IL-12联合结核杆菌DNA疫苗初免-BCG加强免疫的免疫效果观察

目的研究并比较IL-12联合结核分枝杆菌(TB)DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗初免-BCG加强免疫的应答效果。方法将小鼠随机分成PBS阴性对照组和4组免疫组:BCG组、DNA(Ag85A和ESAT-6)初免-BCG异源加强组、DNA IL-12初免-BCG异源加强组和DNA初免-BCG IL-12异源加强组。末次免疫后4、6、8周分别测定血清总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验(流式细胞仪检测),测定脾细胞培养上清中IFN-γ分泌水平,并检测小鼠脾脏淋巴细胞表型。结果4组免疫组体外经TB纯蛋白衍生物(TB-PPD)刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,且抗体水平在末次免疫后4～8周逐渐增加,4组平均效价为1∶80,1∶120、1∶160、1∶160,各组抗体水平增加无明显差异(P>0.05);小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,4组免疫组均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,且DNA IL-12/BCG和DNA/BCG IL-12组特异性淋巴细胞增殖活性和IFN-γ分泌水平均明显强于BCG,DNA/BCG组(P<0.05),但DNA IL-12/BCG和DNA/BCG IL-12组间差异不明显;4组免疫组小鼠CD4 、CD8 T淋巴细胞较PBS组有较大升高(P<0.05),且DNA IL-12/BCG和DNA/BCG IL-12组CD4 、CD8 T淋巴细胞百分比大于BCG以及DNA/BCG组(P<0.05)。结论IL-12联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫策略较BCG免疫以及单纯的DNA疫苗初免-BCG加强免疫能在小鼠体内诱导更强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ。     

Ag85A与Ag85B DNA疫苗对膀胱肿瘤免疫效应的实验研究

目的 研究单独及联合应用Ag85A与Ag85B DNA疫苗对膀胱肿瘤的免疫效应.方法 选择6～8周龄雌性Wistar大鼠作为实验对象.以膀胱灌注MNU建立膀胱原位癌模型,左后肢皮下注射BTT739细胞株建立种植性膀胱肿瘤模型.于末次膀胱灌注后14 d随机处死10只大鼠,以确定模型是否成功建立.每种模型均随机分为6组(每组8只):生理盐水(NS)组、pcDNA3.1组(空白质粒组)、pcDNA3.1-Ag85A(Ag85A)组、pcDNA3.1-Ag85B(Ag85B)组、pcDNA3.1-Ag85A+Ag85B组(联用组)、卡介苗(BCG)组,并予相应干预治疗.计算各组肿瘤生长抑制率、荷瘤鼠脾脏T细胞亚群数量变化,检测血清干扰素(IFN)-γ水平,剥离肿瘤进行病理组织学检查.结果 肿瘤生长抑制率:BCG组最高达63.53%,其余依次为联用组53.56%、Ag85B组33.08%、Ag85A组11.50%、空白质粒组1.10%;干预治疗后空白质粒组T细胞亚群无明显变化,其余各组CD4+T细胞与CD8+T细胞亚群的数量及CD4+/CD8+比值均有增加(P＜0.05或P＜0.01);空白质粒组血清IFN-γ平无变化,BCG组升高最明显,其余依次为联用组、Ag85B组、AgB5A组.病理组织学观察显示BCG组、联用组、Ag85B组肿瘤坏死明显,而Ag85A组、NS组和空白质粒组肿瘤坏死不明显.结论 Ag85A与Ag85B DNA疫苗对大鼠原位及种植性膀胱癌有明显的免疫效应,Ag85B DNA疫苗的免疫效力强于Ag85A DNA疫苗;两者联用效果更显著,但不及BCG的抗肿瘤效果.     

