肿瘤坏死因子-α增强肝肾综合征时肾脏Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达

目的: 通过观察TNF-α对肾组织中Ⅰ型IP3R表达的影响来探讨肝肾综合征的发病机制.方法: 制备大鼠离体肾灌注模型,随机分成对照组(A组)、肝素处理组(B组)、TNF-α处理组(C组),留取的标本应用免疫组织化学技术、Western blot及实时定量PCR检测肾组织Ⅰ型IP3R蛋白的定位、表达及mRNA的变化.结果: Ⅰ型IP3R主要分布于肾小球系膜细胞和血管平滑肌细胞的胞质内.免疫组化结果显示,C组与A组相比棕褐色颗粒着色的阳性细胞明显增多,有显著性差异(U=2.26,P＜0.05);B组与A组相比阳性染色细胞无明显减少(P＞0.05);Western blot结果与免疫组织化学结果相一致:C组与A组相比Ⅰ型IP3R蛋白表达水平明显增高,有显著性差异(1.89±0.11vs 0.55±0.03,P＜0.05);B组与A组相比无显著性差异(P＞0.05);实时定量PCR结果显示:C组与A组相比Ⅰ型IP3R mRNA的表达水平明显增高,有显著性差异(7.99±0.12 vs 1.00±0.05,P＜0.05);B组与A组相比无显著性差异(P＞0.05).结论: TNF-α可增强肾小球系膜细胞和血管平滑肌细胞Ⅰ型IP3R蛋白的表达,且Ⅰ型IP3R mRNA也呈增加趋势.     

血管平滑肌细胞增殖过程中钙调神经磷酸酶对三磷酸肌醇受体Ⅰ型表达的调节

目的研究血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖过程中钙调神经磷酸酶(CaN)对三磷酸肌醇受体Ⅰ型(IP3R Ⅰ) 表达的调节.方法植块法分离培养VSMCs , 比色法 (MTT法) 测定VSMCs 的增殖,荧光染色法测定 VSMCs 的活性,RT-PCR检测IP3R Ⅰ型mRNA转录水平, 免疫印迹法(Western blot)测定IP3RⅠ型蛋白质翻译水平.结果苯肾上腺素(PE)组VSMCs吸光度显著高于对照组(P<0.05),环孢素A (CsA) 组和CsA PE组VSMCs吸光度显著低于对照组(P<0.05).PE组活细胞百分数与对照组无显著差异(P>0.05),CsA 组和CsA PE组活细胞百分数显著低于对照组(P<0.05).PE组IP3R Ⅰ型mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),CsA组和CsA PE组mRNA水平显著低于对照组(P<0.05).PE组IP3R Ⅰ型蛋白质表达水平显著高于对照组(P<0.05),CsA 组和CsA PE组蛋白质表达水平显著低于对照组(P<0.05).结论 CaN调节VSMCs增殖与活性,并且在转录水平和翻译水平调节IP3R Ⅰ的表达.     

牛磺酸对大鼠胰岛活性和功能的保护作用

目的:探讨牛磺酸(taurine,Tau)在大鼠胰岛培养过程中对胰岛的保护作用及其机制.方法:实验Wistar大鼠分为2组,RPMI 1640组和牛磺酸组(Tau组).流式细胞仪检测Caspase-9和磷酸化Akt阳性细胞比例,观察牛磺酸对Caspase-9及Akt的影响.RT-PCR检测单纯1640组和Tau组胰岛细胞的TNF-α、IL-1β、NF-κB和HO-1基因的表达.结果:胰岛单纯用RPMI 1640培养1 wk后激活的Caspase-9与加入牛磺酸后相比有统计学意义(41.03%±4.46% vs 23.85%±3.09%,P<0.05).胰岛分离纯化后有明显的TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、NF-κB mRNA、HO-1mRNA表达,随着培养时间的延长TNF-αmRNA、IL-1β mRNA、NF-κB mRNA表达逐渐减弱,HO-1 mRNA表达逐渐增强.加入牛磺酸后胰岛TNF-α mRNA、IL-1β mRNA、NF-κB mRNA表达明显减弱,在6 h,72 h及1 wk时(TNF-α:0.34±0.02.0.24±0.01,0.19±0.02;IL-1β:0.24±0.09,0.09±0.01,0.05±0.01;NF-κB:1.76±0.30,0.93±0.15,0.37±0.02)和单纯培养组(TNF-α:0.57±0.1,0.39±0.02,0.29±0.02;IL-1β:0.34±0.02,0.24±0.01,0.19±0.02;NF-κB:2.52±0.24.1.21±0.14,0.76±0.07)比较差异具有显著性(均P<0.05).HO-1mRNA的表达较单纯培养组明显增强且随着时间的延长表达更明显(3.74±0.10,4.33±0.29.5.28±0.29 vs 2.46±0.30,3.13±0.07,3.59±0.22;均P<0.05).结论:牛磺酸能抑制TNF-α、IL-1β和NF-κB转录并活化Akt,抑制细胞凋亡.     

