大鼠视神经夹挫伤视网膜视神经病理学动态观察及功能检测

目的 :动态观察视神经夹挫伤后视网膜、视神经形态学和视功能变化 ,揭示其病理过程的内在规律 ,为视神经保护研究提供依据。方法 :应用光镜、电镜观察正常及视神经夹挫伤 2 4、4 8、72小时 ,1、2、4周大鼠的视神经和视网膜形态学改变 ,闪光视觉诱发电位检测正常及视神经损伤后 1小时、4周大鼠的视功能状况。结果 :视神经部分损伤诱导视网膜神经节细胞 (RGCs)严重下降 ,损伤后的前 2周RGCs快速减少 ,2周以后缓慢减少 ;电镜下可见RGCs染色质明显聚集 ,胞体皱缩 ,核膜、胞膜完整 ;也可见核膜溶解 ,细胞器水肿、崩解 ;视神经纤维在损伤过程交错存在着轴突空泡样变 ,髓鞘崩解、消失 ,胶质细胞增生 ;视神经急性损伤F VEP波形较正常变得低而宽 ,损伤 4周波形消失。结论 :神经元继发性损伤是视功能进行性下降的重要原因 ,保护神经元免受继发性损伤是视神经保护的重要方面 ,对改善视功能有极其重要的意义     

大鼠视神经钳夹伤动物模型的病理学观察

目的观察大鼠视神经钳夹伤后不同时间的病理学变化及其修复规律.方法成年S-D大鼠36只,随机等分为6组:一组为正常对照,其余均用70g压力的显微无创血管钳于右眼球后1mm处夹持视神经15s,分别于损伤后3、7、14、30、60 d取材,观察视神经轴突和视网膜神经节细胞(RGC)的形态及数目变化.结果正常大鼠视神经髓鞘完整,损伤后3 d、7 d,髓鞘疏松解体,轴突内线粒体肿胀,伤后14 d胶质细胞开始增生,伤后60 d可见到新生样轴突.正常大鼠RGC单层排列,神经纤维层(RNFL)厚度均匀,伤后3 d、7 d,RGC胞浆中线粒体肿胀明显,尼氏体减少,RNFL水肿,之后上述改变程度减轻,部分恢复.轴突数目正常为555.00±93.80(单位:个/3258.04 μm2),视乳头两侧各1mm的视网膜切片RGC数目,正常为69.75±5.38(单位:个),损伤后均逐渐减少,至60 d时稍增多.结论夹持大鼠视神经70 g压力15 s可造成中等程度的损伤,表现在轴突和RGC的形态异常及数目减少,改变随时间加重,至1个月左右开始恢复.     

大鼠视神经压榨伤模型的建立

目的建立大鼠标定性视神经损伤模型.方法健康SD大鼠28只,7只为正常对照组,只进行双上丘注射3%快蓝逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs),另21只为标定性视神经损伤组,依损伤后存活时间的不同再分为A组(4d组)、B组(14d组)及C组(21d组),每组7只.21只大鼠以夹持力为40 g的特制视神经夹,在大鼠眼球后2 mm处夹持视神经4s,制成大鼠标定性视神经压榨伤模型,于处死前3d采用双上丘直接注射3%快蓝(fast blue)法标记双眼RGCs,将全视网膜铺片置于荧光显微镜下,在距视乳头1 mm处的颞上、颞下、鼻下、鼻上4处作荧光摄影(400 ×),并输入计算机经图像分析仪计数RGCs,按RGCs标识率进行统计学比较.RGCs标识率=损伤眼(右眼)RGCs数/未损伤眼(左眼)RGCs数×100%.结果正常大鼠的RGCs标识率右眼RGCs数/左眼RGCs数为99.79%±13.05%,左眼RGCs数/右眼RGCs数为101.86%±13.91%,无论是用左眼的RGCs数比右眼的RGCs数,或用右眼的RGCs数比左眼的RGCs数,其结果无显著性差异(P＞0.5).视神经损伤组的RGCs标识率A组(4d组)RGCs标识率为77.79%±7.11%;B组(14d组)RGCs标识率为63.76%±3.79%;C组(21d组)RGCs标识率为54.66%±4.75%.以上显示,损伤各组的RGCs标识率明显低于正常对照组(P＜0.05),且随着时间的推移,损伤A、B、C组的RGCs标识率渐进性降低.结论用特制的夹持力为40 g的视神经夹,夹持正常大鼠视神经4s,可造成部分性RGCs丧失,随大鼠存活时间的推移,RGCs呈渐进性丧失.眼科学报2001;1799～102.     