有机硒增强BCG细胞免疫效果的初步探讨

目的:探讨酵母硒(Yeast-based selenium,Se)对卡介苗(BCG)免疫效果的影响.方法:将小鼠分为4组:A组BCG皮内接种 喂硒、B组BCG皮内接种、C组单纯喂硒、D组对照组(control).于接种4周、8周后取单个脾淋巴细胞,通过检测淋巴细胞增殖指数(Stimulation idex,SI)、IL-2、IFN-γ、细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活力及淋巴细胞颗粒酶B及穿孔素的表达量来评价机体抗结核的细胞免疫能力.结果:6项指标A与B组均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组的SI、IL-2、IFN-γ、CTL杀伤活力,免疫4周后分别为2.61±0.24、(172.56±9.34)pg/ml、(131.89±3.32)pg/ml、(43.91±3.21)%(8周值分别为2.32±0.31、(138.04 4-9.67)pg/ml、(129.17±2.41)pg/ml、(39.92±6.45)%,均显著高于B组(4周值:(1.62±0.14)、(134.06±9.60)pg/ml、(105.89±4.62)pg/ml、(30.46±7.97)%;8周值:1.61±0,19、(101.42±7.76)pg/ml、(102.00±5.41)pg/ml、(28.14 ±5.70)%),P＜0.05.结论:BCG与硒酵母有免疫协同作用,能诱导机体产生较强的抗结核的细胞免疫应答反应.     

Toll样受体4对Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗免疫保护效应的影响

目的:探讨Toll样受体4(TRL4)对Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗免疫保护效应的影响。方法:分别用pcDNA-Ag85B,pcDNA-Ag85BTRL4免疫小鼠,第三次免疫2周后检测细胞因子IFN-γ,IL-4和IL-10分泌水平,3月后进行MTB感染实验,观察MTB菌落数。结果:TRL4可增强Ag85B免疫后IFN-γ分泌量,IL-4和IL-10分泌水平无显著变化。免疫后小鼠抗MTB能力增强,pcDNA-Ag85B,pcDNA-Ag85B-TRL4组MTB菌落数均有减少且pcDNA-Ag85B-TRL4组抗MTB作用更明显。结论:TRL4可增强Ag85B抗MTB DNA疫苗免疫保护效应。     

系统性红斑狼疮患者IL-10、IL-18和IFN-γ的变化及意义

目的:探讨IL-10、IL-18和IFN-γ水平与系统性红斑狼疮(SLE)发病的关系.方法:采用ELISA法检测45例SLE患者和40例正常对照组血浆IL-10、IL-18和IFN-γ的水平.结果:SLE组IL-l0(76.24±8.37)pg/ml、IL-18(251.32±71.28)pg/ml较正常对照组IL-10(17.92±6.32)pg/ml、IL-18(191.41±64.25)pg/ml差异有统计学意义(p<0.01),且SLE活动组IL-10(95.76±11.89)pg/ml、IL-18(394.24 ±138.16)pg/ml与非活动组IL-10(41.35±13.27)pg/ml、IL-18(214.80±69.21)pg/ml之间比较差异有统计学意义(p<0.01);IFN-γ在各组间差异无统计学意义(p>0.05);SLE组IL-10与IL-18呈正相关(r=0.521,p<0.01),而IL-10与IFN-γ以及IL-18与IFN-γ间无相关性.结论:IL-10、IL-18水平与疾病活动性有关,可作为判断疾病疗效的监测指标.IFN-γ在各组间无明显变化,可能与IL-10与IL-l8等细胞因子之间的拮抗作用有关.     

结核杆菌多价核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究

目的构建包含结核杆菌3种抗原蛋白Ag85A、ESAT-6和CFP-10真核表达质粒的多价DNA疫苗,并对其在小鼠体内的免疫原性进行初步分析。方法PCR扩增获得结核杆菌ag85 a、esat-6和cfp-10基因片段,分别克隆入真核表达质粒VR1020的BamHⅠ位点构建DNA疫苗,以此多价DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内的特异性抗体应答和细胞免疫反应,并与BCG免疫组、质粒VR1020免疫组和生理盐水对照组相比较。结果多价DNA疫苗免疫小鼠后能产生特异性的细胞和体液免疫应答,DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞IFN-γ的表达量显著高于BCG免疫组,而DNA疫苗免疫组小鼠所产生的特异性抗体水平低于BCG免疫组。结论成功构建了结核杆菌多价DNA疫苗,免疫小鼠后检测到特异性细胞和体液免疫应答。     

