氟对大鼠成骨细胞Runx2表达的影响

目的 研究氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Runx2表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,按染氟剂量分为0(对照组)、1、2.4 mg/L 4个水平,分别在48、72 h后,提取RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PcR)方法检测Runx2 mRNA表达;采用酶联免疫吸附试验(EUSA)方法检测培养液上清中的Runx2蛋白质.结果 Wistar大鼠乳鼠成骨细胞在体外染氟培养48 h后,1、2、4mg/L染氟水平下Runx2的mRNA表达(0.613±0.055、0.773±0.070、0.775±0.070)与对照组(0.482±0.043)比较.差异均有统计学意义(P<0.05);在染氟培养72 h后,1、2,4 mg/L染氟水平和对照组的Runx2 mRNA表达量分别为0.969±0.048、1.229±0.061、1.255±0.063、0.724±0.036,任意两组问比较,差异均有统计学意义(P<0.05).各染氟组Runx2mRNA表达,72 h组均高于铝hm(P<0.05);染氟剂量和染氟时间有交互作用(F=189.20,P<0.05).在染氟培养48 h后,1、2、4 mg/L染氟水平下的Runx2蛋白质表达(0.141±0.007、0.143±0.008、0.143±0.011)与对照组(0.129±0.012)比较,差异有统计学意义(P<0.05);在染氟培养72 h后,1、2、4 mg/L染氟水平下的Runx2蛋白质表达(0.156±0.014、0.168±0.018、0.162±0.010)与对照组(0.137±0.016)比较.差异有统计学意义(P<0.05);各染氟剂量Rung2蛋白质表达.72 h组均高于48 h组(P<0.05),染氟剂量和染氟时间之间无交互作用(F=2.22,P0.05).结论 氟可促进成骨细胞Runx2的mRNA和蛋白质表达,与染氟的剂量以及作用时间有关.     

氟对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达的影响

目的研究不同剂量的氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Ⅰ型胶原表达的影响。方法体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,给予不同剂量的氟,提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅰ型胶原mRNA:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测培养液上清中的Ⅰ型胶原蛋白质。结果与对照组相比,1、2及4 mg／L F-均能促进Ⅰ型胶原表达,但在蛋白质表达方面培养48 h后只有2、4 mg／L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P<0．05),而在培养72 h后各加氟组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P< 0．01);在mRNA表达方面培养48 h后只有2 mg／L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P<0．01),而在培养 72 h后2 mg／L F-和4 mg／L F-组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0．01)。结论氟可促进成骨细胞Ⅰ型胶原的表达,且与氟化物水平以及作用时间有关。     

氟化物对成纤维细胞和成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响

目的观察氟化物对成纤维细胞和成骨细胞骨形态发生蛋白-2（BMP-2）表达的影响。方法采用体外细胞培养的方法，将细胞分为对照组和6个染氟（F^-，0．1、1．0、100．0、1000．0、10000．0、20000．0μg／L）组，分别在5个染氟时间段（2、4、24、48、72h）收集培养上清液和细胞，应用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法检测BMP-2蛋白，RT-PCR方法检测染氟48hBMP-2mRNA的表达。结果与对照组比较．成纤维细胞染氟48hBMP-2mRNA表达呈普遍增强趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）；免疫组化检查，可见染氟0．1、1．0、1000．0μg／L组成纤维细胞BMP-2阳性着色较对照组增强；染氟72h，培养上清中BMP-2蛋白在1．0、100．0、20000．0μg／L组分别为（0．11±0．01）、（0．11±0．01）、（0．11±0．01），与对照组（0．07±0．01）比较有明显增高（P〈0．05）。与染氟成纤维细胞比较，染氟成骨细胞BMP-2mRNA和蛋白表达升高出现早．持续时间较长．增强程度更为明显。结论成纤维细胞和成骨细胞在氟化物的刺激下，BMP-2mRNA和蛋白表达有所升高，推测BMP-2可能是氟化物诱导成纤维细胞中成骨细胞核心结合因子α1（cbfa1）和骨钙素（OCN）表达的重要中介环节。     

