黄连解毒汤含药血清对血管内皮细胞增殖及粘附中性粒细胞能力的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型,应用MTT和蛋白染料染色法,观察给药一次及连续给药3d后5,1,1．5,2,2．5h所取黄连解毒汤（HLJDT）含药血清对HUVEC增殖及粘附中性粒细胞（PMN）能力的影响,以探讨HLJDT含药血清制备的最佳取血时间点及其抗炎作用机制,结果：（1）与对照血清相比,40％及20％浓度的含药血清HUVEC产有不同程度的抑制增殖作用,而10％浓度时无明显抑制作用;（2）各点的HLJDT含药血清均有一定的抑制HUVEC－PMN粘附的作用,且与取血时间点存在一定的时效关系。其抑制细胞粘附的最佳时间点为连续给药3d组的1．5h左右。结论：HLJDT含药血清能抑制HUVEC－PMN粘附,可能是HLJDT抗炎作用的机制之一。     

清开灵对白细胞-血管内皮细胞粘附的影响

目的：研究清开灵对白细胞与血管内皮细胞粘附的作用。方法：以THF处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验模型，用不同浓度的清开灵作用HUVEC2、l2h后，用虎红染色法检测人外周血中性粒细胞(PMH)、淋巴细胞与佃VEC粘附的情况；并用Cell—ELISA检测HUVEC表面粘附分子E—selectin的表达。结果：THF作用HUVEC2、l2h后，能明显增强PMH、淋巴细胞与HUVEC的粘附，不同浓度的清开灵能降低PMH、淋巴细胞与HUVEC的粘附；THF作用HUVEC2h后，不能促进HUVEC表面E—selectin的表达，清开灵能抑制E—selectin的表达，THF作用HUVECl2h后，不能促进HUVEC表面E—selectin的表达，不同浓度的清开灵对E—selectin的表达没有作用。结论：清开灵能降低白细胞与HUVEC的粘附，抑制E—selectin的表达是其抗白细胞粘附的分子机制之一。     

活血通络汤对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤CD54表达及中性粒细胞粘附率的影响

目的研究活血通络汤对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧/复氧损伤CD54表达及中性粒细胞(PMN)粘附率的影响。方法制备兔含药血清;HUVEC复苏和培养后,建立缺氧/复氧损伤模型;将模型细胞分为5组,即正常对照组、模型组及活血通络汤高、中、低剂量组。上述分组处理后,倒置显微镜下观察其形态学变化,测定CD54表达及PMN粘附率。结果活血通络汤低、中、高剂量组能够抑制HUVECCD54表达、降低PMN与HUVEC的粘附率,且作用呈剂量依赖性改变,其中活血通络汤中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论活血通络汤能够抑制CD54的表达增多、改善血管内皮细胞在缺氧条件下的细胞粘附性,从而对血管内皮细胞起到保护作用,这可能是该方防治下肢深静脉血栓的作用机制之一。     

四妙勇安汤抑制中性粒细胞-内皮细胞黏附的实验研究

目的： 探讨四妙勇安汤对于凝血酶处理的内皮细胞与中性粒细胞黏附及内皮细胞P-选择素表达的影响。方法： MTT法检测四妙勇安汤以生药22.5 g·kg^-1·d^-1,ig 7 d制备含药血清对于内皮细胞活力的影响,EA.hy926细胞加入0.2 U·mL^-1凝血酶、中性粒细胞作为模型组,2.5%,5%,10%,20%四妙勇安汤含药血清预处理内皮细胞24 h后造模为干预组。虎红法检测细胞黏附率,流式细胞术、ELISA检测内皮细胞P-选择素的表达。结果： 空白组与空白对照组在各项检测中均无显著性差异;10%,20%含药血清组对黏附率有抑制作用,10%组效果较好;ELISA结果显示10%含药血清组预处理组能抑制P-选择素的表达,其他3个干预组则无差异;流式细胞术检测10%,20%含药血清组对于细胞表面P-选择素有抑制作用,10%含药血清组效果最好。结论： 四妙勇安汤能抑制中性粒细胞、内皮细胞的黏附,这一作用可能是通过抑制内皮细胞P-选择素的表达来实现的。     

灵芝孢子油对血管生成作用的研究

目的观察灵芝孢子油(GSO)对血管生成的作用。方法应用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养三维血管生成模型和鸡胚尿囊膜(CAM)模型,观察灵芝孢子油含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响;及对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果灵芝孢子油含药血清,使CAM血管生成减少、变细,其中较大剂量组中、小血管生成数量明显减少。对血管内皮细胞的出芽和管腔形成有抑制作用,较大剂量组抑制作用明显。结论灵芝孢子油具有抑制血管内皮细胞的增殖,抑制新生血管的形成的作用。     

