HCV抗原检测与HCV-RNA和HCV抗体检测的比较研究

目的 评价丙型肝炎病毒核心抗原(HCV抗原)、丙型肝炎病毒抗体(HCV抗体)及丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)三种检测方法在丙型肝炎实验室诊断中的作用.方法 HCV抗原采用双抗体夹心法;HCV-RNA采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR),HCV抗体采用酶联免疫技术(间接法),对44例HCV抗体阳性标本进行HCV抗原和HCV-RNA检测.结果 在HCV抗体阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为43.2％,HCV-RNA阳性检出率为82.5％;在HCV-RNA阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为45.5％.结论 三种丙肝标志物中,实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA是判断丙肝感染最可靠的方法而HCV抗原诊断丙肝,仍有54.5％的漏检率,其应用于临床还有距离.所以在没有条件应用实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA的医院,在用HCV抗原对HCV抗体阳性标本进行确认,来判断HCV既往感染或现症感染时,应结合肝功能指标及临床表现以明确诊断.     

建立一种高灵敏的HBV核酸定量检测方法

目的 建立一种高灵敏度的TaqMan实时荧光PCR法用于HBV核酸定量检测,并评估其临床性能。方法 针对HBV保守序列设计引物探针,收集来自国内3家医院共计631例样本,利用本文建立的方法进行HBV核酸定量检测,评估其灵敏度、特异性和重复性,并与普遍采用的对照试剂盒进行比较,评价该方法的临床性能。结果 本文建立的HBV核酸定量检测方法对5 IU/mL的HBV血清和血浆样本的检出率均为100%,且对HBV强阳性、弱阳性和临界阳性样本的阳性检出率均为100%;该方法对于可能存在交叉的15种病原体、内源干扰物及外源干扰物均无交叉反应;与对照试剂的检测结果比较基本相同,对于不一致的样本,经过复检均和本文建立的检测方法结果一致。结论 该方法具有较高的灵敏度,稳定性和重复性好,特异性强,具有较高的临床应用价值。     

RT-PCR检测HCV-RNA在丙肝流行病学研究中的应用

目的 分析丙型肝炎病毒(HCV)IgG抗体和HCV-RNA核酸检测结果的相关性,为丙肝流行病学研究提供实验依据.方法 对5 385例血液样本采取ELISA法检测HCV-IgG抗体,实时荧光定量RT-PCR方法检测HCV-IgG抗体阳性样HCV核酸.同时检测51例医院门诊送检样本HCV-IgG抗体和HCV-RNA.结果 5 385例检出HCV-IgG抗体阳性47例,阳性率0.87%; 47例HCV-IgG抗体阳性样本经核酸检测14例阳性;阳性检出率0.26%.51例门诊样本中HCV-IgG抗体阳性44例,阳性率86.27%,HCV核酸阳性28例,阳性率54.90%;两者阳性率比较,χ2=9.877,P<0.01差异有统计学意义.结论 ELISA方法检测HCV抗体操作简便,可作为HCV感染筛查方法,RT-PCR 检测 HCV-RNA 是判断丙肝感染最准确方法.     

国产丁型肝炎病毒核酸检测试剂的性能评估和初步临床应用

目的对一种国产丁型肝炎病毒核酸定量试剂(简称"国产HDV RNA试剂")进行质量评估和初步临床应用探索。方法基于Bio-Rad CFX Opus 96实时荧光定量PCR分析系统的国产HDV RNA试剂对WHO HDV RNA国际标准品系列稀释样本进行分析, 对国产HDV RNA试剂的灵敏度和准确度进行评价, 并将人工合成的假病毒或病毒培养物稀释后用于国产HDV RNA试剂线性范围评价;采用国产HDV RNA试剂对HAV、HBV、HCV感染的阳性样本以及HEV国家参考品进行分析, 对其特异性进行评价;用国产HDV RNA试剂测试高、低两个水平的样本, 进行精密度评价;用基于ABI 7500 FAST DX荧光定量PCR仪的RoboGene HDV RNA作为对比试剂与国产HDV RNA试剂平行检测30例丁型肝炎病毒抗体IgG(HDV IgG)阳性样本, 采用Pearson相关系数(r)评价2种试剂的相关性。结果国产HDV RNA试剂的灵敏度为6 IU/ml, 与对比试剂宣称的灵敏度一致;对WHO HDV RNA标准品的标定曲线的斜率为-3.286, 扩增效率为101.6%, 对8种HDV...     

