口腔鳞癌中抑癌基因的失活

目的：探讨同一口腔鳞标本中３种抑癌基因失活情况。方法：２７例口腔鳞癌标本行ＡＢＣ免疫组织化学染色,一抗分别为鼠抗人ｎｍ２３,Ｐ５３单克隆抗体及Ｐ１６多克隆抗体。以癌细胞着色３０％为判断高低表达煌界值。结果：ｐ１６基因失活率最高,为６６．７％;２种以上基因同时失活为５１．９％,其中ｐ１６和ｎｍ２３占６４．２％（９／１４）。结论：ｐ１６基因失活是口腔鳞癌中发生频率最高的分子事件;口腔鳞癌中抑癌基因的失活为非单一基因失活,其意义值得探讨;同时提示,研究口腔鳞癌其基因表达及意义时,应注意抑癌基因的活的复杂性。     

人乳头瘤病毒,疱疹病毒I型及人巨细胞病毒与口腔鳞癌关系的研究

目的：研究口腔鳞癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）、孢疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－Ｉ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的关系。方法：采用斑点杂交和ＰＣＢ技术检验３２例口腔鳞癌、１４例口腔白斑和１０例正常口腔粘膜中ＨＰＶ１６、ＨＳＶ－Ｉ及ＨＣＭＶＤＮＡ。结果：在正常口腔粘膜、白斑及口腔鳞癌中ＨＰＶ１６、ＨＳＶ－１及ＨＣＭＶＤＮＡ感染率分别为０％、３５．７％、５０．０％、４０．０％、５０．０％、４３．３％和０％、１４．３％、２８．１％,口腔鳞癌及白斑组织中ＨＰＶ１６－ＤＮＡ的检出率均高于正常口腔,且差别具有显著性（ｐ〈０．０５）;但ＨＳＶ－Ｉ和ＨＣＭＶＤＮＡ在口腔疾患中的检出率与正常比较无显著差别（ｐ〈０．０５）。结论：ＨＰＶ１６感染与口腔鳞癌的发生相关;ＨＳＶ－Ｉ和ＨＣＭＶ可能参予口腔鳞癌的发生及发展,并且与ＨＰＶ１６有协同致癌的作用     

口腔白斑和鳞癌中p53基因突变的免疫组化及PCR—SSCP分析

本实验应用免疫组化－链霉素抗生物素蛋白过氧化酶连接法（ＳＰ）和聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲＳＳＣＰ）对５例正常口腔粘膜，２２例白斑（轻、中、重度异常增生各为８、８、６例）和３０例鳞癌（有和无淋巴结转移各为１６、１４例）组织中ｐ５３突变进行检测。结果表明：轻、中、重度异常增生白斑和鳞癌ｐ５３蛋白表达率为１２．５％，２５．０％，３３．３％和５０．０％；ｐ５３基因突变率为１２．５％，３７．５％，５０．０％和７０．０％。正常粘膜无一例阳性。白斑和鳞癌ｐ５３变化有显著性差异。ｐ５３基因突变与蛋白表达间存在不一致性，且与鳞癌有否淋巴结转移无关。     

口腔上皮癌变过程中肿瘤抑制基因p53基因产物的表达分析

为了探讨ｐ５３在口腔粘膜上皮癌变过程中的作用，本研究用免疫组织化学方法观察了ｐ５３在口腔颊粘膜上皮的正常（５例）、乳头状瘤（５例）、白斑（５例）、鳞癌（２７例）以及癌旁上皮（１４例）中的表达情况，结果显示，ｐ５３在鳞癌中的表达率为５５．６％；此外发现转移、复发及分化差的鳞癌表达率更高（６６．７％）。在同一病变中分化差的肿瘤细胞阳性率明显高于分化好的细胞。在白斑和癌旁上皮中ｐ５３也有表达（３６．８％）。结果显示，ｐ５３的表达与肿瘤细胞的分化及恶性程度密切相关，在口腔颊粘膜上皮的癌变早期及晚期均有ｐ５３的过表达，此外在癌前病变中的ｐ５３表达将有助于判断其癌变发展的可能。     