不同剂量氟对大鼠成骨细胞激活与BMP-4、BMP-2和Smad-4表达的影响

目的探讨过量氟对大鼠成骨细胞系BMP-2、BMP-4及其信号转导物Smad-4表达水平的影响及其与氟骨症发病机制的关系。方法利用饮水加入氟化钠(NaF)进行大鼠染氟实验,采用原位杂交技术、 Western blot技术、免疫组织化学方法,对氟中毒大鼠骨组织成骨细胞系进行BMP-4、Smad-4的mRNA水平和 BMP-2、BMP-4蛋白质水平的定量分析。结果 NaF可刺激慢性氟中毒大鼠椎骨各包被成骨细胞增殖,并诱导 BMP-2、BMP-4和Smad-4的表达。在低钙偏食组慢性氟中毒大鼠BMP-4、Smad-4 mRNA和BMP-2、BMP-4 蛋白质水平稍增高但与对照组相比差异无统计学意义(P>0．05);在高钙和低钙加氟组Smad-4 mRNA的表达均增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0．001);在低钙加氟组Smad-4 mRNA水平与BMP-4 mRNA水平和BMP-2、BMP-4蛋白质表达水平具有一定相关性(r=0．53)。结论过量氟可刺激大鼠成骨细胞系激活、增殖能力增强,但在增殖能力增强的成骨细胞中BMP-4 mRNA和BMP-2、BMP-4蛋白质水平表达无明显增高,可能与氟骨症的骨化不良有关;NaF刺激Smad-4 mRNA过表达可能与氟骨症骨相损害的信号转导途径激活有关。     

氟化物对成骨细胞OPGL mRNA和M-CSF mRNA表达的影响

目的探讨氟对成骨细胞的骨保护蛋白配体(OPGL)mRNA和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA表达的影响.方法应用酶消化法分离小鼠乳鼠成骨细胞,取第3代成骨细胞,加入不同浓度的氟6 h,提取细胞总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,观察成骨细胞分泌的OPGL和M-CSF表达的变化.结果在氟的作用下,成骨细胞的OPGL mRNA和M-CSF mRNA的表达呈上升趋势,但未达到统计学差异水平.结论氟有可能通过上调OPGL和M-CSF的表达,提高破骨细胞的骨吸收活性.     

氟化物对骨形成中成骨细胞的影响及机制

氟化物作为促骨形成药物之一 ,最早被推荐应用于骨质疏松症的临床治疗 ,目前仍是唯一可供临床使用的有效的促骨形成的药物。近年来由于成骨细胞 (osteoblast OB)培养技术及基因工程技术的发展 ,对氟化物刺激骨形成作用有了更进一步的认识 ,有助于我们对氟中毒时氟骨症机制的探讨。1　氟化物对成骨细胞的直接作用　　氟是一种已知可影响骨形成的非激素因子。具有双相调节作用。长期小剂量氟可促进骨形成 ;大剂量可引起骨质疏松或骨硬化。在人体和动物实验研究中 ,较多学者报道氟中毒时骨量增多是由于 OB数增多 ,活性增加 ,生命周期延长 [1 …     

IL-4和IL-13在溃疡性结肠炎中的表达

目的探讨Th2类细胞因子IL4和IL13在溃疡性结肠炎中的作用。方法收集30例经内镜检查证实的UC患者结肠黏膜和血清标本,20例性别、年龄相匹配的同期大肠息肉患者(取其正常组织)作为对照组。用RTPCR法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL4及IL13的mRNA表达及其血清含量。结果轻度UC患者IL4和IL13的mRNA表达与对照组比较无统计学意义(P>0.05),中重度UC患者IL4和IL13的肠黏膜表达明显下降(P<0.05)与对照组比较,二者血清含量未见明显区别(P>0.05)。结论IL4和IL13在UC的发病中起重要作用。     

