漆黄素激活SIRT1/Nrf2信号通路改善急性呼吸窘迫综合征大鼠铁死亡的研究

目的 探究漆黄素通过激活沉默信息调节因子1（SIRT1）/核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠铁死亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组以及漆黄素1、2、4 mg/kg组和漆黄素（4 mg/kg）＋SIRT1抑制剂（10 mg/kg EX-527）组，每组各14只。漆黄素、SIRT1抑制剂于造模前30 min ip给药，对照组、模型组ip给予等量生理盐水。除对照组外，其余各组大鼠均采用气管内滴注脂多糖法建立急性呼吸窘迫综合征模型。检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；测定肺组织湿/干质量比（W/D）；HE染色观察肺组织病理改变；检测肺组织中铁死亡相关指标活性氧（ROS）、铁、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）水平；免疫印迹法检测肺组织中SIRT1/Nrf2信号通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，漆黄素各剂量组BALF中IL-6、TNF-α水平降低，肺组织W/D比值降低，肺组织中ROS、铁、MDA水平降低，GSH水平升高，肺组织中SIRT1、核Nrf2蛋白水平升高（P<0.05），且4 mg/kg漆黄素干预的改善效果更显著；在4 mg/kg漆黄素干预的基础上增加SIRT1抑制剂后，漆黄素的改善作用被削弱。结论 漆黄素对脂多糖诱导的急性呼吸窘迫综合征有保护作用，能够改善铁死亡，可能是通过激活SIRT1/Nrf2信号通路实现的。     

盐酸川芎嗪注射液通过Nrf2/HO-1通路对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨盐酸川芎嗪注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤及E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路的影响。方法 按随机数字表法将100只大鼠分为假手术组、模型组、丹参注射液(2mL/kg)组、盐酸川芎嗪注射液(30 mg/kg)组和盐酸川芎嗪注射液(30 mg/kg)+鸦胆子苦醇(Nrf2抑制剂,2 mg/kg)组。除假手术组外,各组大鼠采用阻断肝门静脉和肝动脉1h的方法制备肝脏缺血再灌注损伤大鼠模型,造模前30 min ip相应药物。造模6h后,采用生化分析法检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平;苏木精-伊红(HE)染色法检测肝组织病理学改变;比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量,Western blotting法检测核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路相关蛋白表达水平。结果 与模型组比较,丹参注射液组和盐酸川芎嗪注射液组血清ALT、AST、TBIL水平显著降低(P<0.05),肝组织病理学改变明显改善,病理评分显著降低(P<0.05);肝组织SOD、GSH-Px活性显著升高,且MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05),Nrf2、HO-1表达量显著升高(P<0.05),胞核核因子-κB(NF-κB)p65表达量及胞核NF-κB p65/胞浆NF-κB p65比值降低(P<0.05)。Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇能够明显逆转盐酸川芎嗪注射液对Nrf2/HO-1通路的激活作用以及对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。结论 盐酸川芎嗪注射液可能通过激活Nrf2/HO-1通路、抑制NF-κB核转位减轻肝脏缺血再灌注损伤大鼠氧化应激和炎症损伤,对肝脏缺血再灌注损伤起到保护作用。     

