射干中异黄酮成分拟雌激素效应机制的分子模拟研究

目的:采用分子对接方法探索射干异黄酮化合物与人雌激素受体的分子作用机理。方法:运用计算机辅助药物设计方法中的分子对接技术,基于靶点雌激素受体alpha和beta结构对射干中所含8种异黄酮化合物进行筛选研究。结果:分子对接研究预测发现理论上射干中8种异黄酮成分能与雌激素受体alpha和beta有亲和力。结论:分子对接技术应用于射干拟雌激素效应机制的研究是可行的,其对接位点信息有助于理解中药射干的拟雌激素作用机制。     

中成药抑制巨噬细胞炎性细胞因子释放的体外研究

[目的]病毒感染后免疫系统过度激化导致的"细胞因子风暴"是病毒性肺炎由轻症向重症转换的重要原因,同时也是重症患者产生并发症的重要原因。该实验旨在寻求能有效抑制细胞因子的中成药,为病毒性肺炎治疗提供科学依据。[方法]采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞建立体外炎症损伤模型,用Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)生成量,酶联免疫法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-10分泌量,对收集的已上市中成药开展抑制炎症因子释放的研究。[结果]发现牛黄清心丸(局方)、藿香正气软胶囊、牛黄解毒丸、穿心莲内酯滴丸等中成药对LPS诱导RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及细胞因子分泌均有显著抑制作用,提示这4种中成药具有抑制炎症因子活性。[结论]中成药牛黄清心丸(局方)、藿香正气软胶囊、牛黄解毒丸、穿心莲内酯滴丸具有抑制"细胞因子风暴"作用,在防治重症肺炎中具有潜在的临床应用价值。     

射干中异黄酮成分清除自由基的作用

目的　研究射干 Belamcanda chinensis中分离的 4种异黄酮类成分清除 O2 ÷ ,· OH和 H2 O2 自由基的能力。方法　采用生物化学发光法测定。结果　射干根茎中分离得到的异黄酮成分野鸢尾苷元 (irgenin, ) ,鸢尾苷元 (tectorigenin, ) ,鸢尾苷 (tectoridin ) ,5 ,6 ,7,4′-四羟基 - 8-甲氧基异黄酮 (5 ,6 ,7,4′- tetrahydroxy- 8- men-thoxyisoflavone, )均具有清除自由基的作用 ,其中鸢尾苷元对 O2 ÷ ,· OH和 H2 O2 氧自由基清除作用的能力最强。结论　射干根茎中的 4种异黄酮类成分具有清除自由基的作用。     

射干提取物抗豚鼠咳嗽模型气道炎症机制研究

目的:研究射干提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)感染豚鼠咳嗽模型肺组织中COX-2和5-LOX蛋白表达水平及相关通路代谢物的影响,探讨其对气道炎症的相关抗炎机制。方法:将40只豚鼠随机分为4组,每组10只:空白组、模型组、射干组和阳性组。采用烟熏配合RSV滴鼻,建立RSV感染豚鼠咳嗽模型;给予射干提取物和肺宁片进行干预治疗,采用Western-blot法检测模型动物给药治疗后肺组织中COX-2和5-LOX蛋白表达水平;采用HPLC-MS-MS法,检测花生四烯酸COX通路中的代谢产物TXB2、PGD2、PGE2,CYP通路中的代谢产物8,9-DHET、11,12-DHET、14,15-DHET及LOX通路中的代谢产物5HETE、15HETE的变化,进而探讨射干抗炎作用机制。结果:与正常对照组比较,模型组COX-2、5-LOX蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,射干组COX-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),而5-LOX蛋白表达无显著差异(P0.05)。花生四烯酸代谢产物含量测定结果表明:在COX代谢途径研究中,模型组肺组织中PGD2、TXB2、11HETE含量与空白组相比显著升高(P0.05),给予射干提取物治疗后各代谢产物含量均下降(P0.05)。在LOX代谢途径研究中,模型组肺组织中5HETE和15HETE含量与空白组相比显著升高(P0.05),给予射干提取物治疗后各代谢产物含量有降低趋势,但是没有统计学意义。在CYP450途径中,模型组肺组织中16HETE含量与空白组相比显著升高(P0.05),给予射干提取物治疗后11,12-DHET、14,15-DHET含量显著降低(P0.05),16HETE含量有降低趋势,但是没有统计学意义(P0.05)。结论:射干主要通过干预花生四烯酸COX-2、CYP450信号通路达到对豚鼠咳嗽模型气道炎症的抗炎、止咳作用。     

