基于TGF-β/smad信号通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS细胞上皮间质转化过程的影响＊

目的 探究七方胃痛颗粒对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人胃腺癌细胞AGS上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）过程的影响及其潜在分子机制。方法 为了探究七方胃痛颗粒对TGF-β1处理的AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响，实验分为四组：AGS细胞对照组，EMT空白模型组，中药血清组，TGF-β/smad通路抑制剂组，分别利用CCK8、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。此外，通过免疫荧光检测EMT过程中相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3）的表达水平。结果 与AGS细胞对照组相比，TGF-β1诱导EMT过程，显著促进AGS细胞增殖、迁移和侵袭，下调了E-cadherin的表达，上调了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达；与EMT空白模型组相比，中药血清组、TGF-β/smad通路抑制剂组显著抑制了细胞增殖、迁移和侵袭，上调了E-cadherin的表达，降低了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达。结论 七方胃痛颗粒通过调控TGF-β/smad信号通路从而抑制人胃腺癌AGS细胞的EMT过程。     

西红花苷对成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞生物学行为的影响及机制初步研究＊

目的 探究西红花苷对与成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞生物学行为的影响，并初步探究作用机制。方法 将人结直肠癌细胞HCT116和人表皮成纤维细胞ESF-1共培养，再用低、中、高（50、100、200 μmol·L^-1）剂量西红花苷处理共培养后的HCT116细胞，实验分组包括对照组、ESF-1/HCT116组、ESF-1/HCT116 + Cro-L组、ESF-1/HCT116 + Cro-M组、ESF-1/HCT116 + Cro-H组；MTT法检测细胞增殖，PI染液法检测细胞周期分布情况，Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力，化学比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量；荧光探针DCFH-DA测定活性氧（ROS）水平，Western blot检测转化生长因子-β（TGF-β1）、上皮性钙粘附分子（E-cadherin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）与波形蛋白（Vimentin）蛋白表达水平。结果 与共培养体系下的HCT116细胞比较，共培养后再经各浓度西红花苷处理后的HCT116细胞存活率下降，G1期细胞比例减少，G2期细胞比例增加，细胞的侵袭数目和迁移数目均减少，TGF-β1、N-cadherin与Vimentin蛋白表达水平均下调，E-cadherin蛋白表达水平上调，此外，SOD活性下降而MDA含量升高，ROS水平也明显提高，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 西红花苷可抑制与成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力，其机制可能与诱导细胞发生氧化应激损伤有关。     

青蒿琥酯通过Akt/Snail信号通路逆转结直肠癌细胞上皮间充质转化

目的 探讨青蒿琥酯（ART）对结直肠癌HCT-8细胞上皮-间充质转化（EMT）的作用,并探讨ART对结直肠癌细胞迁移,侵袭,EMT能力和蛋白激酶B（Akt）/Snail信号通路的影响。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同药物浓度的ART对HCT-8细胞增殖的影响,采用伤口愈合实验和transwell实验,检测ART对结直肠癌HCT-8细胞迁移侵袭能力的影响。免疫荧光双重染色法检测不同ART浓度对肿瘤细胞HCT-8细胞中EMT相关蛋白波形蛋白（vimentin）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）分布情况的影响。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白N-钙黏蛋白（N-cadherin）,vimentin,E-cadherin的蛋白表达情况的影响以及对Akt/Snail信号途径中相关蛋白Akt1,磷酸化Akt1（p-Akt1）和Snail1表达的影响。结果 不同浓度的ART作用于HCT-8后,计算细胞增殖抑制率,并绘制出量效曲线,得出ART对HCT-8细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为（16.67±1.95） μmol·L^-1,且与药物质量浓度呈剂量依赖关系,由此实验处理组分为4组,空白组（0 μmol·L^-1）,ART低剂量组（2 μmol·L^-1）,ART中剂量组（10 μmol·L^-1）,ART高剂量组（50 μmol·L^-1）;与空白组比较,ART组可显著抑制HCT-8细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）;与空白组比较,ART组中相关蛋白E-cadherin表达明显上调,vimentin和N-cadherin表达明显下调,且p-Akt1和Snail1的表达水平明显降低从而抑制EMT（P<0.05）。结论 ART可以抑制EMT引起的迁移和侵袭,其机制可能与抑制Akt/Snail通路活化从而逆转EMT有关。     

