断流和分流术后门静脉高压性胃病大鼠Caspase-3mRNA的表达

目的 研究断流术和分流术对门脉高压性胃病(PHG)大鼠胃黏膜细胞Caspase-3mRNA表达的影响。方法将48只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、断流术组和分流术组。应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测 Caspase-3 mRNA表达。结果正常对照组自由门静脉压为(1.15±0.13)kPa,模型对照组升高至(2.68±0.16)kPa(P<0.01),断流术组升高达(2.73±0.27)kPa,分流术组回降至(1.57±0.23)kPa,与模型对照组比较P<0.01;Caspase-3mRNA表达有类似变化。结论 正常鼠胃黏膜上皮细胞凋亡基因Caspase-3少量表达,PHG时Caspase-3 mRNA表达增加;断流术后Caspase-3 mRNA表达进一步上调,分流术后Caspase-3 mRNA表达有所下调。     

断流术与分流术对门脉高压性胃病患者的影响

目的:探讨断流术与分流术对门脉高压性胃病的影响.方法:对照组9例、断流术组14例和分流术组12例,采用术前及术后3个月胃镜检查、原位末端标记(TUNEL)、测凋亡指数(AI)和逆转录PCR(RT-PCR)法测定Caspase-3 mRNA表达量.结果:对照组AI值为(2.31±0.11)%,Caspase-3 mRNA表达量为0.51±0.03,其他组与对照组比较,AI值增加有统计学意义(P＜0.01),Caspase-3 mRNA表达量显著增加(P＜0.05).断流术后AI值由术前的(12.83±1.54)%增加到(16.24±1.68)%,(P＜0.05),PHG病人2例由轻转重,PHG病变程度加重(P＜0.05);分流术后AI值从术前的(12.18±1.32)%回降至(8.58±0.72)%(P＜0.05);术后PHG病人1例由重转轻,4例痊愈,PHG病变程度得到缓解(P＜0.05).Caspcse-3 mRNA表达量与AI值有类似改变,两者呈正相关(r=0.86,P＜0.05).结论:PHG胃粘膜细胞凋亡增加,断流术后凋亡加剧,PHG病变程度加重;分流术后凋亡改善,PHG病变程度缓解.     

断流术与分流术对门静脉高压性胃病的不同影响

目的　探讨断流术与分流术对门静脉高压性胃病 (PHG)的影响。方法　实验分对照组 9例、断流术组 14例和分流术组 12例 ,采用术前及术后 3个月胃镜检查 ,原位末端标记(TUNEL)染色测凋亡指数 (AI)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法测定Caspase 3mRNA表达量。结果　对照组AI值为 (2 .3 1± 0 .11) % ,Caspase 3mRNA表达量为0 .5 1± 0 .0 3 ,其他组与对照组比较 ,AI值增加差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,Caspase 3mRNA表达量显著增加 (P <0 .0 5 )。断流术后AI值由术前的 (12 .83± 1.5 4) %增加到 (16.2 4± 1.68) % (P <0 .0 5 ) ,PHG患者 2例由轻转重 ,PHG病变程度加重 (P <0 .0 5 ) ;相反 ,分流术后AI值从术前的 (12 .18± 1.3 2 ) %回降至 (8.5 8±0 .72 ) % (P <0 .0 5 ) ,术后PHG患者 1例由重转轻 ,4例痊愈 ,PHG病变程度得到缓解 (P <0 .0 5 )。Caspcse 3mRNA表达量与AI值有类似改变两者间呈正相关(r =0 .86,P <0 .0 5 )。结论　PHG胃黏膜细胞凋亡增加 ,断流术后凋亡加剧 ,PHG病变程度加重 ;分流术后凋亡改善 ,PHG病变程度缓解。     

断流术削弱胃粘膜细胞增殖能力及降钙素基因相关肽保护作用的研究

目的：研究门静脉奇静脉断流术（下称断流术）对胃粘膜细胞增殖能力的影响。并试用降钙素基因相关肽（calcitonin generalated peptide,CGRP)保护术后胃粘膜。方法：Wistar大鼠分正常对照组8只，肝硬变合并门静脉高压性胃病（portal hypertensive gastropathy,PHG)模型对照组12只，断流手术组12只，断流术加CGRP保护组12只，用放射自显影技术测定各组胃粘膜细胞增殖参数。结果：肝硬变PHG大鼠断流术后胃粘膜细胞DNA合成期、细胞周期较正常及模型组延长（P＜0．01），标记指数相应降低（P＜0．01）。各参数变化主要表现在胃体部。应用CGRP后DNA合成期、细胞周期缩短，标记率上升（P＜0．01）。各参数变化主要表现在胃体部。应用CGRP后DNA合成期、细胞周期缩短，标记率上升（P＜0．01）。结论：断流术削弱了胃粘膜细胞增殖能力，可能是易发生术后PHG胃出血的因素之一，CGRP改善了粘膜细胞增殖受抑状态，可保护胃粘膜，减少出血。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠精索静脉曲张生精细胞Caspase-3酶及bcl-2基因的影响

