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1.
人角膜上皮细胞由角膜缘干细胞不断补充, 从而维持眼表稳态及正常视觉功能。热化学烧伤、Stevens-Johnson综合征等眼表损伤或疾病可导致角膜缘干细胞缺损, 严重影响患者视力。当双眼角膜缘干细胞缺损时可考虑非角膜缘性自体上皮组织移植。口腔黏膜上皮细胞是眼表重建的重要种子细胞来源, 体外培养构建的细胞片已在临床应用中取得良好效果。本文围绕载体、培养条件及技术等影响口腔黏膜上皮片培养的各种因素, 以及细胞片应用于临床眼表移植的优缺点, 对利用口腔黏膜上皮治疗角膜缘干细胞缺损的研究进展进行综述, 以期为安全有效地重建眼表上皮提供研究方向。  相似文献   

2.
严重的眼表疾病的治疗一直是眼科临床上的难题,组织工程技术的兴起为眼表重建带来了希望。角膜缘干细胞作为角膜上皮组织更新和再生的源泉,在体外选择近似生理条件下培养可生长增殖,获取足量种子细胞;选择促进角膜上皮细胞生长并具有良好组织相容性的载体来种植种子细胞,从而体外构建成复合角膜上皮移植片重建眼表,目前在动物实验及临床应用上都获得了良好的效果,组织工程化角膜上皮为眼表重提供了较理想的方法,存在着许多优势,但目前属于初步研究阶段,仍面临着许多困难和挑战,有待进一步研究。  相似文献   

3.
胚胎干细胞(ESCs)是一种具有多向分化潜能的细胞,在一定条件诱导下能分化为骨细胞、软骨细胞、肌细胞、血管内皮细胞和神经细胞,在眼表的修复和重建方面具有广阔的应用前景.目前,大量研究已证实,ESCs可以被定向诱导分化为角膜上皮样细胞,并且对眼表损伤的修复也有重要作用.ESCs作为组织工程角膜的种子细胞仍存在一些问题需要解决,如定向分化机制不明确、细胞大量扩增可能存在致瘤问题等.就ESCs向角膜上皮细胞分化的研究进展进行综述.  相似文献   

4.
背景眼表疾病导致的角膜盲已成为全球致盲性角膜疾病中的主要原因之一。随着组织工程技术的发展和进步,组织工程角膜为眼表疾病的治疗开辟了新的途径。目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞(UC—MSCs)移植到兔角膜基质后的分化发育情况,探讨人UC-MSCs分化为角膜上皮细胞以及治疗兔角膜损伤的可行性。方法获取人脐带组织,采用Ⅳ型胶原酶消化法分离纯化人UC—MSCs并传代,取第3代细胞用于扩增和实验。流式细胞仪检测细胞的免疫表型及诱导成骨分化鉴定。24只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为2个组,将人UC—MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上,培养4d后行实验组兔左眼板层角膜移植;对照组以相同的手术方法单纯移植去上皮猪角膜基质。术后对角膜定期行活体激光共焦显微镜检查,并分别于术后2、4、8周摘除各组实验眼行组织病理学和免疫荧光检查,评价移植到兔角膜基质的人UC-MSCs的存活、分化以及移植局部的反应等;应用免疫荧光技术检测移植后角膜上皮细胞中角蛋白3(CK3)、CKl2以及转运蛋白G超家族成员(ABCG2)的表达。结果消化培养的人UC—MSCs呈圆形,细胞胞体较大,贴壁后细胞呈长梭形。培养获得的人UC—MSCs的细胞表型CD105^+/CD29^+/CD44^+/CD34^-/CD45^-,并可诱导分化为成骨细胞。实验组人ISC—MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附良好、生长迅速,术后植片在植床上存活良好,种植了人UC-MSCs的去上皮猪角膜移植到兔眼,可见实验组受体角膜较对照组透明,未见明显新生血管,在活体共焦显微镜下可见新生的角膜上皮样细胞,未发生免疫排斥反应。免疫荧光检测可见在重建的角膜上皮层检测到CK3及CKl2的阳性表达,而未见ABCG2的表达。结论将种植了人UC—MSCs的猪角膜基质移植到损伤的兔角膜后,人UC—MSCs可以存活、增生并分化为角膜上皮样细胞,可用于修复甚至重建损伤的角膜表层。  相似文献   

