实验性自身免疫性葡萄膜炎炎性因子表达的动态观察

背景 C57BL/6 (B6)小鼠是实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)动物模型常用的小鼠种系,以往研究证明葡萄膜炎的发病机制与辅助性T(Th)细胞分泌的炎性细胞因子相关,但各种Th细胞在EAU发病中的相互作用并不十分清楚. 目的 研究光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)诱导不同天数后EAU小鼠脾脏和血清中炎性因子的动态变化,探讨各种炎性因子在EAU病理过程中的作用. 方法 用IRBP及完全弗氏佐剂(CFA)的乳化液在小鼠的尾根部及躯干部均匀注射5个点以免疫B6小鼠44只,免疫后每周3次用间接检眼镜观察小鼠的EAU发病情况,并参照Thurau的评分标准进行炎症评分.于注射后第30天摘取20只模型小鼠眼球,于瞳孔视神经平面制备切片行组织病理学检测.分别于注射前,注射后第2、5、10、15、20、25、30天取模型小鼠脾脏,提取RNA,逆转录扩增并行凝胶电泳,检测白细胞介素-17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)和IL-10等因子的mRNA含量,同时收集相同时间点小鼠的血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中上述因子的质量浓度. 结果 IRBP及CFA乳化液免疫B6小鼠后第12天可见轻度葡萄膜炎症,炎症评分为0.5分,炎症反应在免疫后第13～ 15天最重,评分为1.0分,至第30天炎症明显减轻,评分为0.5.组织病理学检查显示,注射后第30天模型鼠眼部反应与间接检眼镜检查结果吻合,病理评分为0.5.模型鼠血清炎性因子检测结果显示,注射后第5天,小鼠血清中IL-17的质量浓度达到峰值,为(51.85±2.42) ng/L,随着时间的延长开始降低.到第15天时降到最低,为(4.01 ±0.06)ng/L,但在第25天时再次升高至(25.00±0.94) ng/L,之后逐渐下降,第30天时,血清中IL-17的质量浓度为(6.01±0.21)ng/L,与免疫前的(0.98±0.05) ng/L相比差异有统计学意义(P=0.000).小鼠免疫前血清中IFN-γ的质量浓度为(1.02±0.09) ng/L,在注射后第5天达到(50.54±0.48)ng/L,于注射后第10天达到峰值,为(73.21±0.12) ng/L,然后逐渐降低.到第30天时,血清中IFN-γ的质量浓度为(5.15±0.18) ng/L,与免疫前相比差异仍有统计学意义(P=0.000).注射后模型鼠血清中TNF-α质量浓度升高迅速,免疫后第2天质量浓度较免疫前明显升高,第5天达到峰值,质量浓度为(134.25±0.59) ng/L,但至第15天降到最低.注射后第20天再次升高,达到(60.54±0.62)ng/L,之后又逐渐下降,第30天时和免疫前相比差异无统计学意义(P=0.660).IL-10在免疫后第5天可以被检测到,并且随着注射后时间的延长逐渐升高.到第15天时达到高峰,随后开始降低,第30天与免疫前相比差异有统计学意义(P=0.000).脾脏中IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ 4种炎性因子mRNA表达变化趋势和血清中的变化一致. 结论 在B6小鼠的EAU中,Th1、Th2、Th17相关炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-10及IL-17具有特征性变化规律,IFN-γ可能与EAU的急性期病理过程相关;IL-17、TNF-α可能与葡萄膜炎的慢性化、复发性有关;IL-10可缓解EAU的病理过程.     

