基于代谢组学技术的黄连解毒汤配伍规律研究

目的:研究黄连解毒汤组方中君、臣、佐、使药的配伍规律.方法:取雄性Wistar大鼠54只,分为空白组、模型组、黄连组、黄连-黄芩组、黄连-黄芩-黄柏组、黄连解毒汤组;模型组和各给药组于大鼠背部皮下注射2,4-二硝基苯酚( 25 mg·kg-1大鼠体质量)造模;各给药组干造模前30 min ig给予黄连、黄连-黄芩、黄连-黄芩-黄柏、黄连解毒汤1次(分别为7.2,12,16.8,24 g生药/kg大鼠体质量);收集造模后1,3,5,7,13,22 h各时间点的尿液,尿液样品进UPLC-TOF/MS检测分析,质谱数据采用MarkerLynx XS软件统计分析,并采用主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析法(OPLS-DA)对获得的数据进行处理.结果:在得分图中,黄连组与模型组混为一组,黄连-黄芩组与模型组较接近,离空白组较远,黄连-黄芩-黄柏组与模型和空白组显著聚类区组,并且与空白组较接近,黄连解毒汤组与模型组和空白组显著聚类区组,与它们的距离相当;同时黄连、黄连-黄芩、黄连-黄芩-黄柏和黄连解毒汤各给药组分别对33,15,36,40个生物标志物具有干预作用,综合评价各实验组对热病证候的整体代谢和生物标志物的干预作用,结果黄连解毒汤全方作用最好,黄连-黄芩-黄柏次之,黄连作用第三,黄连-黄芩的干预作用最弱.结论:黄连作为方中君药发挥主要的药理作用,黄柏和栀子作为佐使药也发挥了其各自的作用,但黄芩作为臣药的地位有待商榷.     

基于LC-MS技术的连朴饮干预慢性萎缩性胃炎模型大鼠血清代谢组学分析＊

目的 研究连朴饮（Lian Pu Yin Decoction，LPY）对慢性萎缩性胃炎（Chronic atrophic gastritis，CAG）模型大鼠的干预作用，并探索其作用机制。方法 采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍（MNNG）自由饮用，雷尼替丁合并酒精灌服刺激方法，同时施以饥饱失常等，复制大鼠CAG模型，通过观察大鼠一般状况、胃窦组织形态病理变化评价LPY对模型大鼠的干预作用；采用高效液相色谱串联质谱（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS）技术，结合多元统计分析方法，对大鼠血清进行代谢组学分析，探讨LPY干预CAG的作用机制。结果 LPY可改善模型大鼠一般状况，胃窦黏膜组织病理学情况。与正常组相比，模型组筛选得到显著差异代谢物有9种，主要使维生素B6代谢、氨基酸代谢发生紊乱。LPY可显著调节模型组差异代谢产物8种：Kynurenic acid，1-Methylnicotinamide、Indole-3-carboxyaldehyde和5''-S-Methylthioadenosine在LPY组中含量显著上调，Guanosine，Indoleacetic acid，2-Hydroxyisocaproic acid和Uracil在LPY组中含量显著下调。特别是上调了色氨酸肠道微生物代谢物Indole-3-carboxyaldehyde调节了机体的炎症免疫反应；LPY可调节烟酸和烟酰胺代谢、氨基酸代谢等，尤其与半胱氨酸和蛋氨酸代谢高度相关。结论 LPY对CAG具有治疗作用，其机制可能与调节烟酸盐代谢通路、氨基酸代谢通路有关。其中，半胱氨酸和蛋氨酸代谢可能是连朴饮治疗CAG作用机制的核心通路。     

参麦方对于大鼠尿液代谢组学影响的初步研究

目的:运用代谢组学方法研究大鼠灌服参麦方后机体内源性代谢物的变化,探讨参麦方在体内的作用及其机制。方法:通过超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC/TOF-MS)分析药物作用后大鼠尿液的代谢物图谱,采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)寻找各组代谢物差异,变量重要性投影(VIP)及t检验筛选潜在内源性标志物。结果:鉴定出16种内源性代谢物。结论:结果表明参麦方可通过改变色氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等氨基酸代谢,脂肪酸、嘌呤以及能量代谢来影响机体的生理功能从而发挥功效。该研究为参麦方在疾病模型的分析以及临床应用方面提供了依据。     

