hIL-10基因修饰骨髓间充质干细胞对肝移植大鼠排斥反应的影响

目的研究hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞（mesenehymal stem cell,MSC）对大鼠原位异种肝移植排斥反应的影响及机制。方法利用两套管吻合技术行豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝移植构建模型,按照构建模型过程中处理方式的不同（生理盐水＋地塞米松、MSC＋地塞米松、hIL-10-MSC＋地塞米松）分为空白对照组、MSC组、hIL-10-MSC组。观察受鼠存活时间、肝功能、术后24h移植肝组织IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18及TNF-α的含量及其mRNA表达。结果与空白对照组、MSC组相比,hIL-10-MSC组大鼠生存时间延长、肝功能好转,细胞因子IL-2、IL-12、IL-15、IL—18、TNF-α表达明显降低,IL-4、IL-10表达显著升高（P〈0．05）。结论hIL-10-MSC对移植肝保护作用可能与其抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、TNF—α细胞因子的表达,促进细胞因子IL-4的表达有关。     

输注转染人白细胞介素10基因的骨髓间充质干细胞对移植肝的保护作用

目的研究输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞（hIL-10-MSC）对大鼠原位异种肝移植后移植肝的保护作用及机制。方法建立豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝移植模型,受体分为3组：空白对照组、骨髓间充质干细胞（MSC）对照组、hIL-10-MSC组。术后12h取移植肝,HE染色观察移植肝组织形态学变化,用RT-PCR、蛋白质印迹法观察移植肝组织IL-10、穿孔素、颗粒酶B的表达情况。结果与空白对照组、MSC对照组相比,hIL-10-MSC组大鼠移植肝排斥反应最轻,穿孔素、颗粒酶B的表达明显降低,而IL-10的表达显著升高（均P〈0.05）。结论 hIL-10-MSC对移植肝的保护作用可能与其减少穿孔素/颗粒酶B的表达有关。     

hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞的体外免疫抑制作用

目的研究hlL．10基因修饰的骨髓间充质干细胞（mesenchymalstarecell,MSC）对异种混合T淋巴细胞增殖的影响。方法反转录PCR克隆hlL-10基因并构建慢病毒hlL-10／pLOX—CWgfp,然后将hIL．IO／pLOX—CWgfp转入豚鼠MSC内;ELISA法测定hIL-10基因修饰的MSC（hlL-10-MSC）培养上清液内hIL-10含量;CCK-8法检测hIL-10-MSC和其培养上清液对体外混合淋巴细胞培养的影响。结果hIL-10．MSC培养上清液的hIL-10水平明显高于未转染hIL-10者（P〈0．05）;hIL-10-MSC能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应（P〈0．05）;加入IL-2能逆转MSC的抑制作用（P〈0．05）;hIL-10-MSC培养上清液能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应（P〈0．05）。结论hIL-10-MSC和其培养上清液对混合异种淋巴细胞培养有显著的抑制作用。     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞延长异种肝移植大鼠存活时间

目的 探讨人白细胞介素10(hlL-10)修饰的豚鼠骨髓间充质干细胞(hIL-10-MSCs)输注对异种肝移植大鼠存活的影响及其可能机制.方法 以携带hIL-10基因的慢病毒(hIL-10/LOX-ewGFP)为载体构建hIL-10-MSCs.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,制作非协调性异种原位肝移植模型,将受者随机分成3组,每组60只:空白对照组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射生理盐水和地塞米松1次;MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射MSCs和地塞米松1次;hIL-10-MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射hIL-10-MSCs和地塞米松1次.记录供者手术时间、供肝冷缺血时间、受者手术时间、肝上下腔静脉(SVC)吻合时间、无肝期及受者存活时间,测定术后各组受者血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,酶联免疫吸附试验法测定各组受者移植肝组织中自细胞介素2(IL-2)、IL-4、hIL-10、IL-12、IL-15、IL-18和TGF-β1的含量,逆转录聚合酶链反应法检测各组受者移植肝组织中上述各细胞因子mRNA的表达.结果 hIL-10-MSCs组受者存活时间为(72.0±5.5)h,空白对照组和MSCs组受者的存活时间分别为(29.0±2.2)h和(48.0±4.6)h,前者明显长于后二者,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05).hIL-10-MSCs组移植肝组织中IL-4和TGF-β1mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),而IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 mRNA的表达明显低于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),hIL-10-MSCs组肝组织中hIL-10 mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组.结论 静脉输注hIL-10-MSCs可延长异种肝移植大鼠的存活时间,其机制可能与hIL-10-MSCs抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18等细胞因子的表达,促进IL-4和TGF-β1的表达有关.     