肿瘤坏死因子-α对大鼠离体灌注肾血管收缩的影响

目的观察肿瘤坏死因子(TNF)-α对肾血管收缩的影响及机制。方法 56只大鼠制备离体灌注肾模型,随机分为8组(n=7):A1组:Kreb液灌流;A2组:Kreb液+TNF-α灌流;B1组:Kreb液+Verapamil灌流;B2组:Kreb液+Verapamil+TNF-α灌流;C1组:无钙Kreb液灌流;C2组:无钙Kreb液+TNF-α灌流;D1组:无钙Kreb液+2-APB灌流;D2组:无钙Kreb液+2-APB+TNF-α灌流。各组均在刺激期加内皮素(ET)。灌流结束后,计算肾脏水肿率,HE染色观察肾小球及肾小管形态、结构。结果各组基础灌注压比较无显著差异(P0.05)。A1、A2、B1、B2、C1、C2组ET刺激后,肾灌注压较基础压均明显升高(P0.05);A2、B2、C2组灌注压升高值分别显著高于A1、B1、C1组(P0.01)。D1、D2组ET刺激后,肾灌注压均略升高,但与基础灌注压比较无显著差异(P0.05);两组灌注压升高值比较无显著性差异(P0.05)。8组肾脏的水肿率均低于30%,灌流后肾脏标本切片均未发现明显的器质性损伤,与灌流前相符。结论 TNF-α可能通过上调1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)增强ET引起的肾血管收缩。     

TNF-α体外对Caco-2细胞通透性的影响及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞间通透性的影响及作用机制.方法:利用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,模型分为正常对照组(C组)和TNF-α预处理组(TNF-α组),TNF-α组根据预处理时间又分为3、6、12、24 h 4个亚组.应用电阻仪测定TNF-α预处理后各组Caco-2细胞的跨上皮细胞电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)变化;罗丹明-鬼笔环肽直接染色观察细胞骨架改变;同时采用荧光素酶报告基因检测NF-κB活性.结果:TNF-α各亚组TEER均降低,与C组比较均有显著性差异(均P<0.05),其中TNF-α24 h亚组TEER降低明显.与C组及TNF-α 3、6、12 h亚组比较有显著性差异(均P<0.05);TNF-α 3、6、12 h亚组NF-κB活性增高.与C组比较均有显著性差异(均P<0.05),且TNF-α12 h亚组NF-κB活性明显增高,与C组及TNF-α 3、6、24 h亚组比较均有显著性差异(均P<0.05);罗丹明-鬼笔环肽直接染色可见C组的F-actin沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,100 μg/L TNF-α预处理后导致F-actin荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布.结论:TNF-α导致Caco-2细胞问的通透性增加.其机制可能与NF-κB活化及F-actin重组有关.     

TLR4介导小鼠小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制研究

目的研究TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制。方法从C57BL/6J小鼠中提取分离原代小胶质细胞,分组1中,A组:小胶质细胞;B组:小胶质细胞+阴性siRNA转染;应用C组:小胶质细胞+TLR4-siRNA转染。应用Q-PCR和Western Blot检测分组1中TLR4的表达。分组2中,D组:小胶质细胞+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);E组:小胶质细胞+自噬抑制剂(3-MA);F组:小胶质细胞+control-siRNA+3-MA;G组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);H组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+3-MA。Western Blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TLR4、MyD88和核转录因子(NF-κB)蛋白表达。ELISA检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 (1)A组和B组TLR4 mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与B组相比,C组TLR4 mRNA和蛋白表达水平下调(P <0.05)。(2)D组、E组和F组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05);与D组相比,G组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05);与F组相比,H组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05)。E组和F组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平无明显变化(P>0.05);与F组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05);与G组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05)。结论 TLR4-siRNA可抑制TLR4介导的小胶质细胞自噬,从而减轻自噬引起的脑出血炎症损伤。     

