固本防哮饮对幼龄小鼠哮喘缓解期模型IKK/IκB/NF-κB信号途径的调节作用

目的观察固本防哮饮对幼龄哮喘缓解期小鼠IKK/IκB/NF-κB信号途径的影响。方法采用幼龄BALB/c小鼠,鸡卵蛋白腹腔注射和雾化吸入致敏,并多次雾化吸入激发的方法建立幼龄哮喘缓解期小鼠模型。造模成功后给药4周,测小鼠气道阻力、HE染色观察小鼠肺组织病理变化、肺泡灌洗液细胞计数和细胞分类、Western blot法检测肺组织和外周血单个核细胞中IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达。结果固本防哮饮可以降低幼龄哮喘缓解期小鼠的气道阻力、降低肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数,降低BALF中中性粒细胞和单核细胞比例(P0.05,P0.01),改善支气管周围炎性细胞浸润,减轻气道重塑,并能增加肺组织和外周血单个核细胞中IκBα表达量(P0.01,P0.05),降低肺组织和外周血单个核细胞中IKKβ(P0.05,P0.01)、NF-κB p65(P0.01,P0.05)的高表达。结论固本防哮饮降低气道高反应性,减轻支气管炎性细胞浸润以及调节机体IKK/IκB/NF-κB信号通路的功能失调可能是其防止哮喘复发的作用机制。     

固本防哮饮对小鼠哮喘缓解期TLR4及TLR7的调节作用

目的:观察固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠模型Toll-样受体(TLR) 4,TLR7,核转录因子-κB p65(NF-κB p65),NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的调节作用,探讨固本防哮饮治疗哮喘缓解期的机制。方法:呼吸道合胞病毒(RSV)联合鸡卵蛋白(OVA)对3周龄BALB/c小鼠制备哮喘缓解期模型,将60只小鼠分为空白组、模型组、地塞米松组(0. 001 g·kg~(-1))以及固本防哮饮低、中、高剂量(6. 5,13,26 g·kg~(-1))组,分别进行干预,共给药28 d,每天1次。给药结束后处死小鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察哮喘小鼠肺组织病理形态学变化,并对肺部炎症情况进行评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织TLR4,TLR7,IκBα及肺组织细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦观察NF-κB p65在细胞核表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠肺组织有明显炎症细胞浸润及支气管狭窄(P 0. 01),同时小鼠肺组织细胞核内NF-κB p65分布显著增多(P 0. 01),表达明显增高(P 0. 05),TLR4,TLR7,IκBα蛋白表达明显降低(P 0. 05);与模型组比较,固本防哮饮各剂量组能显著缓解小鼠肺组织炎症浸润(P 0. 01),降低肺组织核蛋白NF-κB p65的表达(P 0. 01),核蛋白NF-κB p65入核情况减轻(P 0. 01),同时显著增加TLR4,TLR7,IκBα蛋白的表达(P 0. 01)。结论:固本防哮饮能够缓解气道炎症,并且可能是通过调节TLR4,TLR7,NF-κB p65,IκBα实现其治疗作用。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织内质网应激相关凋亡基因CRT和EDEM的影响

目的:探讨中药复方固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织内质网应激相关的凋亡基因CRT和EDEM的影响。方法:结合前期研究采用卵蛋白(OVA)致敏和OVA-呼吸道合胞病毒(RSV)联合诱导激发BALB/c雌性小鼠,建立哮喘缓解期动物模型,随机分为正常组,模型组,固本防哮饮低、中、高剂量组,孟鲁司特钠组及地塞米松组。Real-time PCR法检测肺组织中EDEM和CRT mRNA表达水平。结果:模型组小鼠肺组织中CRT表达显著高于正常组(P0.05);固本防哮饮高、中剂量组,孟鲁司特钠组及地塞米松组小鼠肺组织中CRT mRNA表达均显著低于模型组(P0.05),而EDEM在各组中表达无统计学意义(P0.05)。结论:固本防哮饮防治哮喘减轻慢性气道炎性反应的作用机制可能是通过抑制蛋白质未折叠反应相关的凋亡基因CRT表达所致。     