表达结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗免疫原性

目的:研究表达结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对结核分枝杆菌(MTB)感染小鼠的保护能力.方法:以100 μg重组质粒pcDNA-e6c10接种BALB/c小鼠腓前肌,共免疫3次. 末次免疫结束2 wk后,检测免疫小鼠特异性抗体滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤效应以及诱导IFN-γ和IL-2水平. 另一部分免疫的BALB/c小鼠以1×105 MTB毒株H37Rv经尾静脉进行攻击,4 wk后计数脾脏细菌负荷数,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用.结果:表达ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶ 800. 淋巴细胞刺激增殖指数为2.42±0.13,显著高于生理盐水对照组;免疫小鼠诱导IFN-γ含量(2449±12)ng/L与卡介苗(BCG)组无明显差异,IL-2含量(198±16)ng/L不及BCG免疫组,但显著高于生理盐水对照组;同时融合蛋白诱导的CTL杀伤率为42%. 与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,DNA疫苗免疫的BALB/c小鼠对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有较明显抵抗作用(细菌负荷4.51±0.23,P＜0.05),但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷无明显减少.结论:表达ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗能在结核病预防中有一定免疫治疗作用.     

肿瘤细胞表达Sema3A对树突状细胞功能的影响

目的:研究肿瘤细胞分泌Sema3A对小鼠树突状细胞(dendritic cells,DCs) 免疫学功能的影响.方法:以Sema3A特异性小干扰RNA片段(Si-Sema)和相应突变片段(Si-mut)分别转染肺腺癌细胞A549,以real-time PCR和Western-blot法检测干扰效果.取未转染和Si-Sema、Si-mut转染细胞的浓缩上清分别作用于DCs,并以流式细胞术分析各组细胞表面MHCⅡ分子及共刺激分子CD40 、CD80的表达;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测DCs表达白细胞介素 (interleukin,IL)-12水平.同时,测定DCs刺激OVA-特异性CD4+T (DO11.10T)细胞表达γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和IL-2水平.结果:与Si-mut转染组相比,Si-Sema转染的A549细胞表达和分泌Sema3A水平明显下降(93.4±7.3% vs 27.8±5.3%,P<0.01);Sema3A缺失引起DCs表达MHCⅡ分子和共刺激分子水平上升,分泌IL-12 p70量明显提高 (449.3±29.3 pg/ml vs 675.7±60.2 pg/ml,P<0.05),刺激抗原特异性T 细胞表达IFN-γ(639.6 ± 41.9 pg/ml vs 905.6 ± 68.0 pg/ml,P<0.05)和IL-2 (1011.7 pg/ml± 81.4 pg/ml vs 1459.0 pg/ml± 96.8 pg/ml,P<0.05)显著增加.结论:肺腺癌细胞A549通过分泌Sema3A,抑制DCs的成熟和免疫学功能,这可能是目前尚未完全了解的肿瘤免疫逃逸机制之一.     

MPT64 DNA疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

目的:研究MPT64 DNA疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.方法:C57BL/6小鼠36只,随机分为4 组.A组(PBS)、B组(pcDNA3.1)、C组(BCG)、D组(pcDNA/MPT64);分别于胫前肌注射质粒DNA免疫,70 μg/次,1次/2 wk,共3次.末次免疫后5 wk用106 CFU H37Rv经尾静脉攻击,攻击后6 wk处死小鼠,测血清总IgG,特异性脾淋巴细胞增殖实验、IFN-γ及IL-4分泌水平.作脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及观察小鼠存活时间.结果:MPT64基因疫苗诱导小鼠特异性IgG的产生、脾淋巴细胞增殖以及IFN-γ的分泌.MPT64 DNA免疫组肺、脾组织荷菌量,病理学改变和小鼠存活时间明显优于阴性对照组.结论:MPT64 DNA疫苗在抗结核分枝杆菌(Mtb)感染过程中具有一定免疫保护作用.     