解毒化浊方含药血清调控TANs对HER-2阳性乳腺癌肿瘤微环境的影响

目的 通过解毒化浊方含药血清干预乳腺癌细胞和中性粒细胞共培养的体外肿瘤微环境的实验研究，探讨其抑制乳腺癌复发转移的作用机制。方法 选用雌性SD大鼠分为生理盐水组、中药组，分别给药制备含药血清，给药血清干预共同培养的乳腺癌MDA-MB-453细胞和小鼠外周血中性粒细胞，采用流式细胞术检测MDA-MB-453细胞和中性粒细胞凋亡率。结果 解毒化浊方含药血清干预肿瘤微环境中性粒细胞24h后，中药组与生理盐水组比较中性粒细胞的凋亡率增加，但不明显(P>0.05);干预48h后，中药组与生理盐水组比较中性粒细胞的凋亡率明显增加(P<0.05);中药组与中药对照组比较中性粒细胞的凋亡率明显减少(P<0.05),生理盐水组与生理盐水对照组比较中性粒细胞的凋亡率明显减少(P<0.05)。解毒化浊方含药血清干预肿瘤微环境中乳腺癌MDA-MB-453细胞48h后,中药组与生理盐水组比较乳腺癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05),中药组与中药对照组乳腺癌细胞比较凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 解毒化浊方中药重塑肿瘤微环境后，能促进中性粒细胞的凋亡。且能阻止中性粒细胞驯...     

补气活血药含药血清对血管内皮细胞迁移的影响

目的:观察补气活血类中药含药血清对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）迁移的影响,并初步筛选出对HUVEC 迁移能力具有较明显的促进、抑制作用的药物。方法：建立HUVEC的体外培养的细胞模型,将赤芍、川芎、丹皮、丹参、莪术、三棱、黄芪、人参按照1∶2,1∶1,2∶1 3种配比两两配伍组合,组成13对补气活血药药对,采用血清药理学方法,制备含药血清,应用划痕法观察不同活血化瘀药和补气活血药药对的10%含药血清对HUVEC（5×105/mL 密度）作用24 h后迁移能力的影响。结果：与空白血清组相比较,丹参组、川芎组、赤芍组,丹参黄芪（1∶2）组、丹参黄芪（1∶1）组、川芎黄芪（1∶2）组对血管内皮细胞的迁移能力具有明显促进作用（P＜0.05或P＜0.01）;三棱组、莪术组、丹皮组,莪术黄芪（2∶1）组、三棱人参（2∶1）组、莪术黄芪（1∶1）组对血管内皮细胞的迁移能力具有明显抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）。结论：不同的活血化瘀药和补气活血药配伍组成对HUVEC 的迁移能力具有不同的促进或抑制作用,这可能是这些药物在细胞层面上促进或抑制血管生成的作用机制之一。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

中药脑心通对血管内皮细胞一氧化氮和内皮素-1的影响

目的 观察脑心通对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)分泌量的影响.方法 以培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入Ox-LDL(50 mg/L)制备细胞损伤模型,并以不同浓度脑心通含药血清预先进行干预,分别采用硝酸还原酶法和放免法检测细胞上清液中的NO及ET-1的含量.结果 Ox-LDL作用HUVEC 24h后,HUVEC上清液中NO含量明显降低,而ET-1的含量明显升高,均明显高于正常对照组(P＜0.05);而预先加入脑心通含药血清或阿托伐他汀药液组NO含量明显升高,且在加入步长脑心通含药血清组,这种作用在一定剂量范围内随药物剂量的增加而增强(P＜0.05).结论 步长脑心通能够通过促进内皮细胞NO的合成与释放从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减轻或抑制动脉粥样硬化的形成与发展.     

养阴药与活血药配伍对血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨养阴药与活血药配伍对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用。方法：采用血清药理学的方法制备药物血清，以大肠杆菌内毒素造成HUVEC的凋亡模型，观察药物血清保护HUVEC以抗凋亡的作用。结果：养阴药与活血药同用可促进HUVEC在损伤条件下的增殖，能明显降低细胞液中LDH及MDA含量、提高SOD水平，并且能显著降低HUVEC的凋亡率。结论：养阴药与活血药配伍对血管内皮细胞(EC)有明显的保护作用，这可能是该法治疗血栓性疾病的主要机理之一。     

加味犀角地黄汤含药血清对人微血管内皮细胞增殖的影响

目的:探讨加味犀角地黄汤含药血清对人微血管内皮细胞(h MVECs)增殖的影响。方法:利用CCK-8检测h MVECs细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的改变。结果:加味犀角地黄汤含药血清能够抑制人微血管内皮细胞的增殖,随着浓度的增加抑制作用逐渐明显,加味犀角地黄汤含药血清能使人微血管内皮细胞阻滞在S期,含药血清组明显高于正常对照组;且能够促进其细胞的凋亡。结论:加味犀角地黄汤含药血清可以抑制人血管微内皮细胞的增殖,且能够引起细胞周期的改变,诱导细胞凋亡。     

