健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

健脾化瘀方抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c-fos表达的研究

目的：从基因和蛋白水平探讨健脾化瘀方抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c—fos表达的影响。方法：分别采用RT—PCR和Westemblot方法检测不同浓度健脾化瘀方处理SMMC-7721细胞前后ERK、C—fosmRNA和蛋白水平的改变。结果：健脾化瘀方能抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK、c—fosmRNA和蛋白表达。结论：健脾化瘀方的作用机制之一可能是抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c—fos的基因表达。     

抗癌扶正方及含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用

目的:探讨抗癌扶正方的抗肝癌作用。方法:提取抗癌扶正方,使用药物及含药血清,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养,分光光度计检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响。结果:抗癌扶正方及药物血清,具有良好的抑肝癌细胞生长作用,尤以1、10mg/mL剂量组效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机制有必要进一步深入探讨。     

双氢青蒿素含药血清抑制人肝癌SMMC-7721细胞活性的研究

目的:研究双氢青蒿素含药血清抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用及作用机制。方法:制备空白组、双氢青蒿素15 mg/kg、30 mg/kg、60mg/kg、120 mg/kg 5个剂量组含药血清,以贝伐单抗为对照药,作用于人肝癌SMMC-7721细胞;噻唑蓝法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;制作细胞爬片,免疫组化法检测各组细胞的血管内皮生长因子表达。结果:和空白组比较,双氢青蒿素含药血清30 mg/kg组、60 mg/kg组、120mg/kg组能明显抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导细胞凋亡。24h的增殖抑制率分别为22.41%、29.31%和36.21%,48h的增殖抑制率分别为24.68%、36.36%和41.56%,72h的增殖抑制率分别为30.59%、38.82%和45.88%;凋亡率分别为16.13%、17.42%和19.73;免疫组化结果显示各双氢青蒿素组细胞的血管内皮生长因子表达均受到明显抑制。结论:双氢青蒿素含药血清浓度达到30 mg/kg以上时表现出明显的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,并且这种作用可能与其对血管内皮生长因子的表达抑制相关。     

益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡抑制基因(Survivin)、caspase-3及caspase-9表达的影响.方法 运用血清药理学方法制备大鼠益气健脾解毒方含药血清,将人肝癌HepG2细胞按随机数字表法分为中药组、化疗组、联合组和空白组,空白组加入10%空白血清;化疗组加入2μg奥沙利铂和10%空白血清;联合组加入2μg奥沙利铂和10%益气健脾解毒方含药血清;中药组加入10%益气健脾解毒方含药血清.采用MTT法检测细胞抑制率,采用Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞Survivin、caspase-3、caspase-9蛋白及基因表达.结果 与空白组比较,中药组、化疗组及联合组人肝癌HepG2细胞抑制率明显增高(P<0.05).与化疗组及中药组比较,联合组Survivin[(0.151±0.054)比(0.288±0.089)、(0.375±0.063)]蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA[(0.205±0.091)比(0.487±0.073)、(0.725±0.092)]表达下调(P<0.05或P<0.01);caspase-3[(0.821±0.079)比(0.634±0.098)、(0.487±0.102)]、caspase-9蛋白[(0.901±0.047)比(0.709±0.054)、(0.402±0.012)]表达上调(P<0.05或P<0.01),caspase-3 mRNA[(1.928±0.226)比(1.564±0.195)、(1.287±0.312)]、caspase-9 mRNA[(2.063±0.517)比(1.536±0.084)、(1.019±0.182)]表达均上调(P<0.05或P<0.01).结论 益气健脾解毒方对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡机制可能通过增强抑制Survivin及促进Caspase-3及caspase-9蛋白表达发挥作用.     

肝癥口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响

本文就肝癌口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响进行了研究。通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测表明，肝癌口服液可以促进人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡，且对正常人的免疫系统影响不大。     

复方斑蝥注射液对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用

目的:探讨复方斑蝥注射液(Compound Cantharis Injection,CCI)对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用.方法:分别用用MTT法和细胞生长曲线研究CCI对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.结果:与阴性对照组比较,CCI在2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml剂量时对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为11.63%、20.54%、38.11%、62.44% (P<0.05);平均半数抑制浓度(IC50)为11.29mg/ml.生长曲线结果显示:CCI对肝癌细胞的抑制作用且呈明显的量效和时效关系.结论:CCI能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,具有一定的剂量依赖性.     