肺炎支原体肺炎患儿血清IL-27水平变化及其意义

目的探讨肺炎支原体肺炎（MPP）患儿血清IL-27水平变化及其在MPP发病机制中的意义。方法以15名健康儿童为正常对照组,对36例MPP患儿和35例非肺炎支原体肺炎（NMPP）患儿的急性期外周血IFN-γ、IL-4和IL-27水平进行测定。血清IFN-γ、IL-4和IL-27水平采用双抗体夹心ELISA法进行检测。结果 MPP组、NMPP组急性期及对照组血清IFN-γ水平分别为（173.1±29.2）pg/ml、（192.2±36.4）pg/ml、（152.3±28.2）pg/ml;血清IL-4水平分别为（124.8±34.7）pg/m、（100.4±31.9）pg/ml、（80.0±24.7）pg/ml。MPP组、NMPP组血清IFN-γ、IL-4水平均较对照组升高（P〈0.05,P〈0.01）,但MPP组IFN-γ/IL-4比值降低,而NMPP组则无明显变化。MPP组、NMPP组、对照组血清IL-27水平分别为（24.24±9.00）pg/ml、（29.76±10.18）pg/ml、（18.03±7.58）pg/ml,MPP组高于对照组（P〈0.05）,NMPP组高于MPP组（P〈0.05）。MPP组及NMPP组患儿血清IL-27与IFN-γ水平呈正相关（r=0.849,P〈0.01）,血清IL-27水平与IFN-γ/IL-4比值呈正相关（r=0.884,P〈0.01）。结论 MPP患儿急性期IL-27应答不足,Th1/Th2应答失衡,在MPP的免疫病理损伤与肺外并发症发生中可能有重要意义。     

加温对小白鼠染色体影响的研究

加温是一种对放疗中射线抵抗性细胞增敏的有效方法。加温是否对机体有损伤目前很少有人探讨。本文利用微波辐射、恒温水浴为热源对小白鼠加温,观察细胞染色体的改变,判定热疗过程对机体的损伤。     

100例子宫肌瘤与子宫腺肌病的B超图像分析

目的 探讨子宫肌瘤与子宫腺肌病Ｂ超图像特征及其鉴别诊断。方法 常规Ｂ超检查,并将子宫肌瘤子宫腺肌病两组Ｂ超图像进行比较分析。结果 ４７例肌瘤（９４．０％）有假包膜或界限清楚,。２８例腺肌病（９３．３％）界限欠清;４１例肌瘤（８２．０％）探及栅栏样图像和后方回声衰减仅各有２例（６．６７％）、１８例（６０．０％）呈高回声,两者比较差异有显著性（Ｐ〈０．０１,〈０．０５）。结论：Ｂ超对子宫肌瘤和腺肌病的     

伤立效总提取物对小白鼠骨骼肌微循环障碍的影响

实验表明,伤立效对肾上腺素所致的小白鼠骨骼肌微循环障碍具有扩张微血管口径、加快微血管的血流速度、增加血流量的作用,实验组与对照组比较,各项指标差异均非常显著(P<0.01)。     

鼻咽癌放疗后复发因素分析（附30例报告）

本文总结了1988－1993年30例鼻咽癌放疗后复发因素，包括剂量因素，边缘因素，病情估计不足及设野不合理等，其中病情估计不足造成的复发，占33．3％（10／30），克服病情估计不足，改进放疗设野布局，有进一步提高鼻咽癌的治愈率和降低复发率的可能，CT检查应列为鼻咽癌的常规检查。     

外阴部血管瘤21例治疗分析

目的：探讨女性外阴血管瘤的治疗方法及时机。方法：对1994-1999年收治的14例女性外阴部血管瘤和7例海绵状血管瘤，分别采用平阳霉素局部注射和手术切除治疗。结果：毛细血管瘤全部治愈，海绵状血管瘤复发率为28.6%(2/7)，1例出现部分皮拉坏死并发症。结论：女性外阴部毛细血管瘤不宜在观察中等其自然消退，应积极采用平阳霉素瘤内注射治疗，海绵状血管瘤单纯用平阳霉素注射治疗效果不佳，宜采用手术切除。     

