党参低聚糖通过抑制PI3K/AKT/HIF-1α通路改善胃癌前病变大鼠胃粘膜损伤

目的:研究党参低聚糖对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃黏膜损伤的改善作用及机制。方法:分析党参低聚糖对缺氧条件下胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(AGS)增殖活性,及对凋亡相关蛋白(BAX、BCL-2、Caspase-3)和磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/缺氧诱导因子1α信号通路(PI3K/AKT/HIF-1α)的影响。70只大鼠随机分为正常对照组、正常动物给予党参低聚糖0.6 g/kg组、模型对照组、维酶素0.27 g/kg组、党参低聚糖0.15、0.6 g/kg组。采用灌胃N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)和40%乙醇并结合饥饱饮食的方法构建PLGC模型。分析党参低聚糖对PLGC大鼠胃组织病理变化、血清生化指标、凋亡相关蛋白(BAX、BCL-2、Caspase-3)和PI3K/AKT/HIF-1α通路的影响。同时通过LC/MS/MS代谢组学技术研究影响党参低聚糖改善PLGC的潜在生物标志物和代谢通路。结果:细胞实验显示,与空白对照组比较,缺氧对照组GES-1细胞的相对存活率显著降低(P<0.01),BCL-2/BAX比值、PI3K及p-AKT蛋白表达显著下调,Ca...     

丹参酮ⅡA调控PI3K/Akt/mTOR通路对高脂血症大鼠肝脏自噬的影响

目的:基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮Ⅱ改善高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的作用机制。方法:30只SPF级,健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。正常组每日给予普通大鼠饲料喂饲;模型组、治疗组予高脂饲料喂饲。造模4周后,治疗组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射;正常组、模型组予等体积生理盐水腹腔注射。用药8周后,全自动生化分析仪检测大鼠血脂情况,HE、油红O染色观察肝脏组织形态学变化,Western blot技术检测PI3K、p-Akt、p-mTOR及Beclin1蛋白表达。Real time-PCR技术检测Beclin1 mRNA水平。结果:与正常相比,模型组TG、TC和LDL-C水平升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.01);与模型组相比,治疗组TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均无明显改变(P>0.05)。形态学结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠肝脏脂肪空泡与脂质沉积减少。Western blot结果显示,与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平上调,Beclin1蛋白表达水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组pAkt、p-mTOR蛋白表达水平下调,Beclin1蛋白表达水平上调(P<0.01),PI3K蛋白表达水平呈下调趋势。Real time-PCR结果显示:与正常组相比,模型组Beclin1 mRNA水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组Beclin1mRNA水平上调(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路,增强高脂血症大鼠肝脏自噬水平,减少肝脏脂质沉积。     

康心饮对缺血性心肌病大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的观察康心饮对缺血性心肌病(ICM)大鼠心肌凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响,探讨其对ICM的作用及可能机制。方法 66只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、卡托普利组及康心饮低、中、高剂量组,每组11只。采用左前降支结扎法制备缺血性心肌病模型。模型组予生理盐水10 m L/(kg·d)早晚灌胃,卡托普利组予卡托普利2.86 mg/(kg·d)早晚灌胃,康心饮低、中、高组分别予康心饮9.2、18.4、36.8 g/(kg·d)早晚灌胃,给药2周。TUNEL法检测心肌凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K、Akt、FoxO1蛋白表达,RT-PCR检测PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌凋亡增多(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达量升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达量下降(P0.01),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白和PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均下降(P0.05);与模型组比较,康心饮组低、中、高剂量和卡托普利组心肌凋亡均明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(均P0.05),PI3K、p-Akt、p-FoxO1蛋白及PI3K、Akt、FoxO1 mRNA表达均升高(P0.01),且康心饮高剂量组和卡托普利组优于康心饮低、中剂量组(P0.05)。结论康心饮可能通过激活PI3K/Akt/FoxO1信号通路,抑制ICM心肌细胞凋亡。     