射干中异黄酮成分对花生四烯酸代谢酶的分子对接研究

目的:利用分子对接的技术对射干抗炎可能的作用靶点进行预测。方法:利用PDB数据库获得与花生四烯酸代谢途径相关蛋白结构作为受体位点,对已报道的分子结构明确的50个射干异黄酮类化合物进行分子对接研究,根据评分结果模拟射干药材抗炎作用机制。结果:利用相关数据库及分子对接软件,分别模拟了射干药材所含50个黄酮类化合物的分子量、氢键给体、氢键受体及脂水分配系数,结果:射干黄酮类化合物符合"Lipinski"类药性规则。射干黄酮成分与花生四烯酸代谢通路七个抗炎靶点的打分值依次为:COX-2 5-LOX COX-1 CYP450 (5a5i) PLA2LTA4H CYP450 (2vn0),50个化合物的结合常数均大于对照分子。结论:射干黄酮类成分干预花生四烯酸炎症通路达到抗炎作用途径可能与COX和5-LOX靶点相关,根据对接位点信息可以预测该类化合物抗炎活性的作用机制。     

楤木单体的结构改造及抗炎活性研究

目的对楤木Aralia elata中的单体成分金盏花苷E进行结构改造,并对其结构改造后的类似物进行体外抗炎活性研究。方法以天然易得的齐墩果酸为起始原料,经苷元28位羧基保护、3位糖苷化、28位羧基脱保护、28位羧基酰胺化、胺基侧链酰胺化、糖基苯甲酰基脱保护、甲叉基脱保护共7步反应制得目标化合物,利用巨噬细胞RAW264.7模型评价化合物的抗炎活性。结果设计并合成了10个金盏花苷E的结构类似物G1~G5和H1~H5,均经谱学技术确证结构。生物活性实验结果表明,10个化合物对RAW264.7细胞呈现不同程度的抗炎活性,其中化合物G1~G4、H1~H3的抗炎活性优于先导物。结论化合物G1~G5和H1~H5均为未见文献报道的新化合物,具有潜在的抗炎活性,值得深入研究。     

喉咽清口服液抗炎活性成分的筛选

目的 筛选喉咽清口服液(土牛膝、马兰草、天名精、车前草)中的抗炎活性成分.方法 ODS-AQ反相柱分离喉咽清浸膏后,分别用水、10％甲醇、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、90％甲醇、甲醇、异丙醇进行洗脱.构建LPS(1μg/mL)诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型,以NO释放量为指标来评价浸膏及其洗脱组分的抗炎...     

延龄草总皂苷提取纯化工艺及其抗炎活性研究

目的 优选延龄草总皂苷提取纯化工艺,并对其纯化前后的抗炎活性进行对比。方法 以延龄草总皂苷提取率为考察指标,采用正交试验优化提取工艺;应用大孔吸附树脂技术,通过静、动态吸附和解吸附实验,确定最佳纯化工艺;为了证实工艺的合理性,对纯化后的总皂苷抗炎活性进行验证。结果 最佳提取工艺为乙醇体积分数75%,料液比1∶10,加热回流提取2次,每次1.5 h。纯化工艺为HPD400大孔树脂,以质量浓度为0.1 g·mL^–1的药液上样,上样量为折合生药（g）∶树脂（mL）=1∶2,以1 BV·h^–1流速上样,然后依次以水2 BV、20%乙醇水3 BV洗脱除杂,收集70%乙醇水洗脱液（5 BV）,经浓缩、干燥即得延龄草总皂苷收率为7.42%,总皂苷质量分数为34.29%。该总皂苷在质量浓度为5.00、1.00 μg·mL^–1时对脂多糖诱导RAW264.7细胞释放一氧化氮有明显的抑制作用,其半数抑制浓度（IC₅₀）值为3.79 μg·mL^–1,而其醇提物的IC₅₀值为20.68 μg·mL^–1,说明精制过程实现了药效成分的富集。结论 该提取纯化工艺稳定、可行,所得到的延龄草总皂苷与其醇提物相比具有更好的抗炎活性。     

射干抗炎止咳有效成分的分离及抗氧化活性研究

目的:在前期研究基础上,对射干抗炎有效成分进行提取、分离和结构鉴定,探讨目标化合物体外抗氧化作用。方法:采用乙醇回流提取射干药材,提取液浓缩后经乙酸乙酯提取,硅胶柱经石油醚—乙酸乙酯—甲醇不同比例洗脱,对得到的结晶化合物进行结构鉴别。以Vc为阳性对照,通过清除DPPH自由基抗氧化实验研究,探讨目标成分体外抗氧化活性。结果:分离得到的4个目标化合物经鉴定分别为白射干素、野鸢尾黄素、鸢尾黄素和野鸢尾苷。Vc及四个化合物清除DPPH自由基的IC50分别为22.8、190.1、76.6、28.5、10.2 g·L-1。结论:从射干中分离的四个化合物均有一定的清除DPPH自由基作用,其中野鸢尾苷抗氧化作用强于Vc。     