大鼠视神经部分切断模型的建立和重复性评价

 目的 应用自行设计的模具制作大鼠视神经部分切断模型,并评价大鼠视神经部分切断模型的可重复性。 设计 实验研究。研究对象  15只Wistar大鼠。方法  利用模具将大鼠视神经部分切断,术后对13只大鼠行荧光金逆行标记及全视网膜拼图,使用Ret-camⅡ眼底照相观察视网膜血供情况。主要指标  观察视网膜神经节细胞（RGC）形态及分布变异。结果 视神经部分切断直接影响的视网膜与周围正常视网膜有明确分界线,标记荧光金视网膜面积比例变异系数最大值为1.85%,平均变异系数为0.67%±0.44%。Ret-camⅡ眼底照相显示视神经部分切断后,未引起视网膜供血障碍。 结论 利用新型模具器械可成功建立易于量化的重复性高的RGC继发性损伤模型。（眼科,2013,22：34-37）     

利用荧光金逆行示踪技术评价视神经不完全损伤后视网膜神经节细胞的存活率

目的　利用荧光金逆行示踪技术评价正常及视神经不完全损伤后的视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells,RGCs)的数目。 方法　正常成年LongEvans大鼠 2 0只 ,体重(2 70± 2 0 ) g ,雌雄不限。按对照组、损伤后 7d、14d、2 1d分组 ,每组 5只大鼠。在球后视神经钳夹伤前 7d行荧光金逆行标记。 7d后损伤组大鼠用反向血管夹于左眼球后 2mm处夹视神经 10s。对照组大鼠只暴露视神经不行钳夹 ,分别于各时间点将大鼠用 4 %多聚甲醛灌注固定后 ,行全视网膜铺片 ,3h内在荧光显微镜下观察。在每张视网膜的上、下、鼻、颞侧距视盘 1/ 6、1/ 2、5 / 6半径处共拍摄 12张荧光照片。对照片上标记的RGCs进行计数 ,求平均值 ,计算损伤后各时间点剩余的RGCs与正常视网膜中RGCs的百分比。结果　视网膜铺片的RGCs边界清晰 ,并可见明显的细胞突起 ,血管走行区未见节细胞分布。正常组每张铺片的平均节细胞数为 (2 0 31± 2 87)个·mm-2 ,损伤后 7d的RGCs存活率为 71% ,14d存活率为 5 1% ,2 1d存活率为 35 %。结论　荧光金逆行标记是评价视神经损伤后RGCs存活率可靠并且有效的方法。     

横向定量牵拉损伤对大鼠视网膜神经节细胞自噬水平的影响

目的：研究不同程度牵拉力对大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)存活率和神经传导功能的影响,探讨RGCs自噬水平对上述指标的影响。

方法：选取健康雄性SD大鼠30只随机分为空白组、假手术组、0.15N组、0.3N组、0.6N组,每组各6只。模型组采用横向定量牵拉法制作视神经损伤大鼠模型。空白组大鼠不予处理。假手术组仅暴露视神经,不予牵拉。造模后第1、3d行闪光视觉诱发电位(f-VEP)检查,第3d取视网膜组织行Brn-3a免疫组织化学染色观察RGCs存活情况,透射电子显微镜观察自噬小体,蛋白质印迹法检测LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平。

结果：造模后第3d,与假手术组比较,模型组大鼠f-VEP P2潜伏期延长,振幅降低,视网膜组织中RGCs存活率降低,LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平降低,且各组大鼠视网膜组织中均可见自噬小体。