益肾调经方调控PI3K/Akt通路对早发性卵巢功能不全大鼠卵巢功能及凋亡蛋白表达的影响

目的：探讨益肾调经方对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠的影响及相关机制。方法：在60只动情周期正常的SD大鼠中随机选取10只大鼠作为空白组,其余50只大鼠腹腔注射环磷酰胺(CTX)诱导POI大鼠模型,建模成功后,随机分为模型组、对照组和中药低、中、高剂量组,连续给予相应药物灌胃14 d。灌胃结束后处死各组大鼠,观察大鼠的一般情况、动情周期、卵巢指数、性激素水平,HE染色观察卵巢组织结构,RT-qPCR和免疫组化检测卵巢组织中PI3K、Akt、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组大鼠体质量明显下降(P <0.000 1),动情周期延长(P <0.000 1),卵巢指数明显下降(P <0.000 1),E2、AMH水平下降(P <0.000 1,P <0.001)、FSH、LH水平升高(P <0.000 1),模型组PI3K、Akt及Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显降低(P <0.000 1,P <0.001),Bax mRNA及蛋白表达明显升高(P <0.000 1);与模型组比较,给药组大鼠一般状况明显改善,体质量出现不同程度增长(P <0.05,P <0.001,P <0.000 1),动情周期缩短(P <0.000 1),卵巢指数升高(P <0.000 1),E2、AMH水平升高(P <0.000 1,P <0.01),FSH、LH水平降低(P <0.01,P <0.001,P <0.000 1,),PI3K、Akt及Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显升高(P <0.01,P <0.001,P <0.000 1),Bax mRNA及蛋白表达明显降低(P <0.01,P <0.000 1),且呈现明显的剂量依赖性,其中中药高剂量组改善效果最佳。结论：益肾调经方可能通过调控PI3K/Akt通路及凋亡相关蛋白从而达到改善POI模型大鼠卵巢功能的目的。     

姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/AKT信号通路、Bcl-2、BAX的影响

目的:探究姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/Akt信号转导通路的影响及作用机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素A组和姜黄素B组,每组18只。其中模型组、姜黄素A、B组慢性脑缺血大鼠模型制备采用将大鼠两侧颈动脉结扎的方法,假手术组和模型组大鼠分别给予等剂量生理盐水。采用免疫组化法检测大鼠PI3K、AKT、Bcl-2、BAX蛋白表达情况,采用干湿重法检测脑组织水含量,采用甲酰胺法检测血脑屏障通透性。结果:与模型组比较,姜黄素组大鼠PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均明显增高(P0.05,P0.01,P0.05),脑组织含水量、BAX表达及伊文思蓝含量显著降低(P0.05,P0.01,P0.01),差异均具有统计学意义。结论:姜黄素对缺血性脑损伤的保护机制可能是其穿透血脑屏障后激活了PI3K/AKT信号通路,介导Bcl-2蛋白表达增加以及BAX蛋白表达降低,进而调节二者平衡。     

基于PI3K/Akt通路探讨首乌丸对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨首乌丸通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 将SPF级SD雄性大50只随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸中剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-半乳糖（120 mg·kg^-1）制造衰老模型,同时首乌丸中、高剂量组用首乌丸（1.08、2.16 g·kg^-1）进行灌胃,维生素E组予以维生素E（0.018 g·kg^-1）灌胃。造模6周后取全脑、海马组织,尼氏染色观察海马神经元形态学变化,原位末端标记法（TUNEL）检测海马细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,磷酸化（p）-PI3K,蛋白激酶B（Akt）,p-Akt、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、叉头框蛋白O3a（FoxO3a）、p-FoxO3a、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马FoxO3a mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠海马神经元凋亡阳性细胞明显增多,凋亡指数显著升高（P<0.01）,海马CA1区尼氏染色显示海马神经元丢失、排列稀疏,尼氏体数量减少,存在尼氏体固缩和深染,p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白相对表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高（P<0.01）,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白相对表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）,Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,FoxO3a mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,经首乌丸治疗后,凋亡阳性细胞明显减少,细胞凋亡指数显著降低（P<0.01）,海马CA1区尼氏染色显示各治疗组神经元丢失好转,尼氏体增多,排列较密集,大鼠PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义,首乌丸中、高剂量组的p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著降低,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）,Foxo3a mRNA表达显著升高（P<0.01）。结论 首乌丸能够改善海马神经元组织结构,抑制PI3K/Akt信号通路,下调Caspase-3蛋白表达,激活FoxO3a,上调Bcl-2,下调Bax,上调Bcl-2/Bax,从而减少神经元细胞凋亡。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