固本防哮饮对支气管哮喘缓解期小鼠免疫失衡的影响

目的探讨固本防哮饮治疗支气管哮喘缓解期的可能作用机制。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、孟鲁司特钠组、固本防哮饮预防组、固本防哮饮高剂量组及固本防哮饮等效剂量组,每组6只。除正常组外其余各组采用卵蛋白致敏、雾化联合呼吸道合胞病毒滴鼻诱导建立支气管哮喘缓解期小鼠模型。造模后正常组、模型组给予蒸馏水20 ml/kg灌胃,固本防哮饮等效剂量、高剂量组分别给予24、36 g/(kg·d)固本防哮饮灌胃,孟鲁司特钠组给予孟鲁司特钠片2. 6 mg/(kg·d)灌胃,每日1次,共28天。固本防哮饮预防组从致敏第1天给予24 g/(kg·d)的固本防哮饮每日灌胃1次,共83天。比较各组小鼠肺组织病理变化,采用实时定量PCR法检测肺组织中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)、GATA3 mRNA表达,Western Blotting法检测TSLP、TSLPR、GATA3蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验测定血清TSLP、TSLPR蛋白表达。结果病理学结果显示,正常组小鼠气道上皮平整,支气管管腔光滑,无明显炎性细胞浸润;模型组小鼠气道上皮不完整,肺泡壁增厚,同时气道黏膜层、黏膜下层以及血管周围组织可见大量炎性细胞浸润;固本防哮饮各治疗组和孟鲁司特钠组小鼠肺组织病理炎症均较模型组减轻,且各治疗组病理差异不明显。与正常组比较,模型组小鼠肺组织TSLP、TSLPR、GATA3 mRNA及蛋白表达显著升高(P 0. 05)。与模型组比较,各给药组小鼠肺组织TSLP、TSLPR、GATA3 mRNA及蛋白表达均不同程度降低(P 0. 05)。各组小鼠血清中TSLP、TSLPR蛋白表达差异无统计学意义(P 0. 05)。结论固本防哮饮可改善支气管哮喘缓解期的肺组织病理改变,其机制可能是抑制肺组织TSLP、TSLPR、GATA3表达,纠正肺组织Th1/Th2的偏移,从而调控机体的免疫功能。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织STAT1的调控作用

目的:研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠肺组织中转录激活因子和信号转导子1(STAT1)的调控作用。方法:用卵蛋白(OVA)和RSV对BALB/c小鼠反复致敏刺激复制哮喘缓解期小鼠模型(正常组除外),随机分为模型组、预防组、固本防哮饮组和孟鲁司特钠组(每组15只)。观察各组小鼠的一般行为活动和病理学变化特点,用Real-time PCR法测定肺组织STAT1、IL-5 m RNA表达,Western Blot检测肺组织STAT1蛋白表达。结果:模型组小鼠肺组织可见支气管壁水肿、增厚,周围有嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润。预防组、固本防哮饮组及孟鲁司特钠组小鼠肺脏病理改变显著改善,支气管壁充血水肿减轻,管壁和平滑肌厚度减小,且嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润也显著减少。模型组肺组织中STAT1、IL-5 m RNA及STAT1蛋白显著高表达(P<0.01),预防组、固本防哮饮组及孟鲁司特钠组均能降低其表达,且孟鲁司特钠组降低肺组织STAT1 m RNA及蛋白表达更明显。结论:固本防哮饮可以降低哮喘缓解期小鼠肺组织IL-5、STAT1 m RNA及STAT1蛋白表达,减轻气道炎症,抑制哮喘发作并能预防哮喘的发作。     