口腔鳞状细胞癌Rb基因的检测

目的研究Ｒｂ基因异常与口腔鳞状细胞癌发生及临床病理指标的关系。方法应用地高辛高效引物标记Ｒｂ３．６ＫｂＤＮＡ探针，结合抗地高辛抗体碱性磷酸酶显色法，对口腔鳞癌病人中Ｒｂ基因改变进行了研究。结果在７／２８例口腔鳞癌中发现Ｒｂ基因结构异常，其中６例出现５．４、４．１及２．３Ｋｂ片段缺失，１例出现６．２Ｋｂ新片段；Ｒｂ缺失与临床病理指标无显著相关性。结论口腔鳞癌中存在Ｒｂ基因缺失、重排，可能与口腔鳞癌的发生有一定关系     

端粒酶hTR基因在口腔癌前病变及鳞癌中的表达

目的探讨端粒酶ｈＴＲ基因在口腔癌前病变及鳞癌中的表达。方法用原位杂交技术检测８２例标本,其中正常口腔粘膜７例,上皮单纯性增生７例,上皮异常增生３０例,原位癌、鳞癌３８例。结果正常口腔粘膜及上皮单纯性增生组织中ｈＴＲ表达较弱,阳性细胞主要位于基底层,检出率２８．５６％（４／１４）。癌前病变中随着异常增生程度的增加,ｈＴＲ表达逐渐增强,阳性细胞逐步由基底层向棘层波及,检出率６０％（１８／３０）。原位癌及鳞癌均有较强的ｈＴＲ表达,检出率为８１．５８％（３１／３８）。结论端粒酶的激活可能出现在口腔癌前病变的晚期阶段,在口腔鳞癌的形成过程中起了关键性作用。     

口腔鳞癌患者免疫功能测定及其临床意义

本文从分子学水平和细胞学水平，对３０例口腔鳞癌患者，及相应的正常对照者，做血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量及外周血Ｔ淋巴细胞亚群测定。血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量测定发现，口腔鳞癌患者ｃＡＭＰ明显低于正常对照者（Ｐ＜０．０１），而ｃｏＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ无明显差异（Ｐ＞０．０５），提示口腔鳞癌患者ｃＡＭＰ抑制肿瘤细胞生长的能力低下，与全身其他部位癌症基本一致。Ｔ淋巴细胞亚群测定发现，口腔鳞癌患者与正常人存在明显差异，主要表现为口腔鳞癌患者ＣＤ３↓（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８↑（Ｐ＜０．０１），ｃＤ４／ＣＤ８↓（ｐ＜０．０１），提示口腔鳞癌患者细胞免免疫功能紊乱，免疫平衡失调。     

口腔鳞癌nm23—H1基因存在状态和颈淋巴结转移的关系

目的：探讨口腔鳞癌中nm23-H1基因结构变化和表达水平及其和颈淋巴结转移的关系。方法：用PCR法扩增了30例入口腔鳞癌,7例正常口腔粘膜标本及人舌鳞癌细胞系TSCCa和人口腔转移癌细胞系GNM nm23-H1基因,并对PCR产物进行SSCP分析;用原位杂交法检测鳞癌组织及两组细胞株nm23-H1mRNA水平,对其和颈淋巴结转移的关系进行统计学分析,结果：除1例口腔鳞癌外,所有标本均无nm23-H1结构变化。9例有转移的口腔鳞癌组织中有7例nm23-H1mRNA表达阴性,而1例无转移患者只有5例表达阴性,且GNM nm23-H1阳性率低于TSCCa(41.2%对63．1％）,nm23-H1表达与癌转移呈显著负相关（P＜0．01）,nm23-H1表达和组织学分级无关。结论：nm23-H1 mRNA水平的变化不是由基因结构变化导致;nm23-H1基因产物对口腔鳞癌颈淋巴结转称有抑制作用。     