Th1/Th2细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达

目的 通过检测Th1/Th2细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达水平,探讨机体免疫在该病发展中的作用. 方法应用角膜表层镜法建立Balb/c小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,在感染后第1、3、5、7天,裂隙灯显微镜观察角膜炎特点;HE染色观察角膜病理变化;半定量RT-PCR和ELISA检测角膜中Thl细胞因子(IFN-γL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)基因mRNA和蛋白的表达,半定量RT-PCR检测T-bet基因mRNA的表达;直线相关分析检测T-bet mRNA与IFN-比值的相关性. 结果角膜接种菌液后,早期角膜浸润混浊进行性加重,第5天后新生血管大量生长;HE染色可见第1、3天在角膜缘、角膜基质及前房中有大量的炎症细胞浸润,第5天后炎症细胞减少,角膜基质中纤维细胞逐渐增多;RT-PCR与ELISA检测结果表明,Thl细胞因子(IFN-γL-12)和Th2细胞因子(IL-4、IL-10)基因mRNA及蛋白在角膜接种菌液后均出现表达,且IFN-γL-12的表达显著强于IL-4、IL-10;IFN-γ/IL-4比值在第3天达最高值,而后逐渐降低;T-bet mRNA在第3天达最高值;T-bet mRNA的表达与IFN-γ/IL-4比值呈正相关(P＜0.05). 结论在真菌性角膜炎中,Thl/Th2型免疫应答共同参与调节机体的抗真菌免疫,但以Th1型应答为主;角膜感染真菌后第3天机体的免疫力达最强.     

甲状腺相关眼病患者血清中Th1 Th2型细胞因子平衡偏离的研究

目的 探讨血清中Th1、Th2型细胞因子平衡偏离与甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)发病、活动性及大剂量糖皮质激素治疗反应的关系.方法 选取TAO患者52例,按CAS评分标准将其分为活动期29例(CAS≥4)和非活动期23例(CAS＜4).其中活动期患者中有22例给予大剂量糖皮质激素治疗;另外选取初诊Graves病患者15例及正常对照15例,收集上述人静脉血,行激素冲击治疗的患者于冲击前后各抽血1次.采用放射免疫法检测血清中IL-4浓度,ELISA法检测IFN γ浓度.比较活动期与非活动期TAO组、GD组以及正常对照组血清上述指标的变化;评价糖皮质激素治疗对上述指标的影响.结果 ①TAO及GD患者血清中IL-4、IFNγ浓度均较对照组明显增高.②活动期TAO与非活动期TAO相比血清中IL-4、IFN7浓度无明显统计学差异,但活动期IL-4/IFN γ比值较非活动期降低,有统计学差异.③22例激素冲击治疗患者中15例有效(CAS减少≥2),7例无效(CAS减少＜2),有效组治疗后血清中IFN γ浓度明显较治疗前降低,IL-4/IFNγ比值增高,而无效组未见明显变化.结论 Th1/Th2在一定程度可以作为TAO活动性判断指标之一,活动期TAO Th2/Th1比值下降,非活动期无明显变化.在一定程度还可以作为大剂量糖皮质激素治疗疗效的判断指标之一,有效者Th2/Th1比值上升,向Th2偏移,无效者治疗前后无明显改变.     

龙胆泻肝汤抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠Th1、Th2细胞分化的影响

目的　探讨龙胆泻肝汤（LXD）对Notch信号通路活化的抑制作用及其对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠Th1、Th2细胞分化的影响。方法　将30只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组、LXD干预组大鼠均诱导EAU,LXD干预组大鼠造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU模型组和正常对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃。干预后12 d分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测Rbpj基因的表达,ELISA检测Rbpj、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）蛋白的表达,流式细胞仪检测各组织中Th1、Th2细胞的表达水平,分析Th1/Th2细胞比例的变化。结果　干预后12 d,Q-PCR检测发现,与正常对照组大鼠相比, Rbpj mRNA在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中均呈显著上调表达(均为P<0.001);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj mRNA相对表达水平均显著降低(均为P<0.01)。ELISA检测结果发现,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj和IFN-γ蛋白表达水平均明显高于正常对照组,IL-4蛋白表达水平均明显低于正常对照组（均为P＜0.05);相比于EAU模型组,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中Rbpj IFN-γ蛋白表达水平均显著降低,IL-4蛋白表达水平均显著升高（均为P＜0.05)。流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Th1细胞水平均明显升高,Th2细胞水平均明显降低,Th1/Th2细胞比例失衡（均为P＜0.05）;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中Th1细胞水平均明显下降,Th2细胞水平均明显升高,两者细胞比例逐渐恢复均衡（均为P<0.01)。结论　LXD可通过下调EAU大鼠Notch信号通路转录因子Rbpj的表达水平抑制Notch信号通路的活化,显著促进EAU大鼠中Th1/Th2细胞比例恢复平衡并改善免疫微环境,从而达到治疗葡萄膜炎的目的。     

