黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究

目的?研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMCs）线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制。方法?①人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）在RPMI 1640（含1%FCS）培养液中培养24?h后分为6组:空白组:正常培养液2?mL;高糖腹透液组:含4.25% PDS 1?mL+正常培养液1?mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10?μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20?μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40?μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50?μmol/mL。②分别采用CCK-8法测定HMrSV5的增殖活性;流式细胞仪检测细胞活性氧族（ROS）水平变化;罗丹明123荧光染色检测HMrSV5膜电位水平变化;JC-1法测定HMrSV5线粒体膜电位的去极化;Western blot检测HPMCs线粒体形态和功能相关蛋白的表达情况。结果?①CCK-8检测结果显示,与模型组相比,黄芪甲苷处理组OD值明显升高,细胞存活率也相应增加,呈浓度依赖性,黄芪甲苷对HPMCs有保护作用;②流式检测提示高糖腹透液刺激后线粒体ROS产生增加,而黄芪甲苷可有效降低ROS水平;③JC-1和罗丹明123染色后流式检测发现随着黄芪甲苷浓度的增加,线粒体膜电位的去极化程度随之减少,同时有效增加线粒体膜电位,线粒体膜通透性降低,黄芪甲苷能部分修复高糖腹透液对线粒体的损伤;④Western blot检测结果显示,黄芪甲苷处理的细胞线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1的表达水平明显降低,线粒体外膜结合蛋白OPA1、TOM70的表达水平明显升高。结论?①高糖腹透液能诱导HPMCs线粒体损伤模型;②黄芪甲苷能够通过促进HPMCs线粒体外膜OPA1、TOM70蛋白的表达,降低DRP1、FIS1蛋白表达水平,减少线粒体膜电位去极化,同时有效增加膜电位及降低线粒体膜通透性,进而改善高糖腹透液诱导的HPMCs线粒体氧化应激损伤,保护其结构功能的稳定。      

黑米花色苷对白血病细胞株HL-60及正常淋巴细胞活性氧及线粒体膜电位的影响

目的 观察黑米花色苷对白血病HL-60细胞和正常淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及线粒体膜电位的影响.方法 以2,7-二氯荧光素(2,7-dichloro fluoreseeineiactate,DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,以罗丹明-123为反映线粒体膜电位荧光探针,流式细胞仪和激光共聚焦扫描显微镜检测分析黑米花色苷作用下HL-60细胞及正常淋巴细胞活性氧水平及线粒体膜电位的变化.结果 黑米花色苷处理正常淋巴细胞2、24 h其ROS水平未见显著变化(P＞0.05);黑米花色苷处理HL-60细胞,ROS水平首先显著升高(P＜0.01),随后逐渐降低,并在12 h显著低于对照纽(P＜0.01).黑米花色苷处理正常淋巴细胞24 h线粒体膜电位无显著变化(P＞0.05),处理HL-60细胞24 h线粒体膜电位显著降低(P＜0.01).结论 黑米花色苷能够显著影响HL-60细胞活性氧水平,并显著降低HL-60细胞线粒体膜电位,而对正常淋巴细胞活性氧及线粒体膜电位无显著影响.     

黄芪和三七主要有效成分配伍对氧化损伤所致的PC12细胞凋亡及其活性氧、线粒体膜电位的影响

目的：探讨黄芪主要有效成分黄芪甲苷和三七主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍抗氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导的PC12细胞氧化损伤的作用及其机制。方法：应用CoCl2诱导经神经生长因子转分化的PC12细胞氧化损伤模型,经不同药物处理后,采用Hocchst33258荧光染色检测细胞凋亡,罗丹明123荧光染色检测细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光染色检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。结果：CoCl2能引起转分化后的PC12细胞凋亡,同时PC12细胞MMP水平显著降低,ROS生成显著增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1均能不同程度地抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,减少损伤后ROS的生成和MMP的下降,4个有效成分配伍的效应强于各有效成分单用。结论：黄芪和三七的主要有效成分能抑制氧化损伤后的PC12细胞凋亡,有效成分配伍后作用加强,其机制可能与抑制细胞活性氧的生成,提高线粒体膜电位有关。     