实时荧光定量PCR法与基因芯片法检测HPV的比较

目的 比较基于PCR的基因芯片方法和实时荧光定量PCR方法检测女性子宫颈脱落细胞HPV DNA的相关性. 方法 收集2050份样本采用基因芯片法和实时荧光定量PCR方法进行比对试验,两者结果不符的进行测序验证,并对检测结果进行一致率及阳性率统计分析. 结果 两种方法总一致率、阳性一致率及阴性一致率都在95.0%以上;荧光定量PCR法检测HPV16阳性率50.0%,HPV18阳性率13.9%. 结论 两种方法检测的一致性良好,本实验中所使用的新型12＋2高危型人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒适合应用于育龄期妇女的宫颈癌筛查及随访.     

两种HBV DNA荧光定量试剂盒检测结果比较

目的 比较两种乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR检测试剂盒的临床性能.方法 采用两种HBV荧光定量PCR检测试剂盒对526例临床样本进行检测,比较两种试剂的灵敏度、检测结果的一致性及相关性.结果 两种试剂阳性一致性为97.44%,阴性一致性为95.77%,总一致性为96.77%,两种试剂具有较好的相关性,相关系数r=0.965.结论 HBV一步法试剂具有操作简便、定量准确、灵敏度较高等优点,是一种较好的临床HBV快速定量检测试剂.     

萍乡地区丙型肝炎基因分型

目的了解萍乡地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型情况,为丙型肝炎病毒的诊断和治疗提供有力的依据。方法利用门诊及住院病人血清HCV抗体阳性标本,经荧光定量PCR检测HCV-RNA阳性的102例标本用基因芯片进行不同基因分型检测。结果检测HCV感染标本102例,共检出7种基因亚型,分别为1b,6,2a,1b+2a,1b+3a,3a和3b型,其中1b占72.6%,6型占8.8%,2a占7.8%,1b+2a占5.9%,1b+3a占2.9%,3a占1.0%,3b占1.0%。结论萍乡地区HCV基因型主要为1b与中国其它地区HCV基因型分布比较一致。     

原料血浆混样HCV/HIV-1核酸检测的方法学研究

目的　建立原料血浆混浆核酸检测方法。方法　以国产HCV和HIV核酸扩增 (PCR)荧光定量检测试剂进行WHO标准品的灵敏度、重现性和精密度实验 ,并对 19196份国内原料血浆进行HCVRNA和HIV 1RNA核酸扩增分析。结果　扩增系统能够确保高拷贝数 (2 0 0IU/ml)标准品核酸的检出率 ,对于 <10 0IU/ml的低拷贝数标准品核酸检出率逐渐降低 ;受检原料血浆样本没有检出HCVRNA和HIV 1RNA阳性。结论　核酸扩增方法适用于原料血浆病毒筛查。     

