.     

应用滤过性手术在大鼠眼上建立结膜滤过泡瘢痕化模型的研究

目的探讨应用滤过性手术在大鼠眼上建立结膜滤过泡瘢痕化模型的可行性。方法选用35只健康成年SD大鼠作为实验动物,在全身麻醉下行单侧眼球滤过性手术,术后观察结膜滤过泡的形成情况,并观察眼前节反应;手术后1、3d,1、2、4周共5个时间点各处死3只大鼠,摘除其眼球,常规10％福马林固定,切片,HE染色,观察其病理改变,并以对侧眼作为正常对照。结果所有大鼠在手术后7d均有结膜滤过泡形成;手术后8d,结膜滤过泡消失,最长的结膜滤过泡能够维持21d。组织病理学观察显示,术后1d,结膜下组织疏松水肿,血管扩张、充血明显,有较多中性粒细胞浸润;术后3d,结膜下组织血管扩张、充血,除有中性粒细胞浸润外,还可见单核巨噬细胞浸润,结缔组织疏松、水肿较前减轻;术后7d,血管扩张充血程度较术后3d时减轻,有较多的纤维母细胞增生,纤维母细胞的细胞核呈椭圆形、胞质丰富,在纤维母细胞周围,可见少量疏松的胶原纤维形成;术后2周,纤维母细胞数量较术后1周时有所减少,细胞变细长,细胞核两端变尖,周围胶原纤维较术后1周时致密;术后4周时,结膜下组织血管多数闭合,细胞成分明显减少,纤维母细胞演变为纤维细胞,细胞核变细长,周围伴大量胶原纤维沉积,呈现瘢痕样改变。结论应用滤过性手术在大鼠眼上建立结膜滤过泡瘢痕化模型具有可行性,其病理改变是一个创伤修复的过程,该模型的建立不仅为青光眼手术后结膜滤过泡瘢痕化的防治,同时也为防治其他原因导致的结膜瘢痕化提供了新的研究方法。     

血管内皮生长因子及贝伐单抗在小梁切除术后伤口愈合过程中的作用

青光眼患者小梁切除术成功的关键在于术后伤口的愈合以及瘢痕化.伤口愈合延迟,甚至不愈合将导致术后滤过泡的过度渗漏和术后低眼压,伤口过度愈合以及瘢痕化则会导致术后高眼压.临床上应用抗代谢药物,如丝裂霉素C(MMC)和5-氟尿嘧啶(5-FU)等可降低术后过度的伤口愈合以及瘢痕化,但是伴有低眼压、眼内炎以及感觉迟钝等不良反应,个别患者对抗代谢药物不敏感.研究表明,在小梁切除模型中结膜下注射转化生长因子-B的单克隆抗体CAT-152能有效降低术后的瘢痕化,为青光眼术后抗瘢痕治疗带来了曙光,然而在临床试验中,其与对照组相比较并没有显著差异.近些年,越来越多的证据显示血管内皮生长因子(VEGF)抗体在小梁切除术后伤口愈合过程中有着重要的影响.本文中对小梁切除术后伤口愈合的机制和VEGF及其抗体贝伐单抗在伤口愈合中的作用进行综述.     

兔眼玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子单克隆抗体Bevacizumab的视网膜毒性研究

目的 观察不同剂量抗血管内皮生长因子单克隆抗体Bevacizumab兔眼玻璃体腔注射的视网膜毒性作用。 方法 16只新西兰无色素兔的32只眼随机分为药物注射组和对照组，药物注射组又根据玻璃体腔注射药物剂量不同分为A、B、C组，玻璃体腔注射Bevacizumab剂量分别为0.05、0.10、0.25 ml，分别含Bevacizumab 1.25、2.50、6.25 mg。对照组玻璃体腔注射0.9％生理盐水0.10 ml。注药后1、2、4周行视网膜电图（ERG）检查。另外 ，在兔眼玻璃体腔注射Bevacizumab后1、2、4周，每组各摘除2只兔眼，行视网膜组织形态及超 微结构的光学显微镜和透射电子显微镜观察。 结果 兔眼玻璃体腔注射 Bevacizumab后1、2、4周，兔眼ERG各项反应波形均正常，振幅均未出现异常改变（P＞0.05）。光学显微镜下观察 ，药物注射组和对照组视网膜各层组织形态在各时间点均未见异常。透射电子显微镜观察， A、B组与对照组无明显差异；C组视网膜光感受器细胞出现部分线粒体损伤，发生肿胀和积 水变，4周时病变无缓解。 结论 单次兔眼玻璃体腔注射Bevacizumab 1.25 mg或2.50 mg是安全的。 （中华眼底病杂志，2008，24：193-196）     