养阴生津方抗血管内皮细胞凋亡的分子机制研究

目的：研究养阴生津方抗血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法：采用血清药理学方法，以大肠杆菌内毒素(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)调亡模型，观察含药血清对HUVEC的抗凋亡作用及对一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)等活性物质的影响。结果：养阴生津方能显著减少LPS诱导的HUVEC凋亡，其机理与减少NOS产生，抑制催化NO合成有关。结论：养阴生津方具有抗HUVEC调亡作用，对治疗温病瘀热证有重要意义。     

六味地黄方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：观察六味地黄方大鼠含药血清对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的保护作用。方法：以MTT法观察人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的活力和流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率,并通过测定胞内丙二醛（MDA）含量及细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力,探讨六味地黄方对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。结果：六味地黄方含药血清能促进ox LDL损伤的血管内皮细胞增殖、抑制ox LDL造成的内皮细胞凋亡、降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论：六味地黄方对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

土茯苓抑制白介素-1诱导的血管内皮细胞细胞间黏附分子-1的表达

目的:探讨中药土茯苓对白介素-1(IL-1)诱导的血管内皮细胞表面的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达升高的保护作用.方法:以原代培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)为研究对象,采用细胞培养、免疫荧光染色、中药血清药理学方法、流式细胞仪等技术,观察IL-1对培养的HUVEC ICAM-1表达的影响并研究不同时间点及不同浓度的含药血清的抑制作用.结果:IL-1使HUVEC的ICAM-1的表达明显升高,同时含药血清组的ICAM-1的表达比空白血清组低.结论:土茯苓含药血清能拮抗IL-1致内皮细胞ICAM-1表达升高.土茯苓的作用部分是多种成分作用于多个靶点的综合效应.     

三草降压汤含药血清对人脐静脉内皮细胞活性及NO分泌的影响

目的：观察三草降压汤（SCD）含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及NO分泌水平的影响,探讨其降压作用的有效组分和作用机制。方法：采用大孔树脂富集纯化技术制备SCD的4种组分（SCD-DW、SCD-10ET、SCD-50ET、SCD-95ET）,分别用血清药理学方法制备SHR大鼠含药血清,以5%、10%、15%的血清浓度作用于HUVEC,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,Griess比色法检测培养液中NO含量。同时观察eNOS抑制剂L-NAME对其作用的影响。结果：SHR空白血清可显著抑制HUVEC活性（P〈0.05）,降低NO含量（P〈0.01）。SCD-DW、SCD-10ET含药血清可增强被SHR空白血清抑制的HUVEC的活性（P〈0.05,P〈0.01）,SCD-10ET可以提高HUVEC的NO分泌水平（P〈0.05）,此效应在15%血清浓度下可被L-NAME明显抑制（P〈0.01）。结论：SCD-10ET可以通过调节内皮细胞NO分泌,减少血管内皮细胞损伤,eNOS-NO途径可能是该组分降低血压的机制之一。     

左归丸含药血清对血管生成体外三维模型的影响

目的:观察高效液相色谱(HPLC)监测制备的左归丸含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖及血管生成体外三维模型的影响。方法:左归丸灌胃大鼠后,于不同时间点制备血清,HPLC监测下,选取药物成分峰值最大时间点的含药血清进行体外实验。噻唑蓝(MTT)法观察左归丸含药血清对HUVEC增殖的影响,I型鼠尾胶原表面培养法观察左归丸含药血清对三维模型管样结构的影响。酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测雌二醇E2(estradiol)、血管内皮生长因子VEGF(vascular endothelial growth factor)水平。结果:左归丸灌胃后2h可达最高药物吸收峰值,左归丸11g/kg(72h),左归丸33g/kg(24、48、72h)对HUVEC均有明显的增殖作用。左归丸11g/kg、左归丸33g/kg均可明显的增加内皮小管的面积、长度、管径及生成指数。左归丸11g/kg、左归丸33g/kg均可明显的提高大鼠血清E2、VEGF水平。结论:HPLC监测下制备的左归丸含药血清能够促进血管内皮细胞的增殖,增大小管的面积、长度、管径及成管指数,提高血清E2、VEGF水平,从而促进血管生成。     

