SB431542和TGF-β1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响

目的　探讨转化生长因子-β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和ＳＢ４３１５４２（ＴＧＦ-β１受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（ｔｈｙｒｏｉｄ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ,ＴＡＯ）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）及结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）基因表达的影响,为ＴＡＯ眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法　实验分为３组。第１组:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ,ＲＴ-ＰＣＲ）检测不同浓度ＴＧＦ-β１（０μｇ?Ｌ－１、１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴ-ＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第２组:采用ＲＴ-ＰＣＲ检测１０μｇ?Ｌ－１ＴＧＦ-β１在不同的时间点（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第３组（分为４小组处理）:眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２刺激眼眶成纤维细胞、１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１ 单独刺激眼眶成纤维细胞、３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２联合１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１刺激眼眶成纤维细胞（ＳＢ４３１５４２预先刺激眼眶成纤维细胞１ｈ,然后再加入ＴＧＦ-β１）,采用ＲＴ-ＰＣＲ检测α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达。结果　ＴＧＦ-β１在一定的浓度范围内（１～１０μｇ?Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着浓度增加ｍＲＮＡ表达增加,各浓度组（１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）与空白对照组（０μｇ?Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＴＧＦ-β１在一定的时间范围内（０～２４ｈ）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着时间延长ｍＲＮＡ表达增加,各时间组（３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）与０ｈ相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β１诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ在２４ｈ达到峰值,而ＣＴＧＦｍＲＮＡ在１２ｈ即可达到峰值。ＳＢ４３１５４２对眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达均有抑制作用。结论　一定范围内,ＴＧＦ-β１以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达,ＳＢ４３１５４２可抑制其表达。     

Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用

目的　观察Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（贝伐单抗）对转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ）-β２诱导下的人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法　用含体积分数１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ高糖型培养基对人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、ＴＧＦ-β２处理组（加入终浓度为１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２ＤＭＥＭ完全培养基）及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组（加入１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２和１．０ｇ?Ｌ－１的ＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＤＭＥＭ完全培养基）,置于３７℃、体积分数５％二氧化碳培养箱中培养４８ｈ,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验检测Ｂｅｖ-ａｃｉｚｕｍａｂ对ＴＧＦ-β２刺激下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）表达的影响。结果　α-ＳＭＡ蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示ＴＧＦ-β２处理组可以见到α-ＳＭＡ的荧光表达,而Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白表达受到抑制。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示空白对照组、ＴＧＦ-β２ 处理组及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量分别为０．６３０±０．０３８、１．１３０±０．０７１和０．３４０±０．０３３,Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量低于空白对照组和ＴＧＦ-β２处理组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ可明显抑制ＴＧＦ-β２诱导下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-ＳＭＡ蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。     

转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的　探究转化生长因子-β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β２,ＴＧＦ-β２）诱导人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）层细胞上皮-间质转分化中ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达变化及意义。方法　使用不同浓度ＴＧＦ-β２刺激ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＲＴ-ＰＣＲ检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ,ＦＮ）、神经钙粘连蛋白（ｎｅｒｖｅｃａｌｃｉｕｍａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏ-ｔｅｉｎ,Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达。采用ＲＴ-ＰＣＲ检测不同浓度ＴＧＦ-β２及不同时间ＴＧＦ-β２（５μｇ·Ｌ－１）刺激ＲＰＥ细胞后ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达。结果　ＴＧＦ-β２刺激后的ＲＰＥ细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内（１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１）,随着ＴＧＦ-β２浓度的增加ＦＮ、Ｎ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ及相应ｍＲＮＡ随之增加,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ-β２在一定浓度范围内（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１组与对照组（０μｇ·Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,在ＴＧＦ-β２浓度为５μｇ·Ｌ－１时ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达量最低。ＴＧＦ-β２在一定时间范围内（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ）以时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ表达的降低,３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ组与０ｈ相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　一定范围内ＴＧＦ-β２以剂量和时间依赖的方式诱导ＲＰＥ细胞ｍｉＲＮＡ-２９ｂ的表达,为进一步研究ｍｉＲＮＡ-２９ｂ与ＴＧＦ-β２在ＲＰＥ细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。     