金丝桃苷预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用与PI3K/Akt信号通路的关系

研究金丝桃苷(hyperoside,Hyp)预处理对抗大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的保护作用及其与PI3K/Akt信号通路的关系。通过可逆性左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型,给予大鼠心肌缺血30 min,复灌120 min。健康雄性SD大鼠60只,随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌组(MIRI组)、Hyp预处理组(Hyp组)、Hyp预处理联合PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002组(Hyp+LY组)及PI3K/Akt抑制剂组(LY组)。记录各组大鼠心脏血流动力学指标,测算心肌梗死面积和大鼠血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)及白介素-6(IL-6)活性。Western blot法检测心肌p-Akt,Akt,Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果显示,与MIRI组比较,Hyp组大鼠心脏血流动力学指标明显改善,心肌梗死面积显著降低;血清中MDA含量和CK,CK-MB,TNF-α,IL-6活性降低,SOD,CAT和GSH-Px活性明显增强;p-Akt的蛋白表达和Akt磷酸化水平明显增强,且Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱(P<0.01)。而LY294002可显著取消Hyp的以上作用(P<0.01)。结果表明,Hyp对抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制可能与其激活PI3K/Akt 信号通路,上调Bcl-2 蛋白表达,下调Bax 蛋白表达等作用有关。     

葛根素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其分子机制研究

[目的] 探索葛根素（Puerarin）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其可能的分子机制。[方法] 以二甲基亚砜（DMSO，空白组）、葛根素（50、100、200 μg/mL）、顺铂20 μg/mL分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞。48 h后，CCK-8法检测细胞增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平，吖啶橙染色法观察细胞自噬状况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、激活型半胱氨酸蛋白酶（Cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、酵母ATG6同源物（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达。[结果] 与空白组比较，葛根素100、200 μg/mL组和顺铂20 μg/mL组HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.01），p-Akt、p-mTOR、bcl-2表达明显下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-I、LC3-Ⅱ表达明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化（p-Akt/Akt比值）降低且Bax/bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（P<0.01）。与顺铂20 μg/mL组比较，葛根素200 μg/mL组细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05或P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.05），p-Akt、p-mTOR表达下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-Ⅱ明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化降低且Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-I比值升高（P<0.01）。[结论] 葛根素具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬的作用，该作用具有一定的剂量依赖性；抑制Akt/mTOR/Beclin1通路进而诱导促凋亡、促自噬相关蛋白表达和活化可能是其重要的分子机制。     

莪连颗粒对胃癌大鼠胃组织自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨莪连颗粒对胃癌大鼠胃组织自噬及磷酯酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（PKB/Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、莪连颗粒组和胃复春组。除正常组常规饲养外,模型组、莪连颗粒组及胃复春组使用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）综合法诱导构建胃癌大鼠模型,并分别予以生理盐水、莪连颗粒水溶液（3.240 g·kg^-1）及胃复春水溶液（0.390 g·kg^-1）灌胃,连续48周。剖腹取胃,肉眼观察胃大体改变,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠胃组织病理学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠胃组织微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）,Beclin1,p62,PI3K,Akt,mTOR mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;与模型组比较,莪连颗粒组大鼠胃胀大减轻,胃壁变薄改善,胃黏膜色暗,皱襞减少,走行尚规整,偶见细颗粒状结节。HE染色显示,与正常组比较,模型组大鼠胃组织腺体排列拥挤紊乱,形态多样,细胞形态不一,胞浆嗜碱性,核大深染不规则,可见核分裂像,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,莪连颗粒组大鼠胃组织腺体排列尚规整,少部分可见轻度异型细胞。与正常组比较,模型组大鼠胃组织LC3B,Beclin1 mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）,PI3K,p62,Akt及mTOR mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,莪连颗粒组胃组织LC3B,Beclin1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）,PI3K mRNA及p62,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论 莪连颗粒可改善胃癌大鼠胃组织细胞异型性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬相关。     

抵当陷胸汤调控PI3K/Akt信号通路对糖尿病大鼠足细胞凋亡的影响

目的 观察抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其对磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的调控作用与对足细胞凋亡的影响,探讨抵当陷胸汤改善糖尿病肾病的机制。方法 采用单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液55 mg·kg^-1的方法建立糖尿病模型,将模型复制成功的30只随机分为模型组、抵当陷胸汤组（8.10 g·kg^-1）、小陷胸汤组（4.05 g·kg^-1）、抵当汤组（4.05 g·kg^-1）、阿拉氯胺（ALT-711）组（3 mg·kg^-1）,每组6只,另设6只空白组大鼠。连续给药8周后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理形态变化;马松（Masson）染色观察胶原沉积程度;高碘酸-席夫（PAS）染色观察基底膜病变;免疫组化法检测大鼠肾组织磷酸化（p）-PI3K、p-Akt蛋白表达;原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠足细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织PI3K、Akt mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）的蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾小球代偿性膨胀,系膜细胞增殖,系膜间质大量胶原沉积,基底膜增厚,PI3K、Akt mRNA表达减少,PI3K、Akt蛋白磷酸化显著受到抑制（P<0.01）,足细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低（P<0.01）,Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,抵当陷胸汤组肾脏组织病理明显改善,PI3K、Akt mRNA表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）,Bcl-2表达显著升高（P<0.01）,Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著降低（P<0.01）,足细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论 抵当陷胸汤可能通过促进PI3K/Akt信号通路活化,抑制足细胞凋亡,减缓糖尿病肾病的发展进程。     

