慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

目的　观察慢病毒载体（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ,ＬＶ）介导ＴＬＲ２基因干扰大鼠角膜上皮细胞（ｃｏｒｎｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＣＥＣ）和基质细胞（ｃｏｒｎｅａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ,ＣＳＣ）的有效性和安全性。方法　分别培养大鼠ＣＥＣ和ＣＳＣ,转染组用携带绿色荧光蛋白（ｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ｅＧＦＰ）和ＴＬＲ２小干扰ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＲＮＡ,ｓｉＲＮＡ）的ＬＶ转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的ＬＶ。转染组按最佳感染复数（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ,ＭＯＩ）分别为１０、５０、１００、２００加入ＬＶ-ＴＬＲ２-ｓｉＲＮＡ-ｅＧＦＰ,选择ｅＧＦＰ表达最强的ＭＯＩ进行后续实验,观察细胞形态,ＣＣＫ８检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,ＲＴ-ＰＣＲ检测转染后ＴＬＲ２ｍＲＮＡ的表达情况。结果　ＭＯＩ＝２００时转染ＣＥＣ和ＣＳＣ荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;ＣＣＫ８结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的ＩＯＤ值差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;流式细胞仪检测ＣＥＣ和ＣＳＣ转染效率分别为７７．６００％ ±１．１００％和７６．３００％ ±１．３８７％,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＴ-ＰＣＲ检测转染后ＣＥＣ和ＣＳＣＴＬＲ２ｍＲＮＡ相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。结论　ＬＶ-ＴＬＲ２-ｓｉＲＮＡ-ｅＧＦＰ可在体外稳定有效转染ＣＥＣ和ＣＳＣ,且对细胞安全性无影响,可有效下调ＴＬＲ２ｍＲＮＡ的表达。     

同轴微切口超声乳化白内障吸出术后角膜生物力学变化

目的　比较同轴微切口超声乳化白内障吸出术（ｐｈａｃｏｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ,Ｐｈａｃｏ）及标准切口Ｐｈａｃｏ术后角膜生物力学的变化。方法　年龄相关性白内障患者３１２例（３１２眼）随机分成两组。其中研究组（２．２ｍｍ同轴微切口组）１５９例,对照组（３．０ｍｍ标准切口组）１５３例。记录两组术前数据,包括年龄、性别、裸眼视力（ｕｎｃｏｒｒｅｃｔｅｄｖｉｓｕａｌａｃｕｉｔｙ,ＵＣ-ＶＡ）、最佳矫正视力（ｂｅｓｔｃｏｒｒｅｃｔｅｄｖｉｓｕａｌａｃｕｉｔｙ,ＢＣＶＡ）、角膜滞后性（ｃｏｒｎｅａｌｈｙｓｔｅｒｅｔｉｅ,ＣＨ）、角膜阻力因数（ｃｏｒｎｅａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｆａｃｔｏｒ,ＣＲＦ）、Ｇｏｌｄｍａｎｎ相关眼压（ｇｏｌｄｍａｎｎｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒｐｒｅｓｓｕｒｅ,ＩＯＰｇ）、角膜补偿眼压（ｃｏｒｎｅａｌｃｏｍｐｅｎｓａｔｅｄＩＯＰ,ＩＯＰｃｃ）、中央角膜厚度（ｃｅｎｔｒａｌｃｏｒｎｅａｌｔｈｉｃｋｎｅｓｓ,ＣＣＴ）、角膜内皮细胞计数（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｃｏｕｎｔ,ＥＣＣ）;术中数据包括累积能量复合参数（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｄｉｓｓｉｐａｔｅｄｅｎｅｒｇｙ,ＣＤＥ）、手术时间。术后１ｄ、１周、２周、１个月复查,比较两组ＵＣＶＡ、ＢＣＶＡ、ＥＣＣ、ＣＣＴ、ＣＨ、ＩＯＰｇ、ＣＲＦ和ＩＯＰｃｃ。结果　术后１ｄ两组ＣＨ、ＣＲＦ均较术前明显降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。术后１周,研究组ＣＨ、ＣＲＦ与术前差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;对照组ＣＨ、ＣＲＦ较术前降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。术后２周,两组ＣＨ、ＣＲＦ均恢复至术前水平（均为Ｐ＞０．０５）;两组ＩＯＰｇ、ＩＯＰｃｃ仍高于术前（均为Ｐ＜０．０５）,而低于术后１周（均为Ｐ＜０．０５）;两组ＣＣＴ恢复至术前水平（均为Ｐ＞０．０５）。术后４周,两组ＣＨ、ＣＲＦ、ＩＯＰｇ、ＩＯＰｃｃ、ＣＣＴ均恢复至术前水平（均为Ｐ＞０．０５）。术前,两组ＣＨ、ＣＲＦ与ＣＣＴ存在正相关性（研究组:ｒ１＝０．４３,ｒ２＝０．５２,对照组:ｒ１＝０．５６,ｒ２＝０．５３;均为Ｐ＜０．０５）。术后１ｄ,两组ＣＨ与ＣＣＴ均无相关性（ｒ１＝０．１３,ｒ２＝０．１０,均为Ｐ＞０．０５）。两组的ＣＲＦ值与ＣＣＴ在不同时相始终存在相关性（均为Ｐ＜０．０５）。两组间不同时相的ＣＨ与ＣＲＦ均存在正相关性（均为Ｐ＜０．０５）。结论　同轴微切口Ｐｈａｃｏ和标准切口Ｐｈａｃｏ均会改变角膜生物力学特征。同轴微切口Ｐｈａｃｏ比标准切口Ｐｈａｃｏ术后角膜生物力学特征恢复更快。     

