补阳还五汤通过NLRP3/caspase-1调控大鼠髓核细胞退变的机制研究

目的 初步探索补阳还五汤对大鼠髓核细胞（nucleus pulposus cell,NPC）退变的抑制效应与Nod样受体蛋白3（Nod–like receptor protein 3,NLRP3）/胱天蛋白酶–1（caspase–1）信号通路之间的关系。方法 离体培养大鼠NPC,得到的细胞根据处理方法分为空白组（0.9%氯化钠溶液预处理）、应力拉伸组（应力拉伸刺激+0.9%氯化钠溶液预处理）和补阳还五汤组（应力拉伸刺激+1.0g/L补阳还五汤制剂预处理）,采用细胞体外拉伸应力刺激法构建大鼠NPC退变模型。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT–PCR）和蛋白质印迹法检测3组细胞聚集蛋白聚糖（aggrecan）、NLRP3、caspase–1的mRNA及蛋白表达情况;采用酶联免疫吸附测定（enzyme–linked immunosorbent assay,ELISA）检测3组细胞上清液白细胞介素（interleukin,IL）–1β、IL–18的表达水平。结果 qRT–PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,应力拉伸组NLRP3、caspase–1的mRNA与蛋白表达较空白组显著上升,aggrecan的mRNA与蛋白表达较空白组显著下降,差异均有统计学意义（P<0.05）;补阳还五汤组NLRP3、caspase–1的mRNA与蛋白表达较应力拉伸组显著下降,aggrecan的mRNA与蛋白表达较应力拉伸组显著上升,差异均有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,应力拉伸组IL–1β、IL–18的表达水平较空白组显著上升,差异均有统计学意义（P<0.05）;补阳还五汤组IL–1β、IL–18的表达水平较应力拉伸组显著下降,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 补阳还五汤可通过抑制NLRP3/caspase–1信号通路的激活,减轻细胞炎症反应,延缓细胞外基质降解重构,从而发挥防治NPC退变的作用。     

DIS3通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路促进人骨髓瘤细胞凋亡

目的 探究DIS3对人骨髓瘤细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI 8226和U266为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA,3种细胞均随机分成5组:对照组、DIS3-siRNA阴性对照(negative control,NC)组、DIS3空载组、...     

外源性Apelin-13通过调控 VEGF/PI3K/Akt信号通路促进大鼠股骨骨折愈合

目的 探讨Apelin-13调控VEGF/PI3K/Akt信号通路对大鼠股骨骨折愈合的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分成假手术组(sham组)、模型组(Model组)、Apelin-13低剂量组[Apelin-13 L组,25μg/(kg·d)]和Apelin-13高剂量组[Apelin-13 H组,75μg/(...     

丹参酮IIA通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压

目的 探究丹参酮IIA治疗野百合碱所致大鼠肺动脉高压（PAH）的作用机制。方法 选取100只SD雄性大鼠,按随机数字表法分为5组（20只/组）：模型组（MCT）、丹参酮IIA组（TIIA）、丹参酮IIA+PI3K抑制剂组（TP）、PI3K抑制剂组（PI）、对照组。除对照组颈背部注射等体积生理盐水外,剩余大鼠均颈背部注射野百合碱（MCT）诱导肺动脉高压模型。2周后,丹参酮IIA组腹腔注射丹参酮IIA10 mg/kg进行治疗,丹参酮IIA+PI3K抑制剂组注射丹参酮IIA10 mg/kg+PI3K抑制剂1 mg/kg,PI3K抑制剂组注射PI3K抑制剂1 mg/kg,对照组和模型组均腹腔注射等体积生理盐水。治疗2周后,采用苏木精-伊红（HE）染色实验和α-SMA免疫荧光染色实验评估大鼠肺血管形态;Western blot实验评估大鼠肺组织中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB/Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化水平;ELISA法测定eNOS、NO水平。结果 HE染色实验和α-SMA免疫荧光染色证实丹参酮IIA能有效抑制PAH大鼠肺血管中膜厚度和血管肌化水平（P<0.01）;Western blot实验结果显示丹参酮IIA能够显著提高PAH大鼠肺组织中PI3K、Akt和eNOS蛋白的磷酸化水平;ELISA 实验结果显示模型组eNOS、NO水平降低（P<0.01）。结论 丹参酮IIA能够通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压。     

