口腔颌面部肉瘤中Survivin表达及其与细胞凋亡关系的研究

目的:探讨口腔颌面部肉瘤(oromaxillofacial sarcoma,OMFS)中Survivin蛋白表达对肿瘤细胞凋亡的影响。方法:应用免疫组织化学技术和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测37例OMFS组织、14例口腔良性间叶组织肿瘤中Survivin蛋白的表达及细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:37例OMFS中30例有Survivin蛋白阳性表达,阳性率为81.08%;在口腔良性间叶组织肿瘤中未见其表达,2组间差异有显著性(P<0.05)。OMFS组AI显著低于良性肿瘤组AI;而且Survivin蛋白阳性表达组AI显著低于Survivin蛋白阴性组AI。结论:Survivin可能通过抑制细胞凋亡,促使肿瘤增殖。     

生存素反义寡核苷酸对血管瘤血管内皮细胞增殖及Caspase-3活性影响研究

目的 观察生存素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对人血管瘤血管内皮细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 实验于2007年12月至2010年2月完成.以靶向Survivin基因中与Caspase-3结合的部位为模板,设计合成ASODN并通过脂质体将其转染至人血管瘤血管内皮细胞中.MTT观察Surv...     

转染反义人BMP2逆转录病毒表达载体对骨肉瘤细胞生长的影响

目的：进一步从分子水平上明确BMP2在骨肉瘤中的作用机制,并为骨肉瘤的基因治疗提供理论依据。方法：用脂质体方法将构建的BMP2反义逆转录病毒表达载体转入有BMP表达的人骨肉瘤细胞OS－9901,经G418筛选获得阳性克隆。免疫组化方法检测肿瘤细胞中BMP和PCNA的表达,并进行流式细胞仪和电镜观察。结果：转染反义表达载体后肿瘤细胞的BMP蛋白的表达明显下降,并且肿瘤细胞的PCNA表达降低,G1期细胞比例增加,溶酶体增加,染色体有断裂。结论：BMP2反义逆转录病毒表达载体降低骨肉瘤细胞中BMP的表达并引起肿瘤细胞增殖活性的降低。     

成骨细胞在机械力刺激下细胞骨架及细胞形态改变的体外研究

目的:探讨大鼠颅骨成骨细胞(OB)对机械力刺激的反应及细胞骨架F-actin的变化。方法:体外分离培养大鼠颅骨OB细胞;应用四点弯曲加力系统,对第3代细胞施加2000με的机械牵张力,加力时间分别为0h、2h、6h、12h,应用特异性荧光染料分别标记微丝蛋白F-actin和细胞核;在激光共聚焦显微镜下观察并进行形态计量学测量。应用TUNEL法进行原位凋亡检测。结果:在机械张力刺激下,OB荧光强度减弱,F-actin纤维束变得稀疏而排列紊乱;胞核轮廓模糊,并可观察到凋亡小体。定量分析表明,OB的荧光总强度、绿色荧光强度(F-actin)和红色荧光强度(胞核)均显著下降(9<0.05或P<0.01)。TUNEL检测也表明,随着加力时间延长,凋亡细胞数明显增加,但明显少于F-actin发生改变的细胞数。结论:机械牵张刺激可引起OB细胞骨架F-actin解聚和重排,并诱发部分细胞发生凋亡。     

Survivin在舌鳞癌中的表达及意义

目的：检测舌鳞癌组织中凋亡抑制蛋白Survivin的表达,探讨Survivin在舌鳞癌中的临床意义.方法：应用免疫组织化学方法检测10例正常舌黏膜、13例高分化舌鳞癌、20例中分化舌鳞癌和12例低分化舌鳞癌标本中Survivin的表达情况.采用SPSS13统计软件包进行非参数Kruskal-Wallis检验及Mann-Whitney U检验.结果：舌鳞癌标本中Survivin的阳性表达率为68.9%,显著高于正常对照组（P＜0.01）,Survivin蛋白表达与舌鳞癌组织学分级,TNM分期相关（P＜0.05）,与淋巴结转移密切相关（P＜0.01）.结论：Survivin在不同分化阶段的舌鳞癌中明显增加,与舌鳞癌发生、临床进展及预后密切相关,有望成为舌鳞癌治疗的新靶点.     

