PDGF和TGF-β1对兔RPE细胞α-SMA表达及收缩功能的影响

目的 研究血小板源性生长因子(PDGF-AB)和转化生长因子(TGF-β1)对兔视网膜色素上皮(RPE)细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和RPE细胞诱导的胶原收缩的影响。方法免疫荧光染色法分析PDGF-AB和TGF-β1对α-SMA表达的影响。体外胶原凝胶收缩实验用于证实两种生长因子对兔RP细胞收缩的刺激作用。结果 PDGF-AB和TGF-β1均可显著诱导兔RPE细胞α-SMA的表达，TGF-β1的作用显著强于PDGF-AB；两种生长因子对RPE细胞诱导的胶原收缩有着相同显著的刺激作用。结论 PDGF-AB和TGF-β1均可增强RPE细胞的收缩力量．但二者可能是通过不同的途径达到这一效果，还需要更多的研究来分析α-S1MA在纤维增殖疾病中的作用。     

TGF-β1对小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、7d)对体外培养的小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果TGFβ1能明显促进小鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,在质量浓度为10ng/mL时作用最明显。FCM结果显示,TGFβ1作用后,巩膜成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比显著升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论TGFβ1可以促进体外培养的巩膜成纤维细胞增殖和DNA合成,它的表达下调可能在近视发生过程中发挥重要作用。     

转化生长因子-β1诱导人Tenon囊成纤维细胞表型转化的信号通路研究

目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)对人结膜下Tenon囊成纤维细胞(human subconjunctival Tenon's capsule fibroblast,HTCF)表型转化的作用及其信号转导通路.方法 白内障手术中取人结膜下Tenon囊组织块培养成纤维细胞.用第5～9代细胞,以10 μg/L TGF-β1诱导HTCF 48 h,使其表型转化为肌成纤维细胞(myofibroblast,MF).用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型.在诱导后不同时间点(0、5、30、60、120、180 min,12、24、36 h),用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术测定smad2、AKT、ERK、P38蛋白表达.结果 10 μg/L TGF-β1诱导HTCF后α-SMA在24 h达峰值,蛋白表达在48 h最高;10 μg/L TGF-β1诱导HTCF后smad2、AKT、P38表达具有时间双向性,smad2具有两个峰值.结论 TGF-β1能显著诱导HTCF,使其表型转化为MF,smad信号通路参与了这一过程.     

兔眼SBK、LASIK、PRK术后角膜转化生长因子β、α-平滑肌肌动蛋白的表达及创口愈合机制的对比研究

背景 目前对飞秒激光前弹力层下角膜磨镶术(SBK)术后创面愈合的研究较多,关于新型角膜板层刀SBK方面的研究尚少.观察术后早期成纤维细胞的活化程度,可以了解术后不同时间的角膜细胞增生情况. 目的 检测转化生长因子(TGF-β)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,比较SBK、准分子激光屈光性角膜切削术(PRK)和准分子激光角膜原位磨镶术(LASIK)手术后早期角膜细胞增生活化情况以及角膜创面的愈合特点,探讨不同手术方式术后组织愈合机制及生物力学差异.方法 新西兰白兔27只,用随机数字表法分为SBK组、LASIK组和PRK组,每组9只,均取右眼为手术眼,左眼为正常对照.于术后7d、1个月、3个月取兔眼角膜,光学显微镜下观察,并行免疫组织化学法检测角膜组织中TGF-β及α-SMA的表达,计数成肌纤维细胞活化数量.结果 SBK组术眼角膜瓣创口边缘上皮细胞增生明显,成肌纤维细胞数量增多,术后7d创口周围TGF-β及α-SMA呈阳性表达,1个月达高峰,3个月减弱.与LASIK组相比,SBK组和PRK组TGF-β的表达差异均有统计学意义(SBK组:t=2.226、2.158、2.330,P＜0.05;PRK组:t=4.745、6.524、6.293,P＜0.05);成纤维细胞数量的差异亦均有统计学意义(SBK组:t=4.439、5.692、4.175,P＜0.05;PRK组:t=6.330、6.723、5.267,P＜0.05).SBK组各时间点TGF-β的表达量均低于PRK组,差异均有统计学意义(t =4.691、5.527、4.399,P＜0.05);α-SMA的表达差异亦均有统计学意义(t=9.637、10.282、8.197,P＜0.05);成纤维细胞数量除3个月时差异无统计学意义外,其余时间点SBK组活化均较PRK组少,差异均有统计学意义( t=5.188、4.529,P＜0.05).结论 与传统LASIK相比,SBK手术的创面活化的成肌纤维细胞、TGF-β和α-SMA表达增多,其愈合反应更强,具有更好的术后生物力学优势,但同PRK相比仍有差距.     