食用白酒灌胃后大鼠胃黏膜的抗损伤作用

目的:观察食用白酒灌胃后,大鼠胃黏膜对无水乙醇损伤的反应及前列腺素E2(PGE2)、转化生长因子α(TGF-α)的表达情况.方法:SD大鼠36只,分别采用食用白酒530±20mL/L(A组),乙醇530mL/L(B组)、生理盐水(C组)按5mL/kg隔日给大鼠灌胃,在1wk末、1mo末处死动物,对比观察胃黏膜的Guth积分;用免疫组织化学方法测定胃黏膜中TGF-α的表达强度.另取36只大鼠,按以上相同处理后用酶联免疫方法测定胃黏膜中PGE2水平.结果:胃黏膜损伤程度由轻到重依次为A,B,C组,A,B,C组1wkGuth积分分别为26.5±6.4,40.5±8.1,69.3±4.3,两两比较均有统计学差异(P<0.05);A,B,C组1moGuth积分分别为34.8±8.0,54.8±8.0,74.8±3.1,两两比较均有统计学差异(P<0.05).1wkA,B组胃黏膜组织内PGE2水平与C组相比明显增高(17.2±1.8,16.6±1.1ng/Lvs13.0±1.5ng/L,P<0.05),A组与B组相比无差异(P>0.05);1mo后A组PGE2值下降,与C组相比无差异(P>0.05),而A,C组与B组相比均有差异(15.7±1.4,14.6±1.9ng/Lvs18.5±2.7ng/L,P<0.05).TGF-α表达1wkA,B组与C组有统计学差异(均P=0),A组与B组无差异;1moA,B,C组两两比较有差异(P=0.013,0.001,0).PGE2水平、TGF-α表达强度1wk与1mo比较,在A,C组差异有统计学意义(P<0.05);B组前后无差异.结论:食用白酒及乙醇对胃黏膜均可产生抗损伤作用;同时胃黏膜PGE2水平增高、TGF-α表达增强,PGE2,TGF-α在胃黏膜适应性保护过程中起到重要作用.     

血管平滑肌细胞增殖过程中钙调神经磷酸酶对三磷酸肌醇受体Ⅰ型表达的调节

目的研究血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖过程中钙调神经磷酸酶(CaN)对三磷酸肌醇受体Ⅰ型(IP3RⅠ)表达的调节。方法植块法分离培养VSMCs,比色法(MTT法)测定VSMCs的增殖,荧光染色法测定VSMCs的活性,RT-PCR检测IP3RⅠ型mRNA转录水平,免疫印迹法(Westernblot)测定IP3RⅠ型蛋白质翻译水平。结果苯肾上腺素(PE)组VSMCs吸光度显著高于对照组(P<0·05),环孢素A(CsA)组和CsA PE组VSMCs吸光度显著低于对照组(P<0·05)。PE组活细胞百分数与对照组无显著差异(P>0·05),CsA组和CsA PE组活细胞百分数显著低于对照组(P<0·05)。PE组IP3RⅠ型mRNA表达水平显著高于对照组(P<0·05),CsA组和CsA PE组mRNA水平显著低于对照组(P<0·05)。PE组IP3RⅠ型蛋白质表达水平显著高于对照组(P<0·05),CsA组和CsA PE组蛋白质表达水平显著低于对照组(P<0·05)。结论CaN调节VSMCs增殖与活性,并且在转录水平和翻译水平调节IP3RⅠ的表达。     