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的] 研究桃叶珊瑚苷（AU）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞活力和上皮间质转化（EMT）的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法] 将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法（WesternBlot）检测基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、波形蛋白（Vimentin）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、Ras同源基因家族成员A（RhoA）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果] GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低（P<0.05）,选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高（P<0.05）,其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著（P<0.05）。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达（P<0.05）。[结论] AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。     

三七总皂苷对A549细胞上皮-间充质转化的影响＊

目的 本研究旨在观察三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS）对A549细胞上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）的影响及其机制。方法 将A549细胞随机分为5组：正常对照组、TGF-β1诱导组（5 ng·mL^-1，诱导24h）、PNS干预组（低、中、高浓度组分别加入TGF-β1 5 ng·mL^-1和50、100、200 μg·mL^-1 PNS）；倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化；Elisa法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白（COL Ⅰ）的表达；Western blot检测各组E-cadherin、Vimentin、磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）蛋白的表达。结果 倒置显微镜下TGF-β1诱导的A549细胞由圆形变为长梭形、纺锤形，细胞圆形度降低（P < 0.01），PNS干预后细胞圆形度增高（P < 0.05）；Elisa法检测显示，与正常对照组相比TGF-β1诱导组细胞上清液COL Ⅰ表达增高（P < 0.05），与TGF-β1诱导组比较PNS干预后COL Ⅰ表达降低（P < 0.05）；Western blot检测与与TGF-β1诱导组比较，PNS干预后E-cadherin蛋白表达增加（P < 0.05），Vimentin蛋白表达降低（P < 0.05），磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38 MAPK）表达降低（P < 0.05）。结论 三七总皂苷可能通过调控TGF-β1/p38MAPK信号通路可以抑制TGF-β1诱导A549细胞发生EMT现象。     

地榆皂苷I调控IGFL2-AS1/miR-138-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨地榆皂苷I对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。方法 人卵巢癌A2780细胞分别用7.5、15.0、30.0 μmol/L的地榆皂苷I处理,同时设置si-NC组、si-IGFL2-AS1组、地榆皂苷I＋pcDNA-IGFL2-AS1组、地榆皂苷I＋pcDNA组;MTT检测细胞增殖抑制率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;Transwell法检测迁移和侵袭细胞数;Western blotting法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）和N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达;双荧光素酶报告实验检测IGFL2-AS1和miR-138-5p的靶向关系。结果 不同浓度的地榆皂苷I处理A2780细胞后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱（P＜0.05）,E-cadherin和miR-138-5p表达上调（P＜0.05）,N-cadherin和IGFL2-AS1表达下调（P＜0.05）,呈剂量相关性。下调IGFL2-AS1抑制A2780增殖、迁移及侵袭（P＜0.05）。IGFL2-AS1靶向调控miR-138-5p,过表达IGFL2-AS1可减弱地榆皂苷I对A2780细胞增殖、迁移和侵袭的作用（P＜0.05）。结论 地榆皂苷I通过调控IGFL2-AS1/miR-138-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移。     