结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用

目的　研究结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）在人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）中的作用。方法　采用ＣＣＫ-８细胞计数试剂盒测定４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理后的ＡＲＰＥ-１９细胞以及稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估ＣＴＧＦＲＮＡｉ对ＡＲＰＥ-１９细胞迁移的影响,同时测定稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞中ＣＴＧＦ、ＦＮ、ＭＭＰ-２和α-ＳＭＡ的表达水平以评估ＣＴＧＦ对于ＴＧＦβ１诱导的ＥＭＴ作用。结果　４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理组ＡＰＲＥ-１９细胞与未接受ＣＴＧＦ处理组细胞之间以及ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照ｓｉＲＮＡ组之间的细胞倍增时间均存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。正常培养ＡＲＰＥ-１９细胞组修复划痕的时间（≤４８ｈ）显著少于ＣＴＧＦＲＮＡｉ靶向干扰处理组（≥７２ｈ）。以ＴＧＦ-β１诱导ＥＭＴ,ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照组比较,ＣＴＧＦ、α-ＳＭＡ、ＦＮ和ＭＭＰ-２表达均显著下调。此外,外源性ＣＴＧＦ可单独诱导ＡＲＰＥ-１９细胞α-ＳＭＡ表达增加。结论　ＣＴＧＦ能够促进ＡＲＰＥ-１９细胞增生,而ＣＴＧＦＲＮＡｉ不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ＡＲＰＥ-１９细胞的迁移。此外,ＣＴＧＦ可通过上调α-ＳＭＡ表达水平而增强ＡＲＰＥ-１９细胞对于ＴＧＦ-β１的反应,ＣＴＧＦＲＮＡｉ可使ＴＧＦ-β１诱导的ＥＭＴ减弱。     

BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨过表达激活素膜结合抑制剂（ｂｍｐａｎｄａｃｔｉｖｉｎｍｅｍｂｒａｎｅ-ｂｏｕｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＢＡＭＢＩ）对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）增殖和迁移的影响。方法　将ＲＦ／６Ａ细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧＋ｐＦＬＡＧ组和缺氧＋ＢＡＭＢＩ组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＢＡＭＢＩ的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,ＣＣＫ-８法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的迁移,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达。结果　与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养１２０ｈ后,对照组细胞增殖倍数为５．００±０．２８,缺氧组为７．６４±０．３２（Ｐ＜０．００１）;缺氧组Ｓ期进程显著加快,占（１０．４４±２．６１）％,对照组Ｓ期占（２０．７９±２．２３）％（Ｐ＜０．０５）;细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为３３．８０±４．２０,对照组为８．３５±２．５０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）。缺氧＋ＢＡＭＢＩ组:缺氧处理的细胞转染ｐＦＬＡＧ-ＢＡＭ-ＢＩ后,与缺氧组相比,ＢＡＭＢＩ蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养１２０ｈ后,增殖倍数为５．５３±０．２７（Ｐ＜０．００１）,细胞Ｓ期受到阻滞,占（１８．７５±２．９２）％,迁移显著下降,数目为１３．００±２．８０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显下调（Ｐ＜０．０５）。结论　过表达ＢＡＭＢＩ可抑制缺氧诱导的ＲＦ／６Ａ细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生。     

