新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察

目的 观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力。方法 将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA／TCP共培养2周，通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况；然后将复合物自体异位植入体内，6周后观察体内成骨情况。结果 扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长，有良好增殖活动性和稳定细胞表型，材料中心区未见细胞生长；植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面，可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论 新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料，骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞。     

胚胎干细胞体外分化为成骨细胞研究进展

目的 对胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）体外诱导分化为成骨细胞的研究现状、诱导分化中存在的问题，以及进一步的研究方向作一综述。方法广泛查阅近年来关于ESCs体外诱导分化为成骨细胞的文献，并进行总结与分析。结果ESCs可以作为理想的成骨细胞种子细胞来源。结论诱导ESCs定向分化得到骨组织工程种子细胞——成骨细胞有巨大的应用潜力，不仅提供了分析成骨细胞发生的分子机制模型，而且奠定了其在骨组织修复中的基础。     

成骨细胞异种移植的免疫观察

目的 探讨异种成骨细胞移植及组织工程骨构建的可能性。方法 用二步酶消化—组织块联合接种法行SD大鼠骨细胞原代培养，传代后用碱性磷酸酶(ALP)染色法进行细胞鉴定；再将28只大耳白兔分为3组：自体移植组(A组)、异种移植组(B组)、正常对照组(C组)，分别于腹直肌袋内注入自体软骨细胞悬液、SD大鼠成骨细胞及生理盐水，于1、2、4及8周行免疫学及组织形态学检测。结果 细胞原代接种后5天成单层，经鉴定为成骨细胞；实验兔各组移植后受体无明显全身及局部排异反应；B组移植后2、4周检测到特异性抗体，2周检测到细胞介导的细胞毒反应，4周达高峰，8周开始减退，HE染色见大量炎性细胞浸润，至8周无明显异位成骨现象。A、C两组移植后末见明显体液及细胞免疫反应。结论 单纯异种成骨细胞不能作为细胞移植及组织工程骨构建的可靠细胞来源。     

17-α雌二醇对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的 观察17—α雌二醇对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法 用植块培养法从乳鼠中分离出成骨细胞，倒置显微镜观察其形态，碱性磷酸酶(ALP)染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的17—α雌二醇作用于成骨细胞，使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨功能的影响。结果 17—α雌二醇以剂量方式促进各项指标的表达，促进成骨细胞的增殖和骨形成。结论 17—α雌二醇具有促进成骨细胞的增殖和骨形成作用。值得作进一步的研究。     

血管内皮细胞对体外培养成骨细胞生物学特性的影响

目的通过血管内皮细胞与成骨细胞体外协同培养，探讨血管内皮细胞对成骨细胞生物学特性的影响。方法用12周自愿中止妊娠并捐赠的健康胚胎来源的成骨细胞和血管内皮细胞采取直接和间接协同培养的方法。倒置相差显微镜下观察细胞一般形态，细胞计数比较增殖能力，检测骨钙素和碱性磷酸酶(ALP)活性，研究成骨细胞成骨能力的改变。结果血管内皮细胞与成骨细胞体外协同培养具有良好的细胞相容性，协同培养使细胞增殖加快（P<0.05）。直接、间接协同培养ALP活性分别为（8.200±0.755）μmol/(min*106细胞)，(12.300±1.300)μmol/(min*106细胞)，较成骨细胞ALP活性(4.900±0.800)μmol/(min*106细胞)明显增高（P<0.05）。直接、间接协同培养骨钙素合成量分别为(3.8267±0.4077)μg/L、(5.1533±0.5965)μg/L，较成骨细胞(2.5083±0.5530)μg/L明显增高（P<0.05）。结论体外协同培养血管内皮细胞与成骨细胞，对成骨细胞的生物学特性具有良好的调控作用。     