淫羊藿素对人卵巢癌A2780细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 观察淫羊藿素对人上皮性卵巢癌A2780细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响，并探讨淫羊藿素通过调控A2780细胞上皮间质转化（EMT）相关分子表达抑制细胞侵袭迁移。方法 设置空白组，淫羊藿素低、中、高剂量组（5，10，20 μmol·L^-1）分别作用于人卵巢癌A2780细胞48 h。采用细胞增殖与活性检测CCK-8）法，流式细胞术检测各组细胞增殖抑制率及凋亡率；划痕实验及transwell迁移实验观察细胞迁移情况并计算划痕愈合率与迁移率；transwell侵袭实验观察细胞侵袭情况并计算侵袭率；蛋白免疫印迹法（Western blot）与实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测EMT相关分子E-钙黏蛋白（E-cadherin），N-钙黏蛋白（N-cadherin），波形蛋白（Vimentin）和肿瘤侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白及mRNA表达情况。结果 CCK-8与流式细胞术结果显示，与空白组比较，淫羊藿素各组细胞抑制率显著上升（P<0.01），细胞总凋亡率上升（P<0.05）；划痕实验及transwell侵袭迁移实验结果显示，与空白组比较，淫羊藿素组的侵袭迁移能力减弱，细胞侵袭迁移数量和侵袭迁移率明显减少（P<0.05）；Western blot与PCR结果显示，与空白组比较，淫羊藿素各组中N-cadherin，MMP-9，Vimentin蛋白和mRNA表达总体呈下降趋势，E-cadherin的表达呈上升趋势。结论 淫羊藿素对人卵巢癌A2780细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用，可能通过调控EMT相关分子表达抑制A2780细胞的侵袭迁移。     

冬凌草甲素抑制人宫颈癌HeLa细胞生存，迁移，侵袭的活性研究＊

目的 观察冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 体外培养HeLa细胞，以细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）检测不同浓度（0、10、20、40、80、160 μmol·L^-1）的冬凌草甲素对HeLa细胞处理不同时间（12 h、24 h和36 h）的细胞活力的影响。以0（对照组）、10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素处理HeLa细胞24 h，TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测HeLa细胞凋亡，细胞粘附实验检测HeLa细胞粘附力，划痕修复实验检测HeLa细胞侵袭能力，Transwell小室体外侵袭实验检测HeLa细胞侵袭能力，Western blot分析检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子原癌基因（C-myc）、细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白的表达。结果 冬凌草甲素以浓度-时间依赖效应的方式抑制HeLa细胞细胞活力（P < 0.05）。与对照组比较，10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素组显著升高HeLa细胞凋亡率和凋亡指数（P < 0.05）；与对照组比较，10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素组显著降低HeLa细胞黏附率、迁移率和侵袭率（P < 0.05）；与对照组比较，10、20、40 μmol·L^-1冬凌草甲素组显著降低HeLa细胞β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表达（P < 0.05）。结论 冬凌草甲素具有抑制HeLa细胞增殖的作用，亦可诱导凋亡及抑制迁移和侵袭能力，并抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

水蛭素对大鼠NRK-52E细胞尿酸盐转运体表达的影响＊

目的 探讨金边蚂蟥活性成分水蛭素对大鼠NRK-52E细胞尿酸盐转运体表达的影响。方法 采用不同浓度（0、0.01、0.1、1、5和10 mg·mL^-1）水蛭素处理大鼠NRK-52E细胞，细胞计数试剂盒-8（Cell counting kit-8，CCK8）检测水蛭素对细胞的毒性作用。将细胞分为正常组、黄嘌呤组（200 μmol·L^-1）、水蛭素低（0.01 mg·mL^-1）、中（0.1 mg·mL^-1）、高浓度组（5 mg·mL^-1），培养24 h后，Hoechst33258染色观察细胞形态，实时荧光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中葡萄糖转运蛋白9（Glucose transporter 9， GLUT9）、有机阴离子运输蛋白（Organic anion transporter 1，OAT1）和尿酸盐转运体1（Urate transporter 1，URAT1）mRNA及蛋白表达水平。结果 水蛭素对大鼠NRK-52E细胞毒性作用较小。与正常组比较，黄嘌呤组细胞碎片增多，细胞中GLUT9和URAT1 mRNA及蛋白表达均显著升高（P < 0.05），而OAT1 mRNA和蛋白表达均显著降低（P < 0.05）。与黄嘌呤组比较，水蛭素组细胞碎片减少，GLUT9和URAT1表达显著降低（P < 0.05），OAT1表达显著升高（P < 0.05），且高浓度组比低浓度组更明显（P < 0.05）。结论 水蛭素可能通过调节肾细胞尿酸盐转运体（GLUT9、URAT1、OAT1）的表达对尿酸排泄的发挥作用。     