不同龄小鼠成骨细胞OPG和RANKL表达的变化

目的观察来源于不同龄小鼠成骨细胞经雌激素作用后,分泌骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)的变化.方法经雌激素作用前后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定OPG、RANKL表达的变化.结果经雌激素作用后,幼年组和成年组OPG分泌显著增多,而老年组RANKL表达明显下调.结论雌激素可以刺激成骨细胞分泌OPG,减少RANKL表达,很可能是骨质疏松的发生机制之一,是绝经后骨质疏松发生的重要原因.     

重组人结缔组织生长因子对人成骨细胞骨保护素/RANKL表达的影响

目的 研究重组人结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的人成骨细胞骨保护素/RANKL(receptor activator of NF-κB ligand)表达的影响,并探讨重组人CTGF调节骨保护素/RANKL表达的信号转导机制.方法 用重组人CTGF干预体外培养的人成骨细胞,采用Western印迹法检测骨保护素/RANKL蛋白表达水平的变化,同时观察重组人CTGF对人成骨细胞FAK、MAPK磷酸化的影响.结果 重组人CTGF可呈时间-剂量依赖性抑制人成骨细胞RANKL的表达,200 ng/ml重组人CTGF作用24～48 h达最大抑制效果,而对人成骨细胞骨保护素的表达无明显影响.重组人CTGF可明显增强p38MAPK磷酸化,并减少FAK磷酸化,重组人CTGF干预对ERK、JNK磷酸化无明显影响;p38MAPK阻断剂SB23058可阻断重组人CTGF对RANKL表达的抑制效应.结论 重组人CTGF通过增强p38MAPK磷酸化,减少FAK磷酸化下调人成骨细胞RANKL的表达.     

氟对小鼠成骨细胞RANKL mRNA表达的影响

目的探讨氟对成骨细胞细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达的影响。方法分离小鼠乳鼠成骨细胞，取第3代成骨细胞，分别培养于含有矿化液（维生素C50mg／L、β-甘油磷酸钠10mmol／L、地塞米松10^-7md／L）和不含矿化液的L-DMEM培养基中，按染氟剂量[F-终剂量为0（对照组）、1、10、100、1000、10000、20000μg／L]分组，染氟72h后，提取细胞总RNA，通过反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）方法，观察含矿化液和不含矿化液情况下培养的成骨细胞在不同染氟剂量下RANKLmRNA表达的变化。结果与对照组比较，非矿化染氟（不含矿化液）1000μg/L组RANKLmRNA表达升高（P〈0．01），10000μg／L组RANKLmRNA表达降低（P〈0．01）；与对照组比较，矿化染氟100、1000μg／L组RANKLmRNA表达升高（P〈0.01）；相同染氟剂量，矿化染氟0、1、10、100、1000、10000μg／L组与非矿化染氟组比较，RANKLmRNA表达降低（P〈0．01）。结论染氟可以影响成骨细胞表达RANKLmRNA；同等染氟剂量下，矿化处理可降低成骨细胞RANKLmRNA表达。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血管内皮生长因子的表达及其意义

