即时荧光定量PCR检测吉西他滨诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡通路关键基因ASK1的高表达

目的 检测抗癌药吉西他滨（gemcitabine）诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡的关键基因ASK1的高表达。方法 应用即时荧光定量PCR技术检测50．33μg／mL吉西他滨作用于胰腺癌Panc-1细胞48h后凋亡基因ASK1表达的变化。结果 吉西他滨作用于胰腺癌Panc-1细胞48h后凋亡基因ASK1高表达,比值为2．64E-02／1．25E-02=2．112,与基因芯片结果2．107622018非常接近。结论 吉西他滨诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡,ASK1高表达。     

吉西他滨对膀胱癌细胞系增殖、细胞周期、凋亡的影响

背景与目的：吉西他滨（gemcitabine，GEM）单药或与顺铂合用在晚期膀胱癌治疗中显示了较高的反应率，已成为晚期膀胱癌化疗的一线药物，然而其在膀胱癌效应机制方面的研究却不多见。本研究探讨占西他滨体外对人膀胱移行上皮癌细胞系增殖、细胞凋亡以及p53、Bax、Bcl-2和Caspase3基因表达的影响。方法：体外培养膀胱移行细胞癌细胞系BIU-87、5637、T24、EJ细胞，用MTT法检测吉西他滨对各类癌细胞生长抑制的影响，用流式细胞技术（碘化丙啶）检测吉西他滨对癌细胞周期影响，流式细胞仪Annexin—V法测定细胞凋亡率，流式免疫荧光检测用药前后p53、Bax、Bcl-2、和Caspase3基因表达变化。结果：吉西他滨对体外培养的膀胱移行细胞癌细胞系均有抑制作用，具有时间和浓度依赖性，低分化肿瘤和倍增时间短的细胞系对吉西他滨敏感性高。吉西他滨1μg/ml作用5637和EJ细胞24h，导致细胞G1期83．94％与85．46％的阻滞；作用于5637细胞12、24和48h，凋亡率分别为4．8％、11．7％及23．3％。免疫荧光显示p53、Bcl-2表达没有显著性变化，而Bax、Caspase3却随吉西他滨作用时间延长表达升高。结论：吉西他滨对膀胱移行细胞癌具有抑制作用，细胞分化低、倍增时间短的癌细胞系对吉西他滨更敏感。吉西他滨阻滞细胞于G1，诱导Bax表达上调可能是产生膀胱癌细胞凋亡的原因之一。     

吉西他滨诱导人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6凋亡的机制

目的探讨吉西他滨诱导人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6产生凋亡的机制。方法应用MTT法、DNA电泳技术及流式细胞术观察吉西他滨诱导人SNK-6细胞凋亡情况,应用基因芯片技术分析加药前后凋亡相关基因的表达差异。结果吉西他滨作用后,MTT结果显示细胞生长抑制率随药物浓度的增加而逐渐增大;DNA断裂电泳可见典型的梯形DNA条带,随吉西他滨作用浓度的增加而逐渐增强;流式细胞术分析,2 μg/ml吉西他滨作用SNK-6细胞4、8、24、48 h后,凋亡细胞比例分别为2.1%、8.3%、23.9%、30.9%;吉西他滨作用48 h后,在88条有关凋亡的目的基因中共有17条基因表达发生大于3倍的显著变化,其中表达上调基因4条,下调基因13条。结论吉西他滨可以诱导人NK/T细胞淋巴瘤细胞产生凋亡,呈时间和剂量依赖性;吉西他滨可使SNK-6细胞中多个凋亡相关基因的表达发生改变,初步揭示了其诱导淋巴瘤细胞凋亡的作用机制。     

奥曲肽逆转人胰腺癌细胞多药耐药机制的初步研究

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽对人胰腺癌细胞BxPC-3多药耐药现象的逆转作用及其机理,为临床应用奥曲肽提高胰腺癌化疗疗效提供实验依据.方法:应用不同浓度的奥曲肽(0-1.6 μg/ml)联合化疗药物顺铂、表阿霉素、氟尿嘧啶、吉西他滨共同处理稳定表达SSTR2的胰腺癌细胞BxPC-3-SSTR2,CCK-8比色法测定奥曲肽处理前后各化疗药物的IC50值,判断奥曲肽对胰腺癌多药耐药的逆转.Real-time PCR法检测SSTR2基因转染前后及奥曲肽处理前后的胰腺癌细胞中MDR1、MRP2、LRP基因表达.结果:奥曲肽可以显著降低顺铂、表阿霉素、氟尿嘧啶和吉西他滨的IC50值(P<0.05),并且这种作用呈剂最依赖性.胰腺癌细胞株BxPC-3在转染SSTR2基因后,细胞中MDR1、MRP2、LRP基因的表达分别下调57%、47%和56%(P<0.01);而转染后的胰腺癌细胞经过1.6 μg/ml奥曲肽作用48h后,其所表达的MDR1、MRP2、LRP基因出现进一步的下调,分别下降88%、73%和87%(P<0.01).结论:生长抑素类似物奥曲肽可逆转胰腺癌细胞的多药耐药,其机制可能与降低胰腺癌细胞中MDR1、MRP、LRP基因的表达,使胰腺癌细胞内细胞毒性药物浓度增加有关.     