成骨细胞的应力调控机制

近年来,骨组织细胞的力学生物学研究逐步兴起,主要研究细胞受应力作用后的生物学反应机制,包括应力的作用效应、应力信号通路、调节机制等。由于成骨细胞易于获取,培养方便,与骨髓干细胞和骨细胞是同源细胞,在应力作用机制上具有高度的相似性,因此,研究的内容集中在成骨细胞的应力调控机制。笔者就成骨细胞的应力作用效应、调节机制、信号通路等方面的研究进展作一综述。     

痩素在骨髓基质干细胞向成骨细胞分化早期的作用研究

目的 研究小鼠骨髓基质干细胞体外增生及向成骨细胞定向分化早期瘦素(Leptin)的作用。方法 取雄性6周ICR小鼠股骨骨髓基质细胞进行原代和传代培养，在传代细胞培养时加入Leptln(实验组)或保持基础培养条件(对照组)，分别检测两组的细胞增生情况。半定量RT-PCR方法检测成骨细胞相关基因Cbfal和Cbtb等在两组细胞分化过程中的表达。结果 实验组在细胞培养24和48h细胞数量明显少于对照组，显示时间与Leptin剂量依赖特性。Leptln在传代细胞培养中促进成骨细胞特异性转录因子Cbfal和Cbtb的表达。结论 Leptin抑制骨髓基质干细胞体外增生并促进早期成骨细胞相关基因的表达。     

珍珠层聚乳酸人工骨复合成骨细胞体内异位成骨研究

目的探讨珍珠层聚乳酸(nacre／polylactic acid，N／P)人工骨与同种异体成骨细胞复合，植入体内后异位成骨的作用机制，以及作为骨组织工程支架材料的可行性。方法成年雄性新西兰大白兔18只，按2、4和8周3个时间点随机分成3组，每组6只。将体外培养的同种异体新西兰大白兔成骨细胞，种植到N／P人工骨材料上，并植入每只兔左侧背部皮下为实验组；以不复合成骨细胞的N／P人工骨材料植入右侧背部皮下作对照，分别于植入后不同时间点取材，经大体观察、组织学检查和免疫组织化学方法检测。结果实验组2周时材料周围有少许炎性细胞聚集，4周时有类骨质形成，8周时有成熟骨组织形成，其中可见骨髓腔；对照组2、4周时仅见大量纤维组织长入材料内，8周时材料内纤维组织增多，但无成骨发生。结论N／P人工骨可作为理想的骨组织工程支架材料。     

成骨细胞的特性及起源综述

成骨细胞的特性及起源综述姚振强１曾才铭２骨因其具有处于矿化的细胞外基质及其连续不断的塑建过程而区别于其他组织，而骨的塑建又是吸收和增殖并存的过程。骨的增殖及细胞外基质的产生都有赖于成骨细胞来完成，并且在与其它细胞的相互作用中，成骨细胞也可能起着中心作...     

自体成骨细胞的诱导培养及其生物学特性

目的 诱导培养来自自体骨髓间充质干细胞的成骨细胞或成骨细胞的前体细胞，进行自体成骨细胞异体骨复合移植实验研究。方法 抽取动物骨髓、抗凝稀释，以适当条件培养诱导，分化为成骨细胞并分析细胞生物学特性。成骨细胞生长在同种异体骨制成的载体上，形成复合物，植入人工缺损处，观察骨修复情况。结果 可以诱导培养出大量的成骨细胞或成骨细胞的前体细胞。自体成骨细胞异体松质骨复合物修复骨缺损的效果明显优于对照组。结论 本实验为自体成骨细胞异体骨复合移植的临床应用提供一个简单有效的方法。     

骨膜成骨细胞修复骨缺损的实验研究

为了进一步验证骨膜成骨细胞培养建立“成骨细胞库”用于修复骨缺损的可能性，取８只家兔胫前骨膜进行成骨细胞分离培养，体外繁殖后，以明胶海绵为载体，回植于自体的桡骨缺损部。对侧以明胶海绵吸附Ｈａｎｋｓ液为对照。分别在细胞植入后第２，４，８和１２周拍摄Ｘ线片，按Ｌａｎｅ方法计分，评价其骨缺损修复愈合的能力。结果表明，植入的成骨细胞因自身的成骨能力而促进骨缺损的愈合。提示自体“成骨细胞库”的建立和移植在骨缺损的修复中是一种可以继续探索的方法     