荆防颗粒对糖尿病小鼠视网膜的保护作用

目的 探讨荆防颗粒对db/db小鼠血糖代谢的调控作用及对其视网膜病变（diabetic retinopaphy,DR）的保护作用。方法 将60只雄性db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍（120 mg/kg）组及荆防颗粒（1、2 g/kg）组,每组15只,另取15只雄性db/m小鼠作为对照组,每周检测小鼠体质量、空腹血糖、摄食量及饮水量等基础指标,并在实验结束后进行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test,OGTT）;采用ELISA检测小鼠视网膜组织白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平和过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;采用PAS染色检测视网膜组织病理变化;采用Western blotting检测视网膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、紧密连接跨膜蛋白（Claudin-1）、胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate 1,IRS1）、磷酸化IRS1（phosphorylated IRS1,p-IRS1）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、磷酸化PI3K（phosphorylated PI3K,p-PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、磷酸化Akt（phosphorylated Akt,p-Akt）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠空腹血糖、摄食量、饮水量明显升高（P＜0.01）,OGTT中曲线下面积（AUC）显著升高（P＜0.01）;视网膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量显著升高（P＜0.01）,CAT、SOD活性显著下降（P＜0.01）;视网膜组织周细胞降低,新生血管增多（P＜0.01）,并且视网膜组织中Claudin-1、p-IRS1/IRS1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达下调（P＜0.01）,VEGF、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达上调（P＜0.01）。与模型组比较,荆防颗粒组小鼠体质量明显升高（P＜0.05、0.01）,空腹血糖、摄食量、饮水量均有不同程度下降（P＜0.05、0.01）;视网膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量显著下降（P＜0.05、0.01）,CAT、SOD活性显著上升（P＜0.05、0.01）;视网膜组织病理形态有所改善,视网膜组织中Claudin-1、p-IRS1/IRS1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达显著上调（P＜0.05、0.01）,VEGF、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著下调（P＜0.05、0.01）。结论 荆防颗粒对db/db小鼠视网膜病变具有一定的改善作用,其作用机制可能为调节小鼠视网膜组织中VEGF及Claudin-1蛋白表达,进而激活胰岛素受体IRS-1/PI3K/Akt信号通路,启动Caspase级联反应,抑制视网膜上皮细胞的凋亡,从而对视网膜病变起到一定的保护作用。     

桑叶调节PI3K/Akt/PPARα/CPT-1通路改善2型糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢紊乱机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/过氧化物酶体增殖物激活受体α/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（PI3K/Akt/PPARα/CPT-1）信号通路探讨桑叶水提物对2型糖尿病（T2DM）大鼠肝脏糖脂代谢紊乱的作用及其机制。方法 高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）方法制备T2DM模型,按血糖、体质量将造模成功大鼠随机分为模型组、二甲双胍（0.2 g·kg^-1）组和桑叶水提物（含生药4.0 g·kg^-1）组,连续给药8周,每周相同时间测定空腹血糖。苏木素-伊红（HE）染色、油红O染色观察肝脏组织形态学和脂肪变化;生化分析法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨基酸氨基转移酶（AST）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、PI3K、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、Akt、PPAR-α、CPT-1蛋白表达。结果 给药8周后,与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠血糖显著降低（P<0.01）。HE染色显示,正常组大鼠肝组织结构完整,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列;模型组大鼠肝细胞损伤明显;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠空泡变性程度显著降低,未见小胆管增生等病变。油红O染色显示,正常组大鼠肝细胞无明显脂肪变性、坏死,肝细胞几乎无脂滴;模型组大鼠肝内脂滴较正常组明显增加;桑叶给药可明显减少大鼠肝脏脂滴。模型组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较正常组显著升高（P<0.01）;桑叶水提物组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶水提物能明显增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶水提物可改善T2DM大鼠肝脏糖代谢紊乱,降糖机制可能与调控PI3K/Akt/PPAR-α/CPT-1信号通路有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

安胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠PI3K/Akt信号传导通路的影响

目的:从PI3K/Akt信号传导通路角度探讨安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠疗效的作用机制。方法:采用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)慢性萎缩性胃炎大鼠模型,应用安胃汤进行干预;运用HE染色观察安胃黏膜组织形态改变;采用实时荧光定量PCR方法、Western blot检测PTEN、PI3K、Akt、PDK1、XIAP基因表达及其蛋白含量的水平。结果:安胃汤能够明显改善CAG大鼠胃组织的病理变化,该方可以明显上调PTEN基因以及其蛋白含量的表达,下调PI3K、Akt、PDK1、XIAP基因以及其蛋白含量的表达。结论:安胃汤能够明显改善CAG大鼠胃组织的病理变化,具有明显的抗CAG作用,其作用机制可能通过提高PTEN基因及蛋白的表达,降低PI3K、PDK1、Akt基因及蛋白表达,抑制CAG大鼠胃黏膜细胞P13K/Akt信号传导通路,降低XIAP基因及蛋白,促进胃黏膜细胞凋亡,可能是安胃汤防治CAG的关键机制之一。     

三七总皂苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响

目的 探究三七总皂苷对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响及调控机制。方法 将60只雌性未孕SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七总皂苷低、中、高剂量（10、20、40 mg·kg^-1）组及三苯氧胺组（1.8 mg·kg^-1），每组10只。采用肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮构建乳腺增生大鼠模型。按照实验分组剂量进行灌胃给药。每日1次，连续30 d。正常组和模型组大鼠给予每日等量的生理盐水灌胃。给药结束后，游标卡尺测量大鼠第2对乳头直径；留取组织标本，苏木素-伊红（HE）染色观察乳腺组织病理形态变化；免疫组织化学法观察细胞凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠第2对乳头直径明显增大（P<0.05），乳房小叶体积增大，腺泡数量增加，乳腺组织呈现弥散性增生，乳腺组织Bcl-2蛋白表达及磷酸化（p）-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显增加（P<0.05），Bax表达明显降低（P<0.05），与模型组比较，三七总皂苷低、中、高剂量组和三苯氧胺组大鼠第2对乳头直径明显减小（P<0.05），乳腺小叶数量、腺泡数、分泌物量均较少，乳腺增生减轻，乳腺组织Bcl-2蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显降低（P<0.05），Bax表达明显升高（P<0.05）。结论 三七总皂苷能够改善大鼠乳腺增生，其机制与调控PI3K/Akt/mTOR通路，促进乳腺组织细胞凋亡有关。     

海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠PI3K/Akt通路相关基因表达的影响

目的：探讨海藻、生甘草剂量为2015年版《中华人民共和国药典》规定高限剂量的2倍条件下,海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠PI3K/Akt通路相关基因表达的影响。方法：84只大鼠按体质量分为空白组、模型组、阳性药组、全方组、去海藻组、去甘草组、去藻草组,每组12只。用丙硫氧嘧啶复制甲状腺肿大动物模型,然后给予相应药液灌胃治疗。采用TUNEL检测细胞凋亡,计算凋亡指数,采用实时定量PCR和Western Blot检测PI3K、Akt、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA和Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果：与模型组比较,全方组凋亡指数显著升高（P<0.05）,各中药给药组PI3K、Cyclin D1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01,P<0.05）,全方组和去藻草组Akt mRNA表达显著降低（P<0.05）,各中药给药组p-Akt、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低（P<0.01,P<0.05）。结论：海藻玉壶汤加减海藻甘草对丙硫氧嘧啶所致甲状腺肿大大鼠有显著治疗作用,通过作用于PI3K/Akt信号通路,下调Cyc...     

基于PI3K/Akt信号转导通路的通脉醒脑滴丸治疗脑缺血的机制研究

目的 探讨以活血化淤为主要功效的中药创新复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的作用机理.方法 选用线栓阻断大鼠大脑中动脉法复制脑缺血再灌注模型,采用荧光定量PCR方法测定脑组织PI3K、Akt和PTEN的表达,免疫组化方法测定脑组织HIF-1α和VEGF的表达,考察通脉醒脑滴丸对PI3K/Akt信号通路的作用.结果 通脉醒脑滴丸能上调脑组织PI3K、Akt、HIF-1α以及VEGF的表达,下调PTEN的表达.结论 研究初步证实通脉醒脑滴丸对脑缺血损伤的保护作用机制可能与活血化淤的中药方剂激活PI3K/Akt信号通路有关.     