活血化瘀注射液Ⅰ号预处理与缺血预处理改善肝缺血再灌注损伤

目的:研究活血化瘀注射液Ⅰ号(HHI-Ⅰ)预处理与缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)对大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤的改善作用,并比较两者的作用效果.方法:健康♂SD大鼠80只,随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IP组)、HHI-Ⅰ预处理组(HHI-Ⅰ组),每组20只.建立大鼠部分肝缺血模型,各组在I/R后1,3,6,24 h分别取材,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平;取左肝测组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.I/R后1 h RTPCR检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达,I/R后3 h行组织学观察.结果:I/R组、IP组、HHI-Ⅰ组的ALT,AST,LDH活性、MDA值和TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平均明显高于Sham组.IP组、HHI-Ⅰ组低于I/R组.HHI-Ⅰ组所有时间点ALT,AST,LDH明显低于IP组(ALT:2378.8±303.4 nkat/Lvs 2840.6±248.4 nkat/L;AST:2887.2±270.1nkat/L vs 4567.6±275.1 nkat/L;LDH:10550.4±710.1 nkat/L vs 12164.1±735.1 nkat/L;P均＜0.05).HHI-I组MDA值明显低于IP组(17.35±1.39 nmol/g vs 21.66±1.84 nmol/g,P＜0.05).HHI-Ⅰ组TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平低于IP组(TNF-α:0.54±0.06 vs 0.78±0.08;ICAM-1:0.43±0.03 vs 0.69±0.11,P均＜0.01).各组SOD值均低于Sham组(P＜0.05),IP组、HHI-Ⅰ组均高于I/R组(P＜0.05),HHI-Ⅰ组SOD(1,3,6 h)明显高于IP组(136.00±12.50 nmol/g vs 124.70±9.32 nmol/g,P＜0.05).Sham组光镜下肝小叶结构正常;I/R组肝小叶结构紊乱,肝细胞水肿变性;IP组肝细胞水肿明显,部分肝细胞变性;HHI-Ⅰ组肝小叶结构基本正常,肝细胞无明显水肿.结论:HHI-Ⅰ预处理与IP均可改善I/R对肝脏造成的损伤,前者的效果优于后者.HHI-Ⅰ的保护机制可能在于改善肝脏微循环,减轻组织缺氧状态,并通过抑制TNF-α和ICAM-1等细胞因子和细胞黏附分子的转录表达,减少肝组织中中性粒细胞的浸润.     

N-乙酰半胱氨酸对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对重症急性胰腺炎(severe acute pan-creatitis,SAP)大鼠肝损伤的保护作用及作用机制.方法:Wistar大鼠42只随机分为3组,SAP组(SAP,n=18),采用逆行十二指肠胰胆管注射50 g/L牛黄胆酸钠溶液制备SAP模型;SAP+NAC组(SAP+NAC,n=18),建模前2 h给予NAC 300 mg/kg体质量预处理;假手术组(SO,n=6).建模成功后3、6和12 h,分别取下腔静脉血液、胰腺和肝脏组织.光镜下观察胰腺和肝脏组织病理改变,全自动生化分析仪检测各时段血液ALT和AST水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏组织中TNF-αmRNA表达,SP免疫组化法检测肝脏组织中NF-κB活化.结果:SO组血液ALT、AST以及肝胰组织病理无显著性变化.SAP组各时间点肝胰病理改变较SO组严重.术后3、6和12 h时间点ALT及AST均较SO组显著升高(186.67±27.28,321.17±56.14,492.50±69.77 vs 36.83±7.02;255.50±44.15,343.17±43.70,425.33±58.37 vs 41.67±5.35,P<0.05或0.01);TNF-αmRNA表达均显著高于SO组(0.37±0.03,0.77±0.04,0.54±0.04 vs 0.24±0.03,P<0.05或0.01):NF-κB活性术后3、6 h均显著高于SO组(51.95±4.76.24.67±4.93 vs 9.33±2.05,P<0.05或0.01),12 h与SO组相比差异无显著性意义.SAP+NAC组各时间点肝胰组织病理改变均较SAP组减轻,术后3-12 h血液ALT及AST水平(143.67±16.62,203.33±25.41,301.17±26.82;136.33±26.27,221.50±38.31,310.50±38.17)均显著低于SAP组(P<0.05或0.01);各时间点肝脏TNF-αmRNA表达(0.25±0.03,0.50±0.05,0.43±0.03)显著低于SAP组(P<0.05或0.01);术后3-6 h NF-κB活性(37.60±6.37,12.88±2.66)均较SAP组显著降低(P<0.05).结论:NF-κB活化与TNF-αmRNA表达上调参与了SAP大鼠肝损伤过程,NAC 300 mg/kg预处理能够有效减轻SAP大鼠肝损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB活化进而下调炎性细胞因子TNF-αmRNA表达水平相关.     