104例骨纤维结构不良的发病机制探讨

总结１０４例骨纤维结构不良的临床及病理表现，并对６例新鲜标本作碱性磷酸酶染色，３例新鲜标本作透射电镜观察。结果发现１０４例中３６例骨小梁周围有成骨细胞镶边，且纤维样细胞与典型成骨细胞移行；电镜下纤维样细胞周围有大量胶原纤维丝，其中可看到电子密度不均匀，圆形或不规则形态结构，这些结构即是从成骨细胞而来的基质小泡。６例新鲜标本碱性磷酸酶染色均呈阳性。１６例中见粘合线。根据（１）纤维样细胞周围的基质小泡的形成同成骨细胞周围的基质小泡完全一致。（２）纤维样细胞以及成骨细胞均含有丰富的碱性磷酸酶。因此认为两种细胞的性质相同。推测在骨的纤维结构不良中的纤维样细胞其本质符合骨祖细胞特点。故认为骨纤维结构不良的发病机制可能是成骨过程的障碍。即骨祖细胞向成骨细胞转化受阻。     

生物活性玻璃陶瓷对成骨细胞影响的体外实验研究

目的：探讨生物活性玻璃作为成骨细胞培养支架的可行性，为骨组织工程寻找一种良好的细胞载体。方法：采用骨膜源性成骨细胞与生物活性玻璃陶瓷体外复合培养，通过光镜、电镜、上清液ALP测定及流式细胞仪观察及检测生物活性玻璃陶瓷对成骨细胞生物学性状的影响。结果：成骨细胞在生物活性玻璃陶瓷的表面及空隙内生长状态良好，上清液ALP测定值及细胞凋亡率(Ap)两组对照无显著性差异。结论：生物活性玻璃陶瓷具有良好的生物相容性、生物活性和成骨作用，可以成为骨组织工程中一种新型的细胞支架材料。     

辛伐他汀在骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中的作用

目的 通过对小鼠骨髓干细胞体外培养的观察，研究辛伐他汀在骨髓基质干细胞向成骨细胞定向分化过程中的作用。方法 取雄性6周ICR小鼠股骨骨髓基质细胞进行原代和传代培养，应用组织化学及yon Kossa方法检测细胞碱性磷酸酶染色和细胞外基质矿化；在细胞培养早期加入辛伐他汀(实验组)或保持基础培养条件(对照组)，应用半定量RT-PCR方法分别检测两组Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、碱性磷酸酶(ALP)、转录因子CBFA1和Osterix(OSX)在成骨细胞分化过程中的表达。结果 小鼠骨髓基质细胞经体外诱导后分化为具备碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质的成熟成骨细胞。实验组COL1、ALP和CBFA1表达在细胞培养第3，5天均高于对照组，OSX表达差异不明显。结论 辛伐他汀在成骨细胞分化过程中促进其相关基因的表达。     

整合素β1在下颌牵张成骨过程中的表达研究

目的：探讨下颌骨牵张过程中整合素β1的表达变化。方法：作犬下颌骨颊舌向骨皮质牵张模型。固定牵张器一周后开始牵张，每天2次，每闪0.5mm，连续7天。牵张完成后第4天及第1、2、4、6、8周取新生骨组织标本作成石蜡切片并用LSAB法进行免疫组化检测，观察整合素β1在新骨组织，特别是在成骨细胞和破骨细胞上的表达。结果：牵张成骨过程中，整合素β1在新骨的成骨细胞与破骨细胞的表达不同。成骨细胞膜上整合素β1在第一周开始表达，第2-4周表达最强，第8周恢复正常水平。在破骨细胞膜上第4天弱阳性表达，一周后数目明显抑制，第4周消失。结论：牵张成骨过程中，成骨细胞整合素β1表达增强，提示在牵张成骨中发挥重要作用，整合素β1可能与介导应力信号转导有关。     