冠心病血瘀证代谢组学研究进展＊

冠心病血瘀证的生物学基础研究是证候客观化研究的热点问题之一，代谢组学技术通过对机体代谢组的识别和量化研究，系统探索机体正常生理下或病理刺激下的动态变化规律，有助于揭示病证结合的生物学基础。本文综述了冠心病代谢组学研究概况，分析了冠心病血瘀证血液与尿液差异代谢产物谱，总结了冠心病血瘀证潜在的诊断代谢标志物，探讨了活血化瘀中药干预冠心病血瘀证的作用机制，以期为未来冠心病血瘀证的生物学基础研究与药物研发提供新的启发。     

代谢组学评价黄连对大鼠药理作用的初步研究

目的:利用HPLC-MS/MS的代谢组学分析方法研究黄连给药大鼠尿液的代谢物变化,寻找可能的生物标记物.方法:SD大鼠灌胃给予7 g·kg~(-1)黄连水提液,连续30 d,采集尿样样品,进行HPLC-MS/MS分析,利用PCA分析数据,从中找出生物标记物.结果:给药22 d,黄连组与对照组大鼠尿样代谢组有较大差异,发现了169个生物标记物,其中可能的化合物为草酰乙酸、苹果酸、2-酮戊二酸、去甲肾上腺素、花生四烯酸、5-羟吲哚乙酸等物质,这与黄连抗炎、阻止儿茶酚胺的生物合成、抑制中枢神经、降低能量代谢的药理作用相一致.结论:代谢组学可用于评价药物的药理作用.     

高脂血症大鼠造模过程中血液代谢组学研究

目的采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)代谢组学法动态观察高脂血症大鼠造模过程中血液的代谢轮廓的改变,寻找高脂血症演化过程中的生物标志物。方法将SD大鼠分成正常对照组和模型组,运用高脂乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型,并收集不同时间点的血样,采用UPLC-TOF-MS检测并进行主成分分析。结果随着造模时间的延长,高脂血症大鼠血清代谢轮廓呈现动态演变。与正常对照组比较,模型组鞘磷脂、乙酰糖蛋白、谷酰胺、3-羟基丁酸、甲硫氨酸、甜菜碱、磷脂酰胆碱、柠檬酸、乌头酸、肌酸、3-吲哚硫酸、赖氨酸、甘氨酸等21种物质发生明显改变。结论在高脂血症进展过程中,不仅大鼠血液脂质代谢发生了紊乱,而且还伴随着糖代谢、氨基酸代谢的紊乱以及炎症和氧化应激。     

基于代谢组学的抗心绞痛常见药物的比较

目的 采用基于气相色谱质谱（GC-MS）的代谢组学技术比较并评价单硝酸异山梨酯,曲美他嗪,复方丹参滴丸三种药物抗心绞痛作用机制.方法 40只SD大鼠分为模型组、正常对照组、单硝酸异山梨酯组、曲美他嗪组、复方丹参滴丸组5组,采用GC-MS技术对不同组别大鼠的血浆进行分析.并利用SIMCAP软件对不同组之间代谢产物含量变化进行主成分分析（PCA）和偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）,初步揭示心绞痛生物标志物,为心绞痛药物筛选提供新的方法.结果 代谢组学分析结果显示,模型组大鼠血浆中琥珀酸、延胡索酸、葡萄糖、柠檬酸、乳酸、尿素、甘氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸及肌苷等内源性代谢物有差异性变化（P ＜0.05）,可视为心绞痛生物标志物.PCA和PLS-DA统计结果显示曲美他嗪组距离正常对照组最近,且所能回调的标志物较其他两组多,其抗心绞痛效果较优.结论 三种药物都有明显的抗心绞痛效果,曲美他嗪效果较优;运用代谢组学技术分析了三种药物抗心绞痛有关标志物的调节作用并对其机制进行了初步比较研究,为药物药效的评价提供了新思路和新方法.     