结论：视神经牵拉伤会降低大鼠早期视网膜自噬水平,导致RGCs死亡和相应的神经传导功能障碍,且不同牵拉力造成的损伤程度不同,RGCs存活情况可能与其自噬水平有关。     

灯盏细辛对大鼠视神经压榨伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨中草药灯盏细辛对大鼠标定性视神经压榨伤所致的视网膜神经节细胞(RGC)损伤的防护和修复作用。方法　 4 2只健康SD大鼠随机均分为A组和B组。两组均用特制微型视神经夹直接夹持视神经 ,制作成单眼视神经部分压榨伤模型后 ,A组不予任何治疗 ,B组予以灯盏细辛治疗 ,直至处死动物。以上两组按致伤日至处死日动物的存活时间又分为 :A1组和B1组 (损伤后 4d) ,A2 组和B2 组 (损伤后 14d) ,A3 组和B3 组 (损伤后 2 1d) ,每组各 7只大鼠。于处死前 3d双上丘直接注射 3%快蓝标记双眼RGC。处死日行眼球摘除术后 ,将双眼全视网膜组织铺片置于荧光显微镜下 ,在距视乳头 1mm处的颞上、颞下、鼻下及鼻上 4处作荧光摄影 ,并输入计算机经图像分析仪计数RGC。计算RGC标识率 ,即 (损伤眼RGC数 /未损伤眼RGC数 )× 10 0 % ,并进行统计学分析。结果　A组大鼠中 ,A1、A2 及A3 组的RGC标识率分别为 (77 79± 7 11) %、(6 3 76± 3 79) %、(5 4 6 6±4 75 ) % ;B组大鼠中 ,B1、B2 及B3 组的RGC标识率分别为 (80 13± 12 0 3) %、(78 17± 9 19) %及(83 5 9± 12 6 1) %。A2 和A3 组分别与B2 和B3 组比较 ,差异均有非常显著意义 (t=14 10 8,36 2 0 3;P<0 0 1)。结论　大鼠标定性视神经压榨伤后用灯盏细辛治疗 ,     

经瞳孔温热疗法对大鼠视神经钳夹视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）阈下反应对BN大鼠视神经钳夹后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法采用阈下TTT对BN大鼠视网膜进行照射后3d,通过逆行标记RGCs的方法,对TTT＋视神经钳夹组（A组）、TTT＋假手术组（B组）、单纯视神经钳夹组（C组）和空白对照组（D组）在视神经钳夹后1、2、4周进行RGCs计数并比较;检测视网膜TTT阈下反应的热休克蛋白70（HSP70）表达;观察TTT阈下反应对视网膜的影响。结果视神经钳夹后4周,A组RGCs数显著高于C组（P=0.006）,而1周和2周时2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;各时间点B组和D组的RGCs数差异无统计学意义（P〉0.05）。视网膜经阈下TTT干预后,HSP70表达高于对照眼。阈下TTT照射能引起视网膜组织形态上的改变。结论阈下TTT可显著提高视神经钳夹4周后RGCs的存活数量;其保护机制可能与诱导视网膜内源性HSP70表达、启动内源性保护机制有关。     

钳夹法造成大鼠视网膜神经节细胞过量丢失

目的评估钳夹视神经对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的损伤程度。方法取38只雄性Wistar大鼠,夹持组(n=30)按夹持时间12s、9s、6s、3s、1s分为A-E组,F为反身夹持组,每组各5只大鼠。沿大鼠眼球颞侧暴露视神经,于球后2mm处用90g微型视神经夹夹持视神经,另有40g反向镊在球后2mm处夹持视神经,每只大鼠均左眼手术,右眼正常对照,假手术组(n=8)大鼠左眼仅手术暴露视神经球后段,不予夹持。采用荧光金逆行标记RGCs,视网膜铺片计数,计算RGCs数量及存活率。结果假手术组左右眼RGCs密度相比无显著性差异,细胞密度分别为(2679±67)mm-2、(2689±53)mm-2(P=0.896);夹持组RGCs细胞密度明显下降,分别为(220±167)mm-2、(265±232)mm-2、(298±239)mm-2、(478±682)mm-2、(769±615)mm-2、(974±476)mm-2,夹持冲量(夹持力与时间的乘积)和RGCs存活率呈负相关。结论钳夹法可造成明确、定量的视神经损伤,但损伤量过大、稳定性较差,与临床外伤性视神经病变的发病实际尚有一定差距。     