羟基喜树碱对抗青光眼滤过术后功能性滤过泡的维持作用

1背景眼外滤过手术一直是治疗青光眼的主要术式,而其术后滤过道瘢痕化是导致青光眼手术失败的主要原因。寻找有效和安全的抗瘢痕药物是抗青光眼滤过手术的研究热点。目的探讨羟基喜树碱（HCPT）在小梁切除术中的应用,评价HCPT对结膜下滤过泡的抗增生作用及其最佳剂量。方法12～16周龄健康新西兰大白兔40只制作抗青光眼滤过手术模型,采用随机数字表法将动物随机分为生理盐水组、丝裂霉素C（MMC）组、0．3g／LHCPT组及1．0g／LHCPT组,每组10只,均取右眼行常规小梁切除术,术中在不同组兔眼巩膜表面及巩膜瓣下分别放置含生理盐水、0．3g／LMMC、0．3g／LHCPT及1．0g／LHCPT的棉片5min。于术后l、4、7、14、21、28d用Icare眼压计测量眼压;裂隙灯显微镜下观察术眼滤过泡情况以评价各种药物的疗效,球结膜、角膜、前房炎症反应、虹膜周边切口及晶状体混浊情况,加前置镜后观察视网膜情况,以评估药物不良反应。于术后7、14、28d分别处死3、3、4只动物,取术眼5mm×5mm手术区组织,包括球结膜、结膜下组织及巩膜,分别行苏木精-伊红染色及Masson三重染色,比较各种药物的抗纤维组织增生效果。采用Kaplan—Meier分析比较各组兔术眼功能性滤过泡的生存时间。结果各组伺实验兔术眼的眼压随着时间的变化明显不同,差异均有统计学意义（F分组=20．79,P=0．00;F时间=85．34,P=0．00;F交互作用=2．13,P=0．01）,其中MMC组和1．0g／LHCPT组术眼术后各时间点的眼压值均明显低于术前,差异均有统计学意义（P〈0．05）,生理盐水组和0．3g／LHCPT组仅能分别维持低眼压至术后第7天和第14天。术后生理盐水组、MMC组、0．3g／LHCPT组及1．0g／LHCPT组术眼滤过泡存活时间分别为（11．3±2．8）、（19．5±2．4）、（13．3±2．2）和（20．2±4．5）d,差异有统计学意义（log rank=11．92,P〈0．01）,1．0g／LHCPT组术眼滤过泡存活时间较其他组明显延长。术后7d内,各组术眼滤过泡面积和高度分级的差异均无统计学意义（P〉0．05）,而术后7、14、28d,生理盐水组和0．3g／LHCPT组较1．0g／LHCPT组与MMC组的滤过泡面积明显减小,差异均有统计学意义（P〈0．05）。苏木精-伊红染色和Masson染色表明,MMC组与1．0g／LHCPT组术区组织中炎性细胞明：显减少,结膜下组织中纤维细胞增生量下降,胶原纤维染色减少。结论小梁切除术中局部应用1．0g／LHCPT能抑制术区组织的炎症反应和胶原纤维的增生,有效降低眼压,且功能性滤过泡维持时间长。【     

生物膜在小梁切除术中防止滤过泡粘连的实验研究

目的 研究生物膜在实验性小梁切除术中防止滤过道粘连的作用。方法 将生物膜植入家兔小梁切除术的巩膜瓣及结膜瓣下，同一只家兔的另一只眼术中未植入生物膜作为对照眼，进行滤过泡，眼压及组织学观察。结果 （１）创伤后的修复过程于术后２～３周达到高峰，而生物膜要术后６周以后开始吸收，生物膜与瘢痕组织间不发生紧密粘连，从而保持滤过道通畅，（２）术后２～７周实验组功能性滤过存留比率明显高于对照组（Ｐ〈０．０５），     