成纤维细胞样细胞转化为成骨细胞的实验研究

目的 探讨牵引成骨过程成纤维细胞样细胞在局部环境因素作用下是否可以转化为成骨细胞。方法 体外培养幼兔肺组织、关节周围结缔组织以及皮肤来源的成纤维细胞样细胞。向来源部位不同培养的成纤维细胞样细胞中加入骨形成蛋白2(BMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、BMP-2和TGF-β1混合液、血小板裂解液，通过组织化学和细胞免疫学方法观察和鉴定细胞。通过膜张力观察成纤维细胞样细胞在张力的作用下细胞的变化。结果 来源于关节周围的成纤维细胞样细胞在BMP-2或BMP-2与TGF-β1协同作用下可以转化为成骨细胞。其他部位来源的成纤维细胞样细胞在各种细胞因子和机械张力的作用下未观察到细胞的转化。结论 牵引成骨过程中成骨细胞是多向来源的。     

Sodium butyrate stimulates mineralized nodule formation and osteoprotegerin expression by human osteoblasts.

OBJECTIVE: Butyric acid (sodium butyrate; BA) is a major metabolic by-product of main periodontopathic bacteria present in subgingival plaque. In the present study, we examined the effects of BA on cell proliferation, alkaline phosphatase (ALPase) activity, mineralized nodule formation, extracellular matrix protein expression, macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), and osteoprotegerin (OPG) in normal human osteoblasts. METHODS: The cells were cultured with 0, 10(-8), 10(-6) or 10(-4)M BA for up to 12 days. Mineralized nodule formation was detected by alizarin red staining, and the calcium content in mineralized nodules was determined using a calcium assay kit. The gene and protein expression levels for type I collagen, bone sialoprotein (BSP), osteopontin (OPN), M-CSF, and OPG were examined using real-time PCR and ELISA, respectively. RESULTS: Mineralized nodule formation and the calcium content of mineralized nodules were increased by BA in a dose-dependent manner. Cell proliferation and ALPase activity were not affected by the addition of BA. Following the addition of 10(-4)M BA, the expression levels of BSP, OPN, and OPG increased, whereas the expression levels of type I collagen and M-CSF were not markedly affected. CONCLUSION: These results suggest that BA stimulates bone formation by increasing the production of BSP and OPN, whereas it suppresses osteoclast differentiation by increasing the production of OPG by human osteoblasts.     

口腔鳞癌发生过程中Survivin促血管生成作用的研究

目的探讨口腔鳞癌发生过程中Survivin促进血管生成的作用。方法选取北京口腔医院病理科存档石蜡标本45例,其中口腔白斑伴上皮轻-中度异常增生16例,口腔白斑伴上皮重度异常增生12例,口腔高-中分化鳞状细胞癌17例,另取正常口腔粘膜组织10例作对照。采用免疫组化SP法对各组织病损中Survivin和Von Willebrand Factor的表达情况进行检测。结果免疫组化结果显示,从正常粘膜→白斑伴上皮轻-中度异常增生→白斑伴上皮重度异常增生→口腔鳞癌,Survivin的表达量呈增加趋势;微血管密度则由正常对照组的28．49±11．87条／mm^2升高到口腔鳞癌组的91．98±40．20条／mm^2,各组之间有显著性差异。结论Survivin的过度表达是口腔鳞癌发生过程中的早期事件。随着Survivin表达量的增加,微血管密度明显升高。Survivin的过表达可能抑制了血管内皮细胞的凋亡,从而促进血管的生成。     

Cytotoxic and inflammatory effects of alendronate and zolendronate on human osteoblasts,gingival fibroblasts and osteosarcoma cells

Objective

The aim of this paper was to assess the effects of zoledronate (ZOL) and alendronate (FOS) on apoptotic behavior and gene expression of pro- and inflammatory cytokines of three cell types (human osteoblasts, human gingival fibroblasts and human osteogenic sarcoma cell lines) during a period of 4 weeks.

