玻璃化技术冻存胚胎的基础与研究现状

在体外受精－胚胎移植（ＩＶＦ－ＥＦ）治疗不孕症中，胚胎冻存技术使得剩余胚胎的保存成为可能，增加了治疗周期的胚胎移植次数和累积妊娠率，胚胎的冻存方法主要有４种：慢速冷却，快速复温法，超快速冻地和玻璃化技术，目前临床多采用第２种方法，但是，玻璃化技术具有避免细胞外冰形成对胚胎的化学，物理损伤，操作简便，费时少，无需贵重的程序式降温仪等优点，而且一些动物实验表明，该方法较常规的慢速冷却，快速复温法获得更     

不同胚胎冷冻方法对冻融胚胎移植患者临床结局的影响

目的:比较人卵裂期胚胎玻璃化冷冻和慢速冷冻解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率,评价两种方法的有效性。方法:选择2009年7月～2010年3月在辅助生殖中心行F-ET的89例患者,将其分为玻璃化冷冻组(46例)和慢速冷冻组(43例),比较解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率。结果:玻璃化冷冻组与慢速冷冻组比较具有较高的胚胎复苏率(92.7%vs.66.1%)、卵裂球完整率(89.2%vs.61.4%)、种植率(21.1%vs.4.7%)以及临床妊娠率(47.8%vs.23.3%)。结论:玻璃化冷冻法解冻后胚胎复苏率高,卵裂球完整性好,胚胎具有更好地发育潜能,是人卵裂期胚胎冷冻的有效方法。     

玻璃化技术冻存胚胎的基础与研究现状

在体外受精-胚胎移植(IVF-EF)治疗不孕症中,胚胎冻存技术使得剩余胚胎的保存成为可能,增加了治疗周期的胚胎移植次数和累积妊娠率。胚胎的冻存方法主要有4种:慢速冷却、慢速复温法;慢速冷却、快速复温法;超快速冻结法和玻璃化技术。目前临床多采用第2种方法,但是,玻璃化技术具有避免细胞外冰形成对胚胎的化学、物理损伤,操作简便,费时少,无需贵重的程序式降温仪等优点,而且一些动物实验表明,该方法较常规的慢速冷却、快速复温法获得更高的胚胎存活率。本文就玻璃化技术的方法设计、影响因素和研究现状进行综述。     

不同冷冻速率在Vero细胞冻存复苏中的应用效果分析

目的：为了选择Veto细胞最佳的冷冻速率。方法：对Vero细胞应用不同的速率进行冻存，观察复苏效果。结果：采用一步直接法可获得90％以上的复活率。结论：不同的细胞具有不同的特性，其在冷冻过程中的生理变化及对保护剂的要求也不同，并具有不同的最适冷冻速率。     

兔骨髓基质干细胞的分离生长及冻存技术研究

目的：建立兔骨髓基质干细胞(MSC)体外分离、培养、增殖、冻存的方法，以及探讨其生物学特性。方法：抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液，采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出MSC，并增殖。观察MSC的生长特性，测定其贴壁率及第3、8、13、18代的生长曲线，并评价其生物学特性。MSC在12．5％DMSO条件下经液氮或-60℃冻存复苏，测其成活率。结果：MSC为贴壁生长，以均一的梭形的成纤维细胞样生长，贴壁及增殖能力强，所测各代的生长曲线呈相似的S型，倍增时间约为35h。MSC需液氮保存，短期也可-60℃冰箱保存。结论：获得的兔MSC生长旺盛、增殖能力强，其分离、培养、纯化、增殖、冻存方法是可行的，可较长时间稳定地培养增殖、冻存，传代的MSC可保持其原代的生物学特性。MSC将是组织工程理想的种子细胞。     

两种冷冻方法对人卵巢组织冻存效果的分析

目的：比较程序化冷冻与玻璃化冷冻人卵巢组织的冻存效果。方法：收集19例人卵巢组织标本,每例分成2份,1份应用程序化方法冷冻,另1份应用玻璃化方法冷冻,复苏后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下。38只重症联合免疫缺陷（SCID）裸鼠（移植宿主）随机分为2组：A组19只,移植程序化冷冻复苏的人卵巢组织;B组19只,移植玻璃化冷冻复苏的人卵巢组织。以去除移植宿主双侧卵巢日为D0,移植人卵巢组织日为D21,整个实验过程中,每日通过阴道脱落细胞学检查观察移植宿主动情周期变化,分别于D0、D21、D42、D63取裸鼠静脉血,酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清AMH浓度。结果：切除卵巢后移植宿主动情周期消失,D63共有14只裸鼠恢复动情周期,2组间差异无统计学意义（A组8只,B组6只,P＞0.05）,但A组恢复时间显著少于B组[（16.38±1.60）d vs.（18.33±1.21）d,P＜0.05]。2组间AMH水平在D0、D21、D42、D63差异均无统计学意义（P＞0.05）,但A组、B组D21 AMH水平均显著低于D0,差异有统计学意义（P＜0.05）。恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63逐渐回升但未恢复至D0水平,未恢复动情周期移植宿主的AMH水平在D42和D63均未回升但仍低于D0。结论：程序化冷冻和玻璃化冷冻均能有效保存卵巢组织。在冷冻的卵巢组织经解冻-移植后宿主恢复动情周期方面,程序化冷冻要优先于玻璃化冷冻,但仍需进一步研究。     

液氮直投及程序冷冻冻存人卵巢组织的研究

目的 液氮直投法及程序冷冻法冻存人卵巢组织效果的比较研究.方法 采用液氮直投法及程序冷冻法冻存人卵巢组织,解冻后苏木素-伊红染色检测冷冻前后各级卵泡(始基卵泡、初级卵泡和次级卵泡)的组织形态,然后将卵巢组织体外培养3天,检测培养上清雌激素水平.结果 液氮直投法、程序冷冻法始基卵泡形态正常率分别为72.96%、81.87%,差异有统计学意义(χ2=11.27,P<0.05);初级卵泡形态正常率分别为58.62%、34.48%,差异有统计学意义(χ2=6.79,P<0.05).第3天、第6天血清雌激素水平检测,液氮直投法与程序冷冻法比较差异无统计学意义(108.38±9.27 vs 105.15±9.13,151.08±16.64 vs 147.38±20.48,均P>0.05).结论 程序冷冻法以及液氮直投法可有效保存卵巢组织,对卵巢组织和功能的影响较小,而且液氮直投法操作更简便、快捷.