HO-1在造影剂所致肾小管上皮细胞损伤中的作用

目的:探讨血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)在造影剂所致肾小管上皮细胞损伤中的作用.方法:体外培养的HK-2细胞,分为正常对照组、甘露醇对照组、造影剂损伤组、钴原卟啉(CoPP)处理组、锌原卟啉(ZnPP)处理组.比色法测定细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,四甲基偶氮唑(methyl ...     

肾小管上皮细胞转分化类型及其在肾脏疾病进展中的作用

The normal shape and functions of renal tubular epithelial cells are very important for keeping renal function. Under pathological conditions, renal tubular epithelial cells transform to myofibroblast or immunocytes. The transdifferentiation of renal tubular epithelial cells acts in the progresses of many kidney diseases, such as diabetic nephropathy and lupus nephritis. In this review, we summarize the types of transdifferentiation of renal tubular epithelial cells and its roles in kidney diseases.     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1表达的影响

目的:通过观察甲状旁腺素(PIH)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分别用不同浓度的PTH(10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L)作用于HK-2细胞48 h,以及10-8 mol /L作用于HK-2细胞不同时间(12、24、48、72 h).应用RT-PCR法检测HK-2细胞内α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HK-2细胞表达α-SMA阳性细胞百分数,Western blot法检测细胞内α-SMA的蛋白表达水平.结果:(1)RT-PCR结果表明,PTH呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达(P＜0.01),且两者之间呈正相关(P＜0.05).(2)免疫细胞化学结果表明,PTH可增加表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分数,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).(3)Western blot结果表明,PTH 可增加HK-2细胞α-SMA的蛋白表达量,也呈剂量和时间依赖性(P＜0.01).结论:PTH可通过促进肾小管上皮细胞转分化以及TGF-β1的表达促进肾小管间质纤维化.     

多发性骨髓瘤本周氏蛋白体外对肾小管上皮细胞转分化作用的研究

目的：体外研究多发性骨髓瘤（MM）患者尿本周氏蛋白（BJP）对肾小管上皮细胞（TEC）的转分化作用以探讨MM肾损害的部分机理。方法：将自MM患者尿中提取的κ和λ型BJP各5例以不同浓度与大鼠NRK52E株TEC共同培养72小时,通过倒置显微镜、透射电镜观察TEC形态学改变;采用细胞免疫组织化学法研究细胞骨架标志：细胞角蛋白-18、波形蛋白、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的改变。结果：培养72小时后,光镜下部分细胞拉长呈梭形;透射电镜下细胞变得肥大,细胞中出现与细胞长轴平行的微丝束和致密体;随BJP的浓度增加,NRK52E细胞角蛋白-18表达率逐渐减少,波形蛋白和α-SMA表达率逐渐增加。结论：BJPκ与BJPλ均有促进NRK52E转分化的作用,且随着BJP浓度增加而增强。     

肾小管上皮细胞转分化及逆转的分子机制

肾小管上皮细胞转分化(EMT)过程广泛存在于胚胎发生和肾纤维化过程中,其调节是一个复杂有序的过程,受多种细胞因子和细胞外基质的调节。促纤维化细胞因子如TGF-β1具有诱导EMT的作用,而抗纤维化细胞因子如骨形成蛋白-7(BMP-7)和肝细胞生长因子(HGF)能抑制纤维化过程。     