射干药材固体发酵前后6种异黄酮成分含量变化

目的：研究射干药材经枯草芽孢杆菌和黑曲霉发酵后其中6种异黄酮成分含量的变化.方法：利用HPLC检测经黑曲霉和枯草芽孢杆菌发酵20 d时射干药材中6种异黄酮成分的含量,并与发酵前比较,计算各成分的含量变化.结果：经枯草芽孢杆菌发酵能增加鸢尾黄素和次野鸢尾黄素的含量,经黑曲霉发酵能增加次野鸢尾黄素的含量.结论：利用枯草芽孢杆菌和黑曲霉发酵后,可使射干药材中苷元成分增加.     

射干麻黄配伍对射干异黄酮类成分在大鼠体内药代动力学的影响

目的探讨麻黄与射干配伍对大鼠体内射干异黄酮类成分药代动力学的影响。方法 12只SD大鼠随机分成2组后分别灌胃给予射干浸膏及射干麻黄配伍浸膏,采集不同时间点的血浆样品。建立UHPLC-MS/MS方法测定血浆中射干异黄酮类成分射干苷元、野鸢尾黄素及次野鸢尾黄素的量,并计算药代动力学参数。结果给予射干浸膏和射干麻黄浸膏的t1/2分别为射干苷元3.06 h、3.82 h,野鸢尾黄素3.62 h、3.78 h,次野鸢尾黄素3.64 h、3.93 h;Cmax分别为射干苷元132.66μg/L、156.34μg/L,野鸢尾黄素288.38μg/L、250.8μg/L,次野鸢尾黄素165.13μg/L、144.41μg/L;AUC(0→7t)分别为射干苷元1 149.88μg.h/L、1 410.65μg.h/L,野鸢尾黄素1 158.91μg.h/L、1 940.67μg.h/L,次野鸢尾黄素573.41μg.h/L、727.70μg.h/L;配伍前后的Tmax均为0.25 h。结论与射干组相比,配伍后射干苷元的t1/2显著延长;3个成分的AUC(0→7t)均显著增加;野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素的Cmax显著增加。     

射干的X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定

目的 建立射干药材XRD的鉴定分析新方法.方法 采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法.结果 通过对5个射干中药材进行实验、计算分析,获得了各样品的Fourier指纹图谱、特征标记峰值和相似度,并结合X射线衍射半定量相分析比较各个组分中α-石英、一水草酸钙、蔗糖的含量.结论 X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材射干的鉴定.     

射干异黄酮有效成分对肝药酶亚型作用研究

目的:运用"鸡尾酒"探针药物法,探讨射干总苷和射干总苷元对肝药酶亚型的作用。方法:以地西泮为内标物,采用"鸡尾酒"探针技术,检测咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲四种探针药物在大鼠血清代谢中的含量变化,通过HPLC方法得出血药浓度数据,绘制平均药-时曲线,计算药代动力学参数。结果:实验组咖啡因(CYP1A2)的AUC明显增大(P 0. 05),经t检验,结果具有统计学意义;实验组美托洛尔(CYP2D6)的半衰期明显减小(P 0. 05),经过t检验,结果具有统计学意义。结论:射干总苷和射干总苷元对CYP1A2酶具有抑制作用,对CYP2D6酶具有诱导作用。     

Anti-osteoporosis of different extracts from Belamcandae Rhizoma in estrogen deficiency rats

目的 观察射干不同提取物对卵巢切除致大鼠骨质疏松症的影响,筛选活性部位.方法 96只雌性SD大鼠随机分为8组,第1组切去腹腔中少量脂肪作为假手术组;第2至8组均切除双侧卵巢,第2组作为模型组,第3至8组作为给药组.6个给药组中,2组分别ig射干总黄酮100、20 mg/kg,2组ig射干乙醇提取物197、40 mg/kg,2组ig射干苷15.30、3.06 mg/kg,连给4个月,测定骨矿密度(BMD),骨矿含量(BMC),血清钙、磷的水平和AKP活性.结果 射干总黄酮、射干醇提取物能明显改善大鼠因雌激素缺乏引起的骨矿丢失,提高BMD和BMC,改善骨骼力学性能.结论 射干总黄酮提取物具有良好的抗骨质疏松症的效果.     