TGF-β1对Tenon''''s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对Tenon's囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法用MTT法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响.结果GF-β1能够剂量依赖性地促进Tenon's囊成纤维细胞增殖(P＜0.05);TGF-β1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mL TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05).结论GF-β1能够促进Tenon's囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制.     

转化生长因子-β2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达

目的 观察形觉剥夺性近视（FDM）形成中视网膜转化生长因子-β2（TGF-β2）水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨.方法 出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达.结果 形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义（P＜0.01）,遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少（P＜0.01）,TGF-β2 mRNA的表达下调.结论 TGF-β2参与调控FDM形成.     

TGF-β2对体外培养豚鼠巩膜成纤维细胞的影响

目的探讨豚鼠巩膜成纤维细胞(guineapigscleralfibroblast,GSF)体外培养的方法,研究转化生长因子-β2(transforminggrowthfactor-β2,TGF-β2)对体外培养GSF的增生及胶原蛋白合成的影响。方法GSF原代培养,取生长状态良好的3~6代GSF分别加入不同浓度的TGF-β2(0.00~50.00μg·L-1)。应用MTT法和氯胺T法分别观察比较GSF的增生及胶原蛋白合成情况。结果TGF-β2体外能促进GSF的增生,最佳作用浓度为10.00μg·L-1。在0.01~10.00μg·L-1浓度范围内促进胶原蛋白的合成,呈剂量依赖性。结论TGF-β2体外能够促进GSF增生及胶原蛋白的合成。     

碱性成纤维细胞生长因子与转化生长因子β在近视眼巩膜中作用的研究进展

近视是世界最常见眼病之一,其发病机制尚不完全清楚。有研究发现,细胞生长因子与近视的发生发展密切相关,其中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与转化生长因子β（TGF-β）作为关键的信号分子可以通过调控巩膜细胞外基质的合成与降解参与近视眼巩膜重塑,但具体转导途径和机制还不十分清楚。现就bFGF和TGF—β在近视眼巩膜中的表达及其调控巩膜重塑的可能机制进行综述。     

转化生长因子-β2对实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响

背景以往对近视眼巩膜力学特性变化的研究局限于其巩膜整体和条带的力学特性变化方面,目前对近视眼细胞水平力学特性的研究日益受到重视。目的明确TGF-β2对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞力学特性的影响。方法2周龄豚鼠12只,随机选取一侧眼用镜片诱导方法制备近视动物模型,对侧眼为对照。造模30d后,用组织块培养法培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞并传2代,采用免疫组织化学法以兔抗鼠波形蛋白、结蛋白、角蛋白、S-100抗体进行细胞鉴定。将不同质量浓度的TGF-β2（分别为0、1、10、100mg／L）加入无血清DMEM中作用24h,利用细胞微管吸吮的方法测定各组巩膜成纤维细胞的力学特性。结果模型眼0mg／LTGF—p：组与对照眼0mg／LTGF—p：组比较,模型眼的巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数明显升高,二者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。模型眼与对照眼在TGF-β2作用下,0mg／L组与1mg／L组、10mg／组比较,细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均有统计学意义（P〈0．05）。模型眼和对照眼培养细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数与TGF-β2的质量浓度均呈正相关（r=0．743、r=0．533;r=0．654、r=0．576）,模型眼和对照眼中的0mg／L组与100mg／L组比较细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异均无统计学意义（P〉0．05）,模型眼1mg／L组、10mg／L组与对照眼1mg／L组、10mg／L组比较,巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数之间差异有统计学意义（P〈0．05）;模型眼组100mg／LTGF-β2与对照眼的100mg／LTGF-β2组比较,巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随着TGF—B,质量浓度的增加,近视眼巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量、黏弹性参数值明显升高,1mg／L和10mg／LTGF-β2可以降低正常巩膜成纤维细胞的平衡杨氏模量及黏弹性参数,导致细胞力学特性的更大变化。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β受体在人巩膜成纤维细胞内的表达