目的 探讨精索静脉曲张大鼠睾丸组织中一氧化氮(NO)与生精细胞凋亡之间的关系并研究其机制.方法 实验分3组:对照组(假手术组)、曲张组(精索静脉曲张组)和药物组,每组10只大鼠.(45±5)d的SD雄性大鼠复制左侧曲张模型.药物组为术后8周起腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),剂量:50mg/lg·d-1),每组10只大鼠.术后10周用流式细胞仪检测睾丸生精细胞凋亡,分光光度法检测Caspase3活性,用硝酸还原酶法测定睾丸组织NO含量和NOS活性.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因mRNA的表达.结果 与对照组对应侧相比较,曲张组大鼠双侧睾丸组织NO含量增加,NOS活性显著升高(P＜0.01),流式细胞仪枪测生精细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著升高(P＜0.01),bcl.2基因mRNA表达明显减少(P＜0.01).药物组较曲张组大鼠对应侧睾丸组织NO含量、生精细胞凋亡显著减少(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著降低(P＜0.01),bcl-2基因mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论 精索静脉曲张明显诱导大鼠睾丸组织生精细胞凋亡.其机制可能与NO含量增加,NOS活性升高,生精细胞中Caspase-3酶的活性升高及bcl-2基因表达下调有关.L-NAME对曲张大鼠乍殖细胞有保护作用.曲张对睾丸的影响是是双侧性的.     

不同断流术式对门静脉高压症犬胃黏膜细胞凋亡的影响

目的 检测对不同断流术式前后门静脉高压症犬胃黏膜细胞凋亡,观察其对门脉高压性胃病(PHG)影响.方法 将肝硬化门静脉高压症模型犬24条,随机分为A组(传统断流组)、B组(选择性断流组)、C组(吻合器断流组)及D组(对照组),每组6条.分别于术中及术后6个月测自由门静脉压(FPP),取胃组织,采用原位末端脱氧核苷标记法(TUNEL)染色测凋亡指数(AI)及Caspase-3蛋白免疫组织化学染色计算各染色强度细胞评分总和(H值).结果 术后6个月内,A、B、C组FPP均明显下降,其中以B组下降最为明显,其次为C组,最后为A组.术后6个月,A组AI值由术前的(14.68±1.28)%增全(20.22±2.20)%(P＜0.05),H值由术前的56.13±11.75增至113.78±19.80(P＜0.05);B组AI值由术前的(13.63±1.19)%降至(9.98±2.29)%(P＜0.05),H值由术前的59.13±10.07降至22.35±4.75(P＜0.05).C、D组术后6个月与术前比较,AI和H值无明显变化(P＞0.05).结论 肝硬化门静脉高压症犬行传统断流术术后胃黏膜细胞凋亡加重,PHG病变程度加剧;选择性断流术后胃黏膜细胞凋亡减轻,PHG病变程度改善;吻合器断流术后胃黏膜细胞凋亡变化无差异,对PHG病变影响不大.     

HIF-1α在门静脉高压症家兔胃壁中的表达及断流术对其影响

目的观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在断流术前、后门静脉高压症家兔胃黏膜中的表达,探讨HIF-1α在门静脉高压性胃病(PHG)的发生发展作用。方法选择成年雄性新西兰兔45只,随机分为正常对照组(NCG,n=15)、模型对照组(MCG,n=15)、断流术组(DSG,n=15),分笼、编号、普通颗粒饲料喂养。后二组(MCG、DSG)家兔采用日本血吸虫尾蚴感染,15周后即形成血吸虫病肝硬化模型。待测定门静脉压力确定门静脉高压症形成后对各组家兔行相应的手术处理,并于术前、术后取相应的胃黏膜组织。免疫组化检测HIF-1α在家兔胃黏膜中的表达。结果感染尾蚴后第15周,断流术组(DSG)家兔在断流术前及术后2周HIF-1α的表达均高于正常对照组(NCG)(P0.01),模型对照组(MCG)家兔在术前HIF-1α的表达高于正常对照组(NCG)(P0.01),术后2周模型对照组(MCG)家兔HIF-1α的表达仍高于正常对照组(NCG)(P0.01),DSG和NCG术后2周HIF-1α的表达高于各自术前水平(P0.01);结论 HIF-1α在断流术前后DSG组胃黏膜中高表达,提示HIF-1α可能参与了PHG的发生发展;DSG组门静脉压力明显高于NCG组,提示门静脉高压状态可能影响HIF-1α的表达,从而间接影响PHG的发生发展;断流术后DSG组和NCG组家兔HIF-1α明显升高,胃黏膜病变加重,提示断流术本身能通过某种机制影响HIF-1α的表达,从而引起PHG发生发展。     