奥曲肽逆转人胰腺癌细胞多药耐药机制的初步研究

目的：探讨生长抑素类似物奥曲肽对人胰腺癌细胞BxPC-3多药耐药现象的逆转作用及其机理,为临床应用奥曲肽提高胰腺癌化疗疗效提供实验依据。方法：应用不同浓度的奥曲肽（0-1.6μg/ml）联合化疗药物顺铂、表阿霉素、氟尿嘧啶、吉西他滨共同处理稳定表达SSTR2的胰腺癌细胞BxPC-3-SSTR2,CCK-8比色法测定奥曲肽处理前后各化疗药物的IC50值,判断奥曲肽对胰腺癌多药耐药的逆转。Real-timePCR法检测SSTR2基因转染前后及奥曲肽处理前后的胰腺癌细胞中MDR1、MRP2、LRP基因表达。结果：奥曲肽可以显著降低顺铂、表阿霉素、氟尿嘧啶和吉西他滨的IC50值（P〈0.05）,并且这种作用呈剂量依赖性。胰腺癌细胞株BxPC-3在转染SSTR2基因后,细胞中MDR1、MRP2、LRP基因的表达分别下调57%、47%和56%（P〈0.01）;而转染后的胰腺癌细胞经过1.6μg/ml奥曲肽作用48h后,其所表达的MDR1、MRP2、LRP基因出现进一步的下调,分别下降88%、73%和87%（P〈0.01）。结论：生长抑素类似物奥曲肽可逆转胰腺癌细胞的多药耐药,其机制可能与降低胰腺癌细胞中MDR1、MRP、LRP基因的表达,使胰腺癌细胞内细胞毒性药物浓度增加有关。     

RNA干扰抑制肺腺癌细胞HMGA1表达对化疗敏感性的影响

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默HMGA1对肺腺癌细胞株SPCA-1化疗敏感性的影响。方法制备HMGA1siRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;HMGA1siRNA慢病毒质粒和阴性siRNA慢病毒质粒转染肺癌细胞株SPCA-1（阳性组和阴性组）,半定量RT-PCR和Western blot检测其对细胞HMGA1基因表达的影响;MTT实验检测吉西他滨对阳性组和阴性组细胞生长、增殖的影响;流式细胞仪检测两组细胞凋亡率。结果 PCR和测序证实,成功构建HMGA1siRNA的慢病毒载体;RT-PCR和Western blot证实阳性组细胞存在HMGA1基因表达下调;分别应用不同浓度的吉西他滨处理两组细胞72 h后,MTT实验检测结果显示,阳性组细胞生长抑制率较阴性组明显增高;用0.05μg/ml、0.5μg/ml、5μg/ml吉西他滨处理细胞72 h后,应用流式细胞仪检测结果显示,阳性组细胞凋亡率较阴性组增高。结论 HMGA1siRNA能特异性下调细胞SPCA-1中HMGA1的表达,增强了该肺腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。     

缺氧状态下人胰腺癌细胞对吉西他滨反应的实验研究

目的:观察缺氧状态对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响并分析其相关机制。方法:将人胰腺癌细胞SW1990分为常氧组、缺氧组、常氧+吉西他滨组和缺氧+吉西他滨组。MMT法检测各组细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Real-time PCR和Western blot分别检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR-1)mRNA和蛋白的表达。结果:与常氧+吉西他滨组相比,低氧+吉西他滨组的细胞增殖率明显增加,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);低氧组和低氧+吉西他滨组HIF-1α蛋白表达分别显著高于常氧组(P<0.05或P<0.01);与常氧组相比,低氧组和低氧+吉西他滨组的MDR1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:缺氧状态可增加人胰腺癌细胞SW1990对吉西他滨的化疗抵抗,其机制与缺氧环境可诱导HIF-1α和MDR1基因表达有关。     