淫羊藿苷改善高糖培养乳鼠心肌细胞活性的线粒体相关机制

目的研究淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞的损伤及其潜在的线粒体相关机制。方法SD乳鼠心肌细胞分别在含5.5mmol／L葡萄糖（正常对照组）、5．5mmol／L葡萄糖＋20.0mmol／L甘露醇（高渗对照组）、25.5mmol／L葡萄糖（高糖损伤组）、25.5mmol／L葡萄糖＋10μmol／L淫羊藿苷（低剂量淫羊藿昔保护组）和25.5mmol／L葡萄糖＋100μmol／L淫羊藿苷（高剂量淫羊藿苷保护组）的培养基中进行原代培养48h后,检测细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞活性氧自由基（ROS）生成、超氧化物歧化酶（SOD）活性,同时检测心肌线粒体跨膜电位,并检测线粒体通透性转换孔（MPTP）开放值。结果与正常对照组比较,高糖培养组心肌细胞活性、细胞SOD活性及心肌线粒体跨膜电位水平均显著下降（P〈0．01）,而培养上清液LDH含量、细胞ROS生成及心肌细胞MPTP开放值则明显升高（P〈001）。淫羊藿苷干预减轻了高糖对心肌细胞各项指标的损伤,尤其是高剂量淫羊藿苷保护组的细胞活性、LDH漏出量、ROS生成值、SOD活性、MPTP开放值、线粒体跨膜电位均有明显改善。高渗对照组各项指标与正常对照组相比差异无统计学意义。结论淫羊藿苷对体外高糖培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高细月旬抗眚化能力．减少ROS诱导的心肌MPTP开放程度．维持线粒体正常跨膜电位而实现的。     

水飞蓟宾对H2O2诱导SH⁃SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的：探究水飞蓟宾对过氧化氢（H2O2）诱导SH?SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法：采用体外培养方法,建立SH?SY5Y细胞的H2O2损伤模型。用水飞蓟宾预处理细胞后MTT法测定细胞的存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;Western blot法检测Cleaved?Caspase?9、Cleaved?Caspase?3蛋白表达情况。结果：与模型组比较,用50和100 μmol/L水飞蓟宾预处理SH?SY5Y细胞3 h能明显减轻H2O2诱导的SH?SY5Y损伤,显著提高细胞存活率（P < 0.01）和减少凋亡（P < 0.05）,减少细胞内ROS水平,稳定线粒体膜电位（P < 0.05）,使Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量下降。结论：水飞蓟宾可以保护SH?SY5Y细胞免受H2O2的损伤,其机制可能与水飞蓟宾的抗氧化性、保护线粒体膜电位和降低Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量有关。     

雷公藤甲素调控p53/SLC7A11轴诱导结肠癌细胞铁死亡

目的 探讨雷公藤甲素调控p53/SLC7A11轴诱导结肠癌细胞铁死亡的分子机制。方法 培养人结肠癌细胞系（HCT116）,采用CCK-8法检测细胞活力,EdU实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖与克隆能力;铁死亡相关检测试剂盒测定Fe2+离子、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量,流式细胞术检测活性氧自由基（ROS）水平;JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位变化;Western Blot 检测p53、SLC7A11蛋白表达水平。结果 CCK-8实验显示雷公藤甲素呈浓度梯度依赖性抑制结肠癌细胞活力,其IC50为47.82nmol/L;EdU实验和平板克隆形成实验证实雷公藤甲素可显著抑制结肠癌细胞增殖与克隆能力（P<0.05）;在雷公藤甲素干预后,铁死亡相关指标检测发现,HCT116细胞 Fe2+离子、MDA及ROS水平显著升高,GSH含量降低（P<0.05）;并在荧光显微镜下观察到HCT116细胞线粒体膜电位下降（P<0.05）。进一步通过Western Blot实验,发现HCT116细胞p53蛋白表达增加,SLC7A11蛋白表达下调（P<0.05）。结论 雷公藤甲素可通过调控p53/SLC7A11轴诱导结肠癌细胞铁死亡,抑制结肠癌细胞增殖与克隆。     