低氧预适应诱导肝脏HIF-1α高表达对自体原位肝移植大鼠JNK信号转导通路的影响

目的 检测低氧诱导因子α(HIF-1α)在自体原位肝移植大鼠肝脏的表达情况,探讨HIF-1α在JNK信号转导通路中的作用机制.方法 采用单纯随机抽样法将96只SD大鼠分为正常对照组、自体肝移植组、低氧预适应+自体肝移植组,每组32只.正常对照组:仅开腹分离血管,不作其他处理;自体肝移植组:采用经门静脉灌注法建立稳定的70%自体原位肝移植模型;低氧预适应+自体肝移植组:术前用8%氮氧混合气体低氧预处理90min,其他处理同自体肝移植组.分别于术后1、2、12、24h检测大鼠血清ALT、AST水平,免疫组织化学染色法测定大鼠肝脏组织HIF-1α的表达,RT-PCR检测c-Jun mRNA表达水平,Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白表达水平.多组比较采用方差分析,两组比较采用t检验.结果 术后1、2、12、24 h,低氧预适应+自体肝移植组大鼠血清ALT和AST水平显著低于自体肝移植组,但高于正常对照组,差异有统计学意义(F=2631.371、1177.642、810.383、682.848,743.618、1095.522、375.995、580.613,P＜0.05).自体肝移植组大鼠术后各时相点HIF-1α蛋白的表达水平明显低于低氧预适应+自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=191.737,284.482,459.419,213.782,P＜0.05).低氧预适应+自体肝移植组大鼠术后1、2、12 h c-Jun mRNA表达水平显著低于自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=66.211,53.169,9.645,P＜0.05),术后24 h c-Jun mRNA表达水平3组间比较,差异无统计学意义(F=1.100,P＞0.05).低氧预适应+自体肝移植组大鼠术后各时相点Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著低于自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=23.133,31.158,14.347,29.043,P＜0.05).结论 肝移植大鼠低氧预适应后HIF-1α的高表达可能通过抑制JNK信号通路的持续激活,下调Cleaved Caspase-3蛋白的表达,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织微血管损伤机制及温阳活血方的干预作用

目的:研究慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织微血管损伤机制及温阳活血方对其干预作用,探讨温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病的保护作用机制.方法:将48只雄性SD大鼠随机分为5组.(1)正常对照组(n=8):予生理盐水灌胃;(2)模型组(n=10):按关木通水煎液10 ml·kg-1·d-1(相当于关木通40 g·kg-1·d-1,马兜铃酸A 2.6 mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃;(3)中药组(n=10):在模型组基础上,再予温阳活血方30 g·kg-1·d-1灌胃;(4)西药组(n=10):在模型组基础上,再予科素亚33.3 mg·kg-1·d-1灌胃;(5)中西药结合组(n=10):在模型组基础上,再予温阳活血方30 g·kg-1·d-1 科素亚33.3 mg·kg-1·d-1灌胃.20周末,光镜观察肾脏病理,采用CD 34免疫组化染色来反映肾组织微血管的损伤情况,实时PCR检测肾组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF mRNA的表达.结果:(1)与正常对照组比较,模型组大鼠肾组织CD34表达明显降低(P＜0.01);而治疗组大鼠肾组织CD34表达较模型组明显升高(P＜0.05),其中尤以中药组明显(P＜0.01);(2)与正常对照组比较,模型组大鼠肾组织Ang-1、Tie-2、VEGF mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),Ang-2表达明显升高(P＜0.01);而治疗组大鼠肾组织Ang-1、Tie-2、VEGF mRNA表达较模型组明显升高(P＜0.05,P＜0.01),中西药结合组Ang-2表达明显减少(P＜0.01).结论:慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织存在微血管的损伤,其损伤机制可能与Ang-1、Tie-2和VEGF mRNA的下调,Ang-2 mRNA上调有关,温阳活血方能明显改善微血管的损伤,对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏具有保护作用.     

Caspase-3和Caspase-8基因沉默保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。