血小板源性生长因子-DD对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响

目的 探讨血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响.方法 将实验用人肾小球系膜细胞分成对照组、PDGF-DD组(20μg/L)和PDGF-DD+AG490组(20 μg/L PDGF-DD+10 μmol/L AG490).采用免疫组化、蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应等方法观察PDGF-DD对肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达的影响.结果 PDGF-DD刺激后肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3表达增强,AG490抑制上述蛋白的表达(P＜0.05或＜0.01).结论 PDGF-DD能够激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,促进系膜细胞增殖.     

白藜芦醇调控白血病JAK1/STAT3信号转导通路的研究

本研究探讨白藜芦醇抗白血病作用的具体分子机制。采用细胞体外培养和免疫组织化学、免疫沉淀法检测白血病细胞L1210p-JAK1、p-STAT3蛋白的表达；建立了L1210白血病腹水瘤小鼠模型，用Western blot、免疫组织化学测定信号转导分子p-JAK1及p-STAT3的活性。结果表明：白藜芦醇能明显抑制JAK1／STAT3信号转导通路，以时间-剂量依赖的方式下调p-JAK1、p-STAT3表达，减弱JAK1和STAT3的酪氨酸磷酸化活性。结论：白藜芦醇体内外均具能明显调控白血病JAK1／STAT3信号转导通路。发挥抗白血病作用。     

JAK/STAT信号通路在变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中的表达及意义

目的探讨JAK/STAT信号通路在大鼠变应性鼻炎(AR)鼻黏膜中的表达,探讨其在变应性鼻炎中的作用。方法 40只大鼠分为两组:对照组和变应性鼻炎组。变应性鼻炎组采用二异氰酸甲苯酯(TDI)制作大鼠实验性AR模型;对照组则给予TDI溶剂醋酸乙酯滴鼻。取两组大鼠下鼻甲组织,利用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测JAK1、JAK2、STAT1和STAT3 mRNA表达,利用Western blot检测p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3蛋白表达。结果q-PCR结果显示,变应性鼻炎组JAK1、JAK2、STAT1和STAT3 mRNA表达均显著高于对照组(P0.05);Western blot结果显示,变应性鼻炎组p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3蛋白表达均显著高于对照组(P0.05)。结论变应性鼻炎发生后JAK/STAT信号通路被激活,可能是变应性鼻炎治疗的靶点。     

氟伐他汀抑制高糖腹透液诱导人腹膜细胞TGF-β合成及细胞外基质产生的机制研究

目的 观察不同浓度氟伐他汀对高糖腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMC）转化生长因子β（TGF-β）合成及细胞外基质产生的抑制作用.方法 体外培养HPMC,同步化24 h后分组,正常对照组、高糖腹透液组、高糖腹透液＋氟伐他汀（108～106 mol/L）组.RT-PCR方法检测过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPAR-γ）、TGF-β1、I型胶原（Collagen I）、纤维连接蛋白（Fibronectin）mRNA的表达.ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化.结果 高糖上调HPMC刺激后PPAR-γ、TGF-β1、Collagen I、Fibronectin mRNA的表达,12 h达到最高峰.与高糖组比较,氟伐他汀10-7M、10-6M可以降低高糖诱导的PPAR-γ、TGF-β1、Collagen I、Fibronectin mRNA的升高,差异有统计学意义（P〈0.01）.氟伐他汀10-7M、10-6M可以降低高糖诱导的Fibronectin蛋白表达的升高（P〈0.01）.结论 氟伐他汀可以降低高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞PPAR-、TGF-β1、Collagen I的表达进而达到减少纤维连接蛋白表达.     