14-3-3蛋白在心肌细胞缺氧预处理中的表达及意义

目的:研究14-3-3蛋白在心肌细胞缺氧预处理中的表达及意义。方法:实验用SD新生大鼠(1～3d龄),雌雄不拘,无菌取出乳鼠心脏,经分离附着组织,胰蛋白酶消化,纯化制成心肌细胞。在培养的第4天随机分为3组:正常对照组、缺氧/复氧(A/R)组、缺氧预处理(APC)组。各组分别进行以下指标观察:①心肌细胞搏动频率;②细胞存活率(MTT法);③培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;④透射电镜观察细胞超微结构;⑤Western Blotting法检测14-3-3蛋白的表达变化。RT-PCR法检测14-3-3蛋白η、σmRNA的表达变化。结果:A/R组和APC组的14-3-3蛋白表达均上调,分别是正常对照组的(3.61±0.37)倍和(5.52±0.49)倍,A/R组和APC组与正常对照组比较、A/R组与APC组比较,均P<0.01。A/R组、APC组心肌细胞14-3-3η亚型mRNA分别为正常对照组的(1.82±0.30)倍、(2.93±0.52)倍,差异均有统计学意义(P<0.01);APC组与A/R组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01)。A/R组、APC组心肌细胞14-3-3σ亚型mRNA表达量分别为正常对照组的...     

γ-干扰素对大鼠肾成纤维细胞增殖及单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的观察γ-干扰素(IFN-γ)对体外培养的大鼠肾成纤维细胞增殖和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达的影响。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞NRK-49F,分别设立对照组和浓度为1 000、2 000、3 000、4 000、5 000 U/ml的IFN-γ组,对照组使用0.9%生理盐水。采用MTT比色法检测NRK-49F细胞的增殖情况;RT-PCR和Western印迹方法检测NRK-49F细胞MCP-1mRNA和蛋白水平。结果 IFN-γ组肾成纤维细胞增殖OD值均明显高于对照组(P<0.05);IFN-γ促进NRK-49F细胞增殖呈时间依赖性(P<0.05),与浓度无关(P>0.05)。与对照组相比,IFN-γ组MCP-1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);不同浓度IFN-γ组MCP-1 mRNA表达水平无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,IFN-γ组MCP-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);不同浓度IFN-γ组间MCP-1蛋白水平无显著差异(P>0.05)。结论 IFN-γ呈时间依赖性促进NRK-49F细胞的增殖,IFN-γ可能通过上调MCP-1参与肾间质纤维化过程。     

改变血红素加氧酶-1水平对糖尿病大鼠氧化应激状态及肾功能的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对糖尿病(DM)大鼠氧化应激状态及肾功能的影响.方法 以链脲佐菌素诱导DM大鼠模型.SD大鼠分成4组:对照组、DM组、正铁血红素Hemin(HO-1)诱导剂组、ZnPP(HO-1抑制剂)组.检测血清总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)含量和尿白蛋白排泄率(UEA);RT-PCR法检测肾脏组织TNF-α和HO-1mRNA表达水平.结果 Hemin组血清总抗氧化能力与DM组相比明显增高;而给予ZnPP后DM大鼠MDA含量增加,总抗氧化能力降低;DM大鼠UEA上升(P均<0.01),并随病程延长而加重.Hemin组UEA与DM 5 w组相比已有下降趋势,但尚无统计学差异(P>0.05);ZnPP组大鼠UEA明显增高(P<0.01);与对照组相比,DM大鼠肾组织TNF-α及HO-1 mRNA表达增加;应用Hemin后DM大鼠肾脏组织TNF-α表达减少(P<0.01).结论提高DM大鼠肾脏HO-1表达水平可以改善肾组织氧化应激状态、延缓肾功能障碍.     

福辛普利拉预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的预防作用

目的:探讨福辛普利拉对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的预防作用。方法:取SD新生大鼠(1~3 d),培养成心肌细胞,在培养的第4天随机分为5组:①正常对照组,②A/R组,③0.2 mmol/L福辛普利拉预处理组(F1组),④0.6 mmol/L福辛普利拉预处理组(F2组),⑤1.8 mmol/L福辛普利拉预处理组(F3组)。分别观察各组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌细胞肌浆网钙泵(SERCA)mRNA的表达水平和心肌细胞内游离[Ca2 ]浓度。结果:①细胞搏动频率:A/R组比正常对照组明显减低(P<0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组显著加快(P<0.01),比正常对照组稍慢(P>0.05)。②细胞存活率:A/R组比正常对照组明显降低(P<0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组明显增高(P<0.01),而与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。③LDH活性:A/R组比正常对照组明显升高(P<0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组明显降低(P<0.01),与正常对照组相比虽有升高但差异无统计学意义(P>0.05)。④SER-CA mRNA的表达水平:A/R组比正常对照组mRNA表达下调,为正常对照组的(0.78±0.30)倍(P<0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组显著上调(P<0.01)。⑤心肌细胞内游离[Ca2 ]浓度:A/R组比正常对照组明显升高(P<0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组明显降低(P<0.01),而与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:福辛普利拉预处理后对A/R心肌细胞损伤具有预防作用,其机制可能与SERCA表达上调、减轻细胞内Ca2 超载有关。     