口腔鳞癌IV型胶原和层粘连蛋白的表达与颈淋巴结转移的关系

目的 探讨口腔鳞癌ＩＶ型胶原（ｃｏｌ ＩＶ）和层粘连蛋白（ＬＮ）的表达及其与临床病理参数的关系。方法 应用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了３０例口腔鳞癌组织和５例人正常口腔膜组ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达,并用病理图像分析软件定量分析了两者的表达程度;对ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达与临床病理参数的关系进行了统计学分析。结果 ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达部位相同,主要分布于口腔粘膜和鳞癌组织基底膜;正常粘膜ＣｏｌⅣ和ＬＮ表达完整连     

STK15基因在口腔疣状癌和鳞癌的表达研究

目的：研究丝氨酸／苏氨酸激酶15基因（Serine／Threonine kinase15,STK15）在口腔疣状癌和口腔鳞状细胞癌的表达,探讨其在疣状癌发生发展中的作用。方法：取20例口腔鳞状细胞癌和10例口腔疣状癌患者的肿瘤组织及其相应正常口腔黏膜组织标本,应用逆转录多聚酶链式反应（RT—PCR）方法检测上述标本STK15基因mRNA的相对含量。结果：口腔疣状癌组织STKl5基因mRNA的表达水平高于对应正常组织,其差异显著（t=2．333,P〈0．05）;口腔鳞癌组织STK15基因mRNA的表达水平高于对应正常组织,其差异显著（t=2．498,P〈0．05）;STK15基因mRNA在口腔疣状癌中的表达显著低于口腔鳞癌（t=2．199,P〈0．05）。结论：STK15基因可能在口腔疣状癌和口腔鳞癌的发生发展中起作用,STK15基因在疣状癌的发生发展过程中作用较在口腔鳞癌中小。     

多肿瘤抑制基因1在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中的变异

目的　检测多肿瘤抑制基因 1(multipletumorsuppressor 1,MTS1)基因在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中的表达和变异 (纯合性缺失和突变 )情况 ,以期发现MTS1在口腔黏膜恶变发生发展中的作用。方法　采用免疫组化SP法检测MTS1的表达情况 ;同时采用PCR、SSCP技术检测相同标本中MTS1基因exon1和exon2的纯合性缺失和突变情况。结果　口腔癌前病变中MTS1基因全部表达 ,无基因缺失和突变。鳞癌中MTS1的表达阳性率 6 0 % ;有 10例发生exon1和 (或 )exon2的纯合性缺失 ,4例基因突变 ,总变异率为 31.1% (14 / 4 5 ) ;伴有局部淋巴结转移的鳞癌的基因变异率为5 7.1% ,不伴有淋巴结转移的为 8.3% ,两者间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　MTS1基因在口腔癌前病变中无改变 ,不能作为检测口腔癌前病变的生物学指标 ;MTS1基因改变在口腔鳞癌的发生、发展中起一定作用     

p53 aberrations in oral submucous fibrosis and oral squamous cell carcinoma detected by immunocytochemistry and PCR-SSCP

Trivedy C, Warnakulasuriya KAAS, Tavassoli M, Steingrimsdottir H, Penhallow J, Maher R, Johnson NW: p53 aberrations in oral submucous fibrosis and oral squamous cell carcinoma detected by immunocytochemistry and PCR-SSCP. J Oral Pathol Med 1998; 27: 72–7. © Munksgaard, 1998.
An archival series of oral biopsies from Karachi, Pakistan, consisting of 21 cases of oral submucous fibrosis (OSF) and 27 cases of squamous cell carcinoma (SCC), of which 6 had arisen from OSF, were used to examine the aberrations in the structure and expression of the p53 tumour suppressor gene. The PCR-SSCP method was used for mutation analysis of exons 2–9, and (over)expression of p53 protein was detected by immunocytochemistry using monoclonal antibody DO 7. Positive immunostaining was observed in 15/20 (75%) of OSF specimens, 3/6 (50%) of SCC arising from OSF and 14/21 (67%) of SCC not arising from OSF. Mobility shifts in SSCP indicative of a mutation in p53 or loss of heterozygosity (deletion of a band) were seen in 13/21 cases of OSF and 15/27 cases of SCC. There was concordance between immunocytochemistry and SSCP results in a majority (33/48) of samples. Though the number of analysed SCC cases arising from OSF was limited, the results suggest that p53 mutation/protein stabilisation may play a part in the pathogenesis of OSF and its progression to SCC.     