肿瘤坏死因子-α对RF/6A细胞自噬促进细胞增殖、迁移和管腔形成的影响

目的　本研究观察肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ-ａｌｐｈａ,ＴＮＦ-α）对体外培养的恒河猴脉络膜／视网膜内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）表达自噬蛋白Ｂｅｃｌｉｎ-１及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,探讨ＴＮＦ-α参与新生血管生成的可能机制。方法　将生长良好的ＲＦ／６Ａ细胞随机分为空白对照组、ＴＮＦ-α组和ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组。培养２４ｈ、４８ｈ后采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞Ｂｅｃ-ｌｉｎ-１蛋白的表达,ＭＴＴ法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,Ｍａｔｒｉｇｅｌ法检测管腔形成。结果　培养２４ｈ和４８ｈ,各组Ｂｅｃｌｉｎ-１／β-ａｃｔｉｎ比值分别是ＴＮＦ-α组（２４ｈ）０．６７３±０．０１７、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（２４ｈ）０．４９１±０．０１７、ＴＮＦ-α组（４８ｈ）０．７９２±０．００６、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（４８ｈ）０．５０４±０．００７、空白对照组０．２６８±０．０１７。ＴＮＦ-α组ＲＦ／６Ａ细胞Ｂｅｃｌｉｎ-１的表达量均明显高于空白对照组（Ｐ＜０．０５）,ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组Ｂｅｃｌｉｎ-１的表达量较ＴＮＦ-α组明显减少（Ｐ＜０．０５）。各组细胞的相对增殖率分别是ＴＮＦ-α组（２４ｈ）１．４１０±０．０１０、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（２４ｈ）１．２９０±０．００４、ＴＮＦ-α组（４８ｈ）１．３２０±０．０１１、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（４８ｈ）０．１８０±０．０１５、对照组（２４ｈ）１．０００±０．０２０、对照组（４８ｈ）１．０００±０．０１１;ＴＮＦ-α组细胞的相对增殖率均较空白对照组升高（Ｐ＜０．０５）,３-ＭＡ预处理后,ＴＮＦ-α促进ＲＦ／６Ａ细胞增殖的能力在两个时间点均受到抑制（均为Ｐ＜０．０５）。各组细胞的相对迁移距离分别是ＴＮＦ-α组（２４ｈ）（３４５±２８）μｍ、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（２４ｈ）（２５９±７７）μｍ、ＴＮＦ-α组（４８ｈ）（７６２±５５）μｍ、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（４８ｈ）（６５９±４８）μｍ、空白对照组（２４ｈ）（１９５±６３）μｍ、空白对照组（４８ｈ）（４１２±９４）μｍ;ＴＮＦ-α处理组ＲＦ／６Ａ细胞２４ｈ的迁移明显强于对照组（Ｐ＜０．０５）,加入３-ＭＡ预处理后,这种增强作用有所下降,但仍然明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）;培养４８ｈ,更多细胞迁移入划痕区域,较２４ｈ明显增加;不同组之间的差异与２４ｈ时的结果类似,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;培养２４ｈ各组细胞管腔形成个数:ＴＮＦ-α组（１１．８０±０．８１）个、ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组（７．５０±０．７２）个、空白对照组（４．３０±１．１２）个,ＴＮＦ-α组及ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组管腔形成个数均高于对照组（均为Ｐ＜０．０５）,ＴＮＦ-α＋３-ＭＡ组较ＴＮＦ-α组明显减少（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＮＦ-α能够促进ＲＦ／６Ａ细胞的增殖、迁移和管腔样结构的形成,且ＴＮＦ-α促进内皮细胞自噬在血管新生中发挥重要的调控作用。     

组织激肽释放酶在糖尿病视网膜病变患者血清中的变化及其调节血管新生机制

目的　检测组织激肽释放酶（ｔｉｓｓｕｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ,ＴＫＬＫ）、血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）和可溶性细胞间黏附分子-１（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｎｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌ-１,ｓＩＣＡＭ-１）在糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）患者血清中的变化,观察ＴＫＬＫ在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＲＭＥＣｓ）中ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１表达的影响。方法　收集２型糖尿病患者６０例,按照ＤＲ分期标准将患者分为糖尿病无ＤＲ组（ＤＭ组）、非增生性ＤＲ组（ＮＰＤＲ组）和增生性ＤＲ组（ＰＤＲ组）,收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组２０例。ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１的水平。体外ＨＲＭＥＣｓ分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组ＴＫＬＫ处理后,检测细胞增殖、凋亡以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达。结果　ＤＭ、ＮＰＤＲ和ＰＤＲ组患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平明显高于对照组,４组总体差异有统计学意义（Ｆ＝２８．８０５,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝３２．０４１,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝２６．１６９,Ｐ＝０．００１）;ＰＤＲ患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平显著高于ＤＭ和ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．００１）。ＴＫＬＫ与ＶＥＧＦ（ｒ＝０．６２３,Ｐ＜０．０１）和ｓＩＣＡＭ-１水平（ｒ＝０．５９８,Ｐ＜０．０１）均呈正相关。１０μｇ?ｍＬ－１ｒｈＴＫＬＫ可显著抑制低氧诱导的ＨＲＭＥＣｓ增殖以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达,并可促进细胞凋亡（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＫＬＫ通过与ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１相互作用而影响ＤＲ的进展。     