吴茱萸碱对子宫内膜癌细胞EMT及JAK/STAT3/HIF-1α通路的影响＊

目的 探究吴茱萸碱（EVO）对子宫内膜癌（EC）细胞的抗癌作用，并探讨其可能的作用机制。方法 培养EC细胞株HEC-1A、Ishikawa和AN3CA，不同浓度EVO（0、1、2、4、8 μmol/L）处理，噻唑蓝（MTT）检测EVO对不同EC细胞株增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC50）。培养Ishikawa细胞，将其分为：Control组（不做任何处理）、EVO组（4 μmol/L EVO）、AG490组［50 μmol/L AG490，Janus激酶（JAK）抑制剂］、EVO+RO8191组（4 μmol/L EVO+20 μmol/L RO8191，JAK激动剂）。分别使用划痕实验和Transwell实验检测各组Ishikawa细胞迁移和侵袭能力；蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测上皮-间质转化（EMT）及JAK/转录激活因子3（STAT3）/缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）信号通路相关蛋白水平。结果 MTT结果显示，EVO对HEC-1A、Ishikawa和AN3CA细胞增殖有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性（P<0.05）；EVO可显著抑制Ishikawa细胞的迁移和侵袭，上调上皮标志物E-钙粘附蛋白（E-cadherin）的蛋白表达，下调间质标志物E-钙粘附蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）以及磷酸化JAK2（p-JAK2）、p-STAT3、HIF-1α的蛋白表达（P<0.05）。与EVO组相比，EVO+RO8191组Ishikawa细胞的划痕愈合率、侵袭率及N-cadherin、Vimentin、p-JAK2、p-STAT3、HIF-1α蛋白水平明显增高，E-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）。结论 EVO通过抑制EC细胞EMT及JAK/STAT3/HIF-1α通路进而抑制细胞迁移和侵袭。     

西黄丸含药血清对SW480人结肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的:研究西黄丸对人结肠癌细胞SW480迁移及侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以人结肠癌细胞SW480为研究对象,细胞划痕试验检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞迁移的影响,并Transwell侵袭实验检测西黄丸含药血清对细胞侵袭能力的改变;用Western blot的方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白表达水平,RTq PCR法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、波形蛋白(Vimentin)和转录因子Snail的mRNA水平。结果:与空白组比较,西黄丸含药血清可降低SW480细胞迁移及侵袭的能力,增加E-cadhenrin mRNA表达水平,并抑制PARP-1,Vimentin和Snail mRNA表达水平,明显降低ERK蛋白的磷酸化水平,均具有统计学意义(P0.05)。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞的体外侵袭及迁移,并影响上皮-间皮转化(EMT)相关基因E-cadherin,PARP-1,Vimentin和Snail的mRNA表达,其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关,本研究为西黄丸抑制结肠癌转移提供了科学证据。     