健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

乳移平含药血清对乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭影响的实验研究

  目的：研究乳移平含药血清对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与侵袭的影响,并探讨其作用机制。  方法：①制备不同浓度的乳移平含药血清(10%、20%、30%、40%),并以10%、20%、30%、40%空白血清作对照,采用噻唑蓝(MTT)方法测定含药血清对4T1细胞存活率的影响,筛选最佳作用浓度和最佳作用时间。②设空白对照组、TGF-β1对照组、TGF-β1 10%乳移平含药血清组、TGF-β1 20%乳移平含药血清组;除空白对照组外,其他组细胞都用2 mg/L的TGF-β1预处理3 h,再分别选择空白血清或含药血清作用48 h。采用Transwell侵袭实验检测含药血清对TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭率的影响;Western blotting及Real-time PCR检测乳移平含药血清对经TGF-β1预处理的4T1细胞Smad4和Smad7表达的影响。  结果：①乳移平含药血清显著抑制4T1细胞的增殖活性;选择10%和20%作用浓度,48 h作用时间用于后续实验。②乳移平含药血清显著抑制TGF-β1诱导的4T1高侵袭能力,并且存在浓度依赖性;Western blotting和Real-time PCR结果显示,乳移平含药血清明显逆转了TGF-β1诱导的Smad4蛋白及mRNA的高表达,但对TGF-β1诱导的Smad7蛋白及mRNA表达量上调没有影响。  结论：乳移平含药血清能够抑制4T1的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与调控TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达有关。     

芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.方法 制备芪参清肝汤,体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为药物干预组及对照组,药物干预组分别加入0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/ml芪参清肝汤处理12h、24 h、48 h,对照组不加药.采用四甲基偶氮唑兰（MTT）比色法检测2组细胞抑制率,采用流式细胞术检测2组细胞凋亡率.结果 0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/m1芪参清肝汤对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用12h的OD值分别为0.89±0.05、0.85±0.05、0.80±0.06、0.78±0.02、0.69±0.07; 24 h的OD值分别为0.77±0.07、0.74±0.07、0.59±0.07、0.50±0.09、0.39±0.08; 48 h的OD值分别为0.78±0.05、0.61±0.08、0.44±0.10、0.39±0.08、0.34±0.07,并呈剂量、时间依赖性,与对照组（1.14±0.06、1.24±0.03、1.31±0.06）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）; 0.27、0.54 g/ml芪参清肝汤能明显诱导SMMC-7721细胞凋亡（11.19±2.23、15.69±2.51）,与对照组（1.41±0.22）比较有统计学意义（P＜0.05）,1.08 g/ml芪参清肝汤诱导肝癌细胞凋亡（41.83±7.11）,与对照组（1.41±0.22）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 芪参清肝汤能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,可能通过诱导肝癌细胞凋亡发挥其作用.     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。     

10种壮药含药血清抗人肝癌细胞的实验研究

目的:观察10种壮药含药血清对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用,筛选出具有较强抑癌作用的药物,以指导临床用药。方法:选用清洁级成年Wistar大鼠,分别制备金刚藤、龙葵、解毒蕨、半枝莲、排钱草、石见穿、绞股蓝、透骨消、叶下珠、藤梨根10种壮药含药血清,设低、中、高浓度作用于人肝癌SMMC-7721细胞,同时设生理盐水(NS)空白血清对照组及环磷酰胺(CTX)阳性血清对照组,用MTT法检测含药血清在24 h、48 h对细胞增殖的影响。结果:MTT法筛选结果显示,金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清在24 h及48 h对人肝癌SMMC-7721细胞均有较好的抑制作用,且金刚藤高剂量组在48 h抑制作用最强。结论:金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞有较好的抑制作用。     