Loss of heterozygosity and microsatellite instability on chromosome 2q in human oral squamous cell carcinoma

Allelic imbalance or loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite instability (MSI) have been used to identify regions on chromosomes that may contain putative tumor suppressor genes. To obtain a detailed understanding of genetic alterations in oral cancer, 10 highly polymorphic markers mapped on chromosome 2 were used to examine 25 cases of oral squamous cell carcinoma (SCC). With these, we analyzed chromosome 2q for LOH in 25 primary oral SCCs and constructed a deletion map for this arm of the chromosome. LOH was detected in 16 (64%) of the 25 informative samples at one or more of the loci examined. MSI was observed in 5 (20%) of the 25 cases. Among the loci examined, LOHs were restricted to D2S1328 and D2S206 on chromosomes 2q14-21 and 2q36, respectively, with the former locus showing a rate of 5 (20.8%) and the latter a rate of 6 (25%) of the 24 informative cases. These observations taken in conjunction with data from 40 former cases analyzed at our laboratory suggest that the high incidence of LOH at chromosome 2q is associated with carcinogenesis of oral SCC. The regions that comprise the D2S1328 and D2S206 loci may play an important role in the development of oral SCC, perhaps containing sites that harbor a putative tumor suppressor gene.     

周期素依赖性激酶4抑制因子基因启动子甲基化与口腔颊癌发生发展的关系

目的探讨p16基因启动子甲基化在口腔颊癌发生发展中的作用.方法对颊黏膜白斑10例、颊癌30例的新鲜标本采用MSP、Western blot杂交分析p16甲基化和p16蛋白表达情况.结果颊癌p16甲基化率高于颊部白斑（P＜0.05）;颊癌有颈淋巴结转移组p16甲基化率高于无转移组（P＜0.5）;颊癌p16蛋白失表达与pl6基因甲基化呈正相关（P＜0.01）.结论启动子甲基化是导致p16基因失活的主要方式,与颊癌的发生、转移有密切关系.     

口腔颌面部鳞癌组织中p16基因变异的初步研究

目的 检测口腔颌面部鳞癌中p16基因的缺失和突变，以了解p16基因在口腔颌面部恶性肿瘤发生发展过程中的作用。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）技术，检测33例原发性口腔颌面部鳞癌的石蜡标本，将p16基因的变异频率与口腔颌面部鳞癌的临床分期，组织学分级及淋巴结转移进行统计学分析。结果 p16基因的缺失率为21％，点突变率为6％，变异频率为27％。临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期每两期之间无显著性差异（P＞0．05）；而临床Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期之间有显著性差异（P＜0．05）。组织学分级和有，无淋巴结转移之间p16基因变异无显著性差异（P＞0．05）。结论 p16基因的缺失和突变是口腔颌面部鳞癌中常见的分子事件，它的失活在口腔颌面部鳞癌的发生发展中起着重要作用，说明其变异与肿瘤的临床分期密切相关，随着肿瘤临床进程的发展，其变异频率增高。研究未发现其变异与肿瘤组织学分级和淋巴结转移之间存在相关关系。     

吸烟和非吸烟口腔良恶性肿瘤组织P16蛋白的表达

目的 研究吸烟与口腔肿瘤组织中P16蛋白表达的关系，评价吸烟的危害性。方法 选取在我科住院的22例吸烟和32例非吸烟口腔良恶性肿瘤患者的手术切除标本，其中恶性肿瘤22例，良性肿瘤19例，正常组织13例。应用免疫组化技术S-P法结合高温高压组织抗原修复法，对P基因的蛋白表达进行检测，按组织病理类型进行分析。试验所得数据均由SAS软件进行统计检验。结果 吸烟组P16阳性表达率为54．55％，非吸烟组68．75％，两组统计学比较无显著性差异（P〉0．05）。不论吸烟与否，恶性肿瘤的P16阳性表达均低于良性肿瘤和正常组织，差异显著（P〈0．05）。结论 在本试验条件下，P16蛋白表达与吸烟无明显关系，P16蛋白表达缺失与口腔恶性肿瘤的发生有一定关系。     