Survivin在口腔鳞癌中的定量分析及平阳霉素对其表达的影响

目的探讨Survivin在口腔鳞状细胞癌组织中的定量表达及平阳霉素化疗对该基因表达的影响。方法收集口腔鳞状细胞癌石蜡包埋组织44例,分化疗组22例,未化疗组22例,正常口腔黏膜组织8例3组。应用流式细胞术定量分析技术和单克隆抗体免疫荧光间接法标记法,以荧光指数(FI)代表Survivin在口腔鳞细胞癌中的定量表达。对3组FI值行t检验。结果Survivin在正常黏膜组FI值为1.0±0.05,平阳霉素化疗组FI值为1.2±0.14,未化疗FI值为1.4±0.06。各组之间FI值均有显著性差异(P<0.01)。结论Survivin在口腔鳞状细胞癌组织中呈高表达,平阳霉素化疗使其含量下降。     

BMP2 mRNA 在颌骨骨肉瘤及软骨肉瘤中的扩增及其对肿瘤增殖活性的影响

目的　研究BMP2mRNA在颌骨骨肉瘤及软骨肉瘤中的扩增及其对肿瘤预后和增殖活性的影响。方法　应用BMP2的cDNA探针 ,原位杂交检测mRNA的扩增。结果　 32例标本中有 2 1例表达BMP2mRNA ,有BMP2mRNA表达的病例更容易发生淋巴结转移 ,且有较高增殖活性。结论　BMP2可能在骨肿瘤的发生和发展过程中起一定作用 ,可以作为估计骨肉瘤预后的参考指标     

人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的生物学特性研究

目的:检测人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的细胞生物学特征。方法:通过生长曲线计算倍增时间、测定集落形成率、分析细胞周期等探讨细胞生长增殖特性;分析染色体核型;免疫组化方法检测CKpan、Vim、BMP-2、COⅠ、OC、BSP、OPN的表达;细胞化学染色试剂盒检测ALP的表达;皮下接种免疫缺陷小鼠,检测HMOS-99细胞的成瘤性。结果:HMOS-99细胞倍增时间为42.98h,平板集落形成率为58.5%;细胞周期测定S期细胞占28.44%,并表现为异倍体细胞;核型分析显示细胞呈亚三倍体核型;CKpan(-)、Vim( )、BMP-2( )、COⅠ( )、OC( )、BSP( )、OPN( )、ALP( );免疫缺陷小鼠皮下接种未见肿瘤形成。结论:人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的生物学特性符合骨肉瘤细胞,接种免疫缺陷小鼠无肿瘤生成。     

rhVEGF对大鼠成骨细胞增殖及功能的影响

目的:研究rhVEGF对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:采用细胞培养技术,应用光镜、MTT法及PNPP偶氮法,分别从细胞形态、细胞增殖及分化等特性,分析不同浓度的rhVEGF对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。结果:rhVEGF能促进成骨细胞的增殖和分化,其中,在加入3.125ng/ml浓度的rhVEGF并于第3天时,成骨细胞增殖最显著;而12.5ng/ml组对碱性磷酸酶活性的影响最明显。结论:一定剂量的rhVEGF可明显促进成骨细胞的增殖和分化。     

Survivin、Ki67在牙源性囊肿上皮组织中的表达及意义

目的：探讨根端囊肿、含牙囊肿及角化囊肿衬里上皮中Survivin、Ki67的表达及意义。方法：采用免疫组化法检测12例根端囊肿、20例含牙囊肿、22例角化囊肿中Survivin、Ki67表达水平,并加以分析。结果：Survivin在根瑞囊肿中无表达,在含牙囊肿和角化囊肿中表达的阳性率分别为10％、63．6％,角化囊肿OD值显著高于根端囊肿和含牙囊肿（P〈0．05）;Ki67在3种组织中均有表达,角化囊肿中Ki67-ＬＩ显著高于根端囊肿和含牙囊肿（Ｐ〈0．05）;角化囊肿中Survivin阳性表达的Ki67-LI显著高于表达阴性者（Ｐ〈0．05）,且Survivin表达与Ki67表达呈正相关（r=0．452,P〈0．05）。结论：survivin、Ki67在牙源性囊肿中的表达差异显示了它们具有不同的增殖和分化过程。     