5.
近年来用以组织工程技术制备的角膜上皮或口腔黏膜上皮细胞植片成为一种目前治疗角膜缘干细胞缺乏性疾病的新技术,能够改善角膜缘的功能,恢复角膜表面的完整性。目前的构建体系常用小鼠胚胎组织来源的3T3成纤维细胞作为饲养细胞,但这种含异种细胞的植片可成为异种病原向人体传播的潜在渠道,也存在异种排斥反应的可能性。因此寻找更安全的饲养细胞成为完善现有技术的一个关键。本研究观察以兔自体结膜成纤维细胞为饲养细胞、兔口腔黏膜上皮细胞为种子细胞构建上皮细胞植片的可行性。  相似文献   

6.
角膜缘干细胞龛的概念及其研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
Zheng TY  Xu JJ 《中华眼科杂志》2008,44(5):469-472
干细胞龛是成体干细胞的集中存储部位,通过特定的细胞外基质和龛细胞提供特殊的微环境,对维持干细胞的高增殖力和诱导定向分化起关键作用.角膜缘干细胞(LSC)是目前公认的角膜上皮的成体干细胞,其相关理论基础与临床研究发展迅速,但是,目前对LSC龛的了解略显滞后.本文对LSC龛在角膜缘上皮小囊结构的定位;龛环境中血清源性和基质细胞源性细胞因子引发LSC胞内特定的信息通路;受损的角膜缘龛环境影响LSC的存活和功能以及LSC体外培养中通过羊膜载体重建龛环境等重要问题进行归纳,分析了LSC龛的研究现状.  相似文献   

7.
目的:探讨增视性角膜移植术后角膜植片的透明率及其影响因素。 方法:回顾性病例研究。选择2004-01/2005-12于青岛眼科医院行增视性穿透性角膜移植术(optical penetrating keratoplasty,PKP)的患者97例105眼,包括圆锥角膜,角膜基质营养不良,外伤、感染等因素导致的角膜白斑,单纯疱疹病毒性角膜炎稳定期,角膜内皮细胞功能失代偿等。统计分析术前视力及术后最佳矫正视力、角膜植片透明情况、内皮细胞计数、是否排斥、植片混浊原因,采用R×C表及四格表的χ2检验。 结果:增视性PKP术后角膜植片透明率:术后1a 89.8%,术后2a 83.7%,术后3a 78.3%,术后4a 67.1%,术后5a 63.6%。术后5a时圆锥角膜角膜植片透明率最高,达94.1%,角膜内皮功能失代偿最低,为14.3%。术后最佳矫正视力0.05~1.0,0.8以上者圆锥角膜所占比例最多,达72.5%,角膜内皮功能失代偿最少,占6.3%。导致角膜植片混浊的主要原因为角膜植片免疫排斥及角膜植片内皮细胞功能失代偿。 结论:增视性PKP术后角膜植片透明率逐年稳定下降,相邻两年之间无显著性差异;原发病不同,角膜植片透明率有差异,圆锥角膜手术效果最佳;角膜植片混浊的主要原因为免疫排斥及角膜植片内皮功能失代偿。  相似文献   

8.
角膜缘干细胞的研究进展   总被引:6,自引:0,他引:6  
健康的角膜上皮是维系完整的眼表以及良好视功能的前提条件,角膜上皮的稳定是由一群位于角膜缘基底部的干细胞实现的。一、角膜缘干细胞的概念Davanger和Evensen[1]于1971年首次观察到角膜缘色素样细胞作水平向心运动,推测角膜上皮细胞更替源于角膜缘,提出了角膜缘干细胞(limbalstem  相似文献   