基于PI3K/Akt信号通路探讨白芷颗粒对糖尿病视网膜病变的影响

目的 研究白芷颗粒对早期糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的保护作用。方法 采用ip链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）法制备糖尿病模型,设置对照组、模型组、白芷（1.25 g/kg）组及羟苯磺酸钙（135 mg/kg）组。连续给药12周后采用苏木素-伊红（HE）和高碘酸-席夫（PAS）染色观察大鼠视网膜病理学改变;采用TUNEL染色法检测视网膜细胞凋亡情况;采用Western blotting检测视网膜组织紧密连接蛋白及磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）通路相关蛋白表达。人视网膜上皮细胞（adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19）分为对照组、高渗组、高糖组、白芷（150 μg/mL）组和羟苯磺酸钙（20 μmol/L）组,对照组在含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基中培养;高渗组在含5.5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇的培养基中培养;高糖组和各给药组在含30 mmol/L葡萄糖的培养基中培养,并给予相应药物。采用TUNEL染色、免疫荧光、Western blotting法观察细胞凋亡、紧密连接蛋白及PI3K/Akt通路相关蛋白表达。使用PI3K抑制剂LY294002后,观察其下游凋亡相关蛋白的变化。结果 HE染色结果显示,模型组大鼠视网膜组织排列紊乱,视网膜变薄,白芷干预后较模型组有所缓解。TUNEL染色显示视网膜组织中细胞凋亡率增加。Western blotting结果显示,与模型组比较,白芷组咬合蛋白（Occludin）、闭锁小带蛋白1（Zonula occluden-1,ZO-1）、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）,Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）/ B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3）蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。体外实验结果显示,白芷干预后细胞凋亡率降低（P＜0.05）,Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,Occludin、ZO-1蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）;免疫荧光结果显示白芷干预后Occludin、ZO-1表达升高;此外,白芷能够促进高糖环境下PI3K/Akt的磷酸化,在使用PI3K抑制剂干预后抑制了Akt的磷酸化,Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 白芷颗粒能够通过抑制细胞凋亡保护血-视网膜屏障损伤,从而延缓早期DR的发展,其作用机制可能与调节PI3K/Akt信号通路有关。     

基于miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨肾衰泄浊汤干预慢性肾脏病合并动脉粥样硬化作用机制

目的 探讨微小核糖核酸126（miRNA126）调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在慢性肾脏病合并动脉粥样硬化（CKD AS）中的作用,以及肾衰泄浊汤干预5/6肾切除术联合高脂饲养的CKD AS大鼠的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、肾衰泄浊汤低、中、高剂量组。通过5/6肾切除术联合高脂饲养10周建立大鼠CKD AS模型,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组（6.0、12.0、24.0 g·kg^-1·d^-1）,氯沙坦组（20 mg·kg^-1·d^-1）剂量灌胃,进行相应的干预8周,然后处死大鼠,取材进行相应检测。全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能和血脂：血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色主动脉组织并在光学显微镜下进行病理学观察;通过透射电子显微镜观察自噬体和自噬溶酶体;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠miRNA126、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、苄氯素-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN、TC、TG、LDL-C均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,氯沙坦组与肾衰泄浊汤低、中、高剂量组大鼠SCr、BUN、TC、TG、LDL-C明显降低（P<0.05）;与假手术组比较,模型组大鼠内膜可见增厚斑块形成,单核巨噬细胞浸润,少量泡沫细胞,中膜平滑肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,氯沙坦组与肾衰泄浊汤各组较模型组病变减轻;与模型组比较,肾衰泄浊汤中、高剂量组中电镜的自噬小体及自噬溶酶体的数量增多;与假手术组比较,模型组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著下降（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肾衰泄浊汤高、中、低剂量组及氯沙坦组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达显著升高（P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较,氯沙坦组和肾衰泄浊汤低、中、高剂量组的p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达降低（P<0.05）,Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）。结论 CKD AS大鼠主动脉组织miRNA126表达降低,激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬通量;肾衰泄浊汤通过miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,恢复主动脉内皮细胞的自噬,保护CKD血管损伤,减少As斑块的形成,减缓心血管并发症的发展。