视神经夹持损伤模型大鼠视网膜和视神经小胶质细胞的活化

背景 外伤性视神经病变(TON)是继发于外力创伤下的急性视神经损伤,预后较差.小胶质细胞作为中枢神经系统中重要的免疫细胞,参与了中枢神经系统疾病与多种眼科疾病的病理生理过程.然而,小胶质细胞在TON的病理发展及损伤修复过程中的作用尚不明确. 目的 比较大鼠视神经夹持损伤后视神经与视网膜中小胶质细胞的形态变化、激活数量、分布情况及活化水平的差异. 方法 将35只SPF级健康雌性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法分为正常对照组,造模后6h、3d、7d、14 d、30 d组和假手术组,每组5只大鼠.造模后各时间点组用夹持钳以50 g的夹持力在大鼠眼球后约2 mm处钳夹视神经10s,建立大鼠视神经夹持模型,假手术组大鼠行相同的手术操作但不夹持视神经,正常对照组不做任何处理.分别于上述时间点制备大鼠视神经和视网膜冰冻切片,采用lectin-FITC荧光标记抗体检测各组大鼠视神经和视网膜中的小胶质细胞数量和激活的小胶质细胞数量. 结果 正常对照组和假手术组大鼠视网膜中小胶质细胞主要位于内丛状层(IPL),少部分位于内核层(INL)和神经节细胞层(GCL),外核层(ONL)和外丛状层(OPL)未见小胶质细胞分布.正常对照组大鼠视网膜小胶质细胞的细胞体较小,以分支状为主,突触细长,可见二级分支.各模型组大鼠视网膜中小胶质细胞主要位于GCL和IPL,小胶质细胞在GCL的数量明显多于假手术组,小胶质细胞多为阿米巴状,部分呈半激活态,少见分支静息态.正常对照组、假手术组及造模后6h、3d、7d、14 d和30 d组大鼠视网膜中小胶质细胞数分别为6.40-±-1.52、7.20±2.05、12.00±3.54、14.00±4.06、18.00±4.36、18.40±3.13和10.80±1.92,造模后各时间点大鼠视网膜中小胶质细胞数量均明显多于正常对照组,造模后30 d小胶质细胞数量明显少于造模后7d和14d组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);造模后3、7和14d组大鼠视网膜中激活小胶质细胞数量明显多于假手术组,差异均有统计学意义(P=0.024、0.009、0.023).正常对照组和假手术组大鼠视神经中小胶质细胞较小,呈棒状或分枝状,分布均匀且稀疏.造模后各时间点组小胶质细胞较假手术组细胞体积增大,呈阿米巴状并分布在近视神经夹持部位.造模后6h、3d、7d、14d大鼠视神经中小胶质细胞数量明显多于正常对照组,差异均有统计学意义(P=0.007、0.001、0.003、0.014).造模后30 d大鼠视神经中小胶质细胞数量明显少于造模后3d、7d和14 d组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).造模后6h、3d和7d组大鼠视神经中活化小胶质细胞数量明显多于假手术组,差异有统计学意义(P=0.005、0.004、0.030),造模后14d、30 d大鼠视神经中活化的小胶质细胞数量较造模后3d组明显减少,差异均有统计学意义(P=0.021、0.004),造模后6h组视神经中激活态小胶质细胞增加并持续到造模后14d.结论 大鼠视神经夹持损伤后一定时间内视网膜及视神经中小胶质细胞增加并活化,视神经中小胶质细胞的活化及其衰减均早于视网膜,视神经中小胶质细胞活化程度更明显.     