活性氧对血府逐瘀汤诱导人脐静脉内皮细胞迁移作用的影响

目的观察活性氧(reactive oxygen species,ROS)在血府逐瘀汤影响人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)迁移中的作用。方法运用血清药理学方法,采用Boyden小室法检测血府逐瘀汤含药血清对HUVEC迁移的影响;运用ROS清除剂预处理细胞,分析ROS在血府逐瘀汤调节内皮细胞迁移能力中的作用;并分析药物对内皮细胞H2O2产生的影响。结果血府逐瘀汤含药血清能增强HUVEC细胞的迁移能力,促进其H2O2的生成;ROS的清除可抑制血府逐瘀汤含药血清对细胞迁移的促进作用。结论血府逐瘀汤可通过激活ROS,增强HUVEC细胞的迁移能力,从而发挥促血管新生作用。     

黄连解毒汤含药血清调控中性粒细胞功能的实验研究

目的 观察黄连解毒汤含药血清对体外调控中性粒细胞功能的影响。 方法 20 只 SD 大鼠每天给予黄连解毒汤 5 g/kg 灌胃，每 12 小时 1 次，共 5 次，制备黄连解毒汤含药血清。 采用流式细胞仪分选C57 BL/6 小鼠骨髓和外周血中性粒细胞，给予不同剂量的黄连解毒汤含药血清和脂多糖（LPS）刺激 3 h，采用实时荧光定量 PCR 检测中性粒细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6 及 IL-12b 表达，确定 10%黄连解毒汤含药血清为最佳剂量。 将 10%黄连解毒汤含药血清用于干预活化的中性粒细胞功能：（1）中性粒细胞给予佛波醇 12-十四酸酯 13-乙酸酯（PMA）刺激 5 min，流式细胞仪检测骨髓中性粒细胞产生活性氧（ROS）情况；（2）中性粒细胞给予 LPS 刺激 3 h，采用 PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒检测培养上清游离 DNA （cf-DNA） 的含量；（3） 免疫荧光法检测中性粒细胞形成的中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）情况；（4）中性粒细胞给予趋化因子 CXCL2、CXCL10、CCL3 诱导 3 h，流式细胞仪检测趋化的中性粒细胞数量；（5） 中性粒细胞给予 LPS 刺激 20 h，流式细胞仪检测外周血中性粒细胞凋亡情况。 结果 PMA 刺激中性粒细胞使 ROS 显著增多（P<0.05）；LPS 刺激 3 h，中性粒细胞产生的 cf-DNA 含量增多，NETs 形成增加，CXCL2，CXCL10、CCL3 使中性粒细胞趋化增多（P<0.05， P<0.01）；LPS 刺激 20 h 后，外周血中性粒细胞凋亡减少（P<0.05）；10% 黄连解毒汤含药血清可减少 ROS 产生，降低 cf-DNA 含量和NETs 形成，减少中性粒细胞趋化，促进中性粒细胞凋亡（P<0.05， P<0.01）。 结论 黄连解毒汤可调节中性粒细胞功能。     

补气活血类中药对血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察补气活血类中药含药血清对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响,并初步筛选出对HUVEC 增殖能力具有较明显促进、抑制作用的药物。方法：建立HUVEC 的体外培养的细胞模型,采用血清药理学方法,将10 种活血化瘀药分别与3 种补气药按照1:2、1:1、2:1 三种不同的配比两两配伍组合,组成90 对补气活血药药对,制备90 对补气活血药药对和10 种活血化瘀药的含药血清。应用MTT 比色法观察不同活血化瘀药和补气活血药药对的含药血清对HUVEC 增殖能力的影响。结果：与空白血清组相比较,大部分的活血化瘀药、补气活血药对含药血清对HUVEC 的增殖能力都有较为显著的影响（促进或者抑制）,其中丹参组、川芎组、赤芍组,丹参黄芪（1:2）组、丹参黄芪（1:1）组、川芎黄芪（1:2）组可明显促进HUVEC 增殖能力（P＜0.05 或P＜0.01）;三棱组、莪术组、丹皮组、莪术黄芪（2:1）组、三棱人参（2:1）组、莪术黄芪（1:1）组可明显抑制HUVEC 增殖（P＜0.05 或P＜0.01）。结论：不同的活血化瘀药和补气活血药配伍组成对HUVEC 的增殖能力具有不同的促进或抑制作用,这可能为这些药物在细胞层面上促进或抑制血管生成的作用机制。     

调脂一号含药血清对H_2O_2诱导HUVECs炎症因子表达的影响

目的:探讨调脂一号(TZYH)含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性因子表达的影响。方法:采用100μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,TZYH含药血清倍比稀释后分为3个剂量干预组(体积分数10%),运用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附实验检测细胞分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子的变化,进一步通过RT-PCR方法检测炎症因子相关基因白细胞介素1β和肿瘤坏死因子的表达。结果:TZYH含药血清能明显提升H2O2损伤后的HUVECs存活率,流式细胞技术结果显示TZYHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;ELISA和RT-PCR结果提示TZYHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低IL-1β、TNF-αmRNA和蛋白的表达实现的。结论:TZYH含药血清可以抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,对血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用。