hIL-10修饰骨髓间充质干细胞对大鼠原位异种肝移植急性排斥反应的影响

目的 研究hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠原位异种肝移植排斥反应的影响及机制.方法 采用豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝脏移植模型,实验动物随机分为3组:空白对照组,MSCs组,hIL-10-MSCs组.观察受体存活时间、受体鼠肝功能变化.术后第24小时取移植肝脏,用RT-PCR、ELISA法观察E-Selectin、LFA-1、VCAM-1及NF-κB的表达情况.结果 与空白对照组相比,hIL-10-MSCs组大鼠生存时间延长、肝功能好转,黏附分子E-Selec-tin、LFA-1、VCAM-1和NF-κB表达明显降低(P＜0.05).结论 hIL-10-MSCs对移植肝脏保护作用可能与其抑制NF-κB、E-Selectin、LFA-1、VCAM-1的表达有关.     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡

目的 探讨转染人白细胞介素10(Hil-10)基因的骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠异种移植肝脏细胞凋亡的影响.方法 以携带Hil-10基因的慢病毒Hil-10/LOX-cwGFP转染豚鼠的MSC.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,利用两套管法行原位肝移植.空白对照组的受者分别于术前24 h和术后24 h经股静脉注射生理盐水2 ml+地塞米松0.5 ml(2 mg/ml)各1次;MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的MSC单细胞悬液2 ml+地塞米松0.5 ml(2mg/ml)各1次;Hil-10-MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的Hil-10-MSC单细胞悬液2 ml+地塞米松0.5 ml(2 mg/ml)各1次.术后12 h切取移植肝脏,观察移植肝组织学变化,测定肝组织中Hil-10、凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)、Fas和FasL的表达,观察肝细胞的凋亡情况.结果 与空白对照组、MSC组相比,Hil-10-MSC组的病理改变最轻,IL-110表达明显增加,FasL明显减少.Hil-10-MSC组的Fas和Caspase-3的阳性区域面积分别为11.5%和25.1%,明显低于空白对照组的35.3%和70.8%(P＜0.05).Hil-10-MSC组的凋亡指数为32.5%,明显低于空白对照组的74.1%和MSC组的50.3%(P＜0.05).结论 Hil-10-MSC可明显减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡,其机制可能与其抑制Fas/FasL的表达有关.     

人白介素-13对牛主动脉内皮细胞表达黏附分子的影响

目的研究人白介素-13（hIL-13）对牛主动脉内皮细胞（BAECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素的影响，为hIL-13应用于诱导异种移植免疫耐受、减轻异种移植排斥反应提供实验依据。方法用不同浓度的hIL-13（2、5、10、20及40ng／ml）孵育BAECs2h后，再与肿瘤坏死因子-α（TNF-α．4ng／ml）共孵育6h或18h；应用细胞-酶联免疫吸附分析方法（Cell—ELISA）检测BAECs表面的E-选择素和ICAM-1的表达；用MTT方法测定hIL-13对BAECs活性的影响。结果用hIL-13在5～20ng／ml浓度内预处理BAECs后，能明显抑制TNF-α诱导的E-选择素与ICAM-1的表达，并呈现一定的剂量依赖性（P〈0．01）。经不同浓度hIL-13处理的BAECs活性与未经hIL-13处理者相比差异无统计学意义。结论hIL-13能明显抑制BAECs表达E-选择素与ICAM-1，诱导异种移植的免疫耐受，且hIL-13对BAECs无损伤作用。     