Snail1/IGF-1信号通路介导高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT

目的:观察高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E中锌指转录因子Snail1和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的表达变化,并初步探讨Snail1与IGF-1在糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease,DKD)上皮-间充质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)过程中的关系。方法:高糖培养大鼠近端肾小管上皮细胞系NRK-52E 72 h后,给予Snail1 siRNA和IGF-1 siRNA处理,分为高糖组、non-targeting(NT)siRNA组、Snail1 RNAi组和IGF-1 RNAi组,并设置对照组。于转染后48和72 h两个时点收获细胞。分别用实时荧光定量PCR检测细胞Snail1、IGF-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的mRNA表达,用免疫荧光方法检测各蛋白的表达。结果:高糖诱导NRK-52E细胞E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01),FN的mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01);同时,Snail1和IGF-1的mRNA和蛋白表达也明显升高(P0.01)。Snail1 RNAi组与高糖组比较,细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01),FN、Snail1和IGF-1的mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01),Snail1的mRNA表达减少62.8%。与高糖组比较,IGF-1 RNAi组细胞IGF-1的mRNA表达减少61.1%,E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01),FN的mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01)。NT组E-cadherin、FN、Snail1及IGF-1的mRNA和蛋白表达与高糖组比较差异无统计学显著性。Pearson相关性分析显示,NRK-52E细胞中Snail1与IGF-1蛋白的表达呈显著正相关(r=0.852,P0.01)。结论:Snail1及IGF-1的mRNA和蛋白在高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT过程中表达升高,且沉默Snail1基因,IGF-1表达随之减少,提示Snail1/IGF-1可能促进DKD时肾小管上皮细胞EMT。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对人肾小管上皮细胞转分化及胶原合成的作用

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在人肾小管上皮细胞转分化及胶原合成中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为2组(1)对照组;(2)IGF-Ⅰ组培养液中加入终浓度分别为25、50、100、200μg/L的IGF-Ⅰ。用倒置显微镜观察细胞形态变化,以RT-PCR检测HK2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰα和胶原ⅢαmRNA表达的变化。ELISA方法检测培养上清中胶原Ⅰ的浓度。结果IGF-Ⅰ刺激使HK2细胞由椭圆形变为梭形。不同浓度的IGF-Ⅰ作用于HK2细胞48h后,α-SMA、胶原Ⅰα和胶原ⅢαmRNA水平显著升高(P<0.05);ELISA结果显示,100及200μg/LIGF-Ⅰ组中HK2细胞分泌的胶原Ⅰ显著增加(P<0.05)。结论IGF-Ⅰ在体外能够诱导人肾小管上皮细胞转分化,并促进其胶原的合成。     

人肾小管上皮细胞necroptosis模型的构建

 目的：以体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）为靶细胞,构建肾小管上皮细胞凋亡样坏死（necroptosis）的模型。方法：采用肿瘤坏死因子 α (tumor nercosis factor α, TNF-α)诱导细胞凋亡,同时采用抗霉素A (antimycin A)耗竭ATP,构建肾小管上皮细胞凋亡的模型,并以caspase-8抑制剂苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮(benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone, zVAD-fmk) 阻断凋亡,用necroptosis的特异性抑制剂necrostatin-1（Nec-1）阻断necroptosis,观察细胞在不同的处理下形态学的变化,同时检测细胞存活率及标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）在TNF-α+zVAD- fmk+antimycin A处理1 h时细胞及细胞器膨胀,电镜下细胞膜碎裂,线粒体变圆、肿胀,嵴逐渐模糊,胞浆中出现大量自噬小体,而Nec-1预处理后细胞的坏死程度较对照组明显改善。（2）在TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A 1 h实验组,Nec-1预处理后细胞的存活率显著增加（P<0.05）。（3）TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A干预1 h实验组在Nec-1预处理后LC3-Ⅱ的表达量明显下降（P<0.05）。结论：凋亡环境中阻断凋亡可以诱导肾小管上皮细胞necroptosis,抑制剂Nec-1能特异性阻断肾小管上皮细胞发生坏死。     

Snail1 siRNA 对高糖诱导肾小管上皮细胞表型转变的影响

目的： 观察Snail1 siRNA对高糖诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转变（TEMT）的影响。方法: 原代培养肾小管上皮细胞分为5组：（1）对照组（含糖5.5 mmol/L）;（2）高糖组（含糖25 mmol/L）;（3）Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6 h后更换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（4）control siRNA处理组,转染control siRNA作为siRNA阴性对照,6 h后换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（5）高渗组（含D-manntio19.5 mmol/L）;72 h后收集细胞,用Western blotting和半定量RT-PCR检测Snail1、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、vimentin和E-cadherin蛋白和mRNA表达。结果: 与高糖组比较,肾小管上皮细胞转染Snail1 siRNA后,Snail1 mRNA和蛋白表达水平分别下降62%和68%（P<0.01）。同时,Snail1 siRNA处理组α-SMA和vimentin蛋白和mRNA表达显著下调（P<0.01）,而E-cadherin蛋白和mRNA表达显著上调（P<0.01）。结论: Snail1参与了高糖诱导TEMT的调节。     