成骨细胞在珍珠层复合人工骨表面的粘附和增殖

目的 评价人成骨细胞在珍珠层聚乳酸人工骨上的粘附能力。方法 将珍珠层聚乳酸人工骨与人成骨细胞体外复合培养，采用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜及流式细胞仪检测，观察人成骨细胞在珍珠层聚乳酸人工骨上的粘附能力。结果 珍珠层聚乳酸人工骨与人成骨细胞体外复合培养1周后，细胞通过伪足贴附于人工骨表面。透射电镜下成骨细胞形态正常，胞浆内有丰富的粗面内质网和线粒体，并可观察到细胞之间形成的连接。流式细胞仪检测结果显示，附着在珍珠层复合人工骨的成骨细胞增殖指数增高。结论 珍珠层复合人工骨材料有利于成骨细胞的粘附、增殖和分化。     

新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察

目的 观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力。方法 将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA/TCP共培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况;然后将复合物自体异位植入体内,6周后观察体内成骨情况。结果 扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长;植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论 新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料,骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞。     

恒定磁场对骨组织中细胞影响的研究

目的阐明恒定磁场对成骨细胞和破骨细胞的生长和功能的影响和对骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的作用，从而在细胞水平较全面的解释磁场治疗骨质疏松的机理。方法利用体外原代培养的成骨细胞、破骨细胞和骨髓基质细胞，分别外加0．38T、0．48T恒定磁场处理后，观察恒定磁场对这三种细胞生长、分化和功能的影响。结果恒定磁场处理可促进骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化，促进成骨细胞的增殖、分化及功能的表达，并且抑制破骨细胞的生长、分化和功能。结论恒定磁场促进骨组织的成骨作用，抑制骨分解，是其治疗骨质疏松良好效果的部分机制。     

组织工程颅骨缺损修复过程中超微结构观察

目的 用组织工程骨修复SD大鼠颅骨极量骨缺损，并在透射电镜下观察骨修复过程中成骨细胞、血管内皮细胞与陶瓷支架的关系。方法 14只雄性SD大鼠，随机分成实验组和对照组，每组7只。取左侧腔、股骨骨髓，体外诱导培养骨髓基质细胞。实验组将已分化的成骨细胞与含孔磷酸钙陶瓷复合用于修复大鼠自体颅骨极量骨缺损；对照组颅骨缺损处仅置入无细胞的陶瓷材料。分别于术后4、8、12、16、20、24及28周每组各处死1只动物取材，制成脱钙超薄切片，透射电镜下观察成骨细胞、血管内皮细胞与陶瓷残余支架的关系。结果 实验组动物颅骨修复12周前成骨细胞或成骨细胞样细胞毗邻新生小血管、血管内皮细胞存在，16周后成骨细胞转变为骨细胞，并围绕血管被包埋于骨基质及胶原纤维中；陶瓷残余与新生骨间有一条明显的钙化沉积带，大量胶原纤维已伸入到陶瓷支架的纳米级结构中。对照组陶瓷中央部位有大量小血管及血管内皮细胞增生，其周围多为幼稚成纤维细胞，无成骨细胞与血管内皮细胞的依附关系。结论 新型含孔磷酸钙陶瓷作为组织工程细胞支架，其间的纳米级结构有利于骨的再生和血管形成；未见来源于植骨床血管的内皮细胞衍变为成骨细胞。     

骨膜源性成骨细胞的分离培养及鉴定

目的：寻找理想的骨组织工程种子细胞。方法：取兔骨膜组织，采用酶消化法和组织块培养法获取成骨细胞，体外培养传代，观察细胞的形态、生长特点及成骨特性。结果：培养的骨膜成骨细胞形态多为三角形或梭形，生长增殖迅速，具有成骨能力。结论：白骨膜获得的细胞是成熟的成骨细胞，可以做为骨组织工程中比较理想的种子细胞。