献血者抗-HCV及HCV RNA的检测分析

目前,国内采供血机构筛查献血者HCV抗体是采用两种不同试剂进行检测,其中任何一种试剂检测阳性,就淘汰该献血者。为缩短抗HCV检测的“窗口期”,一些发达国家已将HCV核酸检测用于献血者筛选。我国虽未将HCV核酸检测列入献血者的强制筛查项目,但国内一些血站已尝试将HCV核酸检测用于抗HCV阴性的献血者[1]。为进一步探讨献血者抗-HCV及HCVRNA检测状况,笔者对4 912例血液标本进行了酶免疫学及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,报告如下。1对象和方法1.1对象郑州市无偿献血标本。1.2试剂与仪器HCV PCR荧光定量试剂盒,中山医科大学达安基因诊断中心产;抗-HCV酶免试剂盒,分别购自A、B两家试剂公司;STAR-FAM E自动化酶免分析系统,瑞士H am ilton公司产,PE 570 PCR基因扩增仪,美国PE公司产。1.3方法1.3.1免疫学检测采用自动化酶免分析系统,利用两种酶免试剂检测无偿献血标本,并收集标本,其中两种试剂均阳性标本26份,及一种试剂阳性一种试剂阴性的标本20份,均阴性标本4 866份。1.3.2 HCV核酸检测将两种酶免试剂检测均阴性标本,24份混在一起进行检测[2],其余单份...     

丙型肝炎病毒总抗原检测用于病程监测的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)总抗原检测方法在丙肝病程监测方面的临床意义。方法对来本院就诊的40位丙肝患者于治疗前、治疗1个月时、治疗3个月时、治疗6个月(停药)时,停药6个月后等不同时期进行采血,收集血清或血浆标本,用抗-HCV检测试剂盒(酶联免疫法)、HCV核酸(RNA)扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒、HCV总抗原检测试剂盒(酶联免疫法)进行检测。结果从患者确认感染丙肝到治疗结束抗-HCV检测均呈阳性,而HCV-RNA检测和HCV总抗原检测会随着病程的变化而变化。本次共检测了189例标本(40位患者不同时期标本总例数),其中HCV-RNA阳性51例,该51例阳性标本中,HCV总抗原检测阳性44例,阳性检出率为86.27%;138例HCV-RNA阴性标本,有3例HCV总抗原检测为阳性(2.2%)。2种方法比较,差异无统计学意义(χ2=1.6,P>0.05)。HCV总抗原检测其OD值会随着病程的变化而相应改变,可以较好地反应丙肝患者的病程状况。结论 HCV总抗原检测方法在丙肝病程监测方面具有很好的临床意义,适合在缺少荧光定量PCR检测能力的中小医院使用,可在一定程度上替代HCV-RNA检测,对抗-HCV阳性患者作进一步的验证检测或补充,更好地应用于丙肝患者的病程监测。     

江苏地区无偿献血者HCV基因型的分布

目的探讨江苏地区献血者感染的HCV基因型及亚型。方法收集2013年来自江苏省血液中心ELISA双试剂检测抗-HCV阳性献血者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂盒检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core区基因片段,并对扩增产物进行测序,利用进化树分析基因型和亚型。结果 2013年抗-HCV阳性标本139例(0.20%),其中64例抗-HCV阳性血清标本经荧光定量检测,RNA阴性30份,阳性34份。经巢式PCR扩增能够分型的标本24份,包括1a(71.7%)、1b(7.5%)、2a(7.5%)和3b(1.9%)3种基因型和4种亚型。年龄偏大(35岁)以及男性的HCV RNA阳性标本的病毒滴度与抗-HCV水平(S/CO值)都高于RNA阴性标本,并且存在性别差异,但年龄间无差异。结论江苏无偿献血者感染的HCV基因型以1型为主,其中1b为优势基因亚型。病毒血症献血者的HCV抗体水平显著升高,HCV RNA在自然感染进程中的变化有待通过进一步随访进行研究。     