固本防哮饮对支气管哮喘缓解期小鼠嗜酸性粒细胞及黏液分泌相关因子的影响

目的探讨固本防哮饮治疗支气管哮喘缓解期的可能作用机制。方法 36只小鼠随机分为正常组、模型组、孟鲁司特钠组及固本防哮饮低、中、高剂量组,每组6只。除正常组外其余各组通过采用卵蛋白致敏和呼吸道合胞病毒滴鼻建立支气管哮喘缓解期模型。末次激发后,固本防哮饮低、中、高剂量组分别给予固本防哮饮溶液12、24、36 g/(kg·d),孟鲁司特钠组给予孟鲁司特钠片2.6 mg/(kg·d),正常组、模型组给予蒸馏水20 ml/(kg·d),每日灌胃1次,共28天。检测各组小鼠肺组织中CCL24、CCR3、Muc5ac mRNA表达及p-STAT6、CCR3蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠肺组织中CCR3、Muc5ac mRNA及p-STAT6、CCR3蛋白表达水平均升高(P0.05);与模型组比较,固本防哮饮高剂量组、孟鲁司特钠组均能降低CCL24、CCR3、Muc5ac mRNA及p-STAT6、CCR3蛋白表达水平(P0.05)。结论固本防哮饮可能通过抑制STAT6蛋白活化,影响CCL24/CCR3结合及Muc5ac表达,从而抑制嗜酸性粒细胞募集和黏液高分泌,达到治疗支气管哮喘缓解期的目的。     

固本防哮饮对支气管哮喘模型小鼠肺组织炎症因子及STAT1蛋白表达的影响

目的探讨固本防哮饮防治支气管哮喘的可能作用机制。方法将70只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、孟鲁司特钠组和固本防哮饮低、中、高剂量组及固本防哮饮预防组,每组10只。除正常组外,其余各组小鼠采用卵蛋白致敏和激发联合呼吸道合胞病毒感染的方法,建立支气管哮喘模型。孟鲁司特钠组给予孟鲁司特钠片1.5 mg/(kg·d),固本防哮饮低、中、高剂量组分别给予固本防哮饮13.5、27.0、54.0 g/(kg·d),以上各组均于造模第56天开始灌胃给予相应药物,每天1次,连续28天。固本防哮饮预防组给予固本防哮饮13.5 g/(kg·d),于造模第1天开始灌胃,连续84天。取各组小鼠右肺中叶进行HE染色,检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达及STAT1蛋白表达。结果 HE染色结果显示,模型组可见肺小叶正常结构破坏,肺泡壁明显增厚、充血、水肿及炎性细胞浸润,气道壁增厚,管腔狭窄;各药物组小鼠肺组织仅有轻度的炎性病变,较模型组明显减轻。与正常组比较,模型组小鼠肺组织STAT1蛋白及IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达水平显著升高(P0.05);与模型组比较,孟鲁司特钠组和固本防哮饮低、中、高剂量组及预防组小鼠肺组织中STAT1蛋白、IL-6、IL-8 mRNA表达明显降低(P0.05),孟鲁司特钠组和固本防哮饮中、高剂量组及预防组小鼠肺组织中TNF-αmRNA表达明显降低(P0.01)。结论固本防哮饮防治支气管哮喘可能与抑制肺组织中STAT1蛋白的活化,降低IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表达有关。     

固本防哮饮对支气管哮喘缓解期小鼠肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白的影响

目的:观察固本防哮饮对支气管哮喘缓解期小鼠肺组织基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)2、9,及基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)1、2蛋白的影响,初步探讨固本防哮饮防治哮喘气道重塑的可能作用机制。方法:用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发联合呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染的方法,建立BALB/c小鼠哮喘缓解期模型,将40只小鼠分为4组,分别为正常组、模型组、孟鲁司特钠组、固本防哮饮组,每组10只。造模成功后,采用固本防哮饮和孟鲁司特钠进行干预,干预结束后,采用Envision法免疫组织化学技术检测各组小鼠肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白分布及表达情况。结果:MMP-2、TIMP-2和TIMP-1蛋白主要分布于支气管管壁,而MMP-9蛋白分布于广泛肺组织。与正常组比较,模型组小鼠肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,孟鲁司特钠组、固本防哮饮组小鼠肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达明显降低(P0.01)。结论:固本防哮饮能降低MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达,维持ECM内环境的稳定,减少黏液的分泌和胶原的沉积,从而减轻气道重塑。     