2.0mm小切口飞秒激光角膜基质透镜取出术与飞秒激光辅助的LASIK矫正近视的疗效比较

目的　比较２．０ｍｍ微切口飞秒激光角膜基质透镜取出术（２．０ｍｍｓｍａｌｌｉｎｃｉｓｉｏｎｌｅｎｔｉｃｕｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ,２．０ｍｍＳＭＩＬＥ）与飞秒激光辅助的ＬＡＳＩＫ（ｌａｓｅｒｉｎｓｉｔｕｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓｗｉｔｈｆｅｍｔｏｓｅｃｏｎｄｌａｓｅｒ,ＦＳ-ＬＡＳＩＫ）矫正近视的疗效。方法　研究纳入行２．０ｍｍＳＭＩＬＥ的近视患者４８例（９６眼）,同期行ＦＳ-ＬＡＳＫ者５０例（１００眼）,记录并比较两组术前及术后１ｄ、１周、１个月、３个月及６个月的裸眼视力（ｕｎｃｏｒｒｅｃｔｅｄｖｉｓｕａｌａｃｕｉｔｙ,ＵＣＶＡ）、最佳矫正视力（ｂｅｓｔｃｏｒｒｅｃｔｅｄｖｉｓｕａｌａｃｕｉｔｙ,ＢＣＶＡ）、屈光度、生活质量量表（ｑｕａｌｉｔｙｏｆｌｉｆｅ,ＱＯＬ）得分及手术满意度量表评分。结果　在术后１周以后ＳＭＩＬＥ组视力高于ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组,且状态较ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组更为稳定。术后１个月、３个月、６个月ＳＭＩＬＥ组ＵＣＶＡ≥术前ＢＣＶＡ的比例高于ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。术后早期（术后１周）ＳＭＩＬＥ组存在１例过矫,而ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组存在１例欠矫,但在术后１个月、３个月、６个月两组手术患者均在±１．００Ｄ范围内。术后平均角膜前表面形态变异指数及垂直不对称指数在各时间点均为ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组大于ＳＭＩＬＥ组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。两组术前及术后６个月ＱＯＬ得分组间比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,术后６个月ＱＯＬ得分均较术前有所增加,且差异均有统计学意义（ＳＭＩＬＥ:ｔ＝－１３．８５,Ｐ＝０．００;ＦＳ-ＬＡＳＩＫ:ｔ＝－１３．２１,Ｐ＝０．００）,而两组术后６个月ＱＯＬ得分比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。两组均有较高的再次手术选择率及手术推荐率,并且未发生严重的并发症。结论　２．０ｍｍＳＭＩＬＥ与ＦＳ-ＬＡＳＩＫ均具有良好的有效性、稳定性以及可预测性,术后都可获得良好的视力及良好的生活质量,前者更好地保持了角膜前表面的形态。     

飞秒激光小切口透镜切除术与飞秒LASIK术后角膜后表面高度变化

目的　应用Ｏｒｂｓｃａｎ-Ⅱ眼前节分析系统探讨飞秒激光辅助的准分子激光原位角膜磨镶术（ｆｅｍｔｏｓｅｃｏｎｄｌａｓｅｒｉｎｓｉｔｕｋｅｒ-ａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ,Ｆｓ-ＬＡＳＩＫ）和飞秒激光小切口透镜切除术（ｓｍａｌｌｉｎｃｉｓｉｏｎｌｅｎｔｉｃｕｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ,ＳＭＩＬＥ）术后角膜后表面高度的变化。方法　前瞻性随机对照研究。选择２０１４年５月至１１月于我院行激光角膜屈光手术的近视患者（等效球镜度数≤ －６．００Ｄ）６０例（１１９眼）,随机分成Ａ、Ｂ两组,每组３０例（Ａ组５９眼,Ｂ组６０眼）。Ａ组施行ＳＭＩＬＥ,Ｂ组施行Ｆｓ-ＬＡＳＩＫ,观察术后视力、屈光度等的变化。采用Ｏｒｂｓｃａｎ-Ⅱ眼前节分析仪,分别于术前、术后１个月对术眼进行眼前节图像采集,记录角膜后表面Ｄｉｆｆ值变化并进行对比。结果　术后１个月两组患者裸眼视力均比术前提高,但两组间相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。术前最佳矫正视力与术后１个月相比差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,术后最佳矫正视力两组间相比差异亦无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。术前及术后１个月Ａ、Ｂ两组屈光度相比差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。两组后表面Ｄｉｆｆ值均较术前显著增加,其中Ａ组术前、术后分别为（０．０２７±０．００１）ｍｍ和（０．０５９±０．００１）ｍｍ（Ｐ＜０．０５）;Ｂ组术前、术后分别为（０．０２９±０．００１）ｍｍ和（０．０５４±０．００２）ｍｍ（Ｐ＜０．０５）,但Ａ、Ｂ两组术后角膜后表面Ｄｉｆｆ值增加量相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＳＭＩＬＥ和Ｆｓ-ＬＡＳＩＫ矫正近视均安全有效,术后１个月角膜后表面高度均部分前移,其远期变化有待进一步探索。     