人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的建立及形态学研究

目的:建立1株人下颌骨骨肉瘤细胞系,并观察其形态学特征。方法:骨肉瘤标本来自我院下颌骨骨肉瘤患者,裸小鼠皮下移植瘤传代11代,移植瘤组织块原代培养及连续传代培养。通过相差显微镜、微分干涉显微镜、HE染色、透射电镜、扫描电镜观察培养细胞的形态学特征。结果:HMOS-99细胞目前已传至95代,形态符合骨肉瘤细胞。结论:通过移植瘤方法建立了1株人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99,其形态学特征符合骨肉瘤细胞。     

口腔鳞癌中碱性成纤维细胞生长因子和凋亡抑制因子Survivin的关系

目的：检测口腔鳞癌组织中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和Survivin的表达，探讨二者在口腔鳞癌中的关系和临床意义。方法：收集口腔鳞癌标本42例(其中有淋巴结转移者14例)和10例正常口腔粘膜组织，用免疫组织化学染色法检测bFGF和Survivin的表达情况。结果：口腔鳞癌中bFGF表达阳性率为69．05％(29／42)，Survivin的表达阳性率为80．95％(34／42)。二者共同表达率为61．90％(26／42)，其表达阳性程度呈显著正相关。结论：bFGF和Survivin在口腔鳞癌的发展中可能起协同作用。     

富血小板血浆对人牙周组织细胞矿化作用的影响

目的观察富血小板血浆(PRP)对人牙龈成纤维细胞(GF)、牙周膜细胞(PDLC)和牙槽骨成骨细胞(AOB)的矿化诱导作用。方法抽取健康成人的新鲜全血,经过两次离心得到富血小板血浆。培养GF、PDLC和AOB,取第4代细胞用于实验,3种细胞均以4×107个/L接种于6孔培养板内,标准条件下培养96h后换不同的培养液,实验组换用含有矿化液(10nmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和新鲜制备的0·2mmol/L抗坏血酸)和50ml/LPRP的DMEM(100ml/LFBS)培养液,对照组换用含有矿化液的DMEM培养液,空白组换用普通DMEM培养液。隔天换液,培养至第30天进行vonKossa染色,显微镜下观察并记录结果,用图像分析软件半定量分析染色阳性面积比及细胞衰减的面积比。结果对于PDLC和AOB,实验组及对照组的矿化量多于空白组(P<0·05),同时实验组的矿化量高于对照组(P<0·05);对于GF,3个组之间的矿化量差异无统计学意义(P>0·05)。AOB实验组在形成基质矿化时的衰减比对照组和空白组少(P<0·05)。结论PRP可促进PDLC和AOB在体外形成矿化小结,并能减少HAOB在矿化形成时的衰减,提示PRP可提高牙周骨组织的矿化和再生。     

Survivin及P53在唾液腺腺样囊性癌中表达的研究

目的：研究Survivin及P53在唾液腺腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）中的表达,探讨其与临床病理因素的关系及两者的相关性。方法：采用SP免疫组织化学染色方法检测36例SACC及10例癌旁正常涎腺组织标本中Survivin及P53的表达,采用SPSS13.0软件行统计分析。结果：SACC组织中Survivin及P53阳性表达率分别为66.67%、69.44%。两者的表达与临床分期密切相关;P53还与淋巴转移、肿瘤病理类型相关,癌旁正常腮腺组织未见两者表达。结论：Survivin及P53可能与SACC的发生、发展有关。