国产高敏HCV-RNA定量试剂与国产普敏及进口高敏试剂一致性分析

目的 分析国产高敏HCV-RNA核酸检测试剂与国产普敏、进口高敏HCV-RNA核酸检测试剂的一致性。方法 选取2021年1月至9月中国科学技术大学附属第一医院感染病医院检验科收录的丙肝患者临床样本165例,分别采用国产高敏HCV-RNA核酸检测试剂A与国产普敏HCV-RNA核酸检测试剂B进行HCV-RNA定量检测,对两种HCV-RNA定量检测试剂定量结果均为阳性的样本（≥500 IU/mL,87例）进行Bland-Altman一致性分析;选择稀释样本（15～500 IU/mL,60例）,采用国产高敏HCV-RNA核酸检测试剂A与进口高敏HCV-RNA核酸检测试剂C进行HCV-RNA平行定量检测,对两种HCV-RNA定量检测试剂定量结果进行Bland-Altman一致性分析。结果 Bland-Altman分析显示试剂A与试剂B定量值差值均值为（-0.032 6）log10IU/mL,95%置信区间为（-0.462 6～0.397 4）log10IU/mL,95.4%(83/87)的样本检测值在95%置信区间内。试剂A与试剂C定量值差值均值为0.180 0 log10IU/mL,95%可信...     

静脉吸毒人群中血浆抗-HCVEIA法、WB法与HCVRNA荧光定量PCR法比较

目的了解吸毒人群中抗-HCV EIA法、WB法与HCV RNA检测分析的符合性,选取适合高危人群的HCV实验室诊断策略。方法使用2种EIA试剂进行筛查试验,初检阳性者用另一种抗体试剂复检和用FQ-PCR(荧光定量PCR)法检测HCV RNA,抗体复检阳性的样品用HCV WB检测试剂进行确认。结果血清学试验115份样本初检结果阳性108份,阴性7份;对初检阳性者进行复检,结果阳性90份,阴性18份。复检阳性者使用WB确认,89份阳性,1份不确定;EIA抗-HCV结果S/CO≥3.8有71份,与WB阳性符合率为98.6%。EIA复检阳性样本中HCV-RNA检出率为82.22%,复检阴性样本中有HCV RNA的检出率为77.78%(14/18)。结论抗-HCV并不与HCV RNA同时出现。吸毒人员HCV感染的检测,在EIA筛查基础上,对阴性样本检测HCV-RNA,阳性样本用WB试验进行确认,确保检测的准确性。     

检测PML/RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立

目的建立在一个反应体系中同时检测融合基因PML/RARα和内参基因ABL的双重荧光定量PCR方法。方法从DNA聚合酶含量、Mg2+浓度和引物浓度等方面进行优化,建立检测PML/RARα和ABL基因双重荧光定量PCR体系,从分析灵敏度,批内、批间精密度以及检测临床样本阳性率等方面对双重荧光定量PCR反应体系进行性能评价,并同时和北京思尔成公司荧光定量PCR试剂盒进行比较,分析两者的一致性。结果成功构建双重荧光定量PCR反应体系,检测质粒灵敏度为103copies/ml,检测NB4细胞的灵敏度为10-3,反应体系批内、批间精密度Ct值的变异系数CV都小于5%,检测20例确诊为APL病人,其检测阳性率,和北京思尔成公司的PCR反应试剂一致。结论成功开发出稳定的双重荧光定量PCR试剂盒,其操作简单,成本低,误差小,能够有效地用于APL分子生物学分型诊断、用药指导、预后观察及MRD监测。     

HCV核心抗原酶联免疫检测与HCV—RNA定量检测敏感性的比较

[目的]比较ELISA法测定总HCV—cAg与荧光定量PCR法测定HCV—RNA两种检测方法对诊断HCV感染的敏感性,分析HCV—cAg ELISA法诊断试剂的重要意义。[方法]ELISA法测定血清样本中的HCV抗体,改进型ELISA法测定血清样本中的HCV—cAg,实时荧光定量PCR法测定血清样本中的HCV—RNA,阳性样本经重复实验确认。[结果]通过用HCV抗体检测试剂对门诊病人或献浆员进行筛查,获得HCV抗体阳性血清样本264例。对这些病例别进行ELISA法测定总HCV—cAg实验和荧光定量PCR法测定HCV—RNA实验,测到HCV—cAg阳性病例101例,HCV—RNA阳性病例115例。经统计学分析,两种检测方法的敏感性差别不太大（0．01〈P〈0．05）。[结论]HCV—cAgELISA法检测和HCV—RNA定量检测具有相近的敏感性,日存某种稗序上HCV—cAg ELISA法榆测可以作为HCV—RNA定量榆测的有效替代。     