骨桥蛋白通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的机制探讨

背景 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)可参与低氧引起的血管重塑,使肺动脉压力升高。但OPN调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)自噬在低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)形成中的作用机制尚不明确。目的 探讨低氧条件下OPN对PASMCs增殖及通过PI3K/AKT/mTOR通路对PASMCs自噬的调控作用。方法 原代分离PASMCs,采用免疫细胞化学法进行平滑肌细胞鉴定。将细胞分为常氧对照组(Normoxia)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧+OPN干扰空病毒组(H+OPN EV)、低氧+OPN干扰慢病毒组(H+OPN shRNA)、低氧+PI3K抑制剂LY294002组(H+LY)。各组分别用EdU阳性标记率法检测细胞增殖能力;Western blot法检测各组PASMCs中的OPN、PI3K、AKT、mTOR及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达;透射电镜、免疫荧光法观察各组PASMCs自噬情况。结果 与Normoxia组相比,...     

NOTCH1调控 PTEN/PI3K/AKT信号通路促进肾透明细胞癌发病

研究NOTCH1在肾透明细胞癌中的表达及其对PTEN/PI3K/AKT信号通路的调控。 方法 收集36对肾透明细胞癌及其邻近非肿瘤肾组织,Western blotting和qrt-PCR检测NOTCH1、HES1、PTEN、AKT(p-S473)蛋白及其mRNA的表达,分析NOTCH1表达与肿瘤临床特征之间的关系。在肾透明细胞癌细胞系786-O及人肾小管上皮细胞系HKC中沉默或过表达NOTCH1,Western blotting和qrt-PCR检测HES1、PTEN、AKT(p-S473)蛋白及其mRNA变化,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡的影响。 结果 肾透明细胞癌组织中NOTCH1的表达明显高于癌旁组织,其表达与患者年龄、肿瘤大小、核分级及肿瘤TNM分期无明显关系（P>0.05）。在两株细胞中,沉默NOTCH1均能抑制细胞生长,引起HES1与AKT(p-S473)蛋白下降,PTEN的蛋白及mRNA水平明显升高。过表达NOTCH1则促进细胞生长,HES1、AKT(p-S473)及PTEN的变化方向同转染siRNA相反。沉默或过表达NOTCH1均对细胞的凋亡无明显影响。 结论 在肾透明细胞癌中,过度活化的NOTCH1信号通路起促癌作用,其机制可能通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路参与发病过程,这为肾透明细胞癌的治疗提供了新思路。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路调控Th17细胞的研究进展

CD4⁺ T细胞是一类在免疫反应中发挥重要作用的免疫细胞,它在激活后可分化为Th1、Th2、Th17和Treg等细胞亚群。其中Th17细胞是一类新型CD4⁺ 效应T细胞,在宿主防御各种病原体和炎症发病机制中发挥重要作用。PI3K/AKT/mTOR信号通路可以调控细胞的新陈代谢、增殖、分化和生存等生命过程,并参与肿瘤、自身免疫性疾病等的发生。本文针对PI3K/AKT/mTOR信号通路调控Th17细胞的研究进展进行综述。     

lncRNA PTPRG-AS1通过调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)蛋白酪氨酸磷酸酶受体G基因反义链1(PTPRG-AS1)调控磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡中的影响.方法:qRT-PCR法检测卵巢癌组织、配对癌旁正常卵巢组织、正常卵巢上皮细胞HOSE和3种卵巢癌细胞株PTPRG-AS1的表达水平...     