胃去门静脉循环断流术犬模型的建立

目的设计胃去门静脉循环断流术的方法 ,并建立胃去门静脉循环断流术犬模型。方法应用缩窄门静脉主干1/2加丝线慢性栓塞术制作犬肝前型门静脉高压食管静脉曲张模型。然后,实施胃去门静脉循环断流术,即行脾切除后,保留贲门周围血管、食管曲张静脉及迷走神经,从根部离断胃冠状静脉等汇入门静脉系统的胃静脉血管,使胃的静脉血流经门奇间的交通支血管进入体循环。将已形成肝前型门静脉高压食管静脉曲张犬12只随机分为脾切除组、贲门周围血管离断术组、胃去门静脉循环断流术组。于开腹后、手术后即刻及术后3周末测量门静脉及食管曲张静脉压力。术前及术后3周末测定肝功能指标。结果犬模型均存活。手术后即刻及术后3周末与开腹后相比,胃去门静脉循环断流术组门静脉压力显著下降(F=7.386,q=3.503、3.121,P<0.05);食管曲张静脉压力亦显著下降(F=8.026,q=3.661、3.240,P<0.05)。手术前后肝功能指标变化不明显(t=0.268～1.325,P>0.05)。结论胃去门静脉循环断流术犬模型存活率高,制作方法简单易行,模型质量可靠,有助于研究胃去门静脉循环断流术对门静脉血流动力学参数的影响。     

手术治疗甲状腺机能亢进93例临床分析

目的：探讨我院所作甲状腺机能亢进的甲状腺次全切除术病例的经验教训。方法：将本院28年来外科施行的93例甲亢的甲状腺次全切除术病例资料进行回顾性分析。结果：男8例,女85例,发病年龄男15～56岁,平均36岁;女16～70岁,平均34岁。肿块大小为3～20厘米,16厘米以上占77.42%,病理诊断：弥漫性毒性甲状腺肿92例,双侧结节性毒性甲状腺肿1例。基础代谢率27%～73%,平均46.3%。心电图异常50例占53.76%。术后1例并发甲亢危象,1例并发甲低,房室传导阻滞,均痊愈出院。结论：甲亢的甲状腺次全切除术效果可靠,优于药物治疗,并发症少,术前准备要仔细充分,术中操作要细致,严防并发症的发生,特别是甲低、甲亢危象,旁腺和神经损伤的发生。     

不同冷冻时间对兔角膜膨胀率的影响

对不同冷冻时间（２０ｓ和３ｍｉｎ）及不同方法保存的兔角膜膨胀率进行了测定。结果冷冻２０ｓ及３ｍｉｎ，新鲜角膜组膨胀率（％）分别为２９．４５±１．９，４９．７４±１．６（Ｐ＜０．０５）；冷冻保存组为３１．６５±０．８及５４．６７±２．７（Ｐ＜０．０５）；干燥保存组为７３．８２±７．７及８６．０９±１．３（Ｐ＜０．０５）。干燥保存组角膜膨胀率与新鲜组及冷冻保存组差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。提示在角膜组织镜片加工时，应考虑不同保存方法和不同冷冻时间所造成的不同膨胀率对其厚度的影响，从而减少镜片加工时的屈光度误差。     

手术治疗支气管类癌30例临床观察

目的分析支气管类癌的临床特征,探讨手术治疗的方法和影响预后的因素。方法进行回顾性分析经手术切除的30例支气管类癌病的影像学特征、临床表现及影响预后的因素。结果术后病理证实,21例为典型支气管类癌,9例为非典型支气管类癌;手术治疗后21例病人存活超过5年,其中10例超过10年;4例3年内死于肝脑转移,5例术后不足5年,仍健在。结论相对于其他类型的肺癌,支气管类癌具有良好的生物学特性及预后。手术是治疗支气管类癌的主要方法,远处转移是影响预后的主要因素。     

甲状腺癌28例误诊原因分析

甲状腺癌误诊的常见原因是对其发病特点认识不足,术前临床资料不■实,术中处理不够慎重。为减少临床误诊应采取综合措施。包括提高对此病诊断的警惕性,认真行颈部触诊,综合分析各项检查结果,依靠穿刺细胞学检查和术中冰冻切片以及石蜡块组织学检查而最后确诊。