应用UPLC-MS/MS观测6种中药对尿酸盐体外溶解度的影响＊

目的 建立水基质溶液中尿囊素含量的测定方法，观测6种治疗痛风常用中药对尿酸盐体外溶解度的影响。方法 采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法定量分析9组溶液中尿酸盐溶解后产生的尿囊素含量：实验组溶剂为6种治疗痛风常用中药的超声水提取溶液，对照组溶剂为超纯水、5%碳酸氢钠溶液和尿酸酶溶液。结果 尿囊素的色谱在1.40 min出峰，在0.1-100 ng·mL^-1范围内线性关系良好（r² = 0.9995），平均加标回收率为102.36%（n = 6），RSD为2.33%。尿囊素浓度与溶液pH值无线性相关；溶解时间24 h，土茯苓、黄柏和海金沙组尿囊素浓度与超纯水组均无统计学差异（P > 0.05）；溶解时间24 h，山慈菇、苍术和大黄组尿囊素浓度均高于超纯水组（P < 0.05）；溶解时间24 h，山慈菇组尿囊素浓度高于5%碳酸氢钠组（P < 0.05）；尿酸酶组的尿囊素浓度在1 h和24 h溶解时间内均为9组中最高（P < 0.05）。通过尿酸盐溶液中分解产生的尿囊素含量估算尿酸盐的溶解度（1 h，24 h），以1h超纯水组的溶解度为100%：超纯水组（100%，121%），山慈菇组（279%，463%），土茯苓组（69%，172%），海金沙组（21%，97%），苍术组（105%，400%），大黄组（146%，311%），黄柏组（65%，74%），尿酸酶组（8247%，12454%）和5%碳酸氢钠组（63%，285%）。结论 本方法可灵敏、准确地测定尿酸盐在水基质中药溶液中溶解后产生的尿囊素含量。山慈菇、苍术和大黄对尿酸盐的体外溶解度有一定促进作用，但未能达到临床溶解痛风石的要求。土茯苓、黄柏和海金沙对MSU的溶解无促进作用。     

四君子汤含药血清调控hTERT，TRF1，Tankyrase表达及对UCAC的影响

目的:应用四君子汤含药血清干预肠癌SW480细胞,观察人端粒酶逆转录酶(hTERT),端粒结合因子1(TRF1),端锚聚合酶(Tankyrase)mRNA及蛋白的表达变化,探讨其防治溃疡性结肠癌相关癌变(UCAC)的可能机制。方法:体外培养肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、四君子汤含药血清、美沙拉嗪含药血清干预,将经过干预后的SW480细胞,采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测肠癌SW480细胞中hTERT,TRF1及Tankyrase mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白血清组比较,四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组和美沙拉嗪含药血清组均能降低hTERT,TRF1,Tankyrase mRNA表达(P0.05);与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤(4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组明显降低hTERT,TRF1 mRNA表达(P0.05),四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组Tankyrase mRNA表达明显升高(P0.05)。与空白血清组比较,四君子汤(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组和美沙拉嗪含药血清组hTERT,TRF1蛋白表达均降低(P0.05),美沙拉嗪含药血清组Tankyrase蛋白表达降低(P0.05);四君子汤含药血清组Tankyrase蛋白表达呈下降趋势,但无统计学差异;与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤(8.64 g·kg-1)含药血清组hTERT蛋白表达明显降低(P0.05),四君子汤(4.32,8.64 g·kg-1)含药血清组TRF1蛋白表达明显降低(P0.05),四君子汤(2.16 g·kg-1)含药血清组Tankyrase蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:四君子汤含药血清可能通过下调hTERT,TRF1,Tankyrase表达,抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,达到防治UCAC的作用。     

南蛇藤提取物联合miR-302通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)联合miR-302对人食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。方法实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人正常食管上皮细胞Het-1A及不同食管癌细胞株中miR-302表达情况。将miR-302mimic和阴性对照mimiccontrol转染至人食管癌TE-1细胞中,q RT-PCR检测质粒转染后TE-1细胞中miR-302的表达情况。单独或联合使用COE作用TE-1细胞,CCK-8实验检测TE-1细胞增殖情况,Transwell实验检测TE-1细胞侵袭和迁移能力,Westernblotting分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达情况。结果食管癌细胞株中miR-302的表达明显低于正常食管上皮细胞(P0.05)。转染miR-302mimic能够有效提高TE-1细胞中miR-302的表达(P0.05)。单独使用COE或过表达miR-302可抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移(P0.05),下调PI3K和p-Akt蛋白表达;二者联合使用对TE-1细胞增殖、侵袭和迁移抑制及对PI3K和p-Akt蛋白表达下调作用更显著(P0.05)。结论 COE联合miR-302可协同抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