肾小管上皮细胞在肾间质纤维化中的作用

肾小管是连接肾小球与肾间质的枢纽 ,肾小管上皮细胞可通过产生趋化因子、致纤维化细胞因子、表型转化为成纤维 /肌成纤维细胞以及细胞凋亡等方式 ,主动参与肾间质纤维化的发生与发展。干预肾小管上皮细胞的表型转化及凋亡 ,可能会为抗纤维化治疗提供新的思路和手段     

Akt/GSK-3β介导高糖上调肾小管上皮细胞Snail1的表达

 目的：观察高糖对原代肾小管上皮细胞Snail1和蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β（Akt/GSK-3β）信号通路的影响,探讨糖尿病肾病时Snail1表达的调节机制。方法：原代培养大鼠肾小管上皮细胞（RTECs）,随机分为正常糖对照组、高渗组和高糖组。Western blotting检测不同处理组 RTECs不同培养时点（30 min、2 h、12 h、24 h、48 h和72 h）Snail1、Akt1、GSK-3β、磷酸化Akt（p-Akt,Ser473）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β,Ser9）蛋白的水平。RT-PCR检测Snail1、Akt1和GSK3β mRNA的表达。RTECs以磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002（25 μmol/L）预处理50 min,再与高糖共同培养24 h,Western blotting检测上述指标蛋白的表达。结果：与正常糖对照组比较,高糖组RTECs Snail1和Akt1蛋白和mRNA的表达上调,p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达增加,但总GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化。以LY294002处理后,高糖组RTECs Snail1、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达水平较未处理高糖组明显下降,但LY294002不影响总Akt1和GSK-3β蛋白表达。结论：Akt/GSK-3β可能介导了高糖诱导的RTECs锌指转录因子Snail1的表达上调。     

Snail plays an oncogenic role in glioblastoma by promoting epithelial mesenchymal transition

Background: The factors affecting glioblastoma progression are of great clinical importance since dismal outcomes have been observed for glioblastoma patients. The Snail gene is known to coordinate the regulation of tumor progression in diverse tumors through induction of epithelial mesenchymal transition (EMT); however, its role in glioblastoma is still uncertain. Therefore, we aimed to further define its role in vitro. Methods and results: The small interfering RNA (siRNA) technique was employed to knock down Snail expression in three glioblastoma cell lines (KNS42, U87, and U373). Specific inhibition of Snail expression increased E-cadherin expression but decreased vimentin expression in all cell lines. In addition, inhibition of the expression of Snail significantly reduced the proliferation, viability, invasion, and migration of glioblastoma cells as well as increased the number of cells in the G1 phase. Conclusions: Knockdown of Snail suppresses the proliferation, viability, migration, and invasion of cells as well as inhibits cell cycle progression by promoting EMT induction. The findings suggest that expression of this gene facilitates glioblastoma progression. Therefore, these results indicate the clinical significance of Snail for use as a potential therapeutic target for glioblastoma.     

STAT1的SUMO4修饰在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间叶性转化中的作用

目的 探讨STAT1的SUMO4修饰与人近端肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的关系.方法 将HK-2细胞分为空白对照组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,30 mmol/L葡萄糖)、SUMO4-siRNA(转染SUMO4 siRNA)组、NC-siRNA(转染scrimble siRNA)组、UBC9...     