柚皮苷通过减轻氧化应激降低急性肺损伤小鼠内皮通透性的研究

目的 研究柚皮苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤模型肺微血管内皮通透性及气道炎症的改善作用。方法 将66只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及柚皮苷40、80、120 mg/kg组,每组11只。对照组小鼠正常饲养;模型组和给药组小鼠麻醉后给予LPS滴鼻,每只小鼠滴鼻50 μL。柚皮苷40、80、120 mg/kg组和地塞米松5 mg/kg组在LPS滴鼻前分别ig相应剂量的柚皮苷和地塞米松,连续给药5 d,滴鼻后继续ig相应剂量的柚皮苷和地塞米松,连续给药2 d。对照组和模型组同时间ig 0.2 mL生理盐水。苏木精–伊红（HE）染色观察肺实质病理变化;血常规分析仪检测血液及肺泡灌洗液淋巴细胞、中性粒细胞、血细胞、血小板数量;ELISA检测肺泡灌洗液白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量和血清内皮素-1（ET-1）水平;肺组织伊文思蓝成像分析肺泡–血管通透性,qPCR检测紧密连接蛋白紧密连接蛋白-1（ZO-1）、密封蛋白（OCLN）、血管内皮钙黏素（VE-cadherin）、β-连环蛋白（β-catenin）和水通道蛋白AQP1、AQP5的mRNA表达水平;化学分析法检测血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）水平。结果 与模型组相比,柚皮苷120 mg/kg组能够显著改善LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺水肿及肺组织炎症浸润的病理状态,减少肺泡内炎症细胞数量、炎症因子和总蛋白含量,以及肺组织伊文思蓝渗入量;增强紧密连接蛋白和水通道蛋白表达;减缓血液炎症细胞流失,降低血管氧化应激水平（P＜0.05）。结论 柚皮苷能够减轻LPS诱导的气道炎症,并可能通过降低血管氧化应激水平减少对紧密链接蛋白和水通道蛋白的损害作用从而改善肺内皮高通透性。     

虎杖苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路以及气道炎症的影响

目的 构建慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型,探讨虎杖苷对COPD大鼠PI3K/AKT/mTOR通路以及气道炎症的影响。方法 100只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松（0.2 mg/kg,阳性药）组和虎杖苷低、高剂量（30、60 mg/kg）组,每组20只。除对照组外,其他组熏香烟加气管注射内毒素法制备COPD模型,COPD造模前1 d开始ig给药,每天1次,持续30 d。ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6水平;RSE3020肺功能检测仪测定用力肺活量（FVC）、第1秒用力呼气容积（FEV₁）、呼气峰流速（PEF）;取肺组织4%甲醛固定后制作切片,HE染色,并进行肺组织损伤病理评分;Western blotting检测肺组织PI3K、AKT、mTOR蛋白表达。结果 虎杖苷高、低剂量组大鼠BALF中TNF-α和IL-6表达水平、肺组织损伤病理评分以及PI3K、AKT和mTOR蛋白表达均显著低于模型组（P<0.01）;虎杖苷高、低剂量组大鼠FVC、FEV1、PEF肺功能指标显著高于模型组（P<0.01）。结论 虎杖苷可以抑制COPD大鼠PI3K/AKT/mTOR通路,抑制气道炎症,发挥肺损伤保护作用。     