目的了解人眼巩膜成纤维细胞是否表达碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)受体FGFR1和转化生长因子(TGF-B)受体TBRⅠ和TBRⅡ。方法角膜移植后的4只眼球,应用定点解剖及游走促进法进行巩膜成纤维细胞的分离培养,建立细胞系,采用免疫荧光染色法检测bFGF受体FGFR1和。TGF-β受体TβRⅠ和TβRⅡ蛋白的表达。结果分别应用FGFR1、TβRⅠ和TβRⅡ的特异多克隆抗体染色,整个细胞表面或细胞核周呈现特异性黄绿色荧光,受体位于细胞胞膜上。肉眼观察TβRⅠ和TβRⅡ呈强阳性表达,FGFR-1表达较弱于TβRⅠ和TβRⅡ。结论人巩膜成纤维细胞表达bFGF受体FGFR和TGF-β受体TBRⅠ、TBR的功能性蛋白,巩膜是bFGF和TGF-β发挥作用的一个部位。外源的bFGF和TGF—β通过与巩膜成纤维细胞上的上述相应受体结合发挥作用,是影响实验性近视发生发展的机制之一。     

Effects of hepatocyte growth factor on MMP-2 expression in scleral fibroblasts from a guinea pig myopia model

AIM:To investigate the effects of hepatocyte growth factor (HGF) on MMP-2 expression in scleral fibroblasts from guinea pig with LIM.METHODS:Sixty 1-week-old guinea pigs were chosen for the study. The right eyes were treated with -10.0 D lenses as the LIM group; the left eyes remained untreated as the control group. The refraction and axial length were measured by streak retinoscopy and A-scan ultrasonography respectively prior to and 4 weeks after the experiment. Four weeks later, the guinea pigs were sacrificed and primary scleral fibroblasts were taken for tissue culture. The 3^rd-5th generation scleral fibroblasts were chosen for the experiments. The expression levels of HGF and MMP-2 protein in the scleral fibroblasts were analyzed by Western blotting. After HGF with different doses acted on the scleral fibroblasts of the control group, MMP-2 protein expression in the scleral fibroblasts was analyzed by Western blotting. HGF siRNA was transfected into the scleral fibroblasts of the LIM group and the protein expressions of HGF and MMP-2 were analyzed by Western blotting.RESULTS:The LIM group became myopic with a significant increase in axial length (7.97±0.29 mm vs 7.01±0.26 mm, P<0.05), and a significant decrease in refraction (-5.06±0.31 D vs 0.55±0.25 D, P<0.05) compared with the control group. The protein expression of HGF in the scleral fibroblasts of the LIM group was significantly higher compared with the control group ( 1.26±0.04 vs 0.32 ±0.04, P<0.05). The protein expression of MMP-2 in the scleral fibroblasts of the LIM group was significantly higher compared with the control group (0.89±0.06 vs 0.42±0.05, P<0.05). In the scleral fibroblasts of the control group, HGF(0, 0.1, 1, 10 ng/mL) upregulated MMP-2 protein expression in a dose-dependent manner (0.35±0.03, 0.44±0.02, 0.91±0.03, 1.33±0.04, all P<0.05). In the scleral fibroblasts of the LIM group transfected with HGF siRNA, MMP-2 protein expressions were significantly decreased compared with the negative control group (0.29±0.03 vs 0.81±0.05, P<0.05).CONCLUSION:HGF is a upstream mediator of MMP-2 in scleral fibroblasts from guinea pig.     

胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法 首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,CCK-8检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达水平的影响.结果 成功进行了人巩膜成纤维细胞的原代培养.人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA及蛋白水平的表达.胶原相关整合素α1β1 1 mg·L-1和4 mg·L-1抗体组细胞存活率分别为(86.3±4.5)％和(74.3±6.8)％,与对照组的100％相比,细胞存活率均显著下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且呈浓度依赖性的抑制作用.胶原相关整合素α2β1抗体在1mg ·L-1时有抑制作用,细胞存活率为(89.3±12.1)％,但与对照组的100％相比差异无统计学意义(P＞0.05),4mg· L-1抗体组细胞存活率下降为(74.5±6.6)％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).胶原相关整合素α1β1(4 mg·L-1)抗体组Ⅰ型胶原mRNA表达明显减低,是对照组的0.48倍(P＜0.05).胶原相关整合素α2β1抗体1 mg·L-1组和4 mg· L-1组Ⅰ型胶原mRNA表达分别是对照组的0.94倍和0.87倍,与对照组相比差异均无统计学意义(均为P ＞0.05).结论 人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位的表达.胶原相关整合素α1β1和α2β1影响人巩膜成纤维细胞的增殖.胶原相关整合素α1β1参与人巩膜成纤维细胞胶原的合成.     