Snail在卵巢癌细胞侵袭转移潜能方面研究

目的研究Snail与卵巢癌侵袭转移问的关系,并探讨其分子机制。方法分别构建正义全长Snail真核表达载体和小分子干扰RNA,分别转染卵巢癌细胞系A2780、C13＊。采用Western印迹方法分析相关蛋白表达,Transwell试验检测细胞侵袭转移能力。结果①成功构建Snail正义全长真核表达载体,并合成Snail小分子RNA干扰片段;②在转染PEGFPCI／Snail的卵巢癌细胞株A2780、C13＊中E-eadhefin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调;而在转染Snail／SiRNA的卵巢癌细胞株A2780、C13‘中E—cadherin表达明显上调,Snail和Vimentin则表达下调;③Snail过表达可显著促进卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能;封闭Snail表达水平可一定水平抑制卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能。结论snail可通过促进卵巢癌上皮细胞间质化转变（epithelial—mesenchymaltransition,EMT）而提高其侵袭转移能力;封闭Snail表达可一定程度逆转卵巢癌上皮细胞间质化转变（EMT）而抑制其侵袭转移能力。     

锌指转录因子Snail 1在糖尿病大鼠肾组织中的表达

目的： 观察锌指转录因子Snail 1在糖尿病大鼠肾组织中的表达并探讨其与糖尿病肾病（DN）发生、发展的关系。方法: 链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠糖尿病（DM），分为2、4、8、12、16、20、24周以及16周A、20周A和24周A组，其中A组动物从第13周起用胰岛素控制血糖至正常水平，每个时点均设鼠龄匹配的正常对照组。测定各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐（Scr）、肾脏指数。PAS染色光镜观察肾脏病理改变。免疫组化、RT-PCR方法检测肾皮质Snail 1和纤连蛋白（FN）的蛋白及mRNA水平，Western blotting检测Snail 1蛋白表达。结果: DM各组大鼠的血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、肾脏指数明显高于正常对照组（P<0.05,P<0.01），A组上述指标均明显低于DM组（P<0.05,P<0.01）。Snail 1免疫组化阳性染色见于各组DM大鼠肾小管，正常对照组未见阳性表达，A组见弱阳性表达，并随治疗时间延长而减少。DM组肾皮质Snail 1、FN蛋白和mRNA的表达水平高于正常对照组（P<0.01），而A组显著低于DM组（P<0.01）。Snail 1与FN mRNA的表达水平呈显著正相关（P<0.01），Snail 1蛋白表达水平与血糖、尿蛋白、血肌酐、肾脏指数亦呈正相关（ P<0.01）。结论: Snail 1基因和蛋白在DM大鼠肾组织过度表达，提示Snail 1可能参与了DN的发生、发展机制。     

整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转化中的作用

目的观察整合素连接激酶（ILK）在单侧输尿管梗阻小鼠（UUO）肾脏中的表达,并探讨其在肾小管上皮细胞转化中的作用。方法将10周龄健康雄性CD-1小鼠随机分为假手术组（C,n=20）和UUO组（n=40）,分别于术后1、3、7、14d处死小鼠。采用Masson染色观察肾间质纤维化程度;用免疫组织化学（sP法）的方法观察ILK、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Westernblot半定量分析梗阻侧肾组织ILK的蛋白水平;用即时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测ILK、E-cadherin和α-SMA mRNA的表达。结果免疫组织化学显示ILK在假手术组只有微量表达,主要位于肾小球脏层上皮细胞,UUO术后1d ILK蛋白表达显著增多（t=16．5,P＜0．01）,7d达高峰。术后3d肾小管上皮细胞及肾间质α-SMA阳性细胞数显著增多（t=21．0,P＜0．01）,肾小管上皮细胞表达E-cadherin明显减少（t=5．6,P＜0．01）。根据免疫组织化学结果分析,术后1～7d,ILK蛋白表达与α-SMA蛋白表达呈正相关（R=0．88,P＜0．01）,与E-cadherin表达呈负相关（R=-0．87,P＜0．01）。Westernblot结果显示ILK蛋白表达于术后1d明显增加,7d达高峰,14d表达不再增加（P＞0．05）。RT-PCR结果显示术后1d ILK mRNA表达增多（t=141．6,P＜0．01）,E-cadherin mRNA表达于术后3d显著减少（P＜0．01）,α-SMA mRNA表达于术后3d开始增多（P＜0．01）。结论UUO模型早期整合素连接激酶表达增高,可能通过介导肾小管上皮细胞．间充质转化而参与肾脏纤维化的发生发展。