频域OCT观察两种类型视网膜脱离术后黄斑中心凹结构变化

目的　利用频域光学相干断层扫描（ｏｐｔｉｃａｌｃｏｈｅｒｅｎｃｅｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ,ＯＣＴ）观察单纯视网膜脱离（ｒｈｅｇｍａｔｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｉｎａｌｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ,ＲＲＤ）和视网膜脱离合并脉络膜脱离（ｒｈｅｇｍａｔｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｉｎａｌｄｅｔａｃｈｍｅｎｔａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｈｏｒｏｉｄａｌｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ,ＲＲＤＣＤ）术后黄斑中心凹结构的变化,并分析中心凹结构与术后最佳矫正视力的相关性。方法　７７例（７７眼）视网膜脱离患者纳入研究,其中ＲＲＤ组４４例（４４眼）,ＲＲＤＣＤ组３３例（３３眼）,所有患者均接受玻璃体切割联合硅油填充复位视网膜,利用频域ＯＣＴ观察术后黄斑区光感受器内／外节（ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｎｅｒａｎｄｏｕｔｅｒｓｅｇｍｅｎｔ,ＩＳ／ＯＳ）连接带及外界膜（ｅｘｔｅｒｎａｌｌｉｍｉｔｉｎｇｍｅｍｂｒａｎｅ,ＥＬＭ）的形态、视网膜中心凹厚度,分析两组间中心凹形态变化差异,并分析ＩＳ／ＯＳ连接带与ＥＬＭ形态以及视网膜中心凹厚度与术后最佳矫正视力的相关性。结果　两组间的ＩＳ／ＯＳ连接带形态差异有统计学意义（χ２＝６．８８８,Ｐ＝０．０３２）,ＲＲＤＣＤ组ＩＳ／ＯＳ连接带的形态消失率明显高于ＲＲＤ组;两组间ＥＬＭ形态差异无统计学意义（χ２＝３．５９７,Ｐ＝０．１６６）,两组的ＩＳ／ＯＳ连接带及ＥＬＭ形态的完整性均与术后最佳矫正视力有相关性（ＲＲＤ组:ｒ＝０．６４９、Ｐ＜０．０５,ｒ＝０．４６６、Ｐ＜０．０５;ＲＲＤＣＤ组ｒ＝０．４８０、Ｐ＜０．０５,ｒ＝０．４４２、Ｐ＝０．０１０）。结论　频域ＯＣＴ是一种评价视网膜脱离复位术后黄斑微结构改变的有效手段。ＲＲＤＣＤ的ＩＳ／ＯＳ连接带消失率明显高于ＲＲＤ,这也是提示术后视力较差的原因之一,ＩＳ／ＯＳ连接带及ＥＬＭ形态的完整性可能是预测视网膜脱离复位术后视力恢复的重要因素。     

不同大小切口飞秒激光基质透镜切除术矫正近视术后角膜地形图对比研究

目的　探讨飞秒激光基质透镜切除术中采用不同大小切口对术后角膜地形图参数变化的影响。方法　将８０例（１６０眼）行飞秒激光基质透镜切除术的近视患者按切口大小分为３组,Ａ组（切口弧长１９．０ｍｍ）５０眼,Ｂ组（切口弧长５．０ｍｍ）５０眼,Ｃ组（切口弧长２．５ｍｍ）６０眼。术后随访６个月,记录术前最佳矫正视力、术后裸眼视力、裂隙灯显微镜及Ｏｒｂｓｃａｎ-Ⅱ检查模拟角膜镜读数（ＳｉｍＫ值）、后表面Ｄｉｆｆ值、３ｍｍＩｒｒｅｇ值、５ｍｍＩｒｒｅｇ值,并对结果进行分析。结果　术后１周、１个月、３个月、６个月裸眼视力３组相比,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。术后６个月３组ＳｉｍＫ差值均较术前减少,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,但术后３组间ＳｉｍＫ差值相比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。术后６个月３组角膜３ｍｍＩｒｒｅｇ值、５ｍｍＩｒｒｅｇ值均较术前显著增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;术后６个月３ｍｍＩｒｒｅｇ值、５ｍｍＩｒｒｅｇ值Ｃ组＜Ｂ组＜Ａ组,但仅５ｍｍＩｒｒｅｇ值Ｃ组与Ａ组相比差异有统计学意义（Ｐ＝０．０２４）。３组术后后表面Ｄｉｆｆ值与术前相比均显著增加（均为Ｐ＜０．０５）,术后６个月后表面Ｄｉｆｆ值增加量（后表面前凸）Ｃ组＜Ｂ组＜Ａ组,但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　微小切口的飞秒激光基质透镜切除术在术后角膜散光、角膜规则性和角膜后表面前凸方面都显示出较好的效果。     