一氧化氮在大鼠异种肝移植急性排异中的作用及其黄递酶组化研究

目的：探讨一氧化氮（NO）在肝移植急性反应中的功能作用及NO合酶 （NOS）的细胞定位。方法：应用金黄地鼠至大鼠异种原位肝移植急性排斥及大鼠同基因原位肝移植动物模型,观察L－NMMA对受体存活期,ALT,TGF-α及移植肝的病理影响。应用NADPH－d组化染色观察NOS的活性及其细胞来源,结果：表明L－NMMA可明显降低异种肝移植受体存活期,加剧其肝功能恶化、上调TGF-α、加剧移植肝的病理损害、异种肝移植组NADPH－d组化染色呈强阳性,主要在肝实质细胞及浸润炎性细胞表达,结论：NO在大鼠肝移植急性排斥反应中可能具有重要的免疫保护作用。     

吻合肝动脉对大鼠部分肝移植早期损伤的影响

目的探讨吻合肝动脉在大鼠部分肝移植早期损伤中的作用。方法选取雄性SD大鼠180只，随机分成3组：全肝移植组（A组）；部分肝移植组（B组）；部分肝移植肝动脉化组（C组）。在恢复血供后30min，2、3、6、12、24h等6个时间点分别取材，检测：血清肝功能指标；血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；原位末端标记法（TUNEL）检测肝组织细胞凋亡；荧光半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TNF-α和TNF-α受体在肝组织中的表达。结果各组总胆红素（TB）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）峰值均出现在术后6、12h后逐渐下降，TB、ALT和AST峰值依次为B组〉C组〉A组（P值均〈0．05）；移植术后各组血清TNF-α表达水平在3h时达到峰值，随后逐渐下降，峰值B组〉C组〉A组。其中B组峰值显著高于A和C组，而A、C组峰值差异无统计学意义（P〉0．05）；B组各时间点细胞凋亡数均显著多于A组和C组；B组肝组织TNF-α表达峰值位于术后2h，A、C组峰值位于术后3h，B组12h表达显著减少，A、C组术后12h为阴性表达。B组TNF-α受体2基因表达水平显著高于A、C组。结论吻合肝动脉可显著减轻部分移植肝早期损伤。TNF-α及其受体的表达强度与肝脏损伤程度有密切关系，可能是参与大鼠部分肝移植早期损伤过程的重要细胞因子。     

骨髓间质干细胞经静脉移植对大鼠脊髓损伤后TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响

目的研究大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)经静脉移植对脊髓损伤(SCI)后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法运用改良Allen法制备大鼠脊髓外伤性截瘫模型,假手术组6只,损伤组84只随机分为对照组和rMSCs移植组。对照组和rMSCs移植组、假手术组于损伤后10min经尾静脉分别注射PBS1ml和rMSCs单细胞PBS悬液1ml。移植后3h、6h、12h、24h、3d、7d、14d,应用RT-PCR方法检测损伤大鼠脊髓TNF-α、IL-1βmRNA表达变化情况。结果对照组和rMSCs移植组损伤脊髓TNF-α、IL-1βmRNA表达较假手术组有明显增加(P0.05);rMSCs移植组与对照组比较,TNF-α、IL-1βmRNA表达受到明显抑制(P0.05)。结论 rMSCs静脉移植后能改变脊髓损伤区的微环境,使损伤脊髓局部的TNF-α、IL-1β表达程度降低。这可能是减少脊髓继发性损伤,促进损伤大鼠运动功能恢复的机制之一。     