孟鲁司特钠对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠NF-κB、TNF-α mRNA表达的影响

目的探讨孟鲁司特钠对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子-α信使核糖核酸(TNF-αmRNA)表达的影响。方法选购清洁级SD成年雄性大鼠24只,以薰香烟法和气管注入脂多糖建立COPD大鼠模型,按随机数字表法分为模型组和用药组各12只。模型组给予10 ml/kg生理盐水灌胃,1次/d;用药组给予0.2 ml孟鲁司特钠灌胃,1次/d,两组均连续灌胃4 w。末次给药结束,检测两组支气管肺泡灌洗液白细胞总数和中性粒细胞(PMN)、单核巨噬细胞(AM)绝对计数及NF-κB、TNF-α、TNF-αmRNA表达情况。结果与模型组相比,用药组白细胞总数、PMN、AM计数较低(P<0.05);模型组与用药组TNF-α表达强度分别为(3.30±0.51)、(2.70±0.67),NF-κB表达强度分别为(2.90±0.61)、(2.30±0.71),差异有统计学意义(P<0.05);用药组TNF-αmRNA表达(0.50±0.07)低于模型组(0.63±0.09)(P<0.05)。结论孟鲁司特钠治疗COPD模型大鼠,能抑制NF-κB、TNF-α活性和TNF-αmRNA表达,孟鲁司特钠对COPD具有一定的疗效。     

活血化瘀注射液I号预处理与缺血预处理改善肝缺血再灌注损伤

目的研究活血化瘀注射液Ⅰ号(HHI-Ⅰ)预处理与缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)对大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤的改善作用,并比较两者的作用效果.方法健康♂SD大鼠80只,随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IP组)、HHI-Ⅰ预处理组(HHI-Ⅰ组),每组20只.建立大鼠部分肝缺血模型,各组在I/R后1,3,6,24 h分别取材,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平;取左肝测组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.I/R后1 h RTPCR检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达,I/R后3 h行组织学观察.结果I/R组、IP组、HHI-Ⅰ组的ALT,AST,LDH活性、MDA值和TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平均明显高于Sham组.IP组、HHI-Ⅰ组低于I/R组.HHI-Ⅰ组所有时间点ALT,AST,LDH明显低于IP组(ALT2378.8±303.4 nkat/Lvs 2840.6±248.4 nkat/L;AST2887.2±270.1nkat/L vs 4567.6±275.1 nkat/L;LDH10550.4±710.1 nkat/L vs 12164.1±735.1 nkat/L;P均＜0.05).HHI-I组MDA值明显低于IP组(17.35±1.39 nmol/g vs 21.66±1.84 nmol/g,P＜0.05).HHI-Ⅰ组TNF-α,ICAM-1 mRNA表达水平低于IP组(TNF-α0.54±0.06 vs 0.78±0.08;ICAM-10.43±0.03 vs 0.69±0.11,P均＜0.01).各组SOD值均低于Sham组(P＜0.05),IP组、HHI-Ⅰ组均高于I/R组(P＜0.05),HHI-Ⅰ组SOD(1,3,6 h)明显高于IP组(136.00±12.50 nmol/g vs 124.70±9.32 nmol/g,P＜0.05).Sham组光镜下肝小叶结构正常;I/R组肝小叶结构紊乱,肝细胞水肿变性;IP组肝细胞水肿明显,部分肝细胞变性;HHI-Ⅰ组肝小叶结构基本正常,肝细胞无明显水肿.结论HHI-Ⅰ预处理与IP均可改善I/R对肝脏造成的损伤,前者的效果优于后者.HHI-Ⅰ的保护机制可能在于改善肝脏微循环,减轻组织缺氧状态,并通过抑制TNF-α和ICAM-1等细胞因子和细胞黏附分子的转录表达,减少肝组织中中性粒细胞的浸润.     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