白细胞介素-23受体过表达对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的初步探讨白细胞介素(IL)-23受体(IL-23R)过表达对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)模型小鼠辅助性T细胞17 (Th17细胞)/调节性T细胞(Treg细胞)平衡的影响。方法 8周龄雌性C57BL/6J小鼠12只, 随机分为LV-Ctrl组、LV-IL-23R组, 每组各6只。两组小鼠经尾静脉分别注射LV-Ctrl、LV-IL-23R慢病毒;注射后7 d采用光感受器间维生素A类结合蛋白1-20主动免疫构建EAU小鼠模型。免疫后13 d开始, 每2天使用间接检眼镜观察小鼠眼底并进行临床评分。免疫后30 d, 苏木精-伊红染色观察小鼠视网膜组织病理学改变。酶联免疫吸附测定检测两组小鼠血清中IL-17水平;流式细胞仪检测Th17细胞和Treg细胞比例;实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-23R、IL-17、维甲酸相关孤儿受体γt (RORγt)、IL-10和叉头状转录因子p3 (Foxp3) mRNA相对表达量。组间比较采用重复测量方差分析、独立样本Mann-WhitneyU检验和独立样本t检验。结果与LV-Ctrl组比较, LV-IL-23R组小鼠视网膜炎症反应更重。免疫后13 ...     

IL-12及Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用

目的探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞(dendriticcell,DC)诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用。方法将雄性SD受体大鼠随机分为3组,每组14只,分别为对照组(术前3d尾静脉注射PBS0.1mL)、6-DC组(术前3d尾静脉注射第6天的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)及IL-10-DC组(术前3d尾静脉注射IL-10修饰的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)。以雌性Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。术后对受体大鼠角膜植片进行临床观察,记录角膜植片存活时间;移植术后第14天检测术眼角膜中细胞因子IL-12、Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-10mRNA的表达。结果对照组、6-DC组及IL-10-DC组角膜植片的存活时间分别为(10.63±2.00)d、(18.88±1.36)d及(24.50±2.07)d。6-DC组、IL-10-DC组与对照组比较,角膜植片存活时间明显延长(均为P<0.01);IL-10-DC组角膜植片存活时间显著长于6-DC组(P<0.01)。术后第14天,对照组角膜组织IL-12(0.80±0.00)及Th1细胞因子IL-2(1.03±0.06)、IFN-γ(0.97±0.03)的mRNA表达水平最高,而Th2细胞因子IL-4(0.13±0.00)、IL-10(0.34±0.02)的mRNA表达最低;IL-10-DC组IL-12(0.39±0.01)及Th1细胞因子IL-2(0.61±0.01)、IFN-γ(0.43±0.02)的mRNA表达水平最低,Th2细胞因子IL-4(0.19±0.00)、IL-10(0.88±0.01)的mRNA表达最高,三组比较差异具有统计学意义。结论 IL-10修饰的树突状细胞能诱导大鼠角膜移植免疫耐受;IL-12、Th1/Th2细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用,IL-12mRNA低表达及Th1/Th2细胞因子偏离是IL-10修饰的树突状细胞诱导角膜移植免疫耐受机制之一。     