固本防哮饮对哮喘小鼠NLRP3和TLR4的影响

目的观察中药复方固本防哮饮对哮喘小鼠肺组织中炎症小体3(NLRP3)及Toll样受体4(TLR4的影响并探讨其防治哮喘机制。方法采用卵蛋白(OVA)联合人呼吸道合胞病毒(RSV)致敏激发雌性Balb/c小鼠,建立哮喘持续期小鼠模型,随机分为正常组、模型组、中药组(固本防哮饮组)。苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化,Western blotting法及real-time q PCR法测定小鼠肺组织中NLRP3、TLR4、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白及mRNA表达,ELISA法测定小鼠肺组织、血清中IL-1(IL-1)及IL-18(IL-18)表达水平。结果模型小鼠肺组织内TLR4、IL-1β蛋白及mRNA表达均高于正常组(P 0.05),固本防哮饮组小鼠肺组织中TLR4、IL-1β蛋白、mRNA表达均低于模型组(P 0.05);肺组织中NLRP3蛋白及m RNA表达、肺组织及血清中IL-18蛋白表达3组间差异无统计学意义(P 0.05)。结论 TLR4的激活可能与哮喘持续期气道炎症持续存在有关。固本防哮饮可能通过下调TLR4,减少IL-1的释放,减轻气道炎症,从而缓解哮喘症状。     

连花清瘟胶囊对脂多糖致急性肺损伤小鼠IKK/IκB/NF-κB信号通路的影响

目的探讨连花清瘟胶囊对经气管内滴注脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤引起的肺组织炎症因子和IKK/IκB/NF-κB信号通路的蛋白表达的影响。方法将急性肺损伤的100只SPF级18~20 g雄性KM小鼠随机均分为5组,LPS组,地塞米松组,连花清瘟胶囊高、中、低剂量组,另设正常对照组(n=20)。光镜下观察实验小鼠肺组织病理变化,流式细胞术检测外周血中白介素-6(IL-6)的阳性表达率,RT-PCR法检测肺组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达,Western blot检测肺组织中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达。结果与正常对照组相比,LPS组小鼠肺组织中有大量炎性细胞渗出,外周血中IL-6,肺组织中MCP-1 mRNA,NE、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达均明显升高;与脂多糖组相比,外周血中IL-6的阳性表达率用药组均有所下降,肺组织中MCP-1mRNA表达用药组均改善明显,肺组织中NE、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达为地塞米松组与高剂量组改善较明显,连花清瘟中、低剂量组也有不同程度改善。结论连花清瘟胶囊能够通过降低IKK/IκB/NF-κB信号通路的表达来减轻肺内炎症反应程度。     

苜蓿素对哮喘小鼠肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的抑制作用

目的观察苜蓿素对低剂量脂多糖(LPS)诱导的哮喘小鼠气道炎症的抑制作用。方法采用低剂量LPS+卵白蛋白(OVA)建立BALB/c小鼠哮喘气道炎症反应模型,随机分为哮喘模型组、苜蓿素组、地塞米松(阳性药)组,另设空白对照组。ELISA法对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症介质NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平进行检测;HE染色观察小鼠肺组织病理情况;RT-PCR法和Western blot法对小鼠肺泡巨噬细胞的Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κB p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白表达进行检测。结果苜蓿素可显著降低哮喘小鼠BALF液中NO、TNF-α、IL-1β水平,有效改善哮喘小鼠肺部炎症,显著下调肺泡巨噬细胞的TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量。结论苜蓿素对哮喘小鼠气道炎症有抑制作用,其机制可能与干预TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