蛋白激酶C对肾小球前小动脉平滑肌细胞Ⅰ型IP3受体表达影响

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)引起的肾小球前小动脉平滑肌细胞(RASMC)内Ⅰ型三磷酸肌醇(IP_3)受体mRNA过度表达的影响。方法:通过对RASMC的分离、培养,应用核酸杂交技术分别检测在TNF-α和PKC抑制剂、TNF-α和PKA抑制剂及PKC激动剂作用下,RASMC内Ⅰ型IP_3受体mRNA的表达情况。结果:TNF-α促进RASMC内Ⅰ型IP_3受体mRNA表达增加;PKC抑制剂明显抑制TNF-α诱导的Ⅰ型IP_3受体mRNA过度表达的作用(14814.0±2029.9,11334.0±1104.9,P<0.05);PKC激动剂能增强RASMC内Ⅰ型IP_3受体mRNA表达(22554.5±2625.2,28128.0±3698.6,P<0.05);PKA抑制剂-H_(89)不影响TNF-α诱导Ⅰ型IP_3受体mRNA的表达。结论:TNF-α影响细胞内储备Ca~(2+)释放信息传递系统可能通过激活PKC作用于Ⅰ型IP_3受体基因,使Ⅰ型IP_3受体mRNA合成增加,导致Ⅰ型IP_3受体蛋白过度表达,参与促进RASMC内储备Ca~(2+)大量释放至胞质,引起肾小球前小动脉平滑肌收缩,使肾血流量减少,肾小球滤过率下降,导致肾功能异常。     

黄芪多糖对LPS损伤小肠上皮细胞的保护作用

目的:探讨黄芪多糖(APS)在内毒素-脂多糖(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)中的作用机制及对细胞因子和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:以小肠上皮细胞株IEC-6为研究对象, 将培养的细胞分为6组: 对照组、LPS组、LPS APS 50 mg/L组、LPS APS 100 mg/L组、LPS APS 200 mg/L组和LPS APS 500 mg/L组. 采用RT-PCR法检测细胞因子TNF-α和IL-8 mRNA的表达, 采用凝胶电泳迁移率法分析NF-κB蛋白活性.结果: LPS损伤IEC-6细胞后, TNF-α, IL-8 mRNA水平和NF-κB蛋白定量表达均升高, 均显著高于对照组(TNF-a: 1.26±0.06 vs 0.65±0.05, IL-8 mRNA: 1.19±0.05 vs 0.57±0.06, NF-kB: 2.76±0.07 vs 0.07±0.03, P均<0.01). 而黄芪多糖呈浓度和时间依赖性地抑制LPS诱导IEC-6细胞分泌的TNF-α, IL-8等细胞因子的mRNA的表达水平(P<0.01), 并能降低NF-κB的表达活性(P<0.01).结论:APS具有抑制LPS刺激IEC-6细胞产生的TNF-α, IL-8炎性因子的作用, 并能降低NF-κB的表达活性, 其对LPS所致的肠道损伤具有保护作用.     

肉毒碱对酒精性心肌病心肌代谢和重构的影响及机制研究

目的 观察肉毒碱对酒精性心肌病(ACM)发病过程中代谢紊乱及心脏重构的防治机制及作用.方法 将实验动物分为3组:酒精(A)组、酒精/药物(B)组和对照(C)组.检测血清游离脂肪酸(FFA)、肉毒碱含量,测定心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和PPARγ、类维甲酸受体(RXR)a、肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)、中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)的mRNA和蛋白表达.结果 (1)与C组比较,A组和B组FFA含量升高,肉毒碱含量下降,PPARα、RXRα、CPT-Ⅰ和MCAD的mRNA和蛋白表达量随ACM进展逐渐减少,A组比B组更为显著(P<0.05).(2)在2和4个月时,A、B和c组PPA脚mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).6个月后B组PPARγ表达量增加,A组表达降低,和C组比较,差异均具有统计学意义(A比C,P<0.01;B比C,P<0.05).结论 ACM进展中发生心肌能量代谢紊乱和心脏重构,肉毒碱可能通过上调PPARα、RXRα、CPT-Ⅰ和MCAD改善心肌代谢障碍,通过上调PPARγ预防心脏重构.