TGF-β介导的Smad信号通路在增生型糖尿病视网膜病变中的作用和意义

目的　本研究旨在观察转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-ｂｅｔａ,ＴＧＦ-β）介导的Ｓｍａｄ信号通路在增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）中的作用和意义,进而阐明其可能的发病机制。方法　收集正常人和糖尿病患者的血液标本,将糖尿病患者依据视网膜受累程度分为２组:无糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉ-ｎｏｐａｔｈｙ,ＮＤＲ）组、糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）组,根据眼底改变又分为非增生型糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＰＤＲ）组和增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）组。分别用ＥＬＩＳＡ检测正常人和糖尿病患者血浆中的ＴＧＦ-β１ 和ＴＧＦ-β２,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测血浆中ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、Ｓｍａｄ３和ｐ-Ｓｍａｄ３的蛋白表达量,比较各组差异。结果　与对照组比较,糖尿病患者各组ＴＧＦ-β１ 和ＴＧＦ-β２分泌量和ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ｐ-Ｓｍａｄ３的蛋白表达量均明显升高（均为Ｐ＜０．０５）;与ＮＤＲ组比较,ＤＲ各组上述指标均显著增高（均为Ｐ＜０．０５）;ＰＤＲ组上述指标均显著高于ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＧＦ-β介导的Ｓｍａｄ信号通路参与了ＤＲ的发生,可能是介导ＰＤＲ发生的重要机制。     

miRNA-184在TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的表达

目的　研究ｍｉＲＮＡ-１８４（ｍｉＲ-１８４）在转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦ-β２）诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法　应用不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２ 诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法观察转分化相关分子波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、钙黏附蛋白Ｅ（Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达;应用ｑＲＴ-ＰＣＲ检测ｍｉＲ-１８４在不同浓度（０μｇ·Ｌ－１、１μｇ·Ｌ－１、５μｇ·Ｌ－１、１０μｇ·Ｌ－１、１５μｇ·Ｌ－１）ＴＧＦ-β２、不同作用时间（０ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）ＴＧＦ-β２（１０μｇ·Ｌ－１）诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化。结果　随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞胞浆中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ荧光强度增强;Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达逐渐减少,各组细胞间Ｅ-Ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝８７．６１７,Ｐ＜０．０１）;Ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达量差异有统计学意义（Ｆ＝６８．９２３,Ｐ＜０．０１）。随着ＴＧＦ-β２浓度的增加,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增多,在１０μｇ·Ｌ－１ＴＧＦ-β２诱导组达到峰值;随着ＴＧＦ-β２诱导时间的延长,细胞中ｍｉＲ-１８４相对表达量增加,在２４ｈ表达达到峰值。结论　ＴＧＦ-β２诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内ｍｉＲ-１８４表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究ｍｉＲ-１８４在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础。     