细胞因子在内毒素诱导的前葡萄膜炎小鼠房水和血清中的表达

目的 通过分析内毒素诱导的C3H/HeN小鼠的前葡萄膜炎模型中房水和血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1、IL-6、IL-10、干扰素-y(interferon-γ,IFN-γ)的浓度,探讨急性前葡萄膜炎可能的发病机制.方法 取180只C3H/HeN小鼠,分为对照组(n-30)和实验组(n=150),将霍乱弧菌内毒素(18 001株,古典生物型,小川血清型)溶于无菌生理盐水中,终浓度为2×103g·L-1,实验组小鼠足底注射100μL制作内毒素诱导的前葡萄膜炎模型;对照组注射等量生理盐水.于诱导后4 h、8 h、16 h、24 h、48 h断颈处死实验组小鼠(各30只).以10只小鼠为一单样本,微量进样器抽取前房水;眼球摘除后微量进样器于眼窝处取外周血.对照组于注射生理盐水后即刻处死小鼠,样本收集方法同实验组.微球流式技术栓测小鼠房水及血清中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10、IFN-γ的浓度.结果 所有实验组小鼠均成功诱导出急性前葡萄膜炎.在小鼠房水中,TNF-α于4 h达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.002);4 h、8 h、16 h及24 h时,在房水和血清内的浓度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).IL-1、IL-6在血清中均于16 h达峰值,与对照组相比差异均有统计学(P=0.001、0.000);且诱导后各时间点在房水内的浓度均高于血清.IL-10在房水中于24 h达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.003),与相同时间点血清内的浓度相比差异亦有统计学意义(P=0.003).IFN-γ于4 h、24 h在房水和血清中的表达差异有统计学意义(P=0.033、0.032).各细胞因子在房水中的表达变化基本与炎症进程相符.结论 细胞因子在眼内炎症发生过程中起着重要作用,网络调控将成为治疗方向.     

糖皮质激素对葡萄膜炎患者外周血Th1和Th2细胞因子的影响

目的探讨糖皮质激素治疗前后葡萄膜炎患者外周血单核细胞（PBMC）培养上清液Th1/Th2细胞因子的变化。方法应用酶联免疫吸附试验检测治疗前后葡萄膜炎患者PBMC上清液干扰素（IFN-γ）、白介素（IL）-2、IL-4和IL-10水平的变化,30例健康人作为正常对照。结果急性葡萄膜炎患者PBMC上清液IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平与IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10比值明显高于恢复期患者和正常对照者（P=0.000）。糖皮质激素治疗后,IFN-γ和IL-2水平、IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-10比值降低（P=0.000）,IL-10水平升高（P=0.000）。治疗前不同类型葡萄膜炎组仅IFN-γ和IL-10水平差异有统计学意义（P〈0.01）,治疗后IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ/IL-10比值差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗前后前葡萄膜炎和Vogt-小柳原田病患者除IL-4外,其余细胞因子及比值差异均有统计学意义（P〈0.05）;Behcet病患者除IL-4和IL-10外,其余细胞因子及比值差异均有统计学意义（P〈0.01）。治疗前后葡萄膜炎患者IFN-γ与IL-2水平间及IL-4与IL-10水平间呈正相关（P=0.000）。结论急性葡萄膜炎患者PBMC中Th1细胞因子显著升高并占优势,表明Th1/Th2细胞因子不平衡性与葡萄膜炎的发病有关。     

血清Th1、Th2亚群细胞因子在眼球穿通伤患者治疗前后的临床观察

目的探讨血清Th1、Th2亚群细胞因子在眼球穿通伤患者治疗前后变化的临床意义。方法眼球穿通伤组30例(30只眼),并设立健康人对照组30例(30只眼)。采用ELISA法检测血清细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10含量的动态变化。结果 (1)治疗组受伤早期较对照组除IFN-γ降低外,其余均升高,其中IL-2、IL-6、IL-10升高明显,差异有统计学意义(P<0.05);(2)治疗组治疗前后检测的4种细胞因子水平均降低,其中IL-2、IL-6、IL-10降低明显,差异有统计学意义(P<0.05);(3)治疗组入院治疗后的白细胞(WBC)和中性粒细胞(N)明显降低,视力改善水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论眼球穿通伤患者治疗前后血清中Th1、Th2亚群细胞因子的动态变化与疾病发生及病程进展有密切联系,并且经抗感染治疗后可降低Th1、Th2炎性因子的大量分泌和WBC、N的增殖,有利于降低自身免疫性交感性眼炎的发生。     