9.
Hou GH  Ye N  Wu J  Xu JT  Shi WJ  Chen Y  Liu XH  Zhang ZH 《中华眼科杂志》2010,46(8):719-724
目的 应用猪板层角膜做载体将人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSC)跨胚层诱导为上皮样细胞,甚至角膜上皮样细胞,初步探讨hMSC作为构建组织工程角膜种子细胞的可行性.方法 实验研究.用密度梯度离心培养技术结合贴壁培养法分离纯化hMSC并传代,对体外培养的hMSC进行免疫表型鉴定.将传代后的hMSC接种于去上皮的猪角膜基质片前弹力层表面培养诱导分化,免疫荧光检测角膜上皮细胞标志物角蛋白12(CK12)以及角膜缘干细胞标记物ABCG2和CK19的表达.运用体外培养的方法使种植在前弹力层表面的细胞复层化.待细胞融合形成单层后,置入插入式培养皿中进行气液界面培养.培养4周后进行HE染色及免疫组织化学检测,光镜下观察其复层情况.结果 获得的hMSC可以在体外培养扩增,表现出很强的增殖潜能.流式细胞仪示:培养的hMSC CD45阳性率为0.06%,CD34为0.41%,CD44为86.43%,CD29为85.72%,CD105为90.72%.诱导4周后部分细胞表达CK12和CK19,不表达ABCG2.运用气液界面培养法进行体外复层的结果显示可以形成1~2层的上皮样细胞,并很可能为角膜上皮样细胞.结论 在本实验的诱导条件下,hMSC可以分化为上皮样细胞,并很可能为角膜上皮样细胞,hMSC有可能作为组织工程技术角膜上皮重建的种子细胞的选择.  相似文献   

10.
目的探讨白内障摘出术后角膜失代偿的组织病理学改变。方法收集91例(91眼)白内障术后角膜失代偿行穿透性角膜移植的受体角膜标本,常规包埋切片,全部做HE染色,部分做PAS染色和胶性铁染色,光学显微镜观察。结果角膜上皮细胞水肿,细胞间隙增宽,上皮下大泡形成,表面不规则,部分病例角膜上皮内生。前弹力层肿胀,局部破坏消失。角膜基质层增厚水肿,基质纤维间隙增宽,部分病例有炎症细胞浸润,伴新生血管和纤维增生。后弹力层略增厚,板层样染色不均,部分形成双层后弹力层样外观。内皮细胞扩大、退变,稀疏甚至消失。部分病例角膜后膜形成。结论角膜内皮细胞大量减少、角膜上皮内生、角膜后膜形成是导致白内障术后角膜失代偿病理改变的原因。  相似文献   

11.
AIM: To investigate the feasibility of corneal anterior lamellar reconstruction with human corneal epithelial cells and fibroblasts, and an acellular porcine cornea matrix (APCM) in vitro. METHODS: The scaffold was prepared from fresh porcine corneas which were treated with 0.5% sodium dodecyl sulfate (SDS) solution and the complete removal of corneal cells was confirmed by hematoxylin-eosin (HE) staining and 4’, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining. Human corneal fibroblasts and epithelial cells were cultured with leaching liquid extracted from APCM, and then cell proliferative ability was evaluated by MTT assay. To construct a human corneal anterior lamellar replacement, corneal fibroblasts were injected into the APCM and cultured for 3d, followed by culturing corneal epithelial cells on the stroma construction surface for another 10d. The corneal replacement was analyzed by HE staining, and immunofluorescence staining. RESULTS: Histological examination indicated that there were no cells in the APCM by HE staining, and DAPI staining did not detect any residual DNA. The leaching liquid from APCM had little influence on the proliferation ability of human corneal fibroblasts and epithelial cells. At 10d, a continuous 3 to 5 layers of human corneal epithelial cells covering the surface of the APCM was observed, and the injected corneal fibroblasts distributed within the scaffold. The phenotype of the construction was similar to normal human corneas, with high expression of cytokeratin 12 in the epithelial cell layer and high expression of vimentin in the stroma. CONCLUSION: Corneal anterior lamellar replacement can be reconstructed in vitro by cultivating human corneal epithelial cells and fibroblasts with an acellular porcine cornea matrix. This laid the foundation for the further transplantation in vivo.  相似文献   