骨髓间充质干细胞移植对兔碱烧伤角膜新生血管形成的抑制作用

目的　观察角膜碱烧伤兔行骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＢＭＳＣ）移植后不同时间受损角膜新生血管（ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ,ＣＮＶ）发生情况,探讨ＢＭＳＣ移植后对碱烧伤ＣＮＶ的抑制作用。方法　取日本大白兔２４只,随机分为实验组和对照组各１２只,实验组进行烧伤后ＢＭＳＣ移植,体外分离培养得到ＢＭＳＣ,制备中度角膜碱烧伤模型,随后行ＢＭＳＣ移植。对照组不进行移植。分别于移植后３ｄ、１４ｄ、２８ｄ观察ＣＮＶ生长状态、计算ＣＮＶ面积、采用ＲＴ-ＰＣＲ检测角膜中基质金属蛋白酶-２（ＭＭＰ-２）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ-α）的表达情况。结果　ＢＭＳＣ贴壁生长,呈长梭形,ＣＤ９０呈现高表达（表达率９７．９４％）,ＣＤ３１低表达（表达率０．１５％）。ＢＭＳＣ移植后２８ｄ时实验组角膜较对照组明显透亮,新生血管面积显著减小（Ｐ＜０．０５）。ＢＭＳＣ移植后１４ｄ、２８ｄ,实验组ＭＭＰ-２基因条带的灰度值均低于对照组（均为Ｐ＜０．０５）,实验组ＭＭＰ-２ｍＲＮＡ表达低于对照组且１４ｄ时差异最明显（Ｐ＜０．０１）。ＢＭＳＣ移植后３ｄ,实验组ＴＮＦ-α基因条带灰度值较对照组低,实验组ＴＮＦ-αｍＲＮＡ的表达明显受到抑制,且两组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;１４ｄ时,实验组ＴＮＦ-α基因表达仍低于对照组（Ｐ＜０．０５）,２８ｄ时实验组与对照组ＴＮＦ-αｍＲＮＡ表达量相当,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＢＭＳＣ通过抑制ＭＭＰ-２的表达,减少细胞外基质的溶解,抑制ＣＮＶ的形成;通过降低炎性细胞因子ＴＮＦ-α的表达,减轻局部炎症反应,从而抑制ＣＮＶ的生长。     

软性与透气性硬性角膜接触镜配戴者角膜地形图及前房深度对比分析

目的　比较配戴软性及硬性角膜接触镜对角膜形态及前房深度的影响。方法　选取屈光不正患者６０例（１２０眼）,分别予以配戴软性角膜接触镜（ｓｏｆｔｃｏｎｔａｃｔｌｅｎｓ,ＳＣＬ）及透气性硬性角膜接触镜（ｒｉｇｉｄｇａｓｐｅｒｍｅａｂｌｅｃｏｎｔａｃｔｌｅｎｓ,ＲＧＰＣＬ）,其中ＳＣＬ组３０例（６０眼）,ＲＧＰＣＬ组３０例（６０眼）,ＯｂｓｃａｎⅡ角膜地形图观察戴镜前及戴镜后１ａ、２ａ角膜屈光力、角膜前后表面Ｄｉｆｆ值、中央角膜厚度、前房深度的变化。结果　戴镜前ＲＧＰＣＬ组角膜上下表面屈光力差值为（０．９８±０．４９）Ｄ,戴镜后１ａ为（０．６６±０．４３）Ｄ,戴镜后２ａ为（０．５９±０．３７）Ｄ,均较戴镜前减小（Ｐ＜０．０５）;戴镜后１ａ、２ａ角膜前表面屈光力均较戴镜前降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＳＣＬ组戴镜后１ａ、２ａ角膜前后表面屈光力、Ｉ－Ｓ值、前后表面Ｄｉｆｆ值、前房深度与戴镜前比较,差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;戴镜前中央角膜厚度为（５４９±２６）μｍ,戴镜后１ａ为（５２７±２９）μｍ,与戴镜前比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,戴镜后２ａ为（５０９±３１）μｍ,与戴镜前比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　长期配戴ＲＧＰＣＬ对角膜代谢和功能影响不明显,且能够提供更好的光学矫正效果。     

小切口基质内透镜取出术及飞秒激光LASIK治疗高度近视的临床对比研究

目的　对比研究小切口基质内透镜取出术（ｓｍａｌｌｉｎｃｉｓｉｏｎｌｅｎｔｉｃｕｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ,ＳＭＩＬＥ）及飞秒激光ＬＡＳＩＫ（ｆｅｍｔｏｓｅｃｏｎｄｌａｓｅｒｉｎｓｉｔｕｋｅｒａｔｏｍｉｌｅｕｓｉｓ,ＦＳ-ＬＡＳＩＫ）治疗高度近视患者的手术疗效。方法　４０例８０眼高度近视患者（等效球镜度数为－７．００～－１０．５０Ｄ）根据手术方式不同分为２组,其中ＳＭＩＬＥ组２０例４０眼行ＳＭＩＬＥ,ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组２０例４０眼行ＶｉｓｕＭａｘＦＳ-ＬＡＳＩＫ,观察时间点为术后１ｄ、１周、１个月、３个月、６个月。分别观察两组术后裸眼视力、等效球镜度数、最佳矫正视力、角膜地形图形态等。结果　安全性:术后３个月ＳＭＩＬＥ组和ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组最佳矫正视力达到术前最佳矫正视力的比例分别为９７．５％（３９／４０）、９５．０％（３８／４０）（Ｐ＞０．０５）,术后最佳矫正视力／术前最佳矫正视力分别为１．１５±０．１２、１．０９±０．１４（Ｐ＞０．０５）。有效性:术后３个月ＳＭＩＬＥ组和ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组裸眼视力达到术前最佳矫正视力的比例分别为９５．０％（３８／４０）、８０．０％（３２／４０）（Ｐ＜０．０５）,术后裸眼视力／术前最佳矫正视力分别为１．１１±０．１３、０．９８±０．１４（Ｐ＜０．０５）。可预测性（精确性）:术后３个月ＳＭＩＬＥ组和ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组等效球镜在±０．５０Ｄ的比例分别为９５．０％（３８／４０）、７０．０％（２８／４０）（Ｐ＜０．０５）;等效球镜在±０．７５Ｄ的比例分别为９７．５％（３９／４０）、８２．５％（３３／４０）（Ｐ＜０．０５）。稳定性:与术后１周相比,术后１个月、３个月及６个月各时间点ＳＭＩＬＥ组和ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组等效球镜度数的差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。角膜地形图形态:ＳＭＩＬＥ组和ＦＳ-ＬＡＳＩＫ组角膜地形图都以平滑型最多,分别占８２．５％（３３／４０）、６０．０％（２４／４０）,两组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　ＳＭＩＬＥ及ＦＳ-ＬＡＳＩＫ治疗高度近视均安全、稳定,而ＳＭＩＬＥ有效性、可预测性、精确性、术后角膜形态均稍好于ＦＳ-ＬＡＳＩＫ,矫正高度近视更值得临床应用。     