视神经鞘切开减压术对大鼠视神经挤压伤后RGC凋亡的影响

目地观察早期视神经鞘切开减压术对大鼠视神经挤压伤后RGC凋亡的相关机制。方法大鼠91只分为对照组、损伤组、手术组各7、42、42只通过视网膜切片技术,HE染色,免疫组化SP法于伤后3、7、15各时问点视网膜神经节细胞计数及检测BCL-2和BAX阳性细胞数。结果手术组各时间点RGC计数均高于损伤组,差异有显著性（P〈0．05）。手术组各时间点BCL-2阳性细胞数均高于损伤组,BAX阳性细胞数均低于损伤组,差异有显著性（P〈0．05）。结论早期视神经鞘切开减压术可对大鼠视神经挤压伤后能上调BCL-2基因的表达和下调BAX基因的表达而抑制RGC的凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞的保护作用

　　目的　观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠视神经钳夹伤视网膜神经节细胞（RGC）是否具有保护作用。方法　72只Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）、假手术+EGCG组（B组）、视神经钳夹+生理盐水组（C组）、视神经钳夹+EGCG组（D组）等4组,每组各18只。B、D组在视神经钳夹或假手术前2 d起给予腹腔注射EGCG  25 mg/（kg·d）,直至手术后2 d,共5 d;随后改为口服2 mg/（kg·d）。C组以生理盐水替代EGCG。每次每组取6只大鼠,采用3%荧光金经上丘逆行标记RGC方法,比较各组视神经钳夹伤后7、14、28 d RGC的存活数量;采用免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹方法检测各组视神经组织神经丝蛋白（NF-L）的表达。结果　视神经钳夹伤后7 d,C、D组RGC存活数量分别为（943.61±85.06）、（1 134.45±117.85） 个/mm2;14 d时分别为（812.76±172.07）、（1 021.67±94.02） 个/mm2;28 d时分别为（766.94±171.45）、（1 009.72±126.40）个/mm2。各时间点D组RGC存活数量均显著高于C组（t=3.216,2.609,2.792;P=0.009,0.026,0.019）。各时间点A、B组间RGC存活数量差异无统计学意义（t=0.749,0.403,0.254;P值均＞0.05）;视神经钳夹后7、14、28 d,D组视神经组织NFL表达均高于C组（t=9.847,5.731,2.868;P=0.001,0.005,0.045）。结论　EGCG对大鼠视神经钳夹伤后RGC具有一定的保护作用。      

大鼠视神经损伤后视网膜小胶质细胞表达的初步观察

目的 研究大鼠视神经损伤后视网膜中小胶质细胞的表达情况.方法 实验研究.选取30只成年雌性健康SD大鼠,按照随机数字表法分为实验组和对照组各15只,分别用于细胞计数、免疫组织化学及免疫印迹实验.实验组在眼球后约1.5 ～2.0 mm处行右眼视神经鞘内切断术,术后5d于视神经断端处用荧光金逆行标记视网膜节细胞,手术后7d处死取材.对照组小鼠右眼行视神经切断术并标记,2d后处死取材.视网膜做铺片用于计数.用免疫组织化学法于视网膜切片上行小胶质细胞的表面标记物Iba-1染色,观察小胶质细胞的形态及数量,同时应用免疫印迹法检测视网膜内Iba-1蛋白含量的变化.两组间比较采用非配对student t-检验进行统计学分析.结果 对照组视网膜中有少量小胶质(Iba-1阳性)细胞表达,并呈非活化状态.视神经切断7d后小胶质细胞明显增多且呈半活化状态,免疫印迹结果显示损伤后Iba-1蛋白表达量明显增加到对照组的2.3倍(t=7.669,P=0.001).视视神经切断7d后节细胞数量为(1182±64)个/mm2,明显减少至对照组的51％(t=23.850,P＜0.01).结论 大鼠视神经损伤后小胶质细胞表达增多且呈部分激活状态,可能是视网膜受损后自我保护的表现之一.     