12.
PURPOSE: To construct a full-thickness biological substitute of the rabbit cornea by tissue engineering. METHODS: Ten rabbit corneas were surgically excised, and the three main cell types of the cornea (epithelial, stromal, and endothelial cells) were cultured. Genetic profiling of the cultured cells was performed by RT-PCR for the genes COL8 and KRT12. To develop an organotypic rabbit cornea equivalent, we used a sequential culture technique on porous culture inserts. First, endothelial cells were seeded on the base of the inserts. Then, a stroma substitute made of cultured keratocytes entrapped in a gel of human fibrin and 0.1% agarose was developed. Finally, cultured corneal epithelial cells were grown on the surface of the scaffold. Stratification of the epithelial cell layer was promoted by using an air-liquid culture technique. Corneal substitutes were analyzed by light and electron microscopy. RESULTS: All three types of corneal cells were efficiently cultured in the laboratory, expanded, and used to construct a full-thickness cornea substitute. Gene expression analyses confirmed that cultured endothelial cells expressed the COL8 gene, whereas epithelial cells expressed KRT12. Microscopic evaluation of the cornea substitutes demonstrated that epithelial cells tended to form a normal stratified layer and that stromal keratocytes proliferated rapidly in the stromal substitute. The endothelial monolayer exhibited a pattern similar to a normal corneal endothelium. CONCLUSIONS: These findings suggest that development of a full-thickness rabbit cornea model is possible in the laboratory and may open new avenues for research.  相似文献   

13.
背景构建组织工程化角膜时,载体的选择十分重要。目前有多种载体可供选用,但脱细胞角膜基质是公认的较好载体。目的观察猪脱细胞角膜基质的组织结构特点,评价其与异种角膜基质和上皮细胞的生物相容性。方法取猪角膜组织进行组织块培养,经胰蛋白酶-EDTA酶消化角膜上皮、基质、内皮细胞,支架组织于-20℃冷冻干燥后灭菌保存。猪脱细胞角膜基质石蜡切片行常规苏木精一伊红染色,光学显微镜下观察组织的形态学特征;扫描电镜下观察其组织结构特点;并对其物理特性,如抗拉性、膨胀性、含水量和透明度进行评价。将猪脱细胞角膜基质移植到兔角膜基质层内,同时与体外培养的兔角膜上皮细胞共培养4周,分析其组织和细胞生物相容性。结果经酶消化处理后猪角膜组织中未见上皮、基质和内皮细胞,其胶原纤维直径大小、排列与正常角膜组织相同,抗拉性、膨胀性、含水量和透明度等物理特性与正常猪角膜相似。猪脱细胞角膜基质行异种兔角膜基质层间移植1周时可见轻度水肿,2周后水肿基本消退,4周时透明度较好。猪脱细胞角膜基质与兔角膜基质之间贴附良好,未见炎症反应及新生血管。兔角膜上皮细胞接种于猪脱细胞角膜基质上共培养4周后CK3表达阳性。猪脱细胞角膜基质脱水前与脱水2h、4h后及正常猪角膜基质间的抗拉性、膨胀性、含水量的差异均无统计学意义(P〉0.05),但脱水2h、4h后及正常猪角膜基质的透明度明显好于脱水前,差异均有统计学意义(P〈0.01)。结论猪脱细胞角膜基质组织结构与正常猪角膜相似,与兔角膜基质和上皮细胞具有良好的生物相容性。  相似文献   

14.
目的观察以纤维蛋白胶(FG)为载体构建兔角膜上皮、基质和内皮细胞片,以及FG对兔结膜和角膜的黏合作用。方法在培养板孔底制作薄层和厚层FG,将培养兔角膜3种细胞分别接种于FG表面,观察细胞生长情况。FG对兔结膜的黏合研究:分为A组(结膜原位粘合组),B组(结膜移位粘合组),对照组(单纯切除结膜植片),每组5只眼,观察结膜组织黏合情况。FG对兔角膜的黏合研究:3例兔前板层角膜移植术,先用10—0尼龙线间断缝合4针固定植片,再用FG黏合,将植片固定于植床。结果角膜3种细胞在薄层和厚层FG表面生长良好:角膜上皮细胞可形成单层和复层;角膜基质细胞间网状连接;角膜内皮细胞排列紧密。对兔结膜的黏合研究:A组和B组植片与植床对位良好,紧密黏合。组织切片显示术后第4周A组和B组结膜上皮完整,炎症基本消退。对照组结膜上皮有局部脱落区,纤维层局部显示瘢痕组织结构特征。兔前板层角膜移植术后3个月,植片与受体角膜愈合良好。结论FG可作为角膜3种细胞的生长载体构建细胞片。FG对兔结膜和角膜组织有良好的黏合作用。  相似文献   