吉西他滨与LY294002对人类胰腺癌细胞BxPc-3及MiaPaCa-2的影响

 目的　探讨吉西他滨与LY294002单药或联合应用对人类胰腺癌细胞BxPc-3和MiaPaCa-2增殖和凋亡的影响。方法　MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞凋亡。结果　吉西他滨与LY294002对两株细胞增殖均有抑制作用,且作用随药物浓度增加而增强,各组用药剂量的对数值与细胞生存率之间呈负相关（r＜-0.95, P＜0.01）;吉西他滨与LY294002对BxPc-3细胞的抑制作用明显强于对MiaPaCa-2细胞作用（P＜0.05）。BxPc-3和MiaPaCa-2细胞对吉西他滨的IC50分别为（10.07±1.83）、（36.45±2.71）μmol／L（P＜0.05）,对LY294002的IC50分别为（7.84±1.48）、（17.89±1.98）μmol／L（P＜0.05）。吉西他滨与LY294002可诱导两株细胞凋亡（P＜0.01）,吉西他滨与LY294002同时或序贯应用,均表现出对两株细胞凋亡的促进作用,其中以LY294002和吉西他滨同时给药组作用最为显著（P＜0.05）,序贯组药物应用的先后顺序并未对细胞凋亡率产生影响（P＞0.05）。结论　吉西他滨和LY294002体外可显著抑制胰腺癌细胞增殖,二者同时应用能显著促进其凋亡。     

乌苏酸联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨乌苏酸联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。 方法: 以乌苏酸、吉西他滨单独用药作 用于体外培养的胰腺癌细胞PANC-1细胞,采用细MTT法检测细胞半抑制浓度（IC 50 ）,确定药物给药浓度;以乌苏酸(2 μ mol/L) 、 吉西他滨(0.2 μ mol/L)单独及联合作用于PANC-1细胞,采用锥虫蓝染色法检测PANC-1细胞存活率,PI染色后PANC-1细胞中检 测细胞凋亡,采用细胞划痕实验检测PANC-1细胞迁移和伤口愈合情况,采用Western blotting检测对照组、乌苏酸组与吉西他滨 组单独及联合用药组细胞中P-JNK、Bcl-2、IL-6、P-Stat 3、NF-κB和Cox-2蛋白的表达。 结果: 乌苏酸和吉西他滨对胰腺癌 PANC-1细胞均有较强的抑制作用,其IC 50 分别是13.67和2.78 μ mol/L,据此选择它们的实验浓度分别为2和0.2 μ mol/L。两者联 合用药比分别单独用药能更显著抑制癌细胞的增殖活性[(46.47±5.07)% vs (78.38±8.65)%、(76.12±3.23)%,均P<0.05],能更明显 诱导癌细胞凋亡[(39.78±7.01)% vs (20.35±8.51)%、(20.35±8.51)%,均P<0.01]和抑制细胞迁移能力（P<0.01）,同时更显著抑制凋亡 相关蛋白Bcl-2、IL-6的表达及促进P-JNK的表达。 结论: 乌苏酸和吉西他滨协同增强抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖和迁移以 及促凋亡作用,其机制可能与抑制Bcl-2、IL-6、P-Stat 3和促进P-JNK蛋白表达有关。     

大黄素联合吉西他滨抑制胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖能力的研究

目的:验证大黄素联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)抑制胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖的作用,探讨大黄素促PANC-1细胞凋亡的抗肿瘤作用机制.方法:MTT方法检测大黄素单药以及与吉西他滨联合应用对PANC-1细胞增殖能力的影响.ELISA方法测定细胞上清IL-6水平.RT-PCR方法检测大黄素处理后PANC-1细胞内侵袭相关基因MMP-9的表达情况.Western blot方法分别检测大黄素以及吉西他滨处理PANC-1后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平.结果:MTT检测结果显示,加药处理细胞72h后,大黄素组(40 μmol/l)PANC-1细胞抑制率为31％,GEM组(20μmol/l)的抑制率为35％,联合用药组的抑制率为49％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).IL-6浓度大黄素组为(22.41±2.27) ng/ml,联合用药组为(15.44±3.91) ng/ml.实验组均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).大黄素组、联合用药组MMP-9 mRNA表达水平显著低于对照组,GEM组较对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).大黄素组、GEM组、联合用药组Bax表达水平上调,但Bcl-2差异无统计学意义.大黄素组、GEM组、联合用药组的Bax/Bcl-2分别为2.71 ±0.25,4.73---0.17,5.72 ±0.36,均显著高于对照组1.14 ±0.15,结论:体外研究结果显示大黄素能够抑制肿瘤PANC-1细胞增殖,具有促细胞凋亡的作用,与吉西他滨联合应用具有协同效应.