番茄红素对血液透析患者静脉铁剂诱导细胞因子的影响

目的：观察维持性血液透析（MHD）患者由静脉铁剂诱导的细胞因子,探讨番茄红素对其的干预作用。方法：60例MHD患者,随机分为两组（对照组和试验组,各30例）。对照组：在患者透析时给予蔗糖铁注射液100mg,2次/周,共10次,观察时间8周。试验组：除蔗糖铁注射液使用外,同时口服番茄红素胶囊,2粒/次,2次/d,用药8周,观察时间8周。观察并比较两组患者治疗前及治疗8周后的白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-18（IL-18）、肿瘤坏死因子（TNF-α）等细胞因子指标的变化。结果：两组患者治疗后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-18水平较治疗前均有显著性升高（P〈0.01或〈0.05）;但是试验组升高幅度显著性小于对照组（P〈0.01）。试验组患者治疗后IL-10水平较治疗前有显著性升高（P〈0.01）;并且试验组升高幅度显著性大于对照组（P〈0.05）。治疗后两组血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-18水平均与铁蛋白（SF）呈正相关（P〈0.01）。结论：静脉铁剂治疗加剧了MHD患者免疫细胞因子的调节;番茄红素可减少细胞因子过度调节而起到抗炎症作用。     

CO_2气腹对SD大鼠重症急性胰腺炎炎性细胞因子的表达及胰腺病理变化的影响

目的探讨腹腔镜手术时CO2气腹对SD大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancretitis,SAP)胰腺局部病变及血淀粉酶、炎症细胞因子IL-6、TNF-α、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)及核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法雄性SD大鼠50只,随机分为3组:Ⅰ组20只(CO2组,5%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射方法建立SAP动物模型后,腹腔镜气腹机向大鼠腹腔内注入CO2,压力12mm Hg,维持30min);Ⅱ组20只(开腹组,建立SAP动物模型后关腹,不充入CO2);Ⅲ组10只(对照组,仅开腹翻动胰腺后关腹)。各组均于术后2.5h处死动物,测定血淀粉酶、IL-6、TNF-α及CRP的变化,进行胰腺组织病理学检查,并用免疫组化法检测NF-κB的变化。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组病理组织学评分值分别为(1.90±0.37)分、(1.75±0.26)分、(0.00±0.00)分,差异有统计学意义(F=365.91,P=0.000),但Ⅰ组与Ⅱ组比较,差异无统计学意义(q=2.372,P0.05)。与Ⅲ组相比,Ⅰ组和Ⅱ组血清淀粉酶、IL-6、TNF-α均明显升高(P0.05)。与Ⅱ组相比,Ⅰ组IL-6降低(P0.05),淀粉酶明显升高(P0.05),Ⅰ组与Ⅱ组TNF-α、CRP差异无统计学意义(P0.05)。Ⅰ、Ⅱ组与Ⅲ组NF-κB阳性表达值分别为3.91±0.81、3.55±0.76、0.92±0.51,差异有显著性(F=56.59,P=0.000),Ⅰ组与Ⅱ组比较,NF-κB表达差异有统计学意义(q=3.387,P0.05),Ⅰ、Ⅱ组与Ⅲ组比较,NF-κb阳性表达值有显著性差异(q=14.764,P0.05;q=11.999,P0.05)。结论CO2气腹对SD大鼠SAP胰腺病理变化无明显影响。SAP时CO2气腹对SD大鼠TNF-α、CRP的表达无明显影响,对IL-6的表达有一定的抑制作用,能增强NF-κB阳性表达。     

频谱多普勒超声检测大鼠肝缺血/再灌注后入肝血流量变化与血清TNF-α及IL-1β水平变化之间的关系

目的探讨频谱多普勒超声检测大鼠肝缺血/再灌注（I/R）后入肝血流量变化与血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-1β（IL-1β）水平变化之间的关系。方法 Pringle法建立肝脏缺血15 min再灌注模型,应用频谱多普勒超声检测再灌注后1、6及24 h不同时间点肝动脉及门静脉的入肝血流量,计算总血流量（FV）,观测肝I/R后入肝血流量的变化情况。检测各时间点血清TNF-α及IL-1β水平的变化,分析FV与TNF-α及IL-1β之间的相关性。结果 I/R组再灌注后1及6 h的FV分别为（52.08±11.88）mL/min及（44.69±8.75）mL/min,较假手术组术后1及6 h的（85.32±29.85）mL/min和（81.41±28.67）mL/min明显减少（P〈0.05）;再灌注后24 h FV 2组间的差异无统计学意义（P〉0.05）。I/R组再灌注后1 h血清TNF-α含量为（310.52±39.83）pg/mL,较假手术组术后1 h的（240.74±31.65）pg/mL高（P〈0.05）;再灌注或手术后6及24 h的TNF-α含量2组间差异无统计学意义（P〉0.05）。I/R组再灌注后1及6 h血清IL-1β含量分别为（38.08±3.73）pg/mL和（27.44±6.11）pg/mL,较假手术组术后1和6 h组的（22.03±0.79）pg/mL及（21.78±0.71）pg/mL高（P〈0.01,P〈0.05）;再灌注后24 h的血清IL-1β含量2组间差异无统计学意义（P〉0.05）。FV与TNF-α及IL-1β之间存在负相关关系（r=-0.43,P〈0.05;r=-0.46,P〈0.05）。结论频谱多普勒超声能够通过检测入肝血流量的变化间接判断肝脏微循环状态,肝I/R后入肝血流量减少,且血流量的减少可能与TNF-α和IL-1β的过表达有关。     