Dominant optic atrophy: Culprit mitochondria in the optic nerve

Dominant optic atrophy (DOA) is an inherited mitochondrial disease leading to specific degeneration of retinal ganglion cells (RGCs), thus compromising transmission of visual information from the retina to the brain. Usually, DOA starts during childhood and evolves to poor vision or legal blindness, affecting the central vision, whilst sparing the peripheral visual field. In 20% of cases, DOA presents as syndromic disorder, with secondary symptoms affecting neuronal and muscular functions. Twenty years ago, we demonstrated that heterozygous mutations in OPA1 are the most frequent molecular cause of DOA. Since then, variants in additional genes, whose functions in many instances converge with those of OPA1, have been identified by next generation sequencing. OPA1 encodes a dynamin-related GTPase imported into mitochondria and located to the inner membrane and intermembrane space. The many OPA1 isoforms, resulting from alternative splicing of three exons, form complex homopolymers that structure mitochondrial cristae, and contribute to fusion of the outer membrane, thus shaping the whole mitochondrial network. Moreover, OPA1 is required for oxidative phosphorylation, maintenance of mitochondrial genome, calcium homeostasis and regulation of apoptosis, thus making OPA1 the Swiss army-knife of mitochondria. Understanding DOA pathophysiology requires the understanding of RGC peculiarities with respect to OPA1 functions. Besides the tremendous energy requirements of RGCs to relay visual information from the eye to the brain, these neurons present unique features related to their differential environments in the retina, and to the anatomical transition occurring at the lamina cribrosa, which parallel major adaptations of mitochondrial physiology and shape, in the pre- and post-laminar segments of the optic nerve. Three DOA mouse models, with different Opa1 mutations, have been generated to study intrinsic mechanisms responsible for RGC degeneration, and these have further revealed secondary symptoms related to mitochondrial dysfunctions, mirroring the more severe syndromic phenotypes seen in a subgroup of patients. Metabolomics analyses of cells, mouse organs and patient plasma mutated for OPA1 revealed new unexpected pathophysiological mechanisms related to mitochondrial dysfunction, and biomarkers correlated quantitatively to the severity of the disease. Here, we review and synthesize these data, and propose different approaches for embracing possible therapies to fulfil the unmet clinical needs of this disease, and provide hope to affected DOA patients.     

雪旺细胞源营养神经活性物质对大鼠视网膜节细胞损伤的作用

目的 观察雪旺细胞(Schwann cells,SC)源营养神经活性物质 (SC derived neurotrophic activity,SCNA)对Sprague-Dawly(SD)大鼠视神经损伤后视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGC)存活的影响。 方法 体外培养日龄3～5 d SD乳鼠SC,收集无血清条件培养液,经超滤浓缩后制成冻干粉。SD大鼠分为正常对照组,视神经夹伤对照组,视神经夹伤溶剂对照组,视神经夹伤SCNA 治疗组,每组20只眼。荧光金逆行标记RGC后7 d,除正常对照组外均行球后视神经夹伤,SCNA治疗组将100 ng SCNA注入大鼠玻璃体腔内。分别于视神经夹伤后第5、7、14、21、28 d 将动物灌注固定,做全视网膜铺片,行RGC计数。 结果 视神经夹伤后第7 d RGC开始减少,14 d时降至正常对照的70.2%,28 d时降至40.5%。SCNA治疗组7 d时RGC数开始减少,但14、21、28 d RGC数均明显多于视神经夹伤对照组及视神经夹伤溶剂对照组(P＜0.01)。 结论 在视神经夹伤后眼内注射SCNA能减少RGC的死亡对RGC损伤有保护作用。（中华眼底病杂志,2000,16：1-70）     