去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷抑制膀胱肿瘤细胞生长作用的实验研究

目的探讨去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine,DAC）对膀胱肿瘤细胞生长的抑制作用。方法采用WST-1法测定DAC对膀胱癌细胞株的生长影响作用,流式细胞仪检测其在诱导细胞凋亡与细胞周期捕获中的效果,APOPCYTO半胱天冬酶（Caspase）色度法分析DAC处理后Caspase 3及Caspase 9的活性,Western blot检测DAC处理后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。结果 DAC对膀胱肿瘤细胞的生长具有抑制作用,药物作用呈剂量依赖性,并且该作用不受p53表型影响。DAC不能诱导膀胱肿瘤细胞凋亡,细胞中Caspase 3、9的活性也未见激活,但DAC可以抑制膀胱癌细胞的增殖能力,PCNA蛋白的表达量呈剂量依存性降低,发生G2/M期捕获。用0、1和8μmol/LDAC处理RT112后G2/M期细胞分别为（36.3±3.4）%、（46.2±4.6）%和（56.5±6.2）%;处理TCCsup后为（37.5±3.8）%、（48.4±4.9）%和（60.1±6.7）%。结论 DAC对膀胱肿瘤细胞生长具有抑制作用,可能成为将来治疗膀胱恶性肿瘤的一种新型药物。     

黄芪甲苷通过SIRT1/AMPK抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老

目的 研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）在高糖条件下对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的抗衰老作用及其可能机制。方法 高糖（60 mmol/L）培养HUVECs 48 h后,用二甲双胍（50μmol/L）或AS-Ⅳ（50μmol/L）作用于HUVECs。48 h后检测细胞活力、活性氧（ROS）含量、衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性、白细胞介素-6(IL-6)、SIRT1、AMPK、p53和p21的表达。结果 高糖显著增加HUVECs中SA-β-gal活性[（55.02±4.16）%比（3.13±1.65）%,P<0.01],降低细胞存活率[（70.75±7.57）%比100.00%,P<0.01],增加ROS产生[（141.05±16.28）%比100.00%,P<0.01]、p-p53[(1.64±0.17)比（1.01±0.10）,P<0.05]和p21[(2.06±0.12)比（1.09±0.12）,P<0.05]蛋白水平。此外,高糖还显著降低SIRT1[(0.49±0.13)比（1.04±0.14）,P<0.01]和p-AMPK[(0.53...     

HHT诱导骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡过程中活性氧和线粒体膜电位的变化

目的研究活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)在高三尖杉酯碱(HHT)诱导骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡过程中的变化,以期进一步探讨HHT诱导细胞凋亡的机制.方法以100ng/mlHHT作用于MUTZ-1细胞一定时间后应用流式细胞仪,以Annexin V FITC和PI双染的方法检测细胞凋亡率,ROS捕获剂HE反应法检测细胞内ROS的水平,JC-1染色法检测细胞MMP的变化.结果HHT作用MUTZ-1细胞0、6、12、24h后的凋亡率分别为5.68%±0.52%、16.88%±0.96%、43.75%±2.33%、55.48%±3.67%.在细胞凋亡的同时,细胞内ROS水平升高(P＜0.01),线粒体膜电位下降(P＜0.01).结论细胞内ROS水平升高和线粒体膜电位下降是HHT诱导MUTZ-1细胞凋亡的重要机制之一.     

黄芪甲苷对胃癌细胞SGC7901侵袭能力的影响及其机制探讨

目的:研究黄芪甲苷对胃癌细胞SGC7901侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法:用终浓度为100μg/ml黄芪甲苷处理实验组细胞48h,之后采用流式细胞仪检测对照组和实验组细胞凋亡情况,Transwell细胞侵袭实验检测黄芪甲苷对细胞侵袭能力的影响,并采用PCR和Western-blot方法检测黄芪甲苷对细胞MMP-2和MMP-9表达的影响,最后采用Western-blot方法检测黄芪甲苷处理对细胞ERK通路的活化情况的影响。结果:100μg/ml黄芪甲苷处理胃癌细胞SGC7901 48h后,细胞凋亡比例未发生明显变化,细胞侵袭能力显著降低,MMP-2和MMP-9分子的mRNA和蛋白水平均下降,此外,细胞内的磷酸化ERK蛋白水平在黄芪甲苷处理后表达减少。结论:在体外黄芪甲苷能够通过减少细胞MMP-2和MMP-9的表达而发挥抑制胃癌细胞侵袭的能力,而且其抑侵袭作用一定程度上是通过抑制细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路实现的。     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