高度近视眼人工晶状体度数计算公式的准确性比较

目的　评价用ＩＯＬＭａｓｔｅｒ和ＳＲＫ-Ⅱ、ＳＲＫ-Ｔ、Ｈｏｌｌａｄａｙ-１和Ｈａｉｇｉｓ四种公式计算眼轴≥２７ｍｍ的高度近视眼人工晶状体（ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒｌｅｎｓ,ＩＯＬ）度数的准确性。方法　回顾性分析于我院行白内障超声乳化摘出联合ＩＯＬ植入术、眼轴≥２７ｍｍ的高度近视合并白内障患者１０５例（１４８眼）的临床资料,用ＩＯＬＭａｓｔｅｒ测量并用以上四种公式计算ＩＯＬ度数和预测术后屈光度。按照眼轴长度分组,从２７ｍｍ起每增加１ｍｍ为一组,分别计算各组术后３个月时实际术后等效球镜度（ａｃｔｕａｌｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅｓｐｈｅｒｉｃａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ,ＡＰＳＥ）与四种公式计算的预测术后等效球镜度（ｐｒｅｄｉｃｔｅｄｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅｓｐｈｅｒｉｃａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ,ＰＰＳＥ）的差值,即为预测屈光度误差值（ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｅｒｒｏｒ,ＰＥ）。比较四种公式在不同眼轴长度区间ＰＥ的统计学差异,将眼轴组间ＰＥ没有统计学差异的组合并得到眼轴长区间,并计算出这四种ＩＯＬ计算公式在不同眼轴长度区间的ＰＥ。结果　１４８眼眼轴长度为（３１．０６±２．３２）ｍｍ,ＰＥ在ＳＲＫ-Ⅱ、ＳＲＫ-Ｔ、Ｈｏｌｌａｄａｙ-１和Ｈａｉｇｉｓ公式分别为（１．０１±１．５３）Ｄ、（０．７６±０．９６）Ｄ、（１．２４±０．８０）Ｄ和（０．７８±０．８４）Ｄ;四种公式计算的ＰＰＳＥ与ＡＰＳＥ间差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,ＳＲＫ-Ｔ和Ｈａｉｇｉｓ公式的ＰＥ差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;Ｈｏｌｌａｄａｙ-１公式的ＰＥ与ＳＲＫ-Ｔ、Ｈａｉｇｉｓ公式的ＰＥ均有显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。将眼轴组间ＰＥ没有统计学差异的组合并后得到２７～３０ｍｍ、３０～３２ｍｍ、３２～３４ｍｍ、≥３４ｍｍ四个眼轴长度区间,ＳＲＫ-Ｔ／Ｈａｉｇｉｓ公式在各区间的ＰＥ分别为（０．２１±０．６５）Ｄ／（０．４８±０．７１）Ｄ、（０．５８±０．５６）Ｄ／（０．５８±０．６１）Ｄ、（１．１８±０．６７）Ｄ／（０．９７±０．６１）Ｄ和（１．９７±１．４４）Ｄ／（１．７６±１．２６）Ｄ。结论　在眼轴≥２７ｍｍ的高度近视眼ＩＯＬ度数计算上ＳＲＫ-Ⅱ、ＳＲＫ-Ｔ、Ｈａｉｇｉｓ和Ｈｏｌｌａｄａｙ-１公式预测术后屈光度均为近视方向的过矫正。在不同眼轴长度区间用ＳＲＫ-Ｔ／Ｈａｉｇｉｓ公式计算时,适当向近视方向调整ＰＰＳＥ（－０．２～－２．０）／（－０．５～－１．８）Ｄ而得到的植入ＩＯＬ度数可以改善计算公式的准确性。     

Activation of toll-like receptor (TLR)2, TLR4, and TLR9 in the mammalian cornea induces MyD88-dependent corneal inflammation

PURPOSE: Toll-like receptors (TLRs), which recognize microbial products, have an important role in the host innate immune response. The purpose of the present study was to determine whether activation of these receptors leads to development of keratitis and to assess the role of the common adaptor molecule myeloid differentiation factor-88 (MyD88). METHODS: Corneal epithelium of C57BL/6, TLR2(-/-), TLR9(-/-), and MyD88(-/-) mice was abraded and treated with Pam(3)Cys, LPS, or CpG DNA, which bind TLR2, -4, and -9, respectively, and neutrophil recruitment to the corneal stroma, development of corneal haze, and chemokine production were measured. RESULTS: Activation of TLR2 and -9 stimulated neutrophil recruitment to the corneal stroma of C57BL/6 mice, but not TLR2(-/-) or -9(-/-) mice, respectively. In marked contrast, neutrophil migration to the corneal stroma of MyD88(-/-) mice challenged with Pam(3)Cys, LPS, or CpG DNA was completely ablated. Activation of TLR2, -4, and -9 also caused a significant increase in corneal thickness and haze, indicative of disruption of corneal clarity; however, this response was ablated in MyD88(-/-) mice, which were not significantly different from untreated corneas. Production of CXC chemokines MIP-2 and KC, which mediate neutrophil recruitment to the corneal stroma, was elevated in the corneal epithelium and stroma of control, but not MyD88(-/-) mice. CONCLUSIONS: Together, these findings demonstrate that the corneal epithelium has functional TLR2 and -9, and that TLR2, -4, and -9 signal through MyD88. This pathway is therefore likely to have an important role in the early events leading to microbial keratitis.     