黑树莓花青素联合奥沙利铂或喜树碱通过Akt信号通路协同增强结直肠癌化疗药物的治疗效果及作用机制研究

目的 探究黑树莓花青素联合奥沙利铂或喜树碱在结直肠癌细胞和氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）诱导的结直肠癌模型小鼠中的协同作用。方法 结直肠癌细胞系SW480和Caco-2给予黑树莓花青素、奥沙利铂或喜树碱进行干预,AOM诱导的结直肠癌模型小鼠给予黑树莓花青素或奥沙利铂进行干预。采用MTT法检测黑树莓花青素联合奥沙利铂或喜树碱对结直肠癌细胞增殖的影响;采用Western blotting法检测结直肠癌细胞和小鼠肠上皮细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路相关蛋白表达;采用苏木素-伊红（HE）染色检测小鼠结肠组织病理变化。结果 黑树莓花青素与奥沙利铂或喜树碱联合使用可显著抑制SW480和Caco-2细胞的增殖（P<0.05、0.01、0.001）;黑树莓花青素与奥沙利铂联合使用显著改善结直肠癌模型小鼠的状态,增加小鼠体质量,减少肠道肿瘤数量（P<0.01）;黑树莓花青素可能通过下调Akt信号通路相关蛋白的表达进而增强化疗药物的治疗效果（P<0.01、0.001）。结论 黑树莓花青素可以协同增加奥沙利铂或喜树碱的抗肿瘤作用。     

理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响

目的:探讨理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化(EMT)的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测理冲汤加减及5-FU单独和联合使用对HepG2细胞生长影响;应用中效原理进行统计分析,确定联合用药时的药物效应-合用指数的关系,判定药物间的相互作用,确定后续实验给药浓度及时间;划痕实验检测理冲汤加减联合5-FU对HepG2细胞迁移能力的影响;细胞侵袭实验(transwell小室)检测理冲汤加减联合5-FU对HepG2细胞侵袭能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测理冲汤加减联合5-FU作用HepG2细胞24 h后对EMT相关基因上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),锌指转录因子(Snail,Twist) mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测理冲汤加减联合5-FU作用HepG2细胞24 h后EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Snail,波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:MTT比色法结果显示,随着药物浓度增加,理冲汤加减,5-FU单药或联合用药对HepG2细胞生长的抑制效应也增加;应用中效原理进行统计分析显示,两药在低剂量合用24 h后对HepG2细胞可以产生较好的协同效应,故选用理冲汤加减,5-FU作用HepG2细胞24 h的25%抑制浓度(IC25)即800 mg·L-1理冲汤加减,3. 125 mg·L-15-FU;设空白组,5-FU组,理冲汤加减+5-FU组,理冲汤加减组进行后续实验;划痕和侵袭实验显示,理冲汤加减,5-FU单独及联合均能抑制HepG2细胞迁移侵袭能力(P 0. 05,P 0. 01),与5-FU组比较,理冲汤加减+5-FU组抑制能力更强(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin mRNA表达上调,N-cadherin,Snail,Twist mRNA表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin mRNA表达上调,N-cadherin,Snail,Twist mRNA表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin蛋白表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin蛋白表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:理冲汤加减方与5-FU在低剂量合用24 h后对HepG2细胞可以产生较好的协同效应,并且能明显抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,上调肝癌细胞内EMT相关标志物E-cadherin的表达,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Twist的表达,据此推测,抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关mRNA的表达,从而增强化疗药物的疗效,可能是理冲汤加减方联合5-FU协同作用的机制之一。     

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2对结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP侵袭迁移能力的影响