红景天苷通过NF-κB/TGF-β1信号通路抑制哮喘小鼠气道重塑的实验研究

目的探讨红景天苷对支气管哮喘小鼠气道重塑及核因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路的影响。方法 40只清洁级雌性BABL/c小鼠,随机分为4组,每组10只,分别为对照组、模型组、红景天苷低剂量组、红景天苷高剂量组。以卵蛋白(OVA)致敏、激发制备小鼠哮喘模型,在末次激发24 h后取小鼠左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色、PAS染色、Masson染色;取右肺组织分别用酶联免疫吸附法(ELISA)、RT-PCR和Western blotting检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平以及TGF-β1 mRNA、蛋白和NF-κB p65蛋白表达。结果模型组与对照组比较,小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平增高;肺组织TGF-β1 mRNA、蛋白和NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05、0.01)。红景天苷组与模型组比较,小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平,TGF-β1 mRNA、蛋白和NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.05、0.01),不同剂量红景天苷组间上述各指标间差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷可抑制哮喘小鼠气道重塑的发生,其部分机制可能是通过抑制NF-κB/TGF-β1信号通路而实现的。     

槲皮素对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的防治作用及IKK/NF-κB/IκB信号通路机制研究

目的:探讨槲皮素防治金黄色葡萄球菌致小鼠肺炎的IKK/NF-κB/IκB炎症信号通路机制。方法:将60只小鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、模型组、阳性对照组(青霉素)及槲皮素50、100、200 mg/kg剂量组,10只/组,每天给药1次,连续3 d。实验第4 d,除阴性对照组外,其余组采用金黄色葡萄球菌气道滴入法建立小鼠感染性肺炎模型,再继续给药3 d。末次药后3 h,小鼠摘眼球取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α、IL-6及IL-1β含量,然后立即颈椎脱臼处死小鼠,分离肺组织,取肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行白细胞分类计数,取左侧肺组织进行病理组织学HE染色检查,取右侧肺组织采用RTPCR及Western blot法检测NF-κB、IKKβ和IκBαmRNA和蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,模型组BALF中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数明显升高,血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高,肺组织炎性病变加重,肺组织NF-κB、IKKmRNA和蛋白表达明显上调,IκBαmRNA和蛋白明显下调。与模型组比较,槲皮素100、200 mg/kg组小鼠BALF中淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞计数明显减少,血清TNF-α、IL-6及IL-1β含量显著下降;槲皮素200 mg/kg组小鼠肺组织炎性病变明显减轻,肺组织NF-κB、IKKmRNA和蛋白表达水平下调,IκBαmRNA和蛋白表达水平上调。结论:槲皮素抑制金黄色葡萄球菌肺炎小鼠炎症反应与其抑制IKK/NF-κB/IκB炎症信号通路有关。     

苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导大鼠心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达的影响

目的观察苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导的大鼠原代心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其保护心肌细胞的分子机制。方法采用差速贴壁法和化学抑制法分离大鼠原代心肌细胞,分别设正常对照组、模型组、正常血清对照组、苓桂术甘汤含药血清(5%、10%、20%)组。通过脂多糖诱导复制心肌细胞损伤模型,检测含药血清预处理后心肌细胞NF-κBp65、IKK-β、IκB-α和p-IκBα蛋白表达,NF-κBp65核移位情况,TNF-α、IL-1β和IL-6的含量变化。结果与正常对照组比较,模型组和正常血清对照组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达增加(P0.01),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达降低(P0.01),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量升高(P0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤5%、10%、20%浓度含药血清组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达降低(P0.05),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达增加(P0.05),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低(P0.05),且干预效应与苓桂术甘汤含药血清呈浓度依赖趋势。结论苓桂术甘汤可调节IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达,干预下游靶分子的转录调控,有效抑制细胞因子的过度激活。     