CD4和CD8基因敲除鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥特征的研究

目的　探讨CD4和CD8基因敲除小鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥反应发生的机制。方法　CD4、CD8基因敲除小鼠及C57BL/6小鼠各20只,分成3组,右眼接受穿透性角膜移植术,供体为BALB/c小鼠,术后裂隙灯显微镜评价角膜移植片情况,并详细记录免疫排斥的发生时间,在术后1、2、4周各取2只鼠术眼行免疫组织化学检查,观察眼前段CD+4 、CD+8 T细胞的变化。在术后2周, 3组小鼠各选其中10只接受皮肤移植,供体为BALB/c小鼠,监测皮肤移植后皮肤植片免疫排斥反应的时间和在皮肤发生排斥反应时角膜移植片的情况。结果　3组小鼠角膜移植术后免疫排斥发生时间明显不同,CD4基因敲除鼠角膜移植片保持透明,至少观察了90d未见免疫排斥反应发生;CD8基因敲除小鼠在(28±3)d时发生免疫排斥反应;C57BL/6小鼠发生免疫排斥反应的时间为(14±2)d(F=2034, P<0. 01)。移植皮肤后发生免疫排斥反应时间为:CD4基因敲除鼠(14±2)d,CD8基因敲除鼠(12±1)d,C57BL/6小鼠(10±1)d(F=42. 54, P<0. 01)。结论　小鼠行穿透性角膜移植术后免疫排斥反应可能是以T淋巴细胞,主要为CD+4 T细胞介导的免疫排斥反应,CD+8 T细胞参与了排斥反应过程。     

急性闭角型青光眼发病机制与Toll样受体及髓样分化因子88免疫调节作用的相关性分析

目的探讨急性原发性闭角型青光眼(PACG)发病机制与Toll样受体(TLR)及髓样分化因子88(My D88)免疫调节作用的相关性,为临床治疗提供依据。方法选取2015年1月至2015年12月收入我院的90例急性PACG患者为研究组,根据视野损伤程度将患者分为重、中、轻三个亚组,选取同期入院的32例白内障患者为对照组,统计两组患者的基线资料,并检测两组患者的TLR4、My D88蛋白及炎性因子(IL-2、IL-6)的表达水平。结果两组患者TLR4和My D88的蛋白表达水平比较,具有统计学差异(P<0.05),且视神经损伤重度组的TLR4和My D88的蛋白表达水平显著高于视神经损伤中度组及视神经损伤轻度组,具有统计学差异(P<0.05)。两组患者外周血IL-2及IL-6水平比较,具有统计学差异(P<0.05),视神经损伤重度组的IL-2水平与视神经损伤中度组相比较,无统计学差异(P>0.05),但其显著低于视神经损伤轻度组,具有统计学差异(P<0.05);视神经损伤重度组的IL-6水平与视神经损伤中度组及视神经损伤轻度组相比较,均无统计学差异(P>0.05)。结论急性PACG的发病可能与TLR4和My D88的免疫调节有关,急性PACG发作期虹膜组织发生炎症,且TLR4和My D88的表达水平升高,这一过程依照TLR4-My D88的信号传导。     

山茱萸总甙滴眼液防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的：观察山茱萸总甙（COG)滴眼液局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法：建立封闭群大鼠角膜移植模型，随机分组：A、B、C、D组为Wister—SD组问同种异体角膜移植，Wistar为受体，SD为供体，其中A组为空白对照组、B组为0．5％COG滴眼液组、C组为1％COG滴眼液组，D组为2％COG滴眼液组，E组为Wistar—Wistar对照组，即Wistar大鼠间同种异体移植组。用裂隙灯显微镜记录及比较各组：角膜植片透明度、水肿度、新生血管度、移植排斥指数(RI)及角膜排斥发生时间。结果：术后各组移植排斥指数及发生角膜移植排斥时间，A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组比较均有显著性差异，P＜0．01；B组与D组之间比较P＞0．05，无显著性差异。结论：COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应，1％COG滴眼液更有效。     

来氟米特活性代谢物A771726对大鼠角膜移植排斥反应的影响

目的探讨来氟米特活性代谢物A771726对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用。方法建立SD-Wistar大鼠同种异体穿透角膜移植模型,随机分组。A组为空白对照组;B、C、D组分别为0．5％、1．0％及2．0％A771726滴眼液组;E组为Wistar大鼠自体移植对照组。术后比较各组角膜植片排斥指数（RI）及植片存活时间,并对植片进行组织学及免疫组织化学染色观察。结果A组角膜植片存活时间为（9．38±2．26）d,B组（10．13±2．41）d,C组（17．57±1．72）d,D组（17．50±2．14）d,E组（〉28．00）d。A组、B组分别与C组、D组植片存活时间差异有统计学意义（P〈0．01）。移植术后10d,A组、B组角膜植片发生排斥反应,植片高表达IFN-γ及ICAM-1;术后20d,C组、D组植片发生排斥反应,植片IFN-γ及ICAM-1表达增高。结论局部应用A771726滴眼液能有效抑制角膜移植排斥反应。     