靶向G蛋白偶联受体91的小发夹RNA慢病毒载体的构建及功能初步检测

目的　构建靶向大鼠Ｇ蛋白偶联受体９１（Ｇｐｒｏｔｅｉｎ-ｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ９１,ＧＰＲ９１）基因的小发夹ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ,ｓｈＲＮＡ）慢病毒载体,探讨ＧＰＲ９１受体对高糖诱导下血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）释放的调节作用。方法　设计合成４对针对大鼠ＧＰＲ９１（ＮＭ＿００１００１５１８）的特异性单链寡核苷酸链,两端分别引入ＡｇｅＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点,退火后得到小片段带黏性末端的双链ＤＮＡ,克隆入慢病毒载体ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ,行聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）和ＤＮＡ测序鉴定重组体。将各慢病毒ｓｈＲＮＡ干扰载体和辅助包装载体共转染２９３Ｔ细胞,收集病毒颗粒并行浓缩滴度检测。将各慢病毒载体转染ＲＧＣ-５细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法筛选有效的慢病毒ｓｈＲＮＡ干扰载体。使用４５ｍｍｏｌ?Ｌ－１的高糖刺激ＲＧＣ-５细胞２４ｈ,用ＥＬＩＳＡ法观察干扰ＧＰＲ９１后ＶＥＧＦ的表达情况。结果　ＰＣＲ及ＤＮＡ测序结果均显示慢病毒载体ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧＰＲ９１构建正确;包装病毒颗粒后,ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧＰＲ９１-１、２、３、４组病毒浓缩液的滴度依次为１．５×１０９ ＴＵ?ｍＬ－１、１．５×１０９ＴＵ?ｍＬ－１、３．０×１０９ＴＵ?ｍＬ－１、３．０×１０９ＴＵ?ｍＬ－１。将慢病毒颗粒感染ＲＧＣ-５细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示ＮＣ组ＧＰＲ９１蛋白（０．６０±０．０８）空白组（０．６２±０．０７）的表达无明显差异（Ｆ＝４９．０３,Ｐ＞０．０５）。而与空白组相比,４个慢病毒载体组（０．４８±０．０５、０．３４±０．０６、０．３０±０．０４和０．１１±０．０６）均能不同程度沉默ＧＰＲ９１的表达,差异有统计学意义（Ｆ＝４９．０３,Ｐ＜００１）,其中ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧＰＲ９１-３干扰效率最高。ＥＬＩＳＡ结果显示空白组、高糖组、高糖＋ＮＣ组、高糖＋ｐＧＣＳＩＬ-ＧＦＰ-ｓｈＧ-ＰＲ９１-３组ＶＥＧＦ蛋白表达分别为（２５．６３±４．５２）ｐｇ?ｍＬ－１、（７２．７４±８．２４）ｐｇ?ｍＬ－１、（７１．６８±８．３１）ｐｇ?ｍＬ－１和（４６．７７±６２１）ｐｇ?ｍＬ－１,表明ＧＰＲ９１病毒干扰载体可显著降低高糖引起的ＶＥＧＦ分泌,差异有统计学意义（Ｆ＝３０．８５２,Ｐ＜０．０１）。结论　本实验成功构建了靶向大鼠ＧＰＲ９１的ｓｈＲＮＡ慢病毒载体并进行病毒颗粒包装。所构建的慢病毒载体能够降低高糖作用下的ＶＥＧＦ表达,为进一步研究ＧＰＲ９１基因在糖尿病视网膜病变中的作用机制和动物基因治疗奠定基础。     

AG490对豚鼠巩膜成纤维细胞生长的影响

目的研究α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblast,GSF)生长状态的影响。方法选取原代培养传3-4代的GSF用于实验,应用台盼蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色法和流式细胞仪检测和观察不同浓度(0μmol·L-1、15μmol·L-1、25μmol·L-1、50μmol·L-1、75μmol·L-1)AG490对体外培养的GSF生存活力和细胞增殖力以及细胞周期的影响。结果 15μmol·L-1、25μmol·L-1AG490对体外培养的GSF干预48h,细胞存活率为94.6%和94.1%,与0μmol·L-1AG490(95.5%)比较差异均无统计学意义(均为P>0.05);且均未见促进或抑制细胞增殖能力的作用,与0μmol·L-1AG490组比较差异亦均无统计学意义(t=3.91、3.89,均为P>0.05)。25μmol·L-1AG490作用GSF细胞48h后,G1期和S期细胞百分比及细胞增殖指数与0μmol·L-1AG490比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论一定浓度范围(≤25μmol·L-1)的AG490对正常GSF的存活率和增殖能力及细胞周期没有明显影响,提示AG490作为一种特异性的阻断JAK2/Stat3信号转导通路的酪氨酸酶受体抑制剂,对正常生理情况下的细胞(几乎没有Stat3磷酸化形式存在)没有明显的毒副作用。     

眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞与正常成纤维细胞形态与生长增殖特性差异

目的　对眼睑基底细胞癌相关成纤维细胞（ｂａｓａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＢＣＡＦｓ）及眼睑正常成纤维细胞（ｎｏｒｍａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＮＦｓ）进行分离、培养、纯化和鉴定,初步研究ＢＣＡＦｓ与ＮＦｓ细胞形态、生长增殖等生物学性状的差异。方法　用组织块贴壁法培养获得原代眼睑ＢＣＡＦｓ和眼睑ＮＦｓ,通过胰蛋白酶差速消化法和反复传代法进行细胞的分离、纯化;通过倒置相差显微镜对照观察ＢＣＡＦｓ和ＮＦｓ细胞形态,应用免疫细胞化学染色检测细胞表达的特异性蛋白鉴定ＢＣＡＦｓ,ＭＴＴ法检测细胞生长增殖特性。结果　在接种后３ｄ便可见原代ＢＣＡＦｓ从组织块爬出,呈放射状生长,约７ｄ铺满瓶底。ＮＦｓ生长缓慢,接种后４ｄ才见稀疏的ＮＦｓ在组织块周围生长,约１１ｄ铺满瓶底。传代后的ＢＣＡＦｓ在形态上未发生明显改变,但生长速度增快,与ＮＦｓ在形态结构特征和生长方式上存在差异;眼睑ＢＣＡＦｓ和ＮＦｓ的免疫细胞化学染色,前者波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞活化蛋白呈阳性,细胞角蛋白呈阴性,后者仅波形蛋白呈阳性,角蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞活化蛋白均呈阴性;与ＮＦｓ相比,眼睑ＢＣＡＦｓ生长增殖较快,倍增时间较短。结论　与眼睑ＮＦｓ相比,ＢＣＡＦｓ在形态结构、蛋白表达、生长方式等方面均有差异,且增殖能力强。     

Retinal and choroidal TGF-β in the tree shrew model of myopia: Isoform expression, activation and effects on function

A visually evoked signalling cascade, which begins in the retina, transverses the choroid, and mediates scleral remodelling, is considered to control eye growth. The ubiquitous cytokine TGF-β has been associated with alterations in ocular growth, where alterations in scleral TGF-β isoforms mediate the scleral remodelling that results in myopia. However, while the TGF-β isoforms have been implicated in the scleral change during myopia development, it is unclear whether alterations in retinal and choroidal isoforms constitute part of the retinoscleral cascade. This study characterised the retinal and choroidal TGF-β isoform profiles and TGF-β2 activation during different stages of myopia development, as induced by form deprivation, in a mammalian model of eye growth. Using quantitative real-time PCR, the mRNA for all three mammalian isoforms of TGF-β was detected in tree shrew retina and choroid. Distinct tissue-specific isoform profiles were observed for the retina (TGF-β1:TGF-β2:TGF-β3 = 20:2085:1) and choroid (TGF-β1:TGF-β2:TGF-β3 = 16:23:1), which remained constant over the development period under investigation. The active and latent pools of retinal TGF-β2 were quantified using ELISA with the majority (>94%) of total TGF-β2 found in the latent form. Unlike previous scleral data showing early and continuous decreases in TGF-β isoform expression during myopia development, the levels of the three isoforms remained within normal ranges for retinal (TGF-β1, −14 to +14%; TGF-β2, −2 to +20%; TGF-β3, −10 to +26%) and choroidal (TGF-β1, −19 to +21%; TGF-β2, −26 to +8%; TGF-β3, −11 to +28%) tissues during myopia development (induction times of 3 h, 7 h, 11 h, 24 h, and 5 days). A 40% decrease in retinal TGF-β2 activation was observed after 5 days of myopia development, however, there was no functional correlate of altered TGF-β2 activity, as assessed by the retinal ERG response. Overall, these data highlight the specific nature of TGF-β isoform expression, which reflects the differences in tissue structure and function. While TGF-β isoforms are involved in scleral regulation during myopia development in mammals, they do not have a primary role in the retinal and choroidal signals. Thus, the regulation of eye growth via the retinoscleral cascade involves more than one factor, which is likely to be tissue-specific in nature.     