MiR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用

目的:探讨miR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用。方法:将ATDC5细胞分为4组:对照组、LPS组、NC mimics组、miR-467b mimics组。于转染培养48 h后收集细胞并进行后续实验:采用ELISA检测各组细胞TNF-α、IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-467b的表达水平;采用MTT法检测各组细胞的增殖能力;采用蛋白质印迹和qRT-PCR法检测各组细胞JAK/STAT信号通路相关基因的蛋白质及mRNA表达水平。结果:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞TNF-α、IL-1β的表达水平均显著升高、miR-467b的表达水平显著降低(P<0.05);MTT实验结果表明:LPS组在24、48、72 h的吸光度值显著降低(P<0.05)。蛋白质印迹结果发现:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-467b mimics组TNF-α、IL-1β的表达水平均显著降低而miR-467b的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-467b后,细胞在24、48、72 h的吸光度值显著升高(P<0.05),而STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:LPS刺激ATDC5细胞后可通过激活JAK/STAT3信号通路引起细胞炎性损伤,过表达miR-467b后可抑制JAK/STAT3信号通路的活化,降低ATDC5细胞的炎症水平。     

体外培养肾小球系膜细胞转化生长因子β1和血管紧张素Ⅱ表达与过氧化物酶体增殖物激活受体α激动剂的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferators-actived receptor-alpha,PPARα)激动剂对体外培养的肾小球系膜细胞的作用。方法:实验于2005-12/2006-05在泸州医学院附属医院传染免疫实验室完成。实验分组:将培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞株分为6组,将高糖作为刺激因子,PPARα激动剂WY14643作为干预因素。分别设①正常组:5.6mmol/L葡萄糖。②高糖组:30mmol/L葡萄糖;③高糖 10,100,500μmol/LWY14643组:30mmol/L葡萄糖 10,100,500μmol/L WY14643。④高糖 WY14643溶剂组:30mmol/L葡萄糖 250μmol/L二甲亚砜 250μmol/L无水乙醇。实验评估:①采用反转录-聚合酶链反应半定量法测定各组肾小球系膜细胞PPARαmRNA和血管紧张素ⅡmRNA表达。②采用免疫细胞化学法检测各组转化生长因子β1蛋白表达。结果:①肾小球系膜细胞PPARαmRNA表达:高糖组肾小球系膜细胞PPARα表达低于正常组(分别为0.21±0.14,0.97±0.25),差异有显著性意义(t=7.742,P<0.05);10,100,500μmol/L WY14643组肾小球系膜细胞PPARα表达高于高糖组(分别为0.52±0.06,0.92±0.22,0.94±0.34,0.21±0.14),差异有显著性意义(t=4.438,7.182,7.213,P<0.05)。②转化生长因子β1表达和血管紧张素ⅡmRNA表达:高糖组肾小球系膜细胞转化生长因子β1、血管紧张素ⅡmRNA表达高于正常组(分别为25.76±0.24,16.43±0.38;0.79±0.23,0.46±0.13),差异有显著性意义(t=4.029,3.563,P<0.05);10,100,500μmol/LWY14643组肾小球系膜细胞转化生长因子β1、血管紧张素ⅡmRNA表达低于高糖组(分别为20.18±0.15,18.59±0.37,16.46±0.31,25.76±0.24;0.43±0.16,0.21±0.09,0.19±0.05,0.79±0.23),差异有显著性意义(P<0.05)。结论:转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ是糖尿病肾病发病的重要致病因子;PPARα激动剂减少转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ的表达可能与其增加PPARα的表达有关。     

敲低lncRNA DILC对胶质瘤细胞体外生物学特性的影响

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)对胶质瘤细胞体外生物学特性的影响。方法胶质瘤细胞系LN382、U87MG分别分组为NC组和敲低组,其中NC组以negative siRNA转染,敲低组以DILC siRNA转染。转染前和转染后48 h,PCR检测IL-6、JAK2、STAT3表达水平,ELISA法检测离心细胞上清液中IL-6水平,Western Blot法检测p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3蛋白质表达水平。细胞转染后48 h,Transwell小室侵袭实验观察细胞的侵袭能力,划痕实验观察细胞的转移能力状况。结果细胞转染后48 h,与LN382、U87MG胶质瘤细胞的NC组比较,其相应敲低组的穿膜细胞数增加,细胞迁移距离亦增加(P<0.05)。与LN382、U87MG胶质瘤细胞的NC组比较,其相应敲低组的IL-6、JAK2、STAT3的mRNA相对表达量升高,细胞上清液中IL-6水平升高,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3蛋白质表达水平亦相应升高(P<0.05)。结论敲低lncRNA DILC可促进胶质瘤细胞的侵袭转移,而激活IL-6/JAK2/STAT3信号通路可能为其作用机制。     