miR-622抑制肺癌细胞的生长

目的探讨miR-622对H460肺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法利用脂质体瞬时转染方法将miR-622模拟物及其对照核苷酸转染至肺癌细胞内。miRNA定量试剂盒检测miR-622的表达。CCK-8试剂盒检测细胞增殖。生物信息学分析miR-622的靶点。蛋白印迹方法检测K-Ras蛋白的表达。构建含K-Ras mRNA的3'非翻译区的报告基因载体,检测萤火虫/Renilla荧光素酶活性。结果转染miR-622模拟物可提高miR-622的表达,并使H460和16HBE-T的细胞增殖率分别降至(58.60±4.27)%和(65.17±4.67)%,P均<0.01。生物信息学分析K-Ras为miR-622的一潜在靶点。转染miR-622模拟物可明显抑制K-Ras蛋白的表达。共转染miR-622模拟物和K-Ras-3'UTR报告基因,可使萤火虫/Renilla荧光素酶的活性降低至(60.22±2.50)%。结论 miR-622可通过负性调控靶点K-Ras抑制肺癌细胞的增殖。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处.文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系.     

Huge clear cell squamous cell carcinoma of the head

To the editor:An 85-year-old woman,presented with a macula in the front region of parietal bone one year ago,which was slightly protruding from the epidermis without pain and pruritus.After scratching,ulceration and the scope was increasing gradually.A month ago,the tumor was about walnut size,and now about egg size,accompanied with bleeding when knocked,without special feeling.Apart from this,the patient has been suffering from hypertension,diabetes for many years.The size of the tumor was 6 cm × 7 cm × 8 cm,dark red,hard shell,endoplasmic soft.The surface was contaminated,oozy,scabing,poor activity,the boundary was not clear,and pressing with no feeling.The pathological examination showed squamous cell carcinoma (SCC),as shown in Figure 1.Immunohistostaining revealed positive staining for PAS and ABPAS in the tumor tissue.We also performed immunohistostaining analysis,such as keratins AE1/AE3,EMA,cytokeratin 7,cytokeratin 18,cytokeratin 20,vimentin,S-100,HMB45,CD68,CKH and CD34.Of which,keratins AE 1/AE3,cytokeratin 18,CKH,CD34 and EMA were positive,others were negative.The tumor was diagnosed as huge clear cell SCC.After expansion excision,skin grafting,abdominal skin surgery,postoperative recovery was uneventful,and flakiness has survived well.     

多发肾透明细胞癌11例磁共振影像分析

目的 描述多发肾透明细胞癌的MR影像表现.方法 回顾性分析2008年1月至2010年12月解放军总医院共11例经病理证实的多发肾透明细胞癌的MR影像资料及临床资料,重点分析病灶的分布、大小、外形、信号,增强特点.结果 11例多发肾细胞癌患者,其中6例女性,5例男性,年龄36 ～ 69岁,平均50.6岁,共发现24个病灶.9例患者为双肾多发病变,单侧肾多发病变为2例.T2加权图像高信号的有16个病灶(16/24),所有病变均可见假包膜,出血的有4例(4/24),含有脂质的为12例(12/24),囊变的有18例(18/24),动态增强扫描各期持续强化的有22例(22/24),快进快出的有2例(2/24).所有病变呈现中度至明显强化.5例患者的多发病变MR表现一致,6例患者的多发病变MR表现并不一致.结论 多发肾细胞癌通常为两肾多发.同一患者的多发病变即使病理类型一致,MR表现可能不同.     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

米非司酮对子宫肌瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨米非司酮对子宫肌瘤和内膜组织Ki67基因、MMP2基因、Fas基因表达的影响。方法 62例子宫肌瘤患者随机分为对照组24例和治疗组38例,治疗组患者从月经周期第2~3d开始,每日服用25mg米非司酮,连续服用1个月后行子宫手术;对照组病人入院后不服用任何药物,直接手术,术中均取瘤体及内膜组织。用免疫组化SP法检测子宫肌瘤及内膜组织中Ki67、MMP2、Fas基因的表达水平。结果治疗组子宫肌瘤组织Fas阳性率为55.3%,明显高于对照组的29.2%,差异有统计学意义(P0.05);治疗组子宫肌瘤Ki67的阳性表达率为36.8%,明显低于对照组的70.8%,差异有统计学意义(P0.01);治疗组子宫肌瘤MMP2的阳性表达率为36.8%,明显低于对照组的66.7%,差异均有统计学意义(P0.05);但两组子宫内膜组织中Ki67、MMP2和Fas的表达没有显著变化,差异均无统计学意义(P均大于0.05)。结论米非司酮抑制子宫肌瘤细胞的增殖和侵袭转移,促进肌瘤细胞凋亡,这可能是米非司酮治疗子宫肌瘤的作用机理。