不同波长的光照射对视网膜色素上皮细胞生长及其分泌生长因子的影响

背景近视的发病机制是眼科研究的一个热点,近年来发现,由神经视网膜细胞及视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌的细胞因子可能参与近视的发病,RPE细胞因子的分泌功能受光照射的影响,而RPE细胞对不同波长光的吸光度（A）值是不一样的。目的研究不同波长的光照射对人胚RPE细胞增生及其分泌肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bVGF）和转化生长因子-β（TGF—β）的影响,从细胞水平和分子生物学水平探讨近视的发病机制。方法第4～5代人胚RPE细胞置于白光、波长为775nm的红光及波长为480nm的蓝光下照射和培养48h,MTT比色法检测各组人RPE细胞的增生情况,并用透射电子显微镜观察各组传代细胞的超微结构。分别于光照射后12、24、48、72h收集培养液,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定培养基中HGF、bFGF和TGF—β的质量浓度。用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测不同波长光照射24h后RPE细胞中HGFmRNA的表达水平,分析蓝光、红光、白光照射对体外培养RPE细胞的影响。结果蓝光组、红光组、白光组和对照组RPE细胞的A490值分别为0．0218±0．0014、0．0353±0．0025、0．0371±0．0024和0．0445-0．0046。4个组中RPE细胞的增生速度明显不同,差异有统计学意义（F=12．579,P〈0．05）,蓝光组和红光组A490值均明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=2．043、t=2．024,P〈0．05）。ELISA结果显示人胚RPE细胞可以分泌HGF、bFGF和TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时间点HGF、bFGF和TGF—β的分泌量不同,随着时间的变化,4个组HGF、TGF—β的质量浓度均逐渐升高,二者在72h和48h均高于12h（P〈0．05）,红光组与蓝光组更为明显,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。各波长组bFGF的质量浓度随着光照时间的延长在RPE细胞中的表达均逐渐降低,72h与12h时相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR结果显示,不同波长光照射后RPE细胞中HGFmRNA的表达水平不同,蓝光下培养的RPE细胞HGFmRNA表达量最少,白光组、红光组和蓝光组HGFmRNA的表达量（A490）与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。透射电子显微镜下红光组、白光组人胚RPE细胞与对照组相比超微结构均无明显变化,但蓝光组RPE细胞核染色质稀疏变淡,细胞器减少,细胞界膜不清或消失。结论不同波长的光照射可影响人RPE细胞的增生及其分泌HGF、bFGF和TGF—β的功能,提示近视的形成可能与不同波长的光相互作用有关。     

RNA干扰MMP-2基因对人晶状体上皮细胞增殖及移行能力的影响

目的　研究ＲＮＡ干扰基质金属蛋白酶-２（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-２,ＭＭＰ-２）表达对体外培养的人晶状体上皮细胞（ｈｕｍａｎｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ｈＬＥＣｓ）增殖、移行的影响。探讨ＲＮＡ干扰技术抑制ＬＥＣｓ增殖、移行的可行性,以探索防治后发性白内障的新方法。方法　设计构建含有靶向ＭＭＰ-２的短发夹ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ,ｓｈＲＮＡ）质粒载体和不含靶向ＭＭＰ-２的ｓｈＲＮＡ阴性对照质粒载体,体外转染ｈＬＥＣｓＳＲＡ０１／０４,分别标记为ＭＭＰ-２沉默组和阴性对照组;以等体积培养液代替转染质粒培养作为空白对照组。实时荧光定量ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转染后２４ｈＭＭＰ-２ｍＲＮＡ及ＭＭＰ-２蛋白的表达水平。ＭＴＴ比色法测定细胞转染后２４ｈ、４８ｈ以及７２ｈ时ｈＬＥＣｓ的增殖能力。细胞划痕实验方法测定转染后２４ｈ、４８ｈ时ｈＬＥＣｓ的移行愈合率。结果　转染２４ｈ后ＭＭＰ-２沉默组ｍＲＮＡ及其蛋白的相对表达水平分别为０．２０２±０．０７５、８０．８５６±２．１６５,与空白对照组１．０４１±０．１６３和１８４．４１９±３．５８４比较分别下降了８０．６％和５５．１％,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,而阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;ＭＴＴ比色法检测结果显示,各时间点的细胞增殖能力ＭＭＰ-２沉默组与阴性对照组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,而２组较空白对照组均有所下降,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;细胞划痕实验示转染２４ｈ与４８ｈ后ＭＭＰ-２沉默组的移行愈合率分别为（２０．３６±４．１４）％和（２３．１９±５．６２）％,较空白对照组（４１．２６±４．５７）％和（６７．６１±８．８０）％以及阴性对照组的（３６．２８±２．２８）％和（７４．４８±９．２１）％均明显降低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　靶向ＭＭＰ-２ｓｈＲＮＡ可以有效降低ｈＬＥＣｓＳＲＡ０１／０４ＭＭＰ-２ｍＲＮＡ和蛋白表达,抑制细胞的移行,但尚不能认为对细胞增殖能力有影响。ＲＮＡ干扰ＭＭＰ-２的表达可有效抑制ｈＬＥＣｓ的移行。     