芪冬活血饮对LPS致炎巨噬细胞炎症反应的作用及机制探讨

目的:通过观察芪冬活血饮大鼠药物血清对NF-κB抑制巨噬细胞炎症细胞因子及TLR4、Cav-1、NF-κBp65 mRNA表达的影响,探讨其炎症调控的机制。方法:将巨噬细胞分为空白对照组(UT组)、LPS组、NF-κB抑制组(NI组)、NF-κB抑制+LPS组(NL组)、LPS加空白血清组(LB组)、LPS加药物血清组(LD组)、NF-κB抑制+LPS+空白血清组(NLB组),NF-κB抑制+LPS+药物血清组(NLD组)8组。巨噬细胞予阻断剂阻断0.5 h后加入LPS致炎,并予药物血清干预,LPS处理12 h后测定各组细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-10水平,及TLR4、Cav-1、NF-κBp65 mRNA相对表达量。结果:LD组TNF-α、IL-1β、IL-10水平及NF-κBp65、Cav-1、TLR4 mRNA相对表达量均低于LB组和LPS组,比较有统计学意义;NLD组TNF-α、IL-1β、IL-10水平及NF-κBp65、Cav-1、TLR4mRNA相对表达量均低于NL组,两组TNF-α、IL-1β有显著统计学差异,NF-κBp65mRNA、IL-10比较差异无统计学意义,Cav-1、TLR4mRNA比较差异有统计学意义。结论:芪冬活血饮药物血清可减轻LPS刺激的巨噬细胞炎性反应;除TLR4/Cav-1/NF-κBp65途径外,芪冬活血饮还可以通过非NF-κBp65途径降低炎症反应。     

化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:采用TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。qRT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、分泌细胞外基质情况。qRT-PCR法检测TNF-αmRNA、NF-κB p65 mRNA、IκBαmRNA、IKKβmRNA,Western Blot检测NF-κB p65蛋白,观察化纤煎对炎症反应因子TNF-α与炎症信号通路NF-κB的作用。结果:与空白对照组比较,模型对照组的细胞增殖水平显著增加(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎中、高剂量组MRC-5细胞增殖水平均明显下降(P0.01)。模型对照组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平显著高于空白对照组(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平显著低于空白对照组(P0.01)。与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平均上升(P0.05或P0.01)。模型对照组NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:化纤煎冻干粉溶液可能通过抑制炎症因子TNF-α分泌和NF-κB炎症信号通路活化,从而发挥抗纤维化作用。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠的治疗作用

目的观察固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠的影响。方法通过腹腔注射和雾化吸入卵蛋白(OVA)制备哮喘缓解期小鼠模型。在停止激发后给药4周,末次给药后24h观察小鼠气道反应性、肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞总数和细胞分类、白细胞介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)水平以及肺脏病理学变化。结果固本防哮饮可以降低模型小鼠的气道高反应性,降低BALF中炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞和中性粒细胞比例,升高IFN-γ水平,减轻支气管周围炎性细胞浸润,减轻气道重塑。结论固本防哮饮降低气道高反应性、减轻支气管周围嗜酸性粒细胞浸润以及调节机体IFN-γ水平可能是其防止哮喘复发的作用机制。     