Deletion of the chemokine receptor CCR1 prolongs corneal allograft survival

PURPOSE: Many corneal grafts undergo immune rejection, and current therapies are associated with many side effects. The purpose of this study was to identify critical chemokine pathways involved in generating the alloimmune response to corneal transplants. METHODS: Orthotopic corneal transplantation was performed in fully mismatched strains. Cytokine and chemokine receptor gene expression was determined by the RNase protection assay. Knockout (KO) strains for chemokine-chemokine receptors that are upregulated after transplantation underwent corneal transplantation. Results derived from KO murine hosts were compared with cyclosporine (Cy) therapy. In addition to graft survival, graft infiltration, allospecific delayed-type hypersensitivity (DTH), and cytokine expression were compared among the recipient groups. RESULTS: Initial experiments revealed gene upregulation of the chemokine receptors CCR1, -2, and -5 after corneal allorejection. Although CCR1 KO hosts showed a significant increase in graft survival compared with wild-type (WT) hosts, allografts in CCR5, CCR2/CCL3(MIP-1alpha), CXCR3, CXCL10/IP-10, and CCL3/MIP-1alpha KO mice did not show a significant improvement in graft survival. Further, CCR1 KO hosts showed a significantly higher survival rate than with systemic Cy therapy in WT hosts. Moreover, graft infiltration by leukocytes and gene expression of proinflammatory cytokines were reduced in CCR1 KO mice compared with both Cy treated and untreated WT mice, as was the induction of allospecific DTH. CONCLUSIONS: These studies provide, for the first time, evidence that targeting of specific chemokine pathways can significantly promote survival of corneal transplants, and suggest that select deletion or suppression of CCR1 can be a useful therapeutic target in corneal transplant immunity.     

糖皮质激素对角膜移植术后大鼠角膜TLR2表达的影响

目的检测大鼠角膜组织TLR2mRNA的表达,研究糖皮质激素对穿透角膜移植术后角膜TLR2表达的影响及对术后排斥反应的作用。方法实验动物分正常对照组（N）、同种同体角膜移植组（A）、同种异体角膜移植组（B）和同种异体角膜移植激素（典必殊滴眼液点术眼,每日2次）抗排斥组（C）,A、B、C3组大鼠给予穿透角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管并用排斥反应指数评价;分别于术后第5、7、9天取材,行组织病理学检查和实时荧光定量PCR检测,动态观察角膜组织中TLR2mRNA的表达。结果术后随时间变化角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长。B组大鼠平均在穿透角膜移植术后7d发生排斥反应并获病理学支持;A组和C组大鼠术后排斥反应指数计分未达到诊断标准。术后3组手术干预组角膜TLR2mRNA的表达均增加,同种异体角膜移植组角膜TLR2mRNA的表达较同种同体角膜移植组显著增加,激素抗排斥组角膜TLR2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论糖皮质激素可能通过抑制角膜TLR2的表达及其介导的信号转导,抑制排斥反应,对移植物起保护作用。     

白细胞介素17中和性抗体对角膜移植排斥反应的抑制作用

背景白细胞介素17（IL-17）是一种促炎性细胞因子,在多种器官移植免疫排斥反应和自身免疫性疾病中发挥致病作用。IL-17拮抗剂在器官移植排斥反应中的作用被广泛研究,但其对角膜移植后排斥反应防治作用的研究较少。目的探讨抗小鼠IL-17单克隆抗体对小鼠角膜移植排斥反应的抑制效果。方法选取8～10周龄C57BL／6小鼠25只和BALB／c小鼠50只,将直径2min的C57BL／6小鼠双眼中央角膜作为供体角膜移植到50只BALB／c小鼠右眼角膜植床上,11,0尼龙线间断缝合8针,建立小鼠角膜移植模型。将建立的40只角膜移植小鼠模型按随机数字表法随机分为2个组,术后腹腔内分别注射小鼠IL-17中和性抗体（IL-17中和性抗体组）或同型对照抗体（同型对照抗体组）,并于术后不同时间点根据Plskova等的标准对受体角膜植片的炎症反应情况进行评分,≥5分为发生排斥反应。应用免疫荧光组织化学法检测受体植片炎性细胞的浸润;用逆转录PCR法对植片中的炎性细胞进行定量;应用ELISA法分析两组受体小鼠Th1、Th2和Th17相关细胞因子在脾脏中的表达情况。结果与同型对照抗体组相比,IL-17中和性抗体可以提高角膜植片的存活率（P〈0．05）。IL-17中和性抗体组受体植片中性粒细胞、CD4＋T淋巴细胞和CD8＋T淋巴细胞mRNA含量分别为2．22±0．10、1．64±0．04、1．32±0．10,明显低于同型对照抗体组的3．61±0．08、2．69±0．06、2．17±0．04,差异均有统计学意义（P=0．000、0．000、0．000）。同型对照抗体组受体小鼠脾脏中γ-干扰素（IFN-γ）、IL-12p40和IL-17质量浓度分别为（741．48±10．51）、（1156．90±69．93）、（366．13±7．93）ng／L,明显高于IL-17中和性抗体组的（529．80±13．83）、（539．58±10．74）、（173．70±8．11）ng／L,差异均有统计学意义（P=0．000、0．001、0．000）。结论中和IL-17的生物学活性可以在一定程度上抑制同种异体角膜移植术后的免疫排斥反应。     