无气腹悬吊与气腹腹腔镜手术对妇科手术患者血清细胞因子和HSP70水平的影响

目的比较妇科无气腹悬吊式与气腹腹腔镜手术对患者术中血清细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和热休克蛋白70（HSP 70）水平的影响。方法选择2005年7月至2006年2月择期行腹腔镜下子宫肌瘤剜除术的38例患者,手术时间均在100 min内,随机分成两组,每组19例。Ⅰ组于静脉全身麻醉下行CO2气体腹腔镜手术;Ⅱ组于静脉全身麻醉下行无气腹悬吊式腹腔镜手术。监测两组患者麻醉前（T1）、气腹或悬吊建立后30 min（T2）、气腹或悬吊撤除后10 min（T3）和术后次日晨8时（T4）4个时点的TNF-α、IL-6、IL-10和HSP70水平。结果麻醉前患者的血清IL-6、IL-10、TNF-α和HSP70水平差异无统计学意义（P〉0.05）。术后各指标的水平均升高,其中Ⅰ组在T3时达峰值,Ⅱ组在T4时达峰值。组间比较,Ⅰ组在T2时点的TNF-α水平高于Ⅱ组（P〈0.05）;在T3时点,Ⅰ组的IL-6、TNF-α和HSP70水平显著高于Ⅱ组（P〈0.01）,且IL-6/IL-10比值也高于Ⅱ组（P〈0.05）。结论悬吊式腹腔镜技术避免了CO2气腹对机体的影响,降低了术中应激反应水平。     

豚鼠至大鼠肝移植肝下下腔静脉套管方法的改进

目的探讨豚鼠至大鼠异种原位肝移植中应用改进的肝下下腔静脉套管方法的手术效果。方法豚鼠和SD大鼠各30只分别作为供、受体,并随机配对分为实验组和对照组。实验组采用改进的肝下下腔静脉套管进行肝下下腔静脉袖套管法吻合。对照组采用常规方法进行肝下下腔静脉袖套法吻合。比较两组的供肝切取时间(切、修肝时间)、受体手术时间、无肝期时间、手术成功率、肝下下腔静脉袖套吻合口附近出血发生率以及术后生存时间。结果实验组和对照组的供肝切取时间分别为(32.2±3.5)min、(45.4±5.7)min,修肝时间分别为(14.5±2.1)min、(9.2±1.8)min,切、修肝总时间分别为(46.7±4.8)min、(54.6±6.9)min,比较差异均有统计学意义(均为P0.05)。两组受体的手术时间分别为(52.7±6.1)min、(53.2±6.5)min,无肝期分别为(16.8±2.1)min、(17.2±2.5)min,比较差异没有统计学意义(均为P0.05)。实验组与对照组的手术成功率分别为93%、53%,比较差异有统计学意义(P0.05)。两组的肝下下腔静脉袖套吻合口附近出血发生率分别为0、38%,比较差异有统计学意义(P0.05)。两组手术成功的动物的术后生存时间分别为(115±24)min、(95±29)min,比较差异无统计学意义(P0.05)。结论应用改进的肝下下腔静脉套管方法进行豚鼠至大鼠原位肝移植,手术成功率高,可用于豚鼠至大鼠原位肝移植实验研究模型的制作。