EGFR 19-Del上调Fn14及JAK/STAT的表达促进非小细胞肺癌的发生发展

目的:本研究检测Fn14、p-JAK1、p-STAT1在EGFR 19-Del的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系中的表达,并探讨EG F R 1 9-Del对Fn 1 4及J A K 1/STAT 1表达的调控作用,以期为EGFR 19-Del之NSCLC的发展机制研究奠定基础。方法:采用EGFR TKI(吉非替尼)处理HCC827细胞系(EGFR 19-Del)、H1975(L858R)及H292细胞系(正常肺上皮细胞),Western blot法检测Fn14、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。结果:相比于H1975和H292细胞系,Fn14、p-JAK1及p-STAT1基因和蛋白在HCC827细胞系中有较高的表达水平。对比未经吉非替尼处理的HCC827细胞系,经抑制剂处理后的HCC827细胞系中Fn14、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达明显受到抑制,而在H292细胞系中无此现象。由此说明,EGFR 19-Del对Fn14及JAK/STAT信号分子的表达具有调控作用。结论:EGFR 19-Del可能通过上调Fn14及JAK/STAT信号分子的表达促进NSCLC的发生发展,而Fn14可能是EGFR 19-Del之NSCLC潜在的治疗靶点。     

雷帕霉素软膏对银屑病小鼠模型的治疗作用及相关机制研究

目的探讨雷帕霉素(RAP)软膏对寻常型银屑病(PSO)小鼠皮肤的影响及相关机制。方法45只BALB/c小鼠分为3组:空白对照组、模型组和实验组,每组15只。模型组和实验组利用5%咪喹莫特乳膏建立银屑病小鼠动物模型,空白对照组不建模。实验组建模后连续给药0.1%雷帕霉素软膏涂抹14 d,其余两组给予生理盐水湿润皮肤,每日3次/d,连续涂抹14 d。三组小鼠于15 d检测血清细胞因子干扰素γ(IFN-γ),白介素4(IL-4)的表达;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导与转录因子1(STAT1)和信号转导与转录因子3(STAT3)mRNA表达;Western blotting检测磷酸化p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组血清细胞因子IFN-γ含量上调(P<0.05),用药后实验组血清中细胞因子IFN-γ水平明显低于模型组(P<0.05),IL-4水平三组比较差异无统计学意义(P>0.05);q-PCR显示,与空白对照组比较,模型组皮损区JAK2、STAT1和STAT3 mRNA表达显著升高(P<0.05),用药后实验组JAK2、STAT1和STAT3 mRNA表达显著低于模型组(P<0.05);Western blotting显示,与空白对照组比较,模型组皮损区皮损区p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达显著升高(P<0.05),实验组p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达显著低于模型组(P<0.05)。结论雷帕霉素可通过抑制JAK/STAT信号通路降低银屑病小鼠炎性因子表达,从而对银屑病小鼠起保护作用。     

钩吻总碱通过JAK2/STAT3/Survivin通路调控人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用探讨

目的观察钩吻总碱对人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用,并探讨其对酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)/Survivin通路的调控作用。方法取人舌癌细胞株Tca8113,培养至对数期,分装至6孔板中,分为对照组、A组、B组和C组,每组设置5个复孔。A组、B组和C组分别加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度的钩吻总碱处理(20μl),对照组加入等量PBS缓冲液。以倒置显微镜观察72 h后各组细胞形态;以MTT法检测24 h、48 h、72 h后细胞增殖抑制率;以流式细胞仪检测72 h后细胞凋亡率;以RT-PCR检测72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量;以WB检测72 h后IL-6蛋白、JAK2、STAT3、Survivin蛋白表达并计算p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin。结果72 h后,倒置显微镜下观察结果显示对照组细胞紧密,轮廓清晰,贴壁生长状态良好;A组细胞有浮起、变圆,B组和C组可见不同程度细胞壁皱缩和细胞碎片,其中C组变化最为明显,B组次之,A组变化最轻;各组24 h、48 h、72 h后增殖抑制率比较差异均有统计学意义(P<0.05),各组增殖抑制率均随时间延长显著增长,且呈时间依赖性和剂量依赖性;各组72 h后细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.05),各组凋亡率均随剂量升高显著增高;各组72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin比较差异均有统计学意义(P<0.05),每两组间比较也可见差异具有统计学意义(P<0.05),其中对照组均最高,A组均次之,B组均稍低,C组均最低;各组IL-6蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论钩吻总碱能够呈剂量依赖性抑制人舌癌细胞株Tca8113增殖、促进凋亡,推测与直接调控JAK2/STAT3/Survivin通路,抑制JAK2、STAT3、Survivin蛋白磷酸化有关。     