平喘方对哮喘小鼠NF-κB信号通路的调控及对TLR4 mRNA和蛋白表达的影响

目的研究平喘方通过调节核因子-K B(NF-K B)信号通路对哮喘小鼠的作用及其对Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将60只SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组15只。除空白组外,其余组均采用先卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝凝胶[AI(OH)3]腹腔注射致敏,采用OVA雾化激发的方法来建立哮喘模型。地塞米松组、平喘方组分别予0.075 mg/mL地塞米松溶液、5.33 g/mL平喘方灌胃治疗1周,空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃。末次给药24 h后,采用HE、Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,Western Blot观察肺组织中NF-κB亚单位(p65)、NF-κB的抑制蛋白(IκBα)、TLR4、髓样分化因子(MyD88)蛋白表达,RT-PCR法观察p65、IκBα、TLR4、MyD88 mRNA水平。结果HE及Masson染色可见模型组小鼠肺组织明显炎症细胞浸润,上皮基底膜增厚,胶原纤维增多,平喘方组小鼠肺部炎性细胞浸润明显减轻,胶原纤维面积减小;与空白组比较,模型组小鼠BALF中IL-6、TNF-α浓度,肺组织中p65、MyD88蛋白表达及mRNA水平,气管中TLR4mRNA及蛋白表达水平均升高(均P<0.01),IκBα蛋白表达及mRNA水平降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和平喘方组BALF中IL-6、TNF-α浓度均降低,MyD88、p65、TLR4蛋白表达及mRNA水平下调(P<0.01,P<0.05),地塞米松组IκBα蛋白表达及mRNA水平升高(均P<0.01),平喘方组IκBαmRNA水平升高(P<0.01),IκBα蛋白表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。与地塞米松组比较,平喘方组BALF中IL-6、TNF-α因子水平、p65 mRNA水平、TLR4 mRNA水平、MyD88蛋白表达及mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.05)。结论平喘方对OVA诱导哮喘小鼠的气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低TLR4及MyD88活性,调控NF-κB信号通路有关。     

补肾平喘方对过敏性哮喘小鼠气道炎症改善效果的实验研究

目的:研究补肾平喘方对过敏性哮喘小鼠气道炎症的改善效果。方法:腹腔注射卵清蛋白(OVA)制备过敏性哮喘模型小鼠,随机分为补肾平喘方低、高剂量组(15、30g·kg~(-1)·d~(-1))、地塞米松组(1mg·kg~(-1)·d~(-1))、模型组(等体积生理盐水)。OVA攻击诱导致敏期间给与药物干预,连续8周。末次OVA攻击后,测定各组气道阻力、支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞计数、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ig E水平。行HE、AB-PAS染色分别观察气道炎性细胞浸润及肺组织黏液分泌情况。Western blot检测肺组织中NF-κBp65、IκBα、TLR4、Foxp3蛋白表达。结果:给药干预后,补肾平喘方可显著降低气道阻力及炎症细胞数量,同时可降低IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、Ig E水平,下调p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα与TLR4蛋白表达,上调Foxp3蛋白表达。HE、AB-PAS染色结果显示补肾平喘方可减少炎性细胞浸润,抑制肺组织黏液分泌和杯状细胞增生,且呈剂量依赖性。结论:补肾平喘方可有效改善过敏性哮喘小鼠气道炎症,发挥平喘作用。     

牛蒡子苷元抗哮喘小鼠气道炎症作用及机理研究

目的:观察牛蒡子苷元对哮喘小鼠气道炎症的影响并探究相关作用机制。方法:将30只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组和牛蒡子苷元组。采用卵清白蛋白与氢氧化铝致敏,并雾化吸入卵清蛋白激发制备小鼠支气管哮喘模型,81天后检测小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞总数和炎症细胞数;采用HE染色在光镜下观察各组小鼠肺组织病理学变化;采用RT-PCR和Western blot分别对肺组织E选择素的mRNA和蛋白表达进行测定;采用Western blot对肺组织中NF-κB p65活化水平(p-NF-κB p65/total NF-κB p65)进行检测。结果:与模型组相比,牛蒡子苷元组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞和巨噬细胞数明显降低;小鼠肺组织病理变化明显减轻;此外,与模型组相比,牛蒡子苷元组哮喘小鼠肺组织E选择素mRNA和蛋白的表达降低,哮喘小鼠的NF-κB p65活化水平显著下降。结论:牛蒡子苷元10 mg/kg可能通过抑制NF-κB的活化从而降低OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症水平,为牛蒡子苷元进一步应用于哮喘的治疗奠定了一定的实验基础。