15.
目的 探讨利用皮肤成纤维细胞替代角膜基质细胞,构建兔角膜基质组织的可行性.方法 实验研究.通过酶消化的方法分离培养同种异体新生兔皮肤成纤维细胞,用腺病毒转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,接种细胞于聚羟基乙酸(PGA)圆盘支架,形成细胞-PGA复合物,移植于成年兔角膜基质层.动态观察构建组织在角膜内的变化情况,并于第3、6、8周取材进行大体、组织学、GFP表达及角膜基质特异蛋白Keratocan的检测.透射电镜观察胶原纤维排列并测量其直径.应用t检验统计分析数据.结果 术后8周,实验侧角膜逐渐恢复透明,形成的新生角膜基质样组织,排列较规则.荧光显微镜检测显示GFP阳性细胞存在,形成基质板层样组织,同时该部分细胞表达Keratocan.胶原纤维排列规则,实验组胶原纤维直径为(33.08±2.47)nm,经统计学分析,与正常角膜差异无统计学意义(t=1.80,P=0.0771).结论 皮肤成纤维细胞可以替代角膜基质细胞,在兔角膜内构建组织工程角膜基质组织.  相似文献   

16.
目的:探讨单纯去细胞猪角膜基质材料诱导兔自体角膜细胞再生及修复兔角膜溃疡的可行性.方法:新西兰白兔10只制作成角膜溃疡模型,接受单纯去细胞猪角膜材料的穿透性角膜移植术,排除发生手术并发症眼(2只),剩余8只术后进行大体观察(裂隙灯检查),观察植片透明度、新生血管、上皮修复情况.分别于3,6,8,16和24wk取材进行组织学观察,并取16wk兔行超声生物显微镜(UBM)检查、32wk兔行透射电镜检查.结果:角膜溃疡修复,眼表重建8只.初期角膜上皮反复糜烂,荧光素纳染色有荧光堆积,HE 组织学检查提示4wk时上皮细胞复层化.角膜基质细胞沿材料板层生长,排列规律;3~7d角膜缘新生血管发生,位于浅基质层,1~20d达高峰,深入植片或沿缝线环形生长,拆线后逐渐消退,32wk后闭锁仅余3~4支微血管;UBM提示角膜恢复自然曲率,植床与植片尚未修复完善.TEM 提示成纤维细胞分泌胶原原纤维,参与材料改建.结论:CACM支持细胞3D生长,促进自体细胞长入,参与角膜修复改建.  相似文献   

17.
傅瑶  陈苹  陆雯娟  邵春益  李瑾  范先群 《眼科》2009,18(6):398-401
目的探讨以异种猪角膜脱细胞基质为供体植片,分析兔角膜进行前板层移植后的生物相容性:设计实验研究。研究对象新西兰白兔。方法应用1%TritonX-100及冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,切取1/3厚度前板层作为供体角膜植片,对兔眼角膜前板层切除后进行移植,同时以新鲜猪角膜板层为供体对兔进行前板层移植作对照。通过术后角膜透明度、组织结构观察,评价猪角膜脱细胞基质的生物相容性及植片转归的情况。主要指标角膜透明度和组织学HE染色。结果制备的猪角膜脱细胞基质植片作前板层移植到兔眼后,未见明显的新生血管、炎症反应、角膜坏死等排斥现象,观察期内植片较透明;脱细胞基质表面上皮化良好,植片基质板层与植床逐渐融合,植片内有宿主细胞迁入生长,板层结构与正常角膜相似。结论猪角膜脱细胞基质具有良好的生物相容性、安全性和低抗原性,有望成为角膜板层移植的供体材料。  相似文献   