改良固相吸附法在 HCV RNA实时荧光定量检测中的应用

目的：通过对固相吸附法的改良,探讨采用固相吸附法提取血清中丙型肝炎病毒RN A在实时荧光定量检测中的应用。方法首先对HCV RNA的提取方法进行改良,对固相载体纳米二氧化硅颗粒表面进行硅醇基化以提高其核酸吸附能力;同时对病毒裂解液进行优化,获得异硫氰酸胍（GuSCN ）的最佳浓度用于 HCV RNA 的提取;最后使用改良方法提取的 HCV RNA进行实时荧光定量PCR实验,并绘制其标准曲线,计算出线性方程,同时检测该提取方法下实时荧光定量PCR对血清样本中HCV RNA的最低检测限并对其检测重复性进行验证。结果纳米二氧化硅颗粒硅醇基化后其吸附核酸的能力显著提高;病毒裂解液中GuSCN的最佳浓度为4．23 mol/L。使用改良方法提取血清样本中的HCV RNA用于实时荧光定量PCR ,获得标准曲线和线性方程,其线性相关系数（R2）达到0．999,检测的线性范围为2．52～5．52 IU/mL ,或者102．52～105．52病原体数/毫升。该方法的检测限达到（2．52＆#177;0．50）IU/mL ,且其检测重复性良好。结论改良后的固相吸附法可以大大降低实时荧光定量PCR的最低检测限,提高了HCV的阳性检测率。该方法操作简单,成本低,可以广泛应用于临床中HCV的检测和其他病毒的核酸检测。     

DA3200-ABI7500全自动核酸提取平台高敏HCV RNA定量检测性能验证

目的 验证DA3200-ABI7500全自动核酸提取高敏检测HCV RNA方法 性能.方法 参考美国临床实验室标准化协会批准指南(CSLI-EP),采用DA3200全自动核酸提取平台及荧光定量PCR检测HCV RNA,评价检测方法 的核酸提取纯度、精密度、正确度、线性范围、分析灵敏度、特异度和抗污染能力等性能指标.结果...     

实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA的应用评价

目的探讨实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA浓度的检测范围和检测健康人全血中核酸DNA的Ct本底值。方法采用试剂盒提取纯菌、健康人和临床患者血液中的核酸DNA,应用实时荧光定量PCR进行检测。结果经检测,40份健康人群血液标本Ct值平均值为37.0,标准差为1.9,Ct值95%置信区间为33.0 ~ 38.8。 将布鲁氏菌核酸DNA标准品倍比稀释（56.2 ng ~ 0.026 5 fg）,实时荧光定量PCR检测灵敏度为6.7 fg。结论实时荧光定量PCR检测纯菌核酸DNA的灵敏度相当于2个基因组DNA拷贝数,但用于检测血液标本尚待进一步研究。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司LightCycler仪器和国产达安试剂,PCR酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBASAmplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBVDNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0.890。结论应用国产试剂配合LightCycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较

目的了解山东地区献血者的乙肝病毒感染状况并为今后开展常规核酸检测技术(NAT)检测提供实验依据。方法使用ELISA和NAT检测法筛选无偿献血者血液样本11334份,应用实时荧光定量PCR仪检测样本的HBV DNA含量。结果在11334份血液样本中发现HBsAg EIA和NAT同时阳性的样本237份,HBsAg EIA阴性但NAT阳性的样本7份和HBsAg EIA阳性但NAT阴性的样本23份。结论核酸检测能够提高HBV的检测灵敏度,荧光定量PCR仪可以应用于献血者的大规模筛选。