Toll样受体2调节Th细胞极化对小鼠角膜移植排斥反应发生的影响

目的 探究Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)是否通过调节辅助性T细胞(T helper cells,Th)极化影响角膜移植排斥反应的发生.方法 取30只C57BL/6小鼠和30只TLR2基因敲除小鼠为受体,BALB/c小鼠为供体,在受体小鼠右眼行同种异体角膜移植术,分别为野生组和基因敲除组;取19只C57BL/6小鼠右眼行自体角膜移植术,为自体组.术后每周两次裂隙灯下观察植片水肿程度和透明度,参照Sonoda评分标准对排斥指数(reject index,RI)进行评分;术后14 d收集角膜.分别取9只C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠作为野生对照组和基因敲除对照组,行常规HE染色和实时荧光定量PCR检测.结果 术后随时间变化各手术组植片水肿和混浊程度不一,以野生组最为严重.角膜RI评分显示术后7d、14 d、21 d,基因敲除组(0.80 ±0.83、0.90±0.55、1.35±0.99)低于野生组(1.55 ±0.94、2.25 ±0.97、2.55±1.19),差异均有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000).HE染色显示,野生组角膜基质层出现水肿和大量炎性细胞;而基因敲除组和自体组炎症反应较轻.PCR检测显示,基因敲除组角膜Th1和Th17细胞因子(IFN-γ和IL-17)mRNA表达(1.94±0.34、2.62±0.30)比野生组(4.27±0.37、3.99±0.40)低,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001);Th2细胞因子(IL-4)三组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除TLR2可能通过抑制Th向Th1和Th17极化,降低角膜移植排斥率.     

采用人促甲状腺激素受体活化的脾细胞免疫小鼠建立甲状腺相关眼病动物模型的研究

目的采用人促甲状腺激素受体活化的脾细胞免疫同源BALB/c小鼠建立甲状腺相关眼病(TAO)动物模型。方法将23只BALB/c小鼠预处理后用完全随机设计的方法分为2组:重组质粒免疫组(A组)18只,空质粒免疫组(B组)5只,分别接受重组质粒pcDNA3·1/hTSHR和空质粒pcDNA3·1免疫,免疫后第3、6周加强免疫2次。18周后处死所有小鼠,机械分离脾细胞,取眼眶组织做病理学观察。另取26只BALB/c小鼠用完全随机设计的方法分为2组:活化脾细胞免疫组(C组)16只和未活化脾细胞免疫组(D组)10只,分别接受A组和B组的脾细胞免疫。4周后处死所有小鼠,取眼眶组织作病理学观察,用放射免疫法测定血清总甲状腺素水平,免疫放射法测定血清促甲状腺激素水平,酶联免疫吸附法测定血清促甲状腺激素受体抗体。结果A组:约25%小鼠眼眶组织出现黏液变性、水肿,无明显纤维组织和脂肪组织增生,肌纤维无变性断裂。C组:约50%小鼠眼眶组织出现明显黏液变性、水肿,局部纤维组织和脂肪组织增生,肌纤维透明变性断裂;电镜下可见滑面内质网扩张,肌原纤维排列紊乱。B组和D组:小鼠的眼眶组织均无形态学改变。脾细胞免疫后4周,血清总甲状腺素:C组(7·130±1·017)μg/dl与D组(6·431±0·573)μg/dl相比显著升高,差异有统计学意义(P=0·036);血清促甲状腺激素:C组(0·070±0·032)μIU/ml与D组(0·098±0·020)μIU/ml相比显著降低,差异有统计学意义(P=0·020);血清促甲状腺激素受体抗体:C组(0·202±0·067)与D组(0·151±0·055)相比无显著升高,差异无统计学意义(P=0·055)。结论采用人促甲状腺激素受体活化的脾细胞免疫同源BALB/c小鼠所构建的动物模型与人TAO的组织学特征非常接近,是一种可行、有效的方法。促甲状腺激素受体和针对该受体的T淋巴细胞在其自身免疫反应过程中具有重要作用。     

Differentiation of Th1 and Th2 cells in lymph nodes and spleens of mice during experimental autoimmune uveoretinitis