褪黑素对帕金森病大鼠Nrf2/HO-1通路及小胶质细胞活化的影响

目的 探讨褪黑素对帕金森病大鼠转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）的调控作用及其对小胶质细胞活化的影响。方法 取SD大鼠72只,按照随机数字表法分为对照组、模型组、褪黑素（5 mg/kg）组、Nrf2抑制剂全反式维甲酸（ATRA,7 mg/kg）组、Nrf2抑制剂阴性对照（Nrf2-NC）（植物油,10 mL/kg）组、褪黑素＋ATRA（5 mg/kg＋7 mg/kg）组,每组12只。除对照组外,其余各组大鼠通过脑黑质区内注射6-羟多巴胺（6-OHDA）建立帕金森病模型。造模成功后各组开始给药,模型组和对照组ip等量生理盐水,各组连续给药8周,2次/d。末次给药后对大鼠进行行为学评分;免疫组化法检测黑质部多巴胺能神经元及小胶质细胞活化阳性染色细胞数目;免疫荧光共定位检测Nrf2、活化小胶质细胞（IBA1标记）重合表达的细胞数目;酶联免疫吸附法（ELISA）检测黑质部代谢产物α-突触核蛋白（α-Syn）和β淀粉样蛋白（Aβ）。采用Western blotting检测黑质部Nrf2、HO-1、肿瘤坏死因子（TNF-α）、环氧化酶2（COX-2）、小胶质细胞活化特异性标记物（OX-42）蛋白相对表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现单侧或双侧后肢部分瘫痪及行走、进食困难现象,行为学评分显著升高（P<0.05）。与模型组相比,褪黑素组大鼠出现行走时转圈,很少有瘫痪及行走困难症状,且行为评分降低（P<0.05）。ATRA组大鼠单侧或双侧后肢部分瘫痪大鼠例数增多,行为学评分最高（P<0.05）。与对照组相比,模型组大鼠黑质区Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、小胶质细胞活化数目、α-Syn和Aβ水平及HO-1、OX-42、TNF-α、COX-2水平和细胞核中Nrf2表达水平升高（P<0.05）,多巴胺能神经元数目减少。与模型组相比,褪黑素组大鼠黑质Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、多巴胺能神经元阳性染色数目、HO-1及细胞核中Nrf2表达升高（P<0.05）,小胶质细胞活化数目、α-Syn及Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表达降低（P<0.05）;ATRA组黑质区Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、多巴胺能神经元数目、HO-1水平及细胞核中Nrf2水平降低（P<0.05）,小胶质细胞活化数目、α-Syn和Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表达水平进一步升高（P<0.05）。褪黑素＋ATRA组大鼠上述指标变化与褪黑素组相反（P<0.05）。褪黑素＋ATRA组及Nrf2-NC组上述指标与模型组相比差异无统计学意义。结论 褪黑素可能通过激活Nrf2/HO-1通路,抑制炎症反应及小胶质细胞活化,减少帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元丢失。     

灵仙新苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 考察灵仙新苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的保护作用,并阐述可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、丹参酮Ⅱ_A（阳性药,16 mg/kg）组和灵仙新苷低、中、高（8、16、32 mg/kg）组,连续ig给药7 d;采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,缺血40 min再灌120 min;试剂盒法检测MIRI大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）水平;TTC染色法检测心肌梗死率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;Western blotting法检测心肌组织中Bcl-2、Bax、TNF-α及Caspase-3的蛋白表达水平。结果 与模型组比较,灵仙新苷（8、16、32 mg/kg）显著降低MIRI模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,心肌梗死率和心肌细胞凋亡率;明显上调Bcl-2蛋白表达水平,下调Bax、TNF-α、Caspase-3蛋白表达水平,且均具有显著性差异（P<0.05、0.01）。结论 灵仙新苷对MIRI大鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制TNF-α,调节Bcl-2/Bax蛋白平衡,减少MIRI诱导的心肌细胞凋亡有关。     

小儿治哮灵片对幼年大鼠哮喘的干预作用

目的 研究小儿治哮灵片对幼年大鼠哮喘模型的干预作用及机制。方法 36只雄性Wistar幼年大鼠随机分为6组：对照组、模型组、醋酸地塞米松（阳性药,1 mg/kg）组和小儿治哮灵片低、中、高剂量（0.32、0.64、1.28 g/kg）组。除对照组外,其余各组以卵清蛋白（OVA）致敏、激发制备幼年大鼠哮喘模型。造模第8天开始ig给药,每天给药1次,给药至造模3周,对照组和模型组ig给予蒸馏水。记录各组大鼠引喘潜伏期并进行行为学评分;检测肺脏器指数;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组幼年大鼠血清中白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-6、免疫球蛋白E（IgE）、γ-干扰素（IFN-γ）、核转录因子（NF-κB）的水平以及肺泡灌洗液中IFN-γ水平。结果 与模型组比较,小儿治哮灵片高、中、低剂量组引喘潜伏期及哮喘行为评分均显著下降（P<0.05、0.01）;肺脏器指数显著下降（P<0.05）;血清IL-4、IL-5、IL-6、IgE、NF-κB水平均显著下降（P<0.01）;血清与肺泡灌洗液中IFN-γ水平显著升高（P<0.01）。结论 小儿治哮灵片抗哮喘作用可能与降低炎性细胞因子分泌有关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路研究橄榄苦苷的体外抗炎作用