大鼠青光眼滤过术后滤过泡形态与组织病理学动态观察

背景制作合适的青光眼滤过术后球结膜滤过泡的动物模型并观察滤过泡形态及组织病理学的动态变化,有助于了解青光眼术后滤过泡瘢痕化的病理变化,并掌握青光眼术后抗滤过泡瘢痕化治疗的时间窗和治疗靶点。目的动态观察大鼠滤过术后球结膜滤过泡生存时间、形态学及组织学改变,了解前房引流管植入术后滤过泡的形成及瘢痕化进程。方法选用健康成年雄性SD大鼠60只,采用前房引流管植入法建立大鼠球结膜滤过泡模型。分别于术后1、3、5、7、14、28d处死大鼠,获得术眼结膜滤过泡组织,并在裂隙灯显微镜下动态观察滤过泡的变化。参照Kronfeld滤过泡形态及功能分型方法对滤过泡进行分型,标尺测量滤过泡的长度和宽度,观察术后不同时间滤过泡面积的变化。分别于上述时间点获取滤过区组织,采用苏木精一伊红染色动态观察术后滤过泡的组织病理学变化。结果所有术眼在术后第1天均形成不同程度隆起的滤过泡。滤过泡生存时间为7～17d,平均生存时间为（11．93±2．23）d;术后1～5d,滤过泡的生存率均为100％,术后7d降至77％,术后14d降至20％,术后28d功能性滤过泡全部消失。术后5d,均为功能性滤过泡,均为Ⅰ型;术后7d,23眼为功能性滤过泡,其中Ⅰ型13眼,Ⅱ型10眼;术后14d,4眼为功能性滤过泡,其中Ⅰ型2眼,Ⅱ型2眼。滤过泡面积由术后第1天的（7．50±1．08）iTlm。逐渐缩小为术后第14天的（1．83±0．35）mm。。术后不同时间点滤过泡面积整体比较,差异有统计学意义（F=180．056,P=0．000）,不同时间点间两两比较差异均有统计学意义（均P=0．000）。组织病理学检查表明,术后1～3d滤过泡组织的病理改变以组织水肿、炎性细胞浸润、充血等炎症改变为主,自术后第5天,滤过泡组织成纤维细胞增加,随着时间延长,滤过泡     

玻璃体腔重复注射抗血管内皮生长因子单克隆抗体bevacizumab对糖尿病大鼠视网膜的毒性观察

目的 观察玻璃体腔重复注射抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体bevacizumab(商品名Avastin)对糖尿病大鼠视网膜的毒性作用.方法 40只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(A组)和糖尿病组,分别为10、30只.糖尿病组采用链脲佐菌霉素(STZ)尾静脉注射方法制作糖尿病动物模型.随机选取10只作为糖尿病视网膜病变(DR)组(B组),不作任何处理;其余20只大鼠左眼为实验组(C组),玻璃体腔注射25 mg/ml的bevacizumab 3 μ1,共注射3次,每次间隔10 d;右眼为实验对照组(D组),不给予任何处理.末次注射后20 d,采用闪光视网膜电图(F-ERG)对各组大鼠行视网膜功能检测;溴化乙锭(EB)染色视网膜铺片,荧光显微镜观察各组大鼠视网膜血管变化情况;苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜观察大鼠视网膜形态学变化;免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜各层Thy-1及VEGF阳性表达情况.结果 F-ERG检测显示,A、B、C、D 4组暗适应a、b波潜伏期,暗适应b波振幅及振荡电位(Ops)总振幅比较,差异均有统计学意义(F=33.165,36.162,19.955,23.243;P值均=0.000);A、B、C、D4组暗适应a波振幅比较,差异无统计学意义(F=0.097,P=0.961).荧光显微镜观察发现,A组大鼠视网膜血管走行良好,B组大鼠视网膜血管走行纡曲、扩张,C组大鼠视网膜血管走形规则、变细,D组大鼠视网膜可见微血管瘤.光学显微镜观察发现,A组大鼠视网膜层次结构整齐分明,B组大鼠视网膜各层细胞结构排列紊乱,C组大鼠视网膜各层细胞排列整齐,D组大鼠视网膜各层细胞排列不整齐.免疫组织化学染色发现,Thy-1阳性表达主要位于神经节细胞层(GCL),极少数位于内丛状层、内核层.VEGF阳性表达主要定位于GCL,少量位于神经纤维层、内核层及视网膜色素上皮层.结论 玻璃体腔重复注射bevacizumab对糖尿病大鼠视网膜有一定毒性作用.