正交试验法优选射干提取工艺的研究

目的研究射干中总黄酮的提取工艺.方法采用正交试验法进行优选,紫外分光光度法测定总黄酮含量.结果提取时间、乙醇用量和乙醇浓度对提取有非常显著性和显著性影响.结论最佳提取工艺为药材8倍量80%乙醇,每次提取90 min.     

均匀设计结合效应面法优选川芎凝胶膏剂基质处方

目的优选川芎凝胶膏剂的基质处方。方法采用均匀设计方法,以初黏力、持黏力、剥离强度、膜残留为评价指标,结合效应面法,筛选川芎凝胶膏剂基质中NP-700、甘羟铝、甘油、酒石酸的用量及药物浓缩程度和加入体积。结果凝胶膏剂最优配比组成为：NP-700：甘羟铝：甘油：酒石酸：药液浓度：加入体积=1．1：0．08：7：0．04：4：5。结论均匀设计结合效应面法可用于凝胶膏剂的基质筛选,制得的贴膏载药量高,且具有良好的涂展性、保湿性,黏着力良好。     

射干与川射干及其混伪品ITS2序列鉴定研究

目的：应用ITS2序列对药材射干与川射干及其混伪品进行DNA条形码鉴定研究,保障临床用药安全。方法：提取射干、川射干及其混伪品和近缘种的DNA,经PCR扩增后测序,通过CodonCode Aligner V3.7.1对测序序列进行质量分析和拼接,基于MEGA5.1中的K2P模型计算射干与川射干及其混伪品的种内、种间遗传距离及构建系统聚类树。结果：射干的ITS2序列比对后长度为272 bp,种内最大K2P距离为0,平均GC含量为52.22%。川射干的ITS2序列比对后序列长度为268 bp,种内最大K2P距离为0.004,平均GC含量为67.87%。射干、川射干的种内最大K2P距离均小于与混伪品的种间最小K2P距离。基于ITS2序列构建NJ 聚类树,射干、川射干能各自聚为一支,呈现出较好的单系性,能很好地与其混伪品白及、山菅、黄花射干,以及近缘种德国鸢尾、北陵鸢尾明显区分开。结论：ITS2序列在药材射干与川射干及其混伪品和近缘种的鉴定方面具有很好的鉴定效果,对保障射干与川射干的用药安全具有重要意义。     

Differentiation of Belamcandae Rhizoma and Iridis Tectori Rhizoma by Thin-Layer Chromatography and High-Performance Liquid Chromatography

Objective: Belamcandae Rhizoma and Iridis Tectori Rhizoma are easily confused with each other. The main objective of this study is to distinguish them using chemical analysis. Materials and Methods: Thin?layer chromatography (TLC) and high?performance liquid chromatography (HPLC) fingerprint methods were established to compare the chemical profile, while HPLC quantitation was used to determine the contents of three isoflavones in thirty batches of Belamcandae Rhizoma and Iridis Tectori Rhizoma samples. Results: The two herbs could be distinguished by TLC using acetic acid-n hexane-ethyl acetate (1:90:80 v/v/v) as the mobile phase, according to the fluorescent band under 366 nm at Rf 0.2. In total, 12 compounds were identified in the 24?min HPLC fingerprint. The similarity coefficient between the two herbs was 0.54 ± 0.01. Mangiferin (1), tectoridin (2), iridin (3), irigenin (5), irisflorentin (6), and iristectorin A (9) were the main peaks in Belamcandae Rhizoma, while tectoridin (2) and tectorigenin (4) were the major peaks in Iridis Tectori Rhizoma. The contents of 2 in Iridis Tectori Rhizoma (2.50 ± 0.20 %) were 8.93 times higher than that of Belamcandae Rhizoma (0.28 ± 0.08 %), while the ones of 5 and 6 were slightly lower in Iridis Tectori Rhizoma. Conclusions: The study established fast and effective methods to distinguish Belamcandae Rhizoma from Iridis Tectori Rhizoma.     

不同种源射干遗传多样性与质量分析

目的:对射干遗传多样性和药材质量进行综合评价,为射干种质资源的合理利用和药材优良品种的选育提供理论依据。方法:采用ISSR分子标记法分析射干9个种源的遗传多样性,并采用HPLC法测定各种源次野鸢尾黄素的含量。结果:9个种源射干次野鸢尾黄素的质量分数为0.12%~0.36%;多态位点比率PPB为55.42%~90.36%;种源间遗传分化系数GST与基因流Nm分别为0.204 1,1.951 5。结论:射干次生代谢产物的含量与遗传多样性相关性不大,而是易受生长环境的影响,在品种选育过程中应对种质选取、栽培环境和栽培方法等进行综合考察。