藿香对营养性肥胖大鼠降脂的作用及其代谢组学研究＊

目的 研究藿香干预营养性肥胖大鼠的降脂作用，分析其对营养性肥胖大鼠内源性物质的影响，寻找潜在的生物标志物分析代谢途径。方法 SD大鼠，雄性，30只，按体重随机分为2组，正常组（10只）、造模组（20只），分别喂以普通饲料与高脂饲料，喂养4周，建立营养性肥胖大鼠模型；造模组按体重和血清TG含量随机分为模型组和藿香给药组。给药4周后，测量血清胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、葡萄糖（GLU）的含量。并利用高分辨质谱检测内源性代谢物信号，经分析主成分，筛选出潜在的生物标记物，应用MetPA数据库对差异化合物进行通路分析。结果 造模4周大鼠体重、Lee s指数、TG、CHOL、HDL-C、LDL-C明显高于正常组（P < 0.01），成功建立营养性肥胖大鼠模型。藿香给药干预4周，与模型组相比，藿香给药组血清中TG含量明显下降（P < 0.01）；血清代谢组学分析发现10种内源性差异化合物，主要通过氨酰基-tRNA、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，鞘脂代谢，酪氨酸代谢4种途径发挥作用。结论 藿香明显降低营养性肥胖大鼠血清TG含量，结合代谢组学分析结果发现藿香可能是通过干预蛋白质、氨基酸合成，调节氨基酸和脂质代谢来发挥降脂 “化湿”的作用。     

基于代谢组学探讨艾灸关元穴对老年大鼠肾能量代谢的影响＊

目的 通过UHPLC-Q-TOF-MS代谢组学探讨艾灸关元穴对老年大鼠肾代谢物的影响，进而为艾灸关元穴的作用机制提供参考。方法 将8月龄SD雄性大鼠设为成年对照组（8只），21月龄SD雄性大鼠随机分为老年对照组（8只）、老年金匮肾气丸组（7只）、老年艾灸组（8只）。老年金匮肾气丸组每日按体重给药，老年艾灸组每日艾灸关元穴15 min，均每周5天。实验持续13周后检测大鼠肾组织线粒体呼吸耗氧速率、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性以及血清肾功能指标，观察肾脏病理变化，结合UHPLC-Q-TOF-MS技术对大鼠的肾组织进行代谢轮廓分析，筛选代谢差异物并进行鉴定。结果 与老年对照组比较，老年艾灸组大鼠肾线粒体的呼吸耗氧速率和SDH酶的活力显著提高（P<0.01）。代谢组学结果显示，肾组织中筛选出13个共同差异化合物，分别是丁酸十二烷基酯、亚油酰胺、5-甲基四氢叶酸、PC（16∶0/22∶5（7Z，10Z，13Z，16Z，19Z））、6，8-二羟基嘌呤、1，2，3-丙烷三羧酸、3-（4-甲氧基苯基）-2-氧代丙酸、吲哚-3-乙酰甘氨酸、亚麻油酸、9，10-环氧十八烷酸、二十二碳五烯酸（22n-6）、牛磺胆酸、LysoPS （18∶0/0∶0）。结论 艾灸关元穴可通过调控老年大鼠的牛磺酸和亚牛磺酸代谢、α-亚麻酸代谢、亚油酸代谢、甘油磷脂代谢来调节肾的能量代谢。     

通阳化浊方与四妙勇安汤干预动脉粥样硬化模型家兔的粪便代谢组学比较研究＊

目的 通过粪便代谢组学技术，考察通阳化浊方与四妙勇安汤在治疗动脉粥样硬化家兔中的作用机制。方法 40只白兔，雄性，每组10只，随机分为4组，包括空白组、模型组、通阳化浊方组与四妙勇安汤组。空白组给予8周正常饮食；模型组和两个给药组以高脂饲料喂养，4周后，用球囊法手术损伤实验兔的右侧颈总动脉；两个给药组在术后，分别每日1次灌胃给予通阳化浊方和四妙勇安汤至第8周。模型组与实验组每组抽取3只家兔，采集粪便后，用LC-MS技术进行粪便代谢组学检测，运用PCA与OPLS-DA分析法来寻找差异性表达的代谢物和代谢途径。结果 相较于模型组，通阳化浊方与四妙勇安汤组分别存在59和48个差异化合物，通阳化浊方组涉及20条代谢通路，5条主要代谢通路分别为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、花生四烯酸代谢、视黄醇代谢、苯丙氨酸代谢以及淀粉和蔗糖代谢；四妙勇安汤组涉及15条代谢通路，4条主要代谢通路包括酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢、苯丙氨酸、亚油酸代谢和花生四烯酸代谢。结论 在治疗动脉粥样硬化模型家兔的过程中，通阳化浊方与四妙勇安汤在粪便代谢组学方面存在差异性代谢产物，干预相应的代谢通路，可能会对药物的作用产生影响。     