目的 观察阻骞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者外周血血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化,探讨其与OSAHS及OSAHS相关性心脑血管疾病的关系. 方法 采用多导睡眠呼吸监测对6个OSAHS高发家庭的21例OSAHS患者及48例体检正常者进行睡眠呼吸监测,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及计算机条带分析半定量检测单纯OSAHS组、OSAHS合并心脑血管疾病组以及正常对照组外周血VEGF mRNA表达水平,同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测3组的外周血浆VEGF的水平. 结果 (1)单纯OSAHS与正常对照组血浆VEGF含量[(205.75±2.79)ng/L与(168.72±4.64)ng/L]及外周血单个核细胞VEGF mRNA的表达[0.61±0.02与0.47±0.02(灰度面积比值)]比较,差异有统计学意义(均P＜0.01).OSAHS合并心脑血管病组与单纯OSAHS组血浆VEGF含量[(288.74±2.73)ng/L与(205.75±2.79)ng/L]及外周血单个核细胞VEGFmRNA的表达[1.16±0.03与0.61±0.02(灰度面积比值)]比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)OSAHS患者血浆VEGF及外周血单个核细胞VEGF mRNA水平均与其呼吸紊乱指数(AHI)、晨起收缩压、晨起舒张压呈正相关,与最低动脉血氧饱和度(MinSaO2)呈负相关. 结论 OSAHS患者VEGF水平明显增加,考虑VEGF可能参与了OSAHS的病理生理过程,特别是OSAHS相关性心脑血管病的病理生理过程.     

运动相关蛋白Fascin在胰腺癌的表达及其临床意义

目的 探讨运动相关蛋白Fascin在胰腺癌的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用RT-PCR法检测SW1990、Patu8988、BxPC3、CfPAC1 4株胰腺癌细胞株Fascin mRNA表达;采用免疫组化方法 检测54例胰腺癌及42例相应癌旁胰腺组织Fascin蛋白表达.结果 胰腺癌细胞株SW1990、Patu8988、CfPAC1有Fascin mRNA表达,BxPC3无表达;54例胰腺癌组织Fascin蛋白表达阳性35例,占64.8%,42例癌旁胰腺组织中均无阳性表达.Fascin蛋白表达与肿瘤分化程度(P<0.01)和淋巴转移(P<0.05)呈显著正相关,但与肿瘤大小及远处转移无相关性(P>0.05).结论 Fascin蛋白在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,检测其表达有助于胰腺癌的诊断,并有助于判断胰腺癌恶性程度.     

宁夏地区病毒性脑炎中新发博尔纳病病毒感染的研究

目的 研究宁夏地区新发博尔纳病病毒(BDV)在病毒性脑炎患者中的感染状况,分析病毒株的核酸序列、编码的氨基酸序列和病毒株的系统发生.方法 套式反转录实时荧光定量PCR检测60例病毒性脑炎患者血液标本;并对前期课题组检测的59例病毒性脑炎患者中BDV p24阳性样本和本实验PCR检测阳性标本使用ELISA法检测其对应脑脊液中p40抗体,对阳性标本进行连接测序,应用MEGA和DnaSP4.0软件对测序结果与国外标准株He/80、H1766、strain V等的核酸和氨基酸序列对比分析,构建病毒基因的系统发生树.结果 PCR检测119份血标本,发现有12份标本BDV p24阳性,阳性检出率为10.08%,7份BDV p40检测阳性,阳性率为5.88%;ELISA检测脑脊液核蛋白抗体,有2份阳性,阳性检出率为1.68%.基因聚合分析显示,7份BDV阳性的核酸序列中有6份与德国马源性的He/80株同源性达100%,1份仅有1个碱基发生同义突变;转录后的氨基酸对比分析显示,7份与He/80株完全一致;重构的基因系统发生树中可见宁夏病毒性脑炎患者BDV核苷酸序列与国外标准株形成一个中国(宁夏)-德国-日本的混合支系.结论 宁夏地区病毒性脑炎患者中可能存在BDV感染,其发生可能与动物的密切接触相关,病毒在种系发生中与德国马源性He/80株有极高的同源性,推断病毒有可能从国外传入本土,不排除病毒株变异的可能.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞諸Toll样受体3 mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体3(TLR3 mRNA)表达及其与疾病活动性的关系.方法 利用实时荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,检测55例PBC患者(活动期33例、缓解期22例)、20例肝癌患者(疾病对照组)和24名健康体检者(健康对照组)PBMCs中TLR3 mRNA的表达水平.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 PBC患者活动期TLR3 mRNA的表达水平高于疾病缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);同时也高于肝癌患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缓解期TLR3 mRNA的表达水平与健康人和肝癌对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBC患者TLR3 mRNA表达异常,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