三叶青黄酮调节PI3K/Akt-eNOS信号通路对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的 分析三叶青黄酮调节PI3K/Akt-eNOS信号通路对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法将对数生长期T24细胞分为空白对照组、高浓度组、低浓度组,空白组在处理时采用空白培养基培养,高浓度组和低浓度组细胞在处理时采用100μg/mL和50μg/mL浓度三叶青黄酮干预;检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性,检测细胞中PI3K、Akt、p-Akt、eNOS、β-actin蛋白表达水平。结果 空白组、低浓度组和高浓度组T24细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性存明显差异,其中高浓度组细胞增殖、迁移和侵袭活性最低,高浓度组细胞凋亡活性最高,且组间两两比较差异有统计学意义(P0.05);Hoechest染色结果显示,空白组细胞细胞核相对较为完整,且颜色均一,低浓度组和高浓度组细胞细胞核出现坍缩,出现裂解碎块并可见凋亡小体,且随给药浓度增高,细胞凋亡越高;空白组、低浓度组和高浓度组T24细胞PI3K、p-Akt、eNOS水平存明显差异,其中高浓度组细胞PI3K、pAkt、eNOS水平最低,且组间两两比较均存统计学意义(P0.05)。结论 三叶青黄酮可通过调节PI3K/Akt-eNOS信号通路实现抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。     

来氟米特通过 PI3K／Akt／mTOR信号通路诱导大鼠系膜细胞凋亡的作用

目的：探讨来氟米特（A771726）对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响及可能机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组（加入含5％胎牛血清的DM EM 培养液）、A771726组（在对照组基础上加入 A771726,使其终浓度为50μg／mL）、LY294002组（在正常对照组基础上加入LY294002,使其终浓度为2μg／mL）,LY294002＋A771726组（先加2μg／mL的LY294002干预系膜细胞4 h后,加入50μg／mL的A771726）,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,采用免疫荧光法检测各组干预48 h对大鼠系膜细胞中mTOR蛋白表达的影响,采用免疫印迹法检测各组干预48 h后对大鼠系膜细胞中Caspase‐3表达的影响。结果与正常对照组比较,A771726、LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与 A771726组比较,LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与LY294002组比较,LY294002＋A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率明显升高,mTOR蛋白表达明显降低,Caspase‐3蛋白表达明显增加。结论来氟米特可能通过下调PI3K／Akt／mTOR信号通路而诱导大鼠肾小球系膜细胞的凋亡,且来氟米特可协同LY294002共同诱导大鼠系膜细胞的凋亡。     

二氢杨梅素通过PI3K/Akt信号通路调节巨噬细胞极化抑制卵巢癌细胞的侵袭

目的观察二氢杨梅素(DMY)处理的RAW264.7巨噬细胞对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响。方法用DMY(60 mg/L)处理RAW细胞24 h,再将SKOV3和RAW细胞非接触共培养24 h。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和Transwell检测SKOV3细胞增殖和侵袭能力。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液上清中细胞因子水平。Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)和p-Akt的表达。结果与SKOV3组比较,RAW+SKOV3组细胞增殖和侵袭细胞数显著升高(P＜0.05)。与RAW+SKOV3组比较,DMY+RAW+SKOV3组细胞增殖和侵袭细胞数显著减少(P＜0.05)。与RAW组比较,DMY+RAW组干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α水平、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达均显著升高,而白细胞介素-10和转化生长因子-β水平显著降低(P＜0.05)。结论DMY抑制巨噬细胞诱导的SKOV3细胞增殖和侵袭,其机制可能与通过PI3K/Akt通路调节巨噬细胞极化有关。     

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

linc00346调控膀胱癌细胞增殖的分子机制

目的：探讨长链非编码RNA-linc00346 调控膀胱癌细胞增殖的分子机制。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测膀胱尿路上皮癌组织中linc00346 mRNA和PTEN mRNA的表达情况;沉默膀胱癌T24细胞系内linc00346的表达,通过RT-PCR检测T24细胞内的linc00346 mRNA和PTEN mRNA表达变化情况,通过蛋白质印迹（Western blot）法检测T24细胞内PTEN蛋白和PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt蛋白的表达情况;CCK-8实验检测各组T24细胞的增殖能力。结果：与膀胱正常组织比较,膀胱尿路上皮癌组织中linc00346 mRNA表达上调,而PTEN mRNA的表达水平降低（均P ＜0.05）。沉默linc00346表达后,T24细胞内linc00346 mRNA的表达水平显著下降,PTEN mRNA的表达水平显著上调,PTEN蛋白水平升高,p-Akt蛋白水平降低（均P ＜0.05）;给予PTEN特异性抑制剂SF1670处理后,PTEN蛋白水平显著下调,p-Akt蛋白水平明显增加（均P ＜0.05）。沉默linc00346表达后,T24细胞的增殖能力明显受到抑制,给予SF1670处理后细胞的增殖能力显著增强（均P ＜0.05）。结论：linc00346可以增强膀胱尿路上皮癌细胞的增殖能力,其作用机制可能是通过抑制PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