SB431542和TGF-β1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响

目的　探讨转化生长因子-β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和ＳＢ４３１５４２（ＴＧＦ-β１受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（ｔｈｙｒｏｉｄ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ,ＴＡＯ）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）及结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）基因表达的影响,为ＴＡＯ眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法　实验分为３组。第１组:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ,ＲＴ-ＰＣＲ）检测不同浓度ＴＧＦ-β１（０μｇ?Ｌ－１、１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴ-ＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第２组:采用ＲＴ-ＰＣＲ检测１０μｇ?Ｌ－１ＴＧＦ-β１在不同的时间点（０ｈ、３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）刺激ＴＡＯ患者眼眶成纤维细胞后α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况;第３组（分为４小组处理）:眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２刺激眼眶成纤维细胞、１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１ 单独刺激眼眶成纤维细胞、３０μｍｏｌ?Ｌ－１ ＳＢ４３１５４２联合１０μｇ?Ｌ－１ ＴＧＦ-β１刺激眼眶成纤维细胞（ＳＢ４３１５４２预先刺激眼眶成纤维细胞１ｈ,然后再加入ＴＧＦ-β１）,采用ＲＴ-ＰＣＲ检测α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达。结果　ＴＧＦ-β１在一定的浓度范围内（１～１０μｇ?Ｌ－１）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着浓度增加ｍＲＮＡ表达增加,各浓度组（１μｇ?Ｌ－１、５μｇ?Ｌ－１、１０μｇ?Ｌ－１、２０μｇ?Ｌ－１）与空白对照组（０μｇ?Ｌ－１）相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＴＧＦ-β１在一定的时间范围内（０～２４ｈ）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ,随着时间延长ｍＲＮＡ表达增加,各时间组（３ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ）与０ｈ相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β１诱导眼眶成纤维细胞表达α-ＳＭＡｍＲＮＡ在２４ｈ达到峰值,而ＣＴＧＦｍＲＮＡ在１２ｈ即可达到峰值。ＳＢ４３１５４２对眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡｍＲＮＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达均有抑制作用。结论　一定范围内,ＴＧＦ-β１以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-ＳＭＡ及ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达,ＳＢ４３１５４２可抑制其表达。     

AG490对豚鼠巩膜成纤维细胞生长的影响

目的研究α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblast,GSF)生长状态的影响。方法选取原代培养传3-4代的GSF用于实验,应用台盼蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色法和流式细胞仪检测和观察不同浓度(0μmol·L-1、15μmol·L-1、25μmol·L-1、50μmol·L-1、75μmol·L-1)AG490对体外培养的GSF生存活力和细胞增殖力以及细胞周期的影响。结果 15μmol·L-1、25μmol·L-1AG490对体外培养的GSF干预48h,细胞存活率为94.6%和94.1%,与0μmol·L-1AG490(95.5%)比较差异均无统计学意义(均为P>0.05);且均未见促进或抑制细胞增殖能力的作用,与0μmol·L-1AG490组比较差异亦均无统计学意义(t=3.91、3.89,均为P>0.05)。25μmol·L-1AG490作用GSF细胞48h后,G1期和S期细胞百分比及细胞增殖指数与0μmol·L-1AG490比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论一定浓度范围(≤25μmol·L-1)的AG490对正常GSF的存活率和增殖能力及细胞周期没有明显影响,提示AG490作为一种特异性的阻断JAK2/Stat3信号转导通路的酪氨酸酶受体抑制剂,对正常生理情况下的细胞(几乎没有Stat3磷酸化形式存在)没有明显的毒副作用。     