四逆散含药血清对大鼠肝干细胞WB-F344增殖分化的影响

目的研究四逆散(柴胡,白芍,枳实,甘草)含药血清诱导大鼠肝干细胞WB-F344分化的作用。方法 SD大鼠灌胃四逆散,取其含药血清处理WB-F344细胞,应用CCK-8方法检测细胞活性,Western blot法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞色素P450 3A(CYP 3A)蛋白表达,PCR检测AFP、ALB的mRNA水平,PAS法检测糖原合成功能,尿素氮检测试剂盒观察尿素氮合成功能,Mito Tracker Red染色法检测线粒体数目,Clark氧电极检测细胞耗氧量,荧光素酶法测定细胞内ATP水平,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果含药血清对实验细胞无毒性作用,10%含药血清显示出较好的促进细胞增殖的效果;含药血清作用后,AFP的蛋白及基因水平有降低趋势,ALB的蛋白及基因水平有升高趋势,糖原合成功能、尿素氮合成功能提高,CYP 3A蛋白水平有一定增加。同时,线粒体数目增加,细胞呼吸功能、ATP水平、线粒体膜电位都有一定程度增加。结论四逆散含药血清可促进肝干细胞增殖、诱导其分化,可能为促进肝损伤修复的机制之一。     

寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

  目的：探讨寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的调节作用。  方法：体外分离培养人早孕滋养层细胞,采用高、中、低剂量寿胎丸含药血清进行干预,以空白血清、地屈孕酮含药血清为对照。采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)及Transwell 侵袭移动实验测定滋养层细胞的增殖活性、周期分布及侵袭迁移能力。  结果：与空白组比较,滋养层细胞经寿胎丸含药血清干预后,细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例降低(P<0.05)。与寿胎丸低剂量组比较,寿胎丸中、高剂量组滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,细胞周期分布变化更加明显(P<0.05)。  结论：寿胎丸含药血清可促进人早孕滋养层细胞的增殖活性及侵袭迁移能力,减少细胞凋亡。     

陕重楼甾体皂苷类单体B(BM-61)对SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:观察陕重楼甾体皂苷单体B(BM-61)对人肝癌SMMC-7721细胞的影响。方法:将不同浓度BM-61与人体肝癌SMMC-7721细胞分别在24 h、48 h、72 h处理后,采用MTT法,测定吸光度OD值,并计算细胞增殖抑制率,检测陕重楼单体B对肿瘤细胞增殖的影响。结果:本品1.6 mg·L-1、8 mg·L-1、40 mg·L-1、200 mg·L-1、1 000 mg·L-1剂量组在24 h、48 h、72 h与对照组比较吸光度A值有显著性降低(P0.01或P0.05),本品0.3 mg·L-1剂量在24 h、48 h吸光度A值也有显著性降低(P0.05),其中8 mg·L-1在24 h、48 h、72 h吸光度最小,抑制率分别为19%、23%、17%。结论:陕重楼BM-61对人肝癌SMMC-7721细胞具有一定的抑制作用,且最强抑制浓度为8 mg·L-1。     

重楼复方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究重楼复方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制作用,及其对细胞周期、细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:采用MTT法观察重楼复方对SMMC-7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR法检测凋亡相关基因生存素(Survivin)mRNA的表达。结果:重楼复方以剂量依赖方式抑制SMMC-7721的细胞增殖,其半数抑制浓度(48h)为(0.26±0.04)mg/mL。重楼复方0.2、0.4、0.8mg/mL作用于SMMC-7721细胞48h后,其早期凋亡率分别为4.8%、8.3%、21.6%,而对照组为1.8%,其诱导凋亡作用呈现剂量依赖性。重楼复方0.8mg/mL作用于SMMC-7721细胞24h后,细胞积聚在G0/G1期,同时S期细胞比例减少。重楼复方0.8mg/mL作用SMMC-7721细胞48h后,Survivin mRNA表达下调(P<0.05)。结论:重楼复方具有抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及诱导细胞凋亡作用,并能阻滞细胞于G0/G1期,下调Survivin mRNA的表达可能为其诱导细胞凋亡的主要机制之一。