黄连解毒汤对糖尿病大鼠血清chemerin水平的影响

目的研究黄连解毒汤干预糖尿病大鼠血清chemerin水平的变化情况,初步探讨黄连解毒汤改善胰岛素抵抗的作用机制。方法实验采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素（STZ）复制大鼠糖尿病模型,连续给黄连解毒汤6周后测定空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量,同时以测定脂肪因子chemerin水平的变化。结果给予黄连解毒汤组治疗的糖尿病大鼠,其血清中FBg、TC、Tg、LDL-C水平显著低于模型组（P〈0.01）,HDL-C水平高于模型组（P〈0.01）,血清chemerin水平显著低于模型组（P〈0.01）。结论黄连解毒汤对高脂高糖饮食联合小剂量STZ所致糖尿病大鼠有一定的治疗作用,能改善胰岛素抵抗,其机制可能是通过调节脂肪因子chemerin的表达,从而降低了炎症信号通路,改善了脂肪组织的慢性炎症反应,继而改善胰岛素抵抗。     

黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠瘦素和抵抗素的影响

目的 探讨黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠脂质代谢、瘦素和抵抗素的影响。方法观察黄连解毒汤对实验性胰岛素抵抗大鼠的血脂[甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、载脂蛋白A1（apoAI）、载脂蛋白B（apoB）、游离脂肪酸（FFA）]、骨骼肌组织甘油三酯（mTG）、糖耐量（OGTT）、空腹血糖（FB6）、血清胰岛素（INS）及体重的变化,用ELISA方法检测血清瘦素和抵抗素的含量。结果 与模型组比较,黄连解毒汤组大鼠血清TC、TG、apoB、FFA、mTG及FBG水平均明显降低,而HDL-C与apoA1水平显著升高,OGTT改善,大鼠体重减轻,瘦素和抵抗素明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论 黄连解毒汤能调节胰岛素抵抗大鼠脂质代谢,同时能降低瘦素和抵抗素的水平,这可能与其改善胰岛索抵抗有关。     

黄连解毒汤对自发性高血压大鼠血栓前状态的影响

目的:观察黄连解毒汤对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血栓前状态(prothromboticstate,PTS)的影响。方法:24只12周龄雄性SHR随机分为黄连解毒汤组(15 g·kg-1)、卡托普利组(0.0175 g·kg-1)和模型组3组,8只同龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为空白对照组,通过BP-6动物无创血压测试仪测定各组治疗前血压,连续ig给药6周,每日1次,第1,2,4,6周的第7天下午定时测量各组血压,6周后由腹主动脉取血,检测血清血栓素A2(TXA2),6-酮前列环素(6-K-PG),一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1),纤溶系统激活剂(t-PA),纤溶系统抑制因子(PAI-1),同型半胱氨酸(Hcy)和血管性血友病因子(vWF)。结果:黄连解毒汤可控制SHR血压,降低TXA2,ET-1,Hcy和vWF(P<0.05或P<0.01),增加6-K-PG和NO(P<0.05或P<0.01)。结论:黄连解毒汤可降低SHR的血压,改善其PTS。     

黄连解毒汤对高脂血症大鼠血脂及氧自由基代谢的影响

目的:探讨黄连解毒汤(Huanglian Jiedu Decoction,HJD)对实验性高脂血症大鼠血脂及氧自由基代谢的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,立普妥组(0.2 mg·kg-1),HJD低、高剂量组(6,12 g·kg-1)。除正常对照组外,其他组大鼠喂饲高脂饲料建立高脂血症模型。连续ig 8周后,测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TAG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high-densitylipoprotein cholesterol,HDL-C)水平,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,并观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,HJD各组能明显降低实验大鼠血清TC,TG,LDL-C,MDA含量,显著提高HDL-C含量和SOD,GSH-Px活性,并能减轻肝细胞脂肪变性。结论:HJD能有效调节高脂血症大鼠血脂代谢,提高机体抗氧化能力,改善肝组织病理损害。     

黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏线粒体氧化应激的影响

目的 研究黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠氧自由基所致肝脏线粒体损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 高脂饲料喂养Wistar大鼠,建立胰岛素抵抗模型;造模成功后随机分为黄连解毒汤组、小檗碱组、硫辛酸组和模型组,各组以相应的药物干预6周;测定肝脏线粒体ATP酶、琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素C氧化酶（CCO）活性及ATP含量以观察线粒体功能及能量代谢活性;测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量以观察线粒体抗氧化能力。结果 黄连解毒汤能提高胰岛素抵抗大鼠肝脏线粒体中GSH Px、SOD、ATP酶活力,抑制MDA生成,促进能量生成代谢,增强SDH和CCO活力。结论 黄连解毒汤可以改善线粒体功能及能量代谢,增强线粒体抗氧化能力,对胰岛素抵抗大鼠肝脏线粒体损伤有明显保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抑制脂质过氧化有关。     