米诺环素在小鼠视神经钳夹伤后早期对视网膜神经节细胞的保护作用

背景 米诺环素在多种中枢神经系统疾病的动物模型及临床试验中显示出神经保护效应,但是否对视神经损伤有保护作用研究尚少. 目的 探讨米诺环素在小鼠视神经钳夹伤后对视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用及其作用机制.方法 采用随机数字表法将136只清洁级雄性C57BL/6J小鼠随机分成正常对照组8只、生理盐水组64只和米诺环素组64只.正常对照组不做任何处理,生理盐水组和米诺环素组用反向镊钳夹小鼠左眼视神经3s以建立视神经钳夹伤动物模型,造模后米诺环素组立即以45 mg/（kg＆#183;d）的剂量腹腔内注射米诺环素0.4ml,造模后24 h注射剂量减半,以后每日注射1次,直至处死,生理盐水组小鼠以同样的方式注射等容量的生理盐水.两组小鼠分别于造模后第4、7、11、14天处死并制备视网膜铺片,用4＆#39;,6＆#39;-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色法观察各组小鼠RGCs层细胞密度的变化.取各时间点小鼠眼球制作视网膜冰冻切片,采用TUNEL法测定RGCs的凋亡;采用实时定量PCR（real-time PCR）法检测各组小鼠视网膜小胶质细胞表面CD11b mRNA的表达.结果 在视神经损伤后第4天和第7天,生理盐水组小鼠RGCs层的细胞密度分别为（77.50±2.38）个/0.01 mm2和（70.00±2.94）个/0.01 mm2,明显低于米诺环素组的（88.75±2.36）个/0.01 mm2和（81.00±3.92）个/0.01 mm2,差异均有统计学意义（t4d=-6.708,P＜0.01;t7d=-4.491,P＜0.01）;生理盐水组RGCs凋亡数分别为（12±1）个/mm和（4±1）个/mm,明显多于米诺环素组的（4±1）个/mm和（1±0）个/mm,差异均有统计学意义（t4d=12.832,P＜0.01;t7d=3.455,P=0.026）;造模后第11天和第14天,生理盐水组小鼠RGCs层的细胞密度与米诺环素组比较差异均无统计学意义（P=0.708、0.777）,且两组小鼠视网膜均未发现凋亡细胞.Real-time PCR检测显示,造模后第4天和第7天,生理盐水组小鼠视网膜细胞CD11b mRNA表达量与米诺环素组比较明显增加,差异均有统计学意义（t4d=8.312,P＜0.01;t7d=5.407,P＜0.01）,但在造模后第11天和第14天,2个组小鼠视网膜细胞CD11b mRNA表达量的差异均无统计学意义（P=0.055、0.170）.结论 米诺环素可能在小鼠视神经钳夹伤后早期通过抑制小胶质细胞活化的机制而减少RGCs的凋亡,从而对视神经发挥保护作用.     

Clinical and experimental study on traumatic optic nerve lesion

Background: Traumatic optic nerve lesions (TONL) range from temporary affection of vision to avulsion of the optic nerve; often they are associated with more complex injuries. Usually Tonl are not regarded as an emergency. Up to now, we lack knowledge on the dependency of strength and duration of optic nerve lesions and the point of no return for afferent disorders of the visual pathway. Materials and methods: We performed a prospective study on 50 patients with severe midface and skullbase fractures in order to find characteristic ophthalmological, computer tomographic und electrophysiological findings as indicators of TONL, independent of patient cooperation. We used an animal model (Wistar rats; n = 117) to study calibrated optic nerve lesions and the resulting neurodegeneration in the retinal ganglion cell (RGC) layer quantitatively. Results: The electrophysiological investigation of the visual system (flash VEP/ERG) proved to be highly specific (0.97) and sensitive (1.0) for detecting TONL (n = 18). In the rat model, we could demonstrate a linear relationship between total neuron number reduction and strength and duration of calibrated optic nerve lesion. Conclusions: Experimental results indicate that optic nerve decompression is useful only within the first hours after TONL to reduce secondary optic nerve lesion. Indication for optic nerve decompression requires early detection of TONL, which is made possible by the combination of flash VEP/ERG.