Abstract：

Objective To observe the retinal toxicity of repeated intravitreal injection with bevacizumab(Avastin)in diabetic rats.Methods Forty male Sprague Dawley(SD)rats were randomly divided into normal group(Group A,10 rats)and diabetes mellitus group(30 rats).The rats in diabetes mellitus group were induced with streptozotocin injection for diabetic retinopathy model.And then randomly divided into diabetic retinopathy(DR)group(Group B,10 rats),the rats were not intervened;the left eyes of the other 20 rats were intravitreal injected with bevaeizumab 3 μ1(25 mg/m1)for 3 times as experimental group(Group C);the right eyes of the 20 rats were not intervened as experimental control group(Group D),20 days after last intravitreal injection,retinal function was measured by Flicker Electroretinogram (F-ERG);retinal vascular pattern was determined by fluorescence microscopy of ethidium bromide(EB)stained retinal flat mounts;retinal morphological changes were determined by light microscope on hematoxylin-eosin (HE) stained sections;Thy-1 and VEGF expression was measured by immunohistochemistry staining.Results F-ERG showed that-the differences of a-and b-waves-the b-wave amplitude and the Ops-wave amplitude in the implicit time between group A,B,C and D were significant (F=33.165,36.162,19.955,23.243;P=0.000);the differences of a-wave amplitude between group A,B,C and D was not significant(F=0.097,P=0v961).Retinal blood vessel pattern was normalin Group A;retinal vascular vessels were tortuous and irregularly expanded in Group B:retinal vascular vessels of Group C were regular and thinner than Group A;microaneurysm were showed in Group D.Light microscope displayed that the layers of the rat retina of Group A were regular,the retinal architectures of Group B were irregular,the retinal layers were regular in Group C,the retinal layers were irregular in Group D.Immunohistochemistry staining discovered that Thy-1 and VEGF were mainly expressed in ganglion cell layer(GCL).Conclusion Repeated intravitreal injection of bevacizumab iS toxic tO retina of diabetes mellitus rats.     

玻璃体腔注射环孢菌素A对糖尿病大鼠血视网膜屏障的保护作用及机制

目的 观察和探讨玻璃体腔注射环孢菌素A(CsA)对糖尿病(DM)大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及其作用机制.方法 8～10周龄健康Sprague-Dawley雄性大鼠48只,随机分为正常对照组、DM组、CsA组及二甲基亚砜(DMSO)组,每组12只.对DM、CsA及DMSO组大鼠进行一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液建模,正常对照组大鼠腹腔注射等量的柠檬酸钠缓冲液.注射后72h,采用免疫组织化学染色法检测视网膜内外渗的内源性白蛋白评价BRB的渗透性;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测视网膜细胞间粘附分子(ICAM-1)的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测视网膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 与正常对照组相比,DM组大鼠视网膜外渗的白蛋白增多,视网膜内ICAM-1、VEGF表达明显升高,差异均有统计学意义(F=29.350,29.240,9.658;P＜0.01).与DM组相比,CsA组大鼠视网膜外渗的白蛋白减少,视网膜内ICAM-1、VEGF表达明显下降,差异均有统计学意义(t=3.174,5.000,3.352;P＜0.05);DMSO组大鼠视网膜外渗的白蛋白、视网膜内ICAM-1及VEGF表达均无明显变化,差异无统计学意义(t=0.420,0.561,0.312 ;P＞0.05).结论 玻璃体腔注射CsA对DM大鼠BRB具有保护作用.其机制可能与CsA降低ICAM-1及VEGF的表达有关.