黄连解毒汤对荷瘤小鼠免疫调节作用的实验研究

目的：探讨黄连解毒汤对荷瘤小鼠免疫调节作用。方法：选择H22肝癌小鼠模型，通过检测免疫指标，研究黄连解毒汤对正常小鼠和模型小鼠免疫反应的影响。结果：实验组小鼠的自然杀伤细胞（NK）杀伤活性及T细胞分泌白细胞介素-4（IL-4）的能力均有显著增高（P〈0．01，P〈0．001）。结论：黄连解毒汤能增强荷瘤小鼠体内NK细胞的杀伤功能及体液免疫功能。     

黄连解毒汤治疗脓毒症的网络药理学研究

目的：探索黄连解毒汤治疗脓毒症的核心作用靶点、主要活性成分及作用机制。方法：在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)以黄连、黄芩、黄柏、栀子为关键词分别检索,按照口服生物利用度(OB)≥30%,类药性(DL)≥0.18的条件筛选,获得黄连解毒汤各中药的活性成分及其作用靶点;通过在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、GeneCards、治疗靶点数据库(TTD)检索脓毒症的疾病靶点;将预测到的成分及其疾病靶点运用Cytoscape软件进行中药-成分-疾病-靶点网络构建及分析,筛选核心靶点及主要活性成分,通过STRING数据库结合Cytoscape软件绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并进行网络拓扑学分析,通过R语言运行后对核心靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路注释分析,设定阈值P<0.05,Q<0.05,筛选具有显著性差异的生物过程及信号通路。结果：筛选出黄连解毒汤78个成分和841个药物靶点;这些共同靶点涉及147条生物过程包括TNF信号通路、趋化因子信号通路、HIF-1信号通路、细胞凋亡通路等代谢通路,内分泌抵抗等与内分泌系统...     

黄连解毒汤对糖尿病大鼠肠道二糖酶活性的影响

目的研究黄连解毒汤对糖尿病大鼠的降血糖作用及对糖尿病大鼠肠道二糖酶活性的影响。方法链脲佐菌素(ip)建立糖尿病大鼠模型;糖尿病大鼠ig给予黄连解毒汤提取物治疗1个月,观察治疗后血糖变化,测定各肠段肠内容物中的二糖酶(蔗糖酶、麦芽糖酶、乳糖酶)活性。正常大鼠小肠注入麦芽糖,30、60、120 min后取门静脉、外周静脉血,测定门静脉与外周静脉血中葡萄糖浓度差值。结果高、低剂量黄连解毒汤治疗后糖尿病大鼠的血糖分别降低(42.2±4.9)%、(23.1±3.8)%;黄连解毒汤治疗后糖尿病大鼠十二指肠、空肠和回肠的麦芽糖酶活性分别降低(32.2±4.3)%、(26.5±2.9)%、(36.5±5.2)%;蔗糖酶活性分别降低(33.3±3.7)%、(32.8±4.6)%、(27.4±3.3)%,乳糖酶活性分别降低(35.4±4.2)%、(17.9±2.3)%、(6.3±1.8)%。黄连解毒汤能减小大鼠小肠注入麦芽糖后门静脉与外周静脉血中葡萄糖浓度差值。结论黄连解毒汤能显著降低糖尿病大鼠血糖,其降糖机制可能与抑制糖尿病大鼠肠道二糖酶活性有关。     

黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠脾脏T细胞亚群的干预

目的:研究黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠免疫状态的影响。方法:采用STZ腹腔注射联合高糖高脂饲料喂养Wistar大鼠,建立2型糖尿病模型。治疗6周后,称重脾脏并计算脾脏指数;免疫组化方法检测脾脏CD+4、CD+8T细胞亚群的表达,计算CD+4/CD+8比值。结果:黄连解毒汤治疗组大鼠体重显著下降,脾脏指数明显升高,脾脏CD+4、CD+8的表达显著增加(P<0.01),CD+4/CD+8比值显著升高(P<0.01),且明显优于二甲双胍对照组(P<0.01)。结论:黄连解毒汤可以有效控制2型糖尿病大鼠体重,对2型糖尿病引起的T细胞亚群异常有良好的调节作用。