PURPOSE: Experimental autoimmune uveoretinitis (EAU) is a T-cell-mediated autoimmune disease that can be elicited in susceptible rodent strains by immunization with a retinal autoantigen, such as interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP). In this study, we investigated whether there is a correlation between inflammation in the eye and T-helper (Th)1- and Th2-type responses in the lymph nodes and the spleen after immunization of B10.A mice with IRBP. METHODS: B10.A mice were immunized with IRBP emulsified with complete Freund's adjuvant (CFA), and eyes were then enucleated for histological examination of EAU at 1, 2, 4, 6, or 8 weeks after immunization. In addition, lymph node cells and spleen cells were collected, and cultured with IRBP to measure T-cell proliferation responses and Th1-type (interleukin [IL]-2, interferon [IFN]-gamma), Th2-type (IL-4, IL-10) cytokine production. RESULTS: Pathologically, severe ocular inflammation occurred 2 weeks after IRBP immunization, persisted for 2 weeks, and then gradually resolved. Interleukin-2 and IFN-gamma production were observed in draining lymph node cells at 1 and 2 weeks after IRBP immunization. Those responses then diminished, whereas IFN-gamma production by spleen cells was observed from week 1, peaked at week 4, and gradually decreased. Alternatively, significant production of IL-4 or IL-10 by draining lymph node cells was not detected at any time point. Both IL-4 and IL-10 production by spleen cells was observed at week 6. CONCLUSIONS: Th1-type responses were observed early in draining lymph nodes, then in the spleen after IRBP immunization. The levels of IFN-gamma production by spleen cells reflected the severity of EAU, confirming their pathogenic role in this disease. Th2-type responses were generated in the spleen only as the disease receded, suggesting a role for Th2 cells in the spontaneous termination of EAU.     

Rapamycin ameliorates experimental autoimmune uveoretinitis by inhibiting Th1/Th2/Th17 cells and upregulating CD4+CD25+ Foxp3 regulatory T cells

AIM:To determine the effects of rapamycin on experimental autoimmune uveoretinitis (EAU) and investigate of role of rapamycin on T cell subsets in the disease. METHODS:EAU was induced in rats using peptides 1169 to 1191 of the interphotoreceptor binding protein (IRBP). Rapamycin (0.2 mg/kg/d) was administrated by intraperitoneal injection for a consecutive 7d after immunization. Th1/Th2/Th17 cytokines, TGF-β1, and IL-6 produced by lymphocyteswere measured by ELISA, while Th17 cells and CD4+CD25+ regulatory T cells (Tregs) from rat spleen were detected by flow cytometry. RESULTS: Intraperitoneal treatment immediately after immunization dramatically ameliorated the clinical course of EAU. Clinical responses were associated with reduced retinal inflammatory cell infiltration and tissue destruction. Rapamycin induced suppression of Th1/Th2/Th17 cytokines, including IFN-γ, IL-2, IL-17, IL-4, and IL-10 release from T lymphocytes of EAU rats, in vitro. Rapamycin also significantly increased TGF-β1 production but had no effect on IL-6 productionof T lymphocytes from EAU rats in vitro. Furthermore, rapamycin decreased the ratio of Th17 cells/CD4+T cells and upregulated Tregs in EAU, as detected by flow cytometry. CONCLUSION: Rapamycin effectively interferes with T cell mediated autoimmune uveitis by inhibiting antigen-specific T cell functions and enhancing Tregs in EAU. Rapamycin is a promising new alternative as an adjunct corticosteroid-sparing agent for treating uveitis.     

Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells Affect Immunologic Profiling of Interleukin-17-secreting Cells in a Chemical Burn Mouse Model

Purpose

This study investigated interleukin (IL)-17-secreting cell involvement in sterile inflammation, and evaluated the effect of mesenchymal stem cells (MSCs) on IL-17-secreting cell immunologic profiling.

Methods

Twenty mice were sacrificed at time points of 6 hours, 1 day, 1 week, and 3 weeks (each group, n = 5) after the cornea was chemically injured with 0.5N NaOH; IL-17 changes in the cornea were evaluated using enzyme-linked immunosorbent assay. Further, IL-17 secreting cells were assessed in the cervical lymph nodes by a flow cytometer. Rat MSCs were applied intraperitoneally in a burn model (n = 10), IL-17-secreting T helper 17 (Th17) cell and non-Th17 cell changes were checked using a flow cytometer in both cornea and cervical lymph nodes at 1week, and compared with those in the positive control (n = 10).