目的 探讨橄榄苦苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（RAW264.7）炎症的保护作用及机制。方法 MTT法检测橄榄苦苷（0、10、20、40 μmol/L）对RAW264.7细胞活性的影响;用橄榄苦苷（10、20、40 μmol/L）预处理细胞1 h后,LPS诱导炎症模型,Griess试剂检测细胞内Nitrite释放;Western blotting方法检测细胞iNOS、COX-2、Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO1蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞内NO、ROS、Ca²⁺的水平;荧光显微镜检测线粒体膜电位（MMP）水平;ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的释放。结果 与模型组比较,橄榄苦苷组Nitrite释放水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001）,iNOS、COX-2蛋白的表达显著降低（P<0.001）,NO的产生显著减少（P<0.05、0.01）;TNF-α、IL-6的释放受到显著抑制（P<0.001）;Ca²⁺释放受到显著抑制（P<0.01）;ROS生成受到显著抑制（P<0.01）;JC-1单体降低,恢复聚合物状态（红色荧光变多）,MMP稳定性增强;Keap1蛋白表达显著降低, Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达均显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 橄榄苦苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症具有抑制作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。     

注射用丹参多酚酸对MCAO/R大鼠Nrf2/Keap1/HO-1信号通路的影响

目的 采用大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（MCAO/R）模型考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠核因子E2相关因子2（Nrf2）/Kelch样ECH相关蛋白（Keap1）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法 线栓法构建大鼠MCAO/R模型,于术后24 h进行神经功能评分,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞（5 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.76、11.51、23.02 mg·kg^-1）组,尾iv给药,连续14 d。考察给药后各组大鼠神经功能缺损评分;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平;TTC染色法检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理变化;Western blotting法检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,SAFI中、高剂量组和丁苯酞组大鼠的神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05、0.01） ;SAFI各剂量组和丁苯酞组脑梗死体积显著减少（P＜0.01、0.001）,血清BDNF、SOD水平均显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA水平显著降低（P＜0.05、0.01）,脑组织病理变化明显减轻,水肿减轻; SAFI高、中剂量组及丁苯酞组Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,SAFI低剂量组Keap1、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.01、0.001）。结论 SAFI可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,抑制氧化损伤实现的。     

红景天苷对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征大鼠的保护作用

摘 要 目的：探讨红景天苷注射液对急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠的保护作用。方法: 50只大鼠随机分为5组：正常对照组,模型对照组,红景天苷高、中、低（8.0,4.0,2.0 mg·kg^-1 ）剂量组,每组10只。采用油酸0.1 ml·kg^-1 经尾静脉注射制备ALI/ARDS模型。腹腔注射给药,qd,连续给药3 d。模型制备成功后24 h经颈动脉采集血样1.0 ml行血气分析。给药第3天检测肺湿干质量比、动脉氧分压、HE染色肺组织病理,并采用ELISE法检测大鼠血液中高迁移率族蛋白 1（HMGB1）和角蛋白 14（KRT 14）的表达。结果:红景天苷各剂量组的HMGB1和KRT 14表达均低于模型对照组,中、高剂量组与模型对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;红景天苷的剂量与药效呈正相关,中、高剂量组与低剂量相比差异有统计学意义（P<0.05）。红景天苷各剂量组的动脉氧分压高于模型对照组,肺湿干质量比低于模型对照组,中、高剂量组与模型对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;红景天苷的剂量与药效呈正相关,中、高剂量组与低剂量相比差异有统计学意义（P<0.05）。红景天苷各剂量组的肺组织病理与模型对照组相比有所改善。结论:红景天苷能减轻ALI/ARDS大鼠血液中炎症因子HMGB1和KRT 14的表达,减轻肺水肿,提高氧分压,对ALI/ARDS大鼠具有明显的治疗作用。