两种缺氧模型对小鼠骨髓间充质干细胞中基质金属蛋白酶表达及其对促血管形成能力的影响

目的　观察物理和化学缺氧模型中小鼠骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ-ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＢＭＳＣｓ）中基质金属蛋白酶１３（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-１３,ＭＭＰ-１３）的表达及其对猴脉络膜-视网膜内皮细胞ＲＦ／６Ａ管腔形成能力的影响。方法　取Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠骨髓,培养鉴定ＢＭＳＣｓ。采用三气培养箱模拟物理缺氧及氯化钴（ＣｏＣｌ２）诱导化学缺氧。物理缺氧６ｈ、１２ｈ、２４ｈ和４８ｈ后检测ＭＭＰ-１３表达。选表达最高的处理时间,检测不同浓度ＣｏＣｌ２（０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、２００μｍｏｌ·Ｌ－１、３００μｍｏｌ·Ｌ－１及４００μｍｏｌ·Ｌ－１）处理后ＭＭＰ-１３表达。检测缺氧后ＢＭＳＣｓ中缺氧诱导因子-１α（ｈｙｐｏｘｉａ-ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ-１α,ＨＩＦ-１α）表达及ＢＭＳＣｓ增殖能力,观察其条件培养基诱导的ＲＦ／６Ａ管腔形成情况。结果　细胞经鉴定符合ＢＭＳＣｓ特征。物理缺氧２４ｈ后,ＭＭＰ-１３蛋白表达量达高峰（３．１６±０．２４）,较常氧组（１．００±０．１２）增加３倍（Ｐ＜０．０１）。１００μｍｏｌ·Ｌ－１和２００μｍｏｌ·Ｌ－１ＣｏＣｌ２组（１．６０±０．０９、１．６４±０．２４）中ＭＭＰ-１３表达较常氧组（１．００±０．２０）均增加（均为Ｐ＜０．０５）,而３００μｍｏｌ·Ｌ－１和４００μｍｏｌ·Ｌ－１ＣｏＣｌ２组中ＭＭＰ-１３表达与常氧组相同或稍低。三气培养箱构建的和ＣｏＣｌ２诱导的缺氧环境下培养２４ｈ后,ＢＭＳＣｓ中ＨＩＦ-１α蛋白表达较常氧组（１．００±０．２３）明显增加,相对表达量分别为３．４０±０．２６和３．１２±０．１３（均为Ｐ＜０．０１）,而两种缺氧模型间无明显差异。在培养２４ｈ时,物理缺氧组（１．５３±０．０４）和化学缺氧组（１．３１±０．１４）均较常氧组（１．０４±０．１０）细胞增殖能力增强（均为Ｐ＜０．０５）,且物理缺氧促增殖效果更明显。三气培养箱模拟的物理缺氧组、ＣｏＣｌ２诱导的化学缺氧组和常氧组ＲＦ／６Ａ管腔形成总长度分别为（５５０６±３８０）μｍ、（５１０９±５５８）μｍ和（３１２０±３００）μｍ,三气培养箱模拟的物理缺氧组和ＣｏＣｌ２诱导的化学缺氧组较常氧组均明显增加（均为Ｐ＜０．０１）,而两种缺氧模型之间差异则无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ＣｏＣｌ２和三气培养箱均可建立缺氧模型,促进ＢＭＳＣｓ表达ＭＭＰ-１３,提高其促血管形成能力,提示缺氧可能调控ＢＭＳＣｓ表达ＭＭＰｓ进而影响新生血管发生发展。