目的:观察人参皂苷Rh_2(ginsenoside Rh_2,GRh_2)对结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP迁移、侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测不同质量浓度GRh_2(0,2. 5,5,10,20,40 mg·L~(-1))对HCT116/L-OHP细胞增殖抑制作用;划痕实验,Transwell实验及黏附实验分别检测GRh_2(0,2. 5,5,10 mg·L~(-1))对细胞迁移、侵袭及黏附能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GRh_2(0,5,10,20,30 mg·L~(-1))对HCT116/L-OHP细胞上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,GRh_2(5,10,20,40 mg·L~(-1))可显著抑制HCT116/L-OHP耐药细胞的增殖能力(P 0. 05,P 0. 01),并且呈浓度依赖性;与空白组比较,GRh_2组(5,10 mg·L~(-1))划痕愈合率明显减小(P 0. 05,P 0. 01),GRh_2组穿过小室的细胞数量明显减少(P 0. 05,P 0. 01),细胞的迁移和侵袭能力受到显著抑制,并且呈浓度依赖性; GRh_2组黏附细胞数量显著减少(P 0. 05,P 0. 01),细胞的黏附能力受到显著抑制,并且呈浓度依赖性;与空白组比较,GRh_2(10,20,30 mg·L~(-1))促进了E-cadherin的蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01),同时抑制了MMP-9蛋白表达(P 0. 01),呈一定的浓度依赖性。结论:GRh_2可显著抑制结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP的侵袭和迁移能力,其潜在机制可能与促进E-cadherin并抑制MMP-9的表达有关。     

南蛇藤提取物靶向mTOR抑制人肝癌HepG2细胞侵袭与转移能力的研究

目的探索南蛇藤提取物(COE)靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、侵袭与转移的分子机制。方法用si RNA技术,构建敲除m TOR基因的Hep G2细胞模型,MTT法检测COE对Hep G2/m TOR-细胞增殖能力的影响。划痕实验及Transwell实验检测药物对细胞侵袭转移能力的影响。Western blotting法分析用药后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平变化。结果成功构建敲除m TOR表达的Hep G2/m TOR-细胞。COE明显抑制Hep G2/m TOR-细胞的增殖(P0.05),并呈浓度依赖性。划痕实验结果显示COE降低了细胞迁移能力。Transwell实验结果表明,COE(80 mg/L)明显减少了穿膜细胞数目(P0.05)。Western blotting结果显示,COE(80 mg/L)明显降低MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平(P0.05)。结论 COE明显抑制Hep G2/m TOR-细胞的增殖与侵袭转移,m TOR通路可能是其抑制肝癌的潜在作用靶点之一。     

软坚散结颗粒对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用及相关机制

目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的发生发展是肿瘤转移的关键因素之一,对胃癌EMT现象的研究可能有助于控制胃癌转移。本课题旨在研究软坚散结方(RJSJ)对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用并探讨相关机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用;采用transwell方法观察RJSJ对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观测SGC-7901细胞EMT过程中锌指E盒结合同源盒蛋白1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,Zeb1),锌指E盒结合同源盒蛋白2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,Zeb2)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:(1)MTT结果显示,不同浓度RJSJ组均能有效抑制SGC-7901细胞的增殖(P0.05),RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖。(2)transwell侵袭实验结果显示,不同质量浓度RJSJ(250,500,1 000 mg·L-1)对SGC-7901细胞的穿膜能力有不同程度的抑制作用(P0.05)。(3)Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,RJSJ各组均能使E-cadherin mRNA和蛋白表达增加,Zeb1,Zeb2mRNA和蛋白表达减少,其中RJSJ高剂量组能够明显上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Zeb1,Zeb2 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:RJSJ对SGC-7901细胞有直接的抑制作用;RJSJ对SGC-7901细胞EMT有抑制作用,其机制可能与下调Zeb1,Zeb2 mRNA及蛋白表达,上调E-cadherin mRNA及蛋白表达有关。