Results

IL-17 was highest in the cornea at 1 week, while, in the cervical lymph nodes, IL-17-secreting cells showed early increase at 6 hours, and maintained the increase through 1 day to 1 week, and levels returned to the basal level at 3 weeks. Specifically, the non-Th17 cells secreted IL-17 earlier than the Th17 cells. When the MSCs were applied, IL-17 secretion was reduced in CD3(+)CD4(-)CD8(-), CD3(+)CD4(+)CD8(-), and CD3(+) CD4(-)CD8(+) cells of the cervical lymph nodes by 53.7%, 43.8%, and 50.8%, respectively. However, in the cornea, IL-17 secretion of CD3(+)CD4(-)CD8(-) cells was completely blocked.

Conclusions

The results indicated that both IL-17-secreting non-Th17 and Th17 cells were involved in the chemical burn model, and MSCs appeared to mainly modulate non-Th17 cells and also partially suppress the Th17 cells.     

Th1、Th17细胞相关因子在实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠中的表达及作用

目的　探讨辅助性Ｔ细胞（Ｔｈｅｌｐｅｒｃｅｌｌｓ,Ｔｈ）１、Ｔｈ１７细胞相关因子在实验性自身免疫性葡萄膜炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｕｖｅｉｔｉｓ,ＥＡＵ）中的表达及作用。方法　取清洁级纯系健康雌性Ｌｅｗｉｓ大鼠４０只随机分为ＥＡＵ组（３２只）和对照组（８只）,ＥＡＵ组用光感受器间维生素Ａ类结合蛋白诱导大鼠ＥＡＵ模型,进行临床症状评分,免疫组织化学方法检测造模后视网膜内干扰素（ｉｎｆｅｒｆｅｒｏｎ,ＩＦＮ）-γ、诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）、白细胞介素（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｅ,ＩＬ）-１７、ＩＬ-６的表达。ＥＬＩＳＡ法对比分析房水中各细胞因子的变化情况。结果　ＥＡＵ模型建立成功;造模后第１４天,视网膜损害以外层为主,视网膜内有大量炎细胞浸润,从而导致视网膜内结构紊乱,同时在视网膜的视锥、视杆细胞层和神经节细胞层ｉＮＯＳ、ＩＬ-１７、ＩＬ-６、ＩＦＮ-γ表达,细胞阳性率分别为２９％、４８％、５２％、７３％。在ＥＡＵ发病过程中,ＩＬ-６于造模后第７天迅速升高,第１０天达到高峰;ＩＬ-１７于造模后第１４天达到最高值,变化趋势与炎症进程一致;ＩＦＮ-γ在炎症后期仍有升高,于造模后第１６天达到最高值;ＩＬ-６、ＩＬ-１７、ＩＦＮ-γ与对照组相比,各时间点表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ｉＮＯＳ在炎症进程中表达有所增加,但与对照组相比,各时间点的表达差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。结论　Ｔｈ１、Ｔｈ１７细胞相关因子调节网络共同参与实验性自身免疫性葡萄膜炎的发生发展。     

脂质体介导含RGD序列内皮抑素基因抑制角膜新生血管的研究

目的观察脂质体介导的含RGD序列的内皮抑素（RGD—ES）抑制兔碱烧伤角膜新生血管（CNV）的效果。方法碱烧伤后诱导兔产生CNV,36只兔（72只眼）随机分为4组。在碱烧伤后,分别球结膜下注射0．2mL的50g／L脂质体pCI—RGD～ES转染液（A组）、50g／L脂质体pCI—ES转染液（B组）、空白载体转染液（C组）、PBS缓冲液（D组）。每周注射2次,共4次。动态观察CNV的生长状况。第3、7、14天免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达,并在显微镜下进行微血管计数。结果在模型制作后的各个时间点,A组和B组CNV的面积明显小于D组,差异有统计学意义（P〈0．01）,但各时间点c组和D组间CNV面积的比较差异无统计学意义（P〉0,05）。在各时间点,A组和B组角膜的微血管数量均明显少于D组（P〈0．01）,其中A组角膜VEGF表达及微血管数量最少。但各时间点c组与D组间角膜VEGF的表达及微血管数量的比较差异无统计学意义（P〉0．05）。VEGF的表达定位于角膜上皮细胞、炎性细胞及新生血管内皮细胞细胞质内。结论RGD—ES抑制CNV的活性增强,脂质体是眼病基因治疗的理想载体,且脂质体本身对CNV无抑制作用。