视黄酸对体外培养的鸡巩膜成纤维细胞MMP-2表达的影响

目的在体外研究视黄酸(retinoicacid,RA)对小鸡后极部巩膜成纤维细胞MMP-2表达的调节作用,探讨RA在形觉剥夺性近视(form-deprivationmyopia,FDM)中的作用。方法取40只1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩遮盖右眼14d制备FDM动物模型,未遮盖眼为正常眼。将正常小鸡眼后极部巩膜成纤维细胞作体外培养并传2代细胞作为正常对照组细胞,FDM眼小鸡后极部巩膜成纤维细胞作体外培养并传2代细胞作为FDM组细胞,取其中20只正常小鸡眼第2代后极部巩膜成纤维细胞,加入不同终浓度RA(6×10-7,6×10-6,6×10-5和6×10-4mol/L)培养24h作为RA组细胞。各组细胞均采用SABC免疫组织化学染色法检测MMP-2的表达,进行计算机图像分析及统计学检验。结果MMP-2在培养的正常鸡巩膜成纤维细胞胞质呈弱阳性表达。FDM组鸡巩膜成纤维细胞较对照组MMP-2表达明显增高(P<0.01)。6×10-7mol/LRA组与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。6×10-6和6×10-5mol/LRA组较对照组MMP-2表达增高(P<0.01),6×10-4mol/LRA组细胞普遍变形崩解。各视黄酸浓度组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论在一定浓度范围内,RA上调体外培养的鸡巩膜成纤维细胞MMP-2的表达。RA可能是调节巩膜MMP-2表达的重要因素而参与FDM形成。     

Transforming growth factor beta2-induced myofibroblastic differentiation of human retinal pigment epithelial cells: regulation by extracellular matrix proteins and hepatocyte growth factor

Retinal pigment epithelial (RPE) cells possess the potential to transdifferentiate into myofibroblasts after stimulation with transforming growth factor beta (TGFbeta) and are implicated in the pathogenesis of proliferative vitreoretinopathy. In this study we evaluated how TGFbeta2 and various extracellular matrix (ECM) proteins modulate the transdifferentiation of human fetal retinal pigment epithelial cells (RPE) cells into myofibroblast-like cells. Furthermore, we investigated whether hepatocyte growth factor (HGF) can suppress this transdifferentiation. RPE cells were cultured on ECM coated or uncoated surfaces in the presence or absence of TGFbeta2. HGF was added to certain cultures only once or on a daily basis during the treatment. Transdifferentiation of RPE cells into myofibroblasts was assessed by the quantitation of alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) using immunocytochemistry, flow cytometry, real-time PCR and Western blotting. TGFbeta2 induced a significant increase of alpha-SMA expression in a dose-dependent manner. Compared with growth on uncoated surfaces, RPE cultured on fibronectin (FN)-coated surfaces and stimulated with TGFbeta2 showed a significantly higher alpha-SMA expression than untreated cells. This upregulation of alpha-SMA could be markedly reduced by daily treatment with HGF; however, a single HGF administration did not significantly reduce alpha-SMA. These findings are important for further understanding the interaction of cytokines, RPE cells and their environment in mesenchymal transformation as well as its possible modulation. Continuous or long-term treatment with HGF should be further investigated for its potential to prevent mesenchymal transdifferentiation of RPE cells, and ultimately, PVR in vivo.     

基质金属蛋白酶-2在实验性近视眼鸡巩膜成纤维细胞的表达

目的研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在形觉剥夺性近视眼(formdeprivation myopia,FDM)鸡巩膜成纤维细胞的表达。方法20只1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩遮盖右眼14d制备FDM动物模型,随机取10只FDM眼去除遮盖7d作为恢复组,均以对侧未遮盖眼作为对照组。将各组小鸡眼后极部巩膜成纤维细胞作体外培养并传2代,行光镜与透射电镜形态学观察,并采用SABC免疫细胞化学染色法检测MMP-2的表达,进行计算机图像分析及统计学检验。结果培养的正常鸡巩膜成纤维细胞胞浆表达MMP-2,阳性灰度值为192·2319±1·2521。FDM组细胞MMP-2染色阳性灰度值为168·1730±5·0039,较对照组MMP-2表达明显增高(P<0·01)。恢复组阳性灰度值为180·4001±2·3522,其MMP-2表达较FDM组有所回降(P<0·01),但与对照组相比仍有升高,差异有显著性(P<0·01)。结论MMP-2参与形觉剥夺性近视眼的发生发展与恢复的过程,在近视发生机制中起重要作用。     

阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组：对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^-1、1.0 g·L^-1及5.0 g·L^-1阿托品处理组(正常巩膜成纤维细胞分别加入三种不同浓度阿托品溶液),每组5只大鼠原代培养细胞。加药后24 h, CCK-8法检测各组巩膜成纤维细胞活力,流式细胞仪检测各组巩膜成纤维细胞凋亡率,Western blot法检测各组巩膜成纤维细胞光蛋白聚糖、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-14和MMP抑制剂(TIMP)-2蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示：与对照组相比,0.1 g·L^-1、1.0 g·L^-1及5.0 g·L^-1阿托品处理组细胞活力均增高,其中以1.0 g·L^-1阿托品处理组增高最显著,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明：阿托品处理组各...