胰岛素泵和多次胰岛素皮下注射治疗老年危重症高血糖的有效性和安全性比较

目的 比较持续皮下注射胰岛素(CSII,即胰岛素泵)和多次皮下注射胰岛素(MDI)强化治疗改善老年危重症高血糖的有效性和安全性.方法 选择本院老年危重病患者94例,入组时空腹血糖为(10.3±2.5)mmol/L;随机分为CSII组(46例)和MDI组(48例),两组均注射可溶性人胰岛素,连续治疗7 d,观察两组血糖控制情况、7 d内日平均胰岛素用量、低血糖发生率.第7日血清C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-6(IL-6)水平、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分以及28 d病死率.结果 与MDI组比较,CSII组血糖控制更好,血糖控制良好率[76.1%(35/46)比33.3%(16/48)3及血糖控制尚可率更高[21.7%(10/46)比14.6%(7/48)3,而控制差的更低[2.2%(1/46)比52.1%(25/48)];低血糖发生率更低(10.9%(5/46)比22.9%(11/48)],7 d内日平均胰岛素用量更少[(40.1±6.3)U/d比(46.2±7.1)U/d];血清TNF-a[(11.54±2.7)μg/L比(19.8±4.2)μg/L]、IL-6水平[(78.3±5.1)μg/L比(141.4±6.2)μg/L]、CRP水平[(53.1±3.3)mg/L比(72.1±4.0)mg/L3明显低于MDI组;APACHE Ⅱ评分明显低于MDI组[(6.0±1.4)分比(11.6±1.0)分];CSII组28 d病死率低于MDI组(4.3%(2/46)比16.7%(8/48)3;差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 胰岛素泵较多次皮下注射治疗可更好地控制危重症高血糖,减轻炎症反应及改善短期预后.     

枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的　探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法　将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组（5,10,50 μmol/L枸杞皂苷）及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系（HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2）和人鼻咽癌上皮细胞（NP69）中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体（pcDNA-Suv39H1）以及针对Suv39H1的小干扰RNA（Suv39H1 siRNA）,分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50 μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果　与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖（F=12.030,P=0.002 5）和侵袭（F=4.807,P=0.031 5）,增加细胞凋亡率（F=5.232,P=0.026 1）,抑制Suv39H1蛋白表达（F=14.64,P=0.001 3）;与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高（P<0.01）;转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义（P<0.01） ;与50 μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.01）。结论　枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。     

JAK2/STAT3信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜炎症反应中的作用研究

目的：探讨Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活子3（STAT3）信号通路在应激性溃疡（SU）的胃黏膜炎症反应过程中的作用。方法：选用雄性清洁级SD大鼠96只,随机分为4组,分别为：正常对照组（NC组）、应激性溃疡组（SU组）、抑制剂组（AG490组）、二甲基亚砜组（DMSO组）。建立水浸束缚SU大鼠模型。4组大鼠分别于实验开始后2h、4h、8h、16h各取6只,测定胃黏膜血流量（GMBF）,计算溃疡指数（UI）。观察胃黏膜组织学变化,测定TNF-α、IL-1β、IL-6以及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达量。结果：SU组GMBF明显低于NC组,而UI明显高于NC组（P〈0.01）;AG490组GMBF明显高于SU组,而UI明显低于SU组（P〈0.01）。通过造模前给予抑制剂AG490,胃黏膜病理学变化明显改善。SU组TNF-a、IL-1β、IL-6以及p-JAK2、p-STAT 3表达量明显高于NC组（P〈0.01）,而AG490组较SU组显著降低（P〈0.01）。结论：JAK2/STAT 3信号通路参与了SU大鼠胃黏膜炎症反应过程,使用JAK2特异性抑制剂AG490可以减轻SU大鼠胃黏膜炎症反应。