PBC患者granulysin基因和蛋白的表达及临床意义

目的:探讨颗粒溶素(granulysin,GNLY)在原发性胆汁性肝硬化和患者(PBC)中的表达及其意义.方法:采用TaqMan探针技术,以18SrRNA为内参照,测定60例PBC患者外周血中GNLYmRNA的含量,同时应用酶联免疫吸附法(ELISA),检测PBC患者血清中GNLY蛋白的水平,并以健康体检组(n=100)和乙型肝炎肝硬化组(n=60)为对照.结果:PBC组GNLYmRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(2.7±2.5)×108vs(3.0±1.9)×107,P<0.01]和乙型肝炎后肝硬化组[(2.7±2.5)×108vs(4.7±3.6)×105,P<0.001).PBC患者血清中的GNLY蛋白表达显著高于健康对照组(15.48±3.24μg/Lvs4.76±2.32μg/L,P<0.01)和乙型肝炎后肝硬化组(15.48±3.24μg/Lvs2.57±1.84μg/L,P<0.01).结论:GNLY的表达与PBC的发生、发展存在一定的相关性,可用于PBC临床诊断.     

严重急性呼吸综合征患者外周血病毒载量和抗体水平动态监测

目的 动态监测严重急性呼吸综合征(SARS)患者外周血SARS病毒载量和抗体含量变化。方法 选择3例因同一传染源感染的SARS患者为研究对象，应用实时荧光定量逆转录，聚合酶链反应(RT—PCR)检测患者外周血PBMCs中病毒载量，用酶联免疫检测技术检测血清SARS病毒IgG、IgM含量。结果 3例患者分别在出现症状后第3～11日、第1～13日、第1～9日检测到SARS冠状病毒核酸，第5～7日病毒载量达到高峰。IgM抗体在患者起病后第7～9日即可被检测到，IgG抗体在患者起病后第7～14日即可被检测到，高峰在第10～20日。结论 SARS病毒载量存在自限性消长过程。SARS抗体IgG、IgM均较早出现，IgG维持时间比IgM长。     

氟对鼠成骨细胞BMP表达的影响及锌的拮抗作用

目的：研究氟对大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白(BMP-2)表达的影响以及锌制剂能否拮抗氟化物的作用。方法：体外培养SD乳鼠成骨细胞，给予不同剂量氟或／和锌制剂，测定细胞增殖及AKP活性，通过免疫组化方法对各组成骨细胞表达BMP-2进行定量分析。结果：10^-4mol/L ZnSO4及10^-5mol/L NaF能促进细胞增殖，增强AKP活性；10^-3mol／L NaF则抑制细胞增殖及AKP活性；高氟(10^-3mol／L)可促进BMP-2表达，但10^-4mol／L ZnSO4加入高氟组后未发现有抑制BMP-2表达的作用。结论:高氟可促进成骨细胞BMP-2表达，锌制剂能拮抗高氟的毒性作用，但对BMP-2的表达无拮抗作用。     

纤维蛋白原对内皮细胞t-PA和PAI-1 mRNA表达的影响

目的 探讨纤维蛋白原（Ｆｇ）对内皮细胞（ＥＣ）组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）和纤溶酶原灭活剂（ＰＡＩ－１） ｍＲＮＡ表达的影响。方法 不同浓度Ｆｇ与ＥＣ孵育不同时间后,用单管逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量法检测ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ－ｍＲＮＡ的表达。结果 用２０,２００,２０００ｍｇ／Ｌ Ｆｇ与ＥＣ孵育１、１２、２４ｈ、ＰＡＩ－１ ｍＲＮＡ的相对表达水平分别为同时相对照组的１．７,３．６,２