18.
目的 探讨脱细胞猪角膜基质的生物相容性,评价组织工程化角膜上皮组织作供体的可行性,观察支架材料的细胞化情况和种子细胞的存活情况.方法 实验研究.采用完全随机化设计的方法,用Dispase-Triton-X-100处理猪角膜基质,脱去角膜细胞;以角膜基质囊袋内植入的方法,观察异种角膜基质植入后的生物相容性,A组:脱细胞猪角膜基质,B组:新鲜猪角膜基质,C组:空白对照组.以组织工程化雄性角膜上皮组织为供体,同种雌性为受体,作板层角膜移植,观察角膜的混浊、水肿、新生血管等情况;组织病理学和免疫组化方法检测支架材料的细胞化情况,Y染色体性别决定基因(SRY)-聚合酶链反应(PCR)方法追踪种子细胞的存活情况.结果 猪角膜基质植入兔角膜囊袋后,角膜逐渐恢复透明,排斥反应指数<6,组织病理学观察角膜结构完整,胶原纤维平行排列,少许细胞长入脱细胞猪角膜基质边缘,各组免疫组化检测未见CIM+、CD8+T淋巴细胞浸润.组织工程化角膜上皮作异体板层角膜移植后,3~4 d上皮光滑,10~20 d变为透明;15 d时角膜上皮、基质、内皮完整,上皮细胞约4或5层结构,少许基质细胞长入支架,1个月时可见角膜上皮细胞约7或8层细胞,基质纤维排列规则,多量细胞长入脱细胞角膜基质.上皮细胞表达CK3,支架内新生细胞表达波形蛋白.SRY-PCR结果显示种子细胞可以在受体内长期存活.结论 脱细胞猪角膜基质生物相容性良好,组织工程化角膜上皮可作为板层角膜移植的供体,脱细胞猪角膜基质细胞化良好,种子细胞可以在受体内长期存活.  相似文献   

19.
Organotypic cornea equivalents are used as in vitro models for permeation studies. Many ophthalmic drugs are applied as ester prodrugs to achieve a higher bioavailability. The esterase activity of three corneal human cell lines (epithelial, stromal, endothelial cells) as well as of excised porcine cornea, human donor cornea and human cornea construct (HCC) was investigated and compared. Esterase activity was determined using p-nitrophenyl acetate and hydrocortisone acetate (HCA) as esterase substrates. Hydrocortisone acetate permeation across porcine cornea, human donor cornea and HCC was studied in vitro using Franz-diffusion cells. Corneal epithelial cells showed the highest esterase activity and only small differences to keratocytes and endothelial cells were detectable. The permeation barrier properties of the different corneal tissues were very similar in the case of HCA permeation whereas HCA metabolism rates were in the ranking order of porcine cornea > HCC > human donor cornea.Permeation and metabolism studies indicate that the in vitro permeation model HCC is able to adequately convert hydrocortisone acetate to hydrocortisone.  相似文献   

20.
Fan XQ  Chen P  Fu Y 《中华眼科杂志》2007,43(5):437-441
目的探讨以异种角膜脱细胞基质为载体,体外构建生物角膜的可能性和方法。方法应用去垢剂1%TritonX-100冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,在其上皮面和内皮面分别接种兔角膜上皮细胞和内皮细胞,体外培养2周。将复合物制成组织切片,在光镜下观察组织形态(HE染色),采用免疫组织化学方法检测角膜上皮特异性细胞角蛋白3(CK3),使用锥虫蓝联合茜素红染色观察内皮细胞,在扫描电镜下观察上皮面和内皮面的超微结构。结果体外培养生物角膜获得上皮、无细胞基质和内皮三层复合结构。4或5层复层上皮中以扁平细胞为主,胞质内特异性CK3表达阳性;内皮层为一连续的单层扁平细胞,细胞活性良好,锥虫蓝联合茜素红染色显示组织呈典型的蜂巢样镶嵌结构。扫描电镜下观察,在载体的上皮面细胞呈复层样生长,形态近似扁平与梭形之间;内皮面为多边形单层细胞,表面具有微绒毛结构。结论构建的生物角膜为上皮一脱细胞基质载体一内皮复合物,初具角膜的雏形结构。异种角膜脱细胞基质提供了良好的细胞生长界面,有望成为体外构建角膜的载体材料。  相似文献   

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