口腔鳞癌染色体3p14-24区域不同位点杂合缺失的分析

目的　探讨 3号染色体短臂 14 2 4区域等位基因杂合缺失与口腔鳞癌临床相关因素之间的关系 ,以及抑癌基因在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法　采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法 ,检测 40例口腔鳞癌及正常组织中 3p14 2 4等位基因的杂合性缺失。结果　 40例口腔鳞癌组织中 3p2 4位点EAβMD有 2 4例为信息个体 ,12例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 5 0 %,EAβH有 15例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 6 2 5 %;3p2 1位点杂合缺失率为 0 0 7%;3p14位点杂合性缺失率为 0 13%。 3p2 4杂合缺失与口腔鳞癌临床分期关系明显 ,Ⅲ -Ⅳ期晚期鳞癌的杂合缺失率高于Ⅰ -Ⅱ期早期鳞癌 ,两组间有差异 (P <0 0 5 ) ;口腔鳞癌高分化组的杂合缺失率明显低于中低分化组 ,其差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;淋巴结转移阴性与阳性组的杂合缺失率有显著性意义 (P <0 0 1)。结论　 3p2 4杂合缺失在口腔鳞癌中普遍存在 ,从而说明 3p2 4位点处存在着某些与口腔鳞癌发生发展有关的抑癌基因 ,我们认为有可能成为检测口腔鳞癌中一项独立的预后指标     

涎腺腺样囊性癌p16基因失活机制的研究

目的　研究p16基因在涎腺腺样囊性癌中的失活机制。方法　收集山东大学齐鲁医院及口腔医院口腔 颌面外科涎腺腺样囊性癌新鲜标本53例,应用PCR、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)及甲基化特 异性PCR(MSP)技术检测涎腺腺样囊性癌中p16基因的纯合性缺失、突变及甲基化。结果　53个病例中16例 (30·2%)纯合性缺失,4例(7·5%)突变,26例(49·1%)高甲基化。结论　p16基因在涎腺腺样囊性癌中的主要失活 机制是启动子高甲基化和纯合性缺失,而基因突变比较少见。     

Frequent promoter hypermethylation of RASSF1A and p16INK4a and infrequent allelic loss other than 9p21 in betel-associated oral carcinoma in a Vietnamese non-smoking/non-drinking female population

BACKGROUND: Betel-chewing, a risk factor for oral carcinoma, is a common habit of elderly Vietnamese females, but concomitant habits of tobacco and alcohol are uncommon. METHODS: In the present study, 36 paraffin-embedded betel-associated oral carcinoma samples including 27 squamous cell carcinoma (SCC) and nine verrucous carcinomas (VC) were analyzed for the hypermethylation of tumor suppressor genes (TSGs) and loss of heterozygosity (LOH) of important TSG loci. Methylation-specific polymerase chain reaction (MSP) was used to identify promoter hypermethylation of p16INK4a and RASSF1A. For LOH analysis, 39 microsatellite markers at 12 chromosomal arms were examined by p olymerase chain reaction (PCR)-based microsatellite assay. RESULTS: Hypermethylation of p16IKN4a was detected in 63% of SCC and 67% of VC. In addition, LOH at 9p21 (locus for p16INK4a) was 58% for SCC and 22% for VC, and hypermethylation of RASSF1A was 93% for SCC and 100% for VC. LOH at 3p21.3-3p22.1 (where RASSF1A is located) was detected in only 12% of SCC and 0% of VC. LOH of other chromosomal arms were infrequent. Conclusion: As LOH for chromosomes other than 9p was uncommon, epigenetic silencing of RASSF1A and p16INK4a gene expression by promoter hypermethylation may play a critical role in betel-associated oral carcinogenesis.