器官培养法保存大鼠角膜移植术后Thl／Th2细胞因子和T细胞亚群表达的研究

背景免疫排斥反应是导致角膜移植手术失败的重要原因。器官培养法保存角膜可以逐渐降低植片的免疫原性,有利于减轻排斥反应。但目前对于器官培养法保存角膜植片行角膜移植术后确切的免疫排斥机制研究较少。目的探讨器官培养法保存大鼠角膜植片行角膜移植后,部分Thl／Th2细胞因子和T细胞亚群在眼局部和／或全身的表达变化。方法以36只Wistar大鼠为供体,72只SD大鼠为受体,行穿透角膜移植术。受体大鼠按随机数字表法分为器官培养植片组和新鲜植片组,每组36只;另选6只SD大鼠作为正常对照组。术后裂隙灯下观察植片存活时间和排斥情况,ELISA法检测房水中自细胞介素2（IL-2）、干扰素1（IFN-1）、IL4和肿瘤坏死因子α（TNF-α）质量浓度的变化,免疫组织化学法检测植片内CD25的表达,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测植片内TNF-dmRNA、IFN-1mRNA、IL4mRNA和CD25mRNA的表达,流式细胞术检测外周血中CD28亚群的表达。结果器官培养植片组的术后植片存活时间达13．78d,长于新鲜植片组的10．56d,差异有统计学意义（t=14．945,P=0．000）。术后6、13、24d时,两手术组房水中IL-2、IFN-1、IL-4和TNF-α的质量浓度均高于正常对照组,于13d时达最高水平,新鲜植片组质量浓度最高（F=324．891、416．416、240．661、364．533,P=0．000）。术后13d时,植片内CD25表达较弱,两组间区别不明显;新鲜植片组中TNF-dmRNA和IFN-1mRNA的表达强于器官培养植片组（t=2．464,P=0．039;t=5．438,P=0．001）,两组IL4mRNA和CD25mRNA的表达水平比较差异均无统计学意义（t=-0．782,P=0．457;t=0．712,P=0．497）,正常角膜则无表达;3组大鼠外周血淋巴细胞中CD28亚群百分比差异有统计学意义（F=70．489,P=0．000）,两手术组显著升高,但器官培养植片组水平低于新鲜植片组（P=0．016）。结论Thl／Th2因子平衡调节机制和CD28亚群可能在器官培养法保存角膜植片行角膜移植术后的排斥反应中发挥重要的调节作用。     

脂肪间充质干细胞来源的外泌体对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用及机制

目的　探讨脂肪间充质干细胞来源的外泌体（ADSC-Exos）对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用及机制。方法　采用超速离心法获取到较高纯度的ADSC-Exos,利用Western blot、纳米粒跟踪分析和透射电镜检测ADSC-Exos特征。取36只小鼠随机分为正常对照组,模型组,低、中、高剂量外泌体组和普拉洛芬组,每组6只。除正常对照组外,其余各组小鼠双眼结膜囊内滴入2 g·L^-1 苯扎氯铵溶液,每天2次,连续滴眼14 d,制作中重度干眼模型。造模结束后,在正常对照组和模型组小鼠结膜囊内滴入5 μL磷酸盐缓冲液,低、中、高剂量外泌体组分别滴12.5 g·L^-1、25.0 g·L^-1和50.0 g·L^-1ADSC-Exos,普拉洛芬组滴相同体积的1 g·L^-1普拉洛芬滴眼液,每天3次,连续滴眼7 d。检测各组小鼠角膜荧光素染色评分、酚红棉线湿润长度和泪膜破裂时间。利用流式细胞仪检测各组小鼠结膜组织中白细胞介素（IL）-1α、γ-干扰素（IFN）和肿瘤坏死因子（TNF）-α含量;Western blot和实时荧光定量PCR检测各组小鼠结膜组织中Myd88和Toll样受体4（TLR4）蛋白及mRNA的表达。结果　与正常对照组相比,治疗后第4天和第7天,模型组小鼠角膜荧光素染色评分均明显增加,酚红棉线湿润长度和泪膜破裂时间明显缩短（均为P<0.01）。与模型组相比,治疗后第4天,高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠角膜荧光素染色评分均明显降低（均为P<0.05）,酚红棉线湿润长度均明显增加（均为P<0.01）,泪膜破裂时间延长,但差异均无统计学意义（均为P>0.05）。与模型组相比,治疗后第7天,中、高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠角膜荧光素染色评分均显著降低（均为P<0.05）,酚红棉线湿润长度均明显增加（均为P<0.01）;高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠泪膜破裂时间均明显延长（均为P<0.01）。与正常对照组相比,模型组小鼠结膜组织中IL-1α、γ-IFN和TNF-α含量明显增加（均为P<0.05）。治疗后第7天,与模型组相比,高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠结膜组织中IL-1α、γ-IFN和TNF-α含量均明显下降（均为P<0.05）。与正常对照组相比,模型组小鼠结膜组织中Myd88和TLR4蛋白及mRNA相对表达量均显著增加（均为P<0.05）。与模型组相比,治疗后第7天,高剂量外泌体组和普拉洛芬组小鼠结膜组织中Myd88和TLR4蛋白及mRNA相对表达量均明显降低（均为P<0.05）。结论　ADSC-Exos对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼具有明显的治疗作用,其机制可能与ADSC-Exos抑制TLR4信号通路的激活有关。