丹参素经PI3K/AKT信号通路改善血管性痴呆小鼠认知功能的机制研究

目的：基于磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路探讨丹参素对血管性痴呆小鼠认知功能的改善情况。方法：将60只昆明种小鼠按随机数字表法分为6组：正常对照组、模型组、阳性对照组（尼莫地平注射液,2 mg·kg-1）、丹参素低（10 mg·kg -1）、中（20 mg·kg -1）、高（30 mg·kg -1）剂量组,每组10只。模型组、阳性对照组、丹参素低、中、高剂量组小鼠构建血管性痴呆模型。建模成功后,从第1天开始丹参素各剂量组和阳性对照组腹腔注射相应的药物,正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,持续28d。给药结束后对小鼠进行水迷宫实验,检测小鼠脑损伤相关因子血清星形胶质源性蛋白（S-100β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量,苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠脑组织结构,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测小鼠脑组织中PI3K、AKT蛋白水平。结果：正常对照组小鼠脑组织结构正常,细胞排列整齐,无明显空泡结构;模型组可见明显的脑白质受损,细胞排列紊乱,视野中大量空泡结构;在给予丹参素干预后,随着丹参素给药剂量的增加,可见脑组织细胞排列逐渐变整齐,空泡结构逐渐减少。与正常对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量显著升高,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,丹参素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量显著降低,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;随着丹参素给药剂量的增加,小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量逐渐降低,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平逐渐升高,具有量-效关系（P<0.05）;丹参素高剂量组和阳性对照组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：丹参素可通过调节PI3K/AKT信号通路及相关细胞因子,改善血管性痴呆小鼠的认知功能障碍。     

芸香苷通过 PI3K/AKT 信号通路抑制 H2 O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的：探讨 PI3K/ AKT 信号通路是否参与芸香苷对过氧化氢(H2 O2)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的抑制作用。方法将培养的 HLEC 分为4组：空白对照组、H2 O2组、芸香苷组、LY294002组;采用 MTT 法测细胞存活率,Western blot 法检测 p-AKT 及 AKT 的表达,Annexin V-FITC/ PI 双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果H2 O2可诱导 HLEC 发生凋亡,与 H2 O2组相比,芸香苷组不仅使 AKT 的磷酸化水平显著升高,还降低了细胞凋亡率(P<0．01);在 LY294002干预组, PI3K/ AKT 信号通路的特异性阻断剂 LY294002明显抑制了芸香苷组中各项指标的变化,差异有统计学意义(P <0．01),但与 H2 O2组比较,差异无统计学意义。结论芸香苷抑制 H2 O2诱导的 HLEC 凋亡可能与 PI3K/ AKT 信号通路有关。     

运动训练调节PI3K/AKT信号通路抑制凋亡改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

目的 探讨运动训练通过调节PI3K/AKT信号通路抑制凋亡改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为3组, 即假手术组(Sham)、模型组(MCAO)及运动训练组(EX+MCAO), 每组12只。运动训练采用跑台跑步方法, 在术后24小时进行跑台训练, 连续4周。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型, 运动训练后分别检测各组大鼠神经功能评分, TTC染色观察脑梗死体积, 用HE染色检测脑组织损伤, Tunnel染色检测细胞凋亡, Western blot法检测海马组织PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果 与Sham组比较, MCAO组大鼠神经功能评分显著增加, 脑梗死体积明显增大, 脑损伤加重, p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平显著降低。与MCAO组比较, 运动训练组大鼠的神经功能损伤明显改善, 脑梗死体积减小, 脑损伤减轻, p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平显著升高。结论 运动训练可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡的过度发生, 从